全 文 ：HPLC法测定小儿咳喘灵口服液中绿原酸的含量
卢其亮 1 ,姜文侠 2
( 1. 天津市药品检验所 ,天津　 300070; 2. 天津市工业微生物研究所 ,天津　 300221)
　　小儿咳喘灵口服液系卫生部药品标准 [1 ]收载的
品种 ,由麻黄、金银花、苦杏仁、板蓝根、石膏、甘草、
瓜蒌 7味中药组成 ,具有宣肺清热 ,止咳祛痰 ,平喘
之功效 ,用于治疗小儿呼吸道感染、气管炎、肺炎、咳
嗽等症。现标准中尚无该药相关有效成分的鉴别和
含量测定方法。为控制产品质量 ,保证疗效 ,本实验
对组方中主药之一金银花的主要疗效成分绿原酸的
含量采用 HPLC法进行测定研究 ,该方法操作简
便、准确、重现性好。
1　仪器与试剂
Waters 2487高效液相色谱仪 ,双波长检测器 ,
Wa ters 515 HPLC泵 , Waters柱温箱 , Shimadzu
C-R6A处理机。
绿原酸对照品购于中国药品生物制品检定所 ,
批号: 0753-200111。其他试剂均为分析纯。小儿咳喘
灵口服液来自天津凯镛药业有限公司 ,共 3批 ,批
号: 20010301, 20010302, 20010303。
2　方法与结果
2. 1　 色谱 条 件: 色谱 柱: Shim-pack ODS 柱
( 250 mm× 4. 6 mm , 5μm) ,流动相: 乙腈-0. 4%磷
酸溶液 ( 11∶ 89) ,检测波长: 327 nm ,柱温: 40℃ ,流
速: 1 m L /min。在此条件下 ,绿原酸与其他组份均可
达到基线分离 ,理论板数按绿原酸计为 5 500。
2. 2　溶液的制备: 精密称取绿原酸对照品适量 ,加
50%甲醇制成 40μg /mL的对照品溶液。精密量取
小儿咳喘灵口服液 2 mL,置 100 m L量瓶中 ,加
50%甲醇至刻度 ,摇匀 ,过滤。 取续滤液 ,经 0. 5μm
有机相微孔滤膜过滤 ,即得供试品溶液。同法 ,制得
缺金银花的阴性对照液。色谱图见图 1。
2. 3　线性关系考察: 取绿原酸对照品 ,加 50%甲
醇 ,分别制成 0. 020, 0. 040, 0. 060, 0. 080, 0. 100
mg /m L的溶液 ,精密吸取 10μL,注入色谱仪进行
分析。 以绿原酸峰面积值为纵坐标 ,进样量为横坐
标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程为 Y= - 256. 3+
1 605. 2X , r= 0. 999 9。 绿原酸在 0. 200～ 1. 000μg
与峰面积之间呈良好的线性关系。
* -绿原酸
* -ch lorogenic acid
图 1　绿原酸对照品 ( A)、供试品 (B)和阴性
对照 (C)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of chlorogenic
acid ( A) , sample ( B) and blank (C)
2. 4　精密度试验:同一供试品溶液 ,重复进样 5次 ,
每次 10μL,测定吸收峰面积。 结果绿原酸峰面积
RSD= 1. 32% (n= 5)。
2. 5　稳定性试验:同一供试品溶液 ,每隔 2 h进样
10μL,依法测定绿原酸峰面积值 ,结果其 RSD=
1. 35% (n= 11)。可见供试品溶液在 20 h内稳定。
2. 6　重现性试验:精密量取同一批号样品 6份 ,照供
试品溶液制备方法操作 ,进样 ,测定峰面积 ,计算绿原
酸含量。 结果绿原酸含量的 RSD= 1. 67% (n= 6)。
2. 7　加样回收试验:精密量取已知含量的小儿咳喘
灵口服液样品 (批号 20010301) 1 mL,共 6份 ,精确
加入绿原酸对照品溶液适量 ,按供试品制备方法处
理后 ,测定绿原酸含量 ,计算回收率。结果绿原酸平
均回收率为 99. 60% , RSD= 0. 96% (n= 6)。
2. 8　样品测定:精密量取不同批号的小儿咳喘灵口
服液样品 ,按供试品溶液制备方法制备 ,分别精密吸
取对照品溶液和供试品溶液各 10μL,进样分析 ,以
外标法计算绿原酸含量。 结果绿原酸含量分别为
2. 031 ( 20010301 ) , 2. 125 ( 20010302 ) , 2. 130
mg /mL ( 20010303) (n= 2)。
3　讨论
·613·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月
收稿日期: 2003-01-16
　　在本实验条件下 ,绿原酸的保留时间为 15. 7
min左右 ,分离效果好 ,达到基线分离 ,且在 25 min
内即可分离完毕。若流动相选用乙腈 -0. 4%磷酸溶
液 ( 13∶ 87) [2 ] ,绿原酸的保留时间在 7 min左右 ,但
样品主峰与其相邻峰达不到良好的分离。
本方法简便、准确 ,样品不需要经过前处理 ,直
接加入 50%甲醇定容即可测定。本方法可以作为小
儿咳喘灵口服液的质量控制检测方法。
References:
[1 ]　 Drug Speci f ica tion Prom ulgated by the Min istry of Publ ic
Health , P. R. China — Preparat ion of Chinese Patent
Medicine (中华人民共和国卫生部药品标准· 中药成方制剂 )
[ S ]. VolⅣ . 1991.
[2 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. VolⅠ .
HPLC法测定好利康中白藜芦醇的含量
贾淑杰 ,曲树明 ,张　蓉 ,王振立
(天津市医药科学研究所 ,天津　 300070)
　　白藜芦醇 ( resv era t ro l)是一种天然活性成分 ,
目前至少已在 21科 31个属的 72种植物中发现它
的存在 ,常见的药用植物如决明、藜芦、虎杖等 ,水果
如葡萄中也含有白藜芦醇。 其具有抗癌、降压、调血
脂、抑制花生四烯酸、 APP、 Ca+ 诱导的兔血小板聚
集和血栓素 B2 ( TXB2 )的产生 ,也具有抗细菌和抗
真菌作用 ,在心血管疾病和癌症的防治上具有良好
的应用前景 [1 ]。功能食品好利康用于心脑血管的保
健 ,其主要成分为白藜芦醇。随着功能食品逐渐被人
们接受 ,其内在质量控制变得十分必要。本实验参考
有关文献 [2 ] ,采用 HPLC法对功能食品好利康中白
藜芦醇进行了含量测定 ,其结果准确度高、重现性
好、操作性强 ,可用于该产品的质量控制。
1　仪器与试药
岛津 LC-10A高效液相色谱仪 , SPD-10Avp紫
外检测器 , C-R8A积分仪 ; AE-240电子分析天平
(瑞士梅特勒 )。白藜芦醇对照品 (由上海医科大学天
然药物室提供 ,含量测定用 ,纯度 98. 2% )。 水为重
蒸馏水 ,乙腈、甲醇为色谱纯。
2　方法及结果
2. 1　 色 谱 条 件: 色 谱 柱: Hypersil ODS 柱
( 250 mm× 4. 6 mm , 5μm);流动相:乙腈 -水 ( 35∶
65) ;检测波长: 306 nm;柱温: 室温 ;流速: 0. 6 mL /
min。理论塔板数以白藜芦醇峰计不低于 2 500。
2. 2　标准曲线的制备:精密称取白藜芦醇对照品约
5 mg,置 100 mL棕色量瓶中 ,加无水甲醇 ,溶解并
稀释至刻度 ,摇匀。分别精密吸取此溶液 1, 2, 3, 4, 5
m L,置 25 mL棕色量瓶中 ,用流动相稀释至刻度 ,
摇匀 ,进样 10μL。 以峰面积为纵坐标 ,浓度为横坐
标绘制标准曲线。结果表明 ,峰面积和浓度呈良好线
性关系 ,回归方程为 Y= 5. 473 5× 105X - 3. 048 7,
r= 0. 999 6。 线性范围为 0. 02～ 0. 1μg。
2. 3　样品溶液的制备: 取好利康 0. 35 g ,精密称定 ,
置 50 mL具塞三角瓶中 ,加 10 mL水浸泡 2 h,滤
过 ,滤液加乙酸乙酯萃取 2次 ,每次 10 mL,合并萃
取液 ;滤渣加乙酸乙酯 20 mL,浸泡 2 h,滤过 ,得滤
液。 合并以上溶液 ,精密吸取 20 mL减压回收乙酸
乙酯 ,加无水甲醇溶解于 10 mL棕色量瓶中 ,以流
动相定容至刻度 ,摇匀 ,过滤 ,即得。
2. 4　精密度考察:取同一供试品 ,按上述色谱条件
连续进样 5次 ,分别进样 10μL,测得白藜芦醇峰面
积的 RSD为 0. 32% (n= 5)。
2. 5　稳定性考察:取同一供试品 ,按样品制备方法
制成供试品液 ,于 0. 5, 1, 2, 4, 8, 16 h分别进样 10
μL,测白藜芦醇峰面积 ,其 RSD为 0. 46% (n= 5)。
2. 6　重现性的考察:取批号 210601样品 ,按样品制
备方法制备成供试液 ,平行制备 5份 ,分别进样 10
μL,得白藜芦醇的峰面积的 RSD为 0. 98% (n= 5)。
2. 7　回收率测定:在已知含量样品溶液中 ,精密加
入白藜芦醇对照品溶液 (约为已知样品含量的
80% , 100% , 120% ) ,配成供试品液。再分别按上述
色谱条件测定含量 ,计算回收率。结果平均回收率为
98. 06% , RSD为 1. 98% (n= 6)。
2. 8　样品测定:将不同批号的样品按样品制备方法
制成供试品溶液 ,将供试品及对照品分别进样 10
μL,记录峰面积 ,按外标法计算含量。结果见表 1。色
·614· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月
收稿日期: 2002-10-29作者简介:贾淑杰 ( 1964— ) ,女 ,主管技师 , 1986年毕业于天津医科大学药学系 ,主要从事中药和天然药物及其制剂的成分分析。