全 文 ：作用。
2. 5　对共生菌的初步探讨:共生菌是目前植物栽培
学的一个研究热点。笔者曾跟有关单位联合 ,提供菌
种进行实验 ,效果不太明显。 2000年 3月 ,我们自培
菌种又重复 3次实验 ,结果是对铁皮石斛刚从试管
苗出瓶时 ,下地对提高成活率有一定作用。但对后期
提高产量似乎无更大效果。 据分析我们认为对于刚
出瓶的苗 ,植株根部共生菌种类和数量都较少 ,能够
接受人为提供的部分共生菌 ,而植株成活后一旦根
部共生菌增殖饱和 ,再继续给予共生菌 ,植株也就不
再吸引。 所以 ,后期对促进产量并无明显效果。
References:
[ 1 ]　 Yang X Z, Sh ao H, Zh ou C , et al . Application of biotech-
nology in s tudies of medicinal plants Dendrobium Sw [ J].
Chin Trad it Herb Drugs (中草药 ) , 2002 ( 2): 173-175.
[2 ]　 Fu K C, Lian S C, Feng D Q, et al . Application and ex ploit
of Dendrobium cand id um [ J] .Ch in Trad it Herb Drugs (中草
药 ) , 1999, 9: 708-711.
[ 3]　Wan K Z, Fan L, Gu o W Y, et al. General research aspect
on cul tivation of m edical Dendrobii [ J ]. China J Ch in Mater
Med (中国中药杂志 ) , 1998, 23 ( 6): 340-343.
[4 ]　 XU H, Wang Z G, Ding J Y, et al . General aspect of bi-
otech nology about m edical Dendrobi i [ J] . Ch in Wi ld Plant
Resour (中国野生植物资源 ) , 2001 ( 1): 1-4.
HPLC法测定不同产地山药中尿囊素的含量
白　雁 ,朱凤云 ,王　东 ,陈志红 ,袁子民 ,余振喜⒇
(河南中医学院 分析测试中心 ,河南 郑州 450008)
摘　要: 目的　测定不同产地间山药中尿囊素的含量。 方法　采用 HPLC法 ,色谱柱: Shimadzu ODS ( 150 mm×
6. 0 mm ); 流动相:甲醇 -水 ( 10∶ 90) ; 流速: 0. 5 mL /min; 柱温: 35℃ ;灵敏度: 0. 005 AUFS; 检测波长: 224 nm;
纸速: 2. 0 cm /min。结果　各产地山药中尿囊素含量差异较大。结论　该法快速 、简便、重现性好 ,为不同产地间山
药中尿囊素的含量比较提供了依据。
关键词: HPLC;山药 ;尿囊素
中图分类号: R282. 6　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 02 0179 02
Determination of allantoin inRhizoma Dioscoreae collected from different regions by HPLC
BAI Yan, ZHU Feng-yun, WANG Dong, CHEN Zhi-hong , YU AN Zi-min, YU Zhen-xi
( Analysis Testing Center o f Henan Colleg e o f TCM , Zheng zhou 450008, China)
Key words: HPLC; Rhizoma Discoreae; allantoin
　　山药为薯蓣科植物薯蓣 Dioscorea opposita
Thunb. 的干燥根茎。 具有补脾养胃、生津益肺、补
肾涩精的功能 ,主治脾虚食少、久泻不止、肺虚喘咳、
肾虚遗精、带下、尿频、虚热消渴等症 [1 ]。 主产于河
南 ,在山西、河北、山东和云南等省也有栽培山药 [2 ]。
山药含有薯蓣皂苷元和尿囊素等成分 ,尿囊素能修
复上皮组织 ,促进皮肤溃疡和伤口愈合 ,具有生肌作
用 ,可用于胃及十二指肠溃疡 ,是山药有效成分之
一 [3 ]。目前文献报道多对山药中尿囊素采用 HPLC
法和薄层扫描法进行含量测定 [ 4, 5 ] ,但对不同产地山
药中尿囊素的含量测定尚未见报道 ,为此 ,本文采用
HPLC法测定了不同产地山药中尿囊素的含量 ,从
而为山药的质量研究提供了依据。
1　仪器、试药和样品
岛津 LC-10AD高效液相色谱仪 ,岛津 SPD-
10A紫外检测器 ,柱温箱 CTO-10A, 岛津 C-R7A
数据处理器 ,微量进样器 (宁波市镇海玻璃仪器
厂 ) ,超声波清洗机 ;甲醇为色谱纯 (天津四友 ) ,水
为重蒸水 ,尿囊素对照品为 Sigma公司产品 ;山药
采自于各产地 ,经鉴定教研室陈随清博士鉴定。
2　实验部分
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Shimadzu O DS( 150 mm×
6. 0 mm );流动相:甲醇-水 ( 10∶ 90) ;流速: 0. 5 mL /
min;柱温: 35℃ ;灵敏度: 0. 005AU FS;检测波长:
224 nm;纸速: 2 cm /min。
2. 2　对照品溶液的制备及线性化范围试验: 取尿囊
素 ,精密称定 ,置 10 mL容量瓶中 ,加重蒸水至刻
度 ,摇匀得对照品溶液 ( 0. 164 mg /mL)。精密吸取
·179·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 2期 2003年 2月
⒇收稿日期: 2002-05-31基金项目:河南省自然科学基金资助项目 ( 004025000)
对照品溶液 1, 2, 4, 6, 8, 10μL, 注入液相色谱仪 ,照
上述色谱条件分析 ,以峰面积积分值 Y为纵坐标 ,
尿囊素含量 X (μg )为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得回
归方程为 Y= 318 166. 662 1 X - 213. 517 8, r=
0. 999 2, 表明尿囊素在 0. 164～ 1. 640μg线性关系
良好。 对照品及样品色谱图见图 1。
2. 3　稳定性试验:精密吸取上述对照品溶液 8μL, 每
隔 30 min进样一次 ,记录峰面积积分值 ,结果表明尿囊
素在 2. 5 h内基本稳定。 RSD为 1. 46% (n= 6)。
2. 4　精密度试验:精密吸取对照品溶液 8μL, 连续
进样 5次 ,记录峰面积积分值 ,结果表明精密度良
好。 RSD为 1. 19% (n= 5)。
2. 5　重现性实验: 精密称取 2号样品 5份 ,每份
0. 5 g左右 ,按供试品溶液的制备方法处理后 ,分别
进样 5μL, 用外标法计算尿囊素含量 , RSD=
1. 87% (n= 5) , 表明该法重现性良好。
2. 6　加样回收率试验: 取已知含量的山药粉末
( 100目 , 60℃ 干燥 3 h) , 精密称定 0. 25 g , 平行 5
份置 50 mL磨口锥形瓶中 ,各精密加入约 0. 8 mg
尿囊素对照品 ,其余照供试品制备方法操作 ,最后用
蒸馏水溶解并定容于 10 mL容量瓶中 ,作为加样回
收供试品溶液 ,用外标法测定 ,计算结果尿囊素的平
均回收率为 97. 06% , RSD为 1. 09% (n= 5)。
1-尿囊素　 A-对照品　 B-样品
1-al lantion　 A-reference subs tance　 B-sample
图 1　对照品及样品色谱图
Fig. 1　 Chromatograms of reference substance and sample
2. 7　供试品溶液的制备及含量测定:取各产地山药
样品 ( 100目 , 60℃干燥 3 h) , 精密称定 0. 5 g , 置
50 mL磨口锥形瓶中 ,加 70% 乙醇 10 mL回流提
取 45 min, 放至室温 ,过滤 ,回收乙醇至近干。残渣
用蒸馏水溶解并定容于 10 mL容量瓶中 ,放置 0. 5
h, 作为供试品溶液。取上述各供试品溶液于离心管
中 , 4 000 r /min高速离心 10 min,取上清液 ,经微
孔滤膜 ( 0. 45μm)滤过 ,分别进样 5μL, 用外标法
计算各产地山药中尿囊素的含量 ,测定结果见表 1。
表 1　山药中尿囊素的含量 (n= 3)
Table 1　 Content of allant ion in Rhizcma Dioscorea (n= 3)
序号 产　地 含量 /% 序号 产　地 含量 /% 序号 产　地 含量 /%
1 河南孟县 0. 287 6 山东济宁 0. 670 11 山西襄汾 0. 276
2 河南武陟 0. 520 7 山东单县 0. 394 12 山西平遥 0. 258
3 河南沁阳 0. 644 8 山西太谷 0. 449 13 陕西西安 0. 105
4 河南温县 0. 545 9 山西曲沃 0. 447 14 河北安国 0. 540
5 河南修武 0. 191 10 山西汾阳 0. 250 15 云南　　 0. 459
3　讨论
3. 1　样品提取方法曾用 70%乙醇回流、甲醇直接超
声、甲醇冷浸过夜超声进行比较 ,结果采用 70%乙醇
回流尿囊素提取比较完全。 进样前供试品溶液经高速
离心、微孔滤膜滤过主要是去除一些沉淀下来的糖类、
蛋白质等干扰性杂质 ,有利于色谱峰分离。
3. 2　流动相的选择以甲醇-氯仿 -水 ( 0. 5∶ 0. 012∶
100)、 乙腈 -水 ( 70∶ 30)、甲醇 -水 ( 10∶ 90) 来进行
考察 ,结果后者系统分离较好 ,色谱重现性好。
3. 3　山药作为常用中药材 ,在成方制剂中的定量指
标少见报道 ,尿囊素是山药中的活性成分之一 ,本方
法可为含山药制剂质量控制标准的制定提供参考。
References:
[1 ]　 Wang B H, Jiang P F, Du HY, et al . Determination of allant-
ion in common yam ( Dioscorea opposita ) by HPLC [ J] . J Bei-
jin g Un iv Trad it Chin Med (北京中医药大学学报 ) , 1995, 18
( 1): 67-68.
[ 2 ]　 Jiangsu New Medical Col lege. Dictionazy of Ch inese Materia
Medica (中药大辞典 ) [M ]. Shanghai: Sh angh ai Science and
Tech nology Press , 1999.
[ 3 ]　 Liu B, Ma X S, Li F. A comparative s tudy on chemical con-
s ti tu ents in di ff eren t process ed prod ucts of Dioscorea opposita
[ J ]. J Chin Med Mater (中药材 ) , 1997, 20 ( 4): 185.
[ 4 ]　 Zhou X R, Cao J Y. Stud y on HPLC analytical meth od for
al lantion in Dioscorea opposi ta [ J ]. Chormatog raph (色谱 ) ,
1996, 14( 3): 129.
[5 ]　 Zhou B H, Luo S D, Cai H S. Determination of allan tion in
common yam (Dioscorea opposita ) b y T LC scanning [ J] . Chin
Tradi t Herb Drugs (中草药 ) , 1994, 25 ( 3): 132.
·180· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 2期 2003年 2月