全 文 ：蔑龙方抑制实验性大鼠胃癌发生及抗始发突变的作用△
中国医学科学院
中国协和医科大学
北京市中医研究所
药物研究所 (北京 10 0 0 5 0 ) 施 波 银
陈飞松
付招娣 李 燕
刘晋 生 任蜀兵 徐春军
摘 要 蔑龙方能显著降低 M GN N诱发的新生大鼠慢性萎缩性胃炎 、 胃粘膜异 型增生及腺 胃痛
的发生率 ,且呈剂量依赖性 。 证明蔑龙方具有较好 的痛化学 预防作用 。 蔑龙方对致 突变物诱导的
T A 。。 、 T A ,。 2的 回复突变率和环磷酞胺诱发 的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形 成率有显 著的抑制作
用 。 提示蔑龙方对于癌的始发 阶段有较强 的抑制作用 。
关健词 蔑龙方 抗癌作用 胃癌
胃癌是我 国最 常见 的恶性肿瘤之一 , 在
全部恶性肿瘤死亡构成 比中居第一位 。 据统
计 , 我国每 年死于 胃癌的患者超过 16 万 , 自
1 9 7 8 年以来 , 胃癌的防治研究一直被列为 国
家重点攻关课题〔` 〕 。 胃癌的发展有较长的潜
伏期 , 慢性萎缩性 胃炎及 胃粘膜异型增生被
认为是 胃癌癌前疾病或癌前状态 , 是向 胃癌
发展的过渡性病变 。 故有效地防治 胃癌癌前
疾病 , 阻断或逆转其发展是防治 胃癌发生 的
重要环节 。
蔑龙 ( 胃平 l 号 )方是北京市中医研究所
治疗 胃癌 癌前疾 病 的经验方 剂 , 由黄蔑 、 龙
葵 、 黄芬 、 党参 、丹 参 、 甘草等组成 , 具有健脾
益气 、 清 热活血 、 解毒 之功 效 。 蔑 龙方 治疗
60 0 多例慢性 萎缩性 胃炎 、 胃粘膜肠 上皮化
生 、 异型增生等症 , 临床痊愈率 21 % ,显效率
47 %
。在临床获得确切疗效的基础上 , 我们进
一步研 究蔑龙方对致癌剂 N 一 甲基 一N ` 一硝基 -
N
一亚硝基 肌 ( M N N G ) 诱发新 生大 鼠的 胃癌
癌前疾病和 胃癌的预防作用 , 并探讨蔑龙方
抗癌始发突变 的作用 。
1 材料
1
.
1 蔑龙方液 : 水提醇沉制成 10 0%浓度 的
液体 , 即 l m L 相 当于 1 9 生药 ,高压灭菌后
备用 。增生平 : 购 自中国医学科学院肿瘤研究
所 , 以无菌水配制成 0 . 5 9 /m L 。
1
.
2 实验动物 : W i s t a r 新生大 鼠 、 1 8 ~ 2 2 9
N IH 雄性小 鼠 , 中国医科院动物所提供 。
1
.
3 细菌菌种 : 鼠伤寒沙门菌组氨酸缺陷型
T A
g。 、
T A
, 0: ,购 自中国生物制品检定所 。
1
.
4 主要试 剂 : M N N G , iS g m a 公 司产 品 。
D M SO
, 天 津化学试 剂一 厂产 品 ; 环磷 酞胺
( C T X )
, 上海第 十二药厂 。 代谢酶活化系统
5
9 及混合液等 由本室 自制 。
2 方法
2
.
1 诱发 胃癌癌前疾病及分组 、 给药方法 :
取新 生 3 d 的 W i st a r 大 鼠 , 每鼠以新鲜配制
的 M N N G 溶液 4 0 拼g / ( 0 . 1 m L · d ) 19 , 连续
10 d临 3〕 。 新生鼠 19 后放 回母 鼠笼中喂养 ,至
出生第 2 1 日断乳后 , 随机分组 ,雌雄分笼饲
养 , 开始 19 给药 。 空 白对照组大 鼠给予生理
盐水 l m L / 1 00 9 体重 , 蔑龙方高 、 中 、 低剂量
3 个实验组分别给予蔑龙方液 1 、 0 . 5 和 0 . 25
m L / 1 0 0 9 体重 。 阳性药对照治疗组给予 。 . 5
g /m L 的增生平液 l m L 1/ 0 0 9 体重 。 各实验
组均每 日 19 1 次 , 连续给药 2 4 , 周后停药 , 于
第 56 周处死各组动物 。 取大 鼠胃用中性福尔
马林 固定 , 石蜡 包埋 、 切 片 , 苏木 精 一伊 红染
,
A d d r e s s
:
S h i B o
,
I n s t i t u t e o f M a t e r i a M e d i e a
,
C h in e s e A e a d e m y o f M e d i e a l S e i e n e e s
,
C h i n e s e X i e h e M e d i e a l U n i v e r
-
s i t y
,
eB i ji施 波 副研究员 。 1 9 9 3 年在上海第二医科大学心血管 内科 获博 士学位 。 1 9 9 3 年 8 月进人 中国医学科学 院药物研究所
博士后流动站 , 在肿瘤药理学专 家韩锐教授指导下工作 ,主要从事抗肿 瘤新 药的开发和药理学研究 。 曾获黑龙 江省卫 生厅科
特讲舟辈 飞项 .业 京市科枯讲舟雌 1 项 及 旱介平一杨森辈 1 项
△国家 自然科学基 金及北京市科委资助课题
.
4 6
。
色 。 病理学观察各标本出现的病变 。 验各组 。 后者分别 1 9茂龙方液 0. 1、 0.2、 。 .4
2
.
2抗 Am s e试 验 :采 用平 板掺 人实 验方 m L/1 0 9体重 , 共给药 4 d 。 除阴性对照组外 ,
法 以 , 。 反应系统含菌液 0 . 1 m L ,致 突变物柔 其余各组小鼠于第 4 天 iP 环磷酞胺 1 0 m g /
红霉 素 50 拌L , 加人 顶层培养基 2 m L , 混 匀 k g l 次 , 24 h 后处死动物 ,取其股骨骨髓细胞
后 倒人 已铺设 低限葡萄糖 琼脂培 养基 的平 涂片 , iG e m sa 染色 , 油镜下计数骨髓嗜多染红
皿 , 于 37 ℃温箱 中培养 48 h , 计数每皿 回变 细胞 ( P C E )l 0 0 个 ,计数含微核的 P C E 。 按
菌落数 。 按下式计算 回复突变抑制率 : 公式计算蔑龙方组的 P C E 微核形成抑制率 。
回复突变抑制率 ( % ) ~ (阳性对照 组 回变菌落 抑 制率 ( % ) = (阳性对照组微核 P CE 一给药组
数一受试药物组回变菌落数 )/ 阳性对照 组回变菌落 微核 P C E )/ 阳性对照组微核 P CE x 10 % 。
数 X l o o % 。 3 结果
2
,
3 抗小 鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成川 : 3 . 1 对 M N N G 诱 发的大 鼠胃癌 癌前疾病
将 N IH 小鼠随机分组 , 每组 10 只 , 分别设阴 和胃癌的抑制作用 : 实验至第 56 周 ,结果见
性对照组 、 环磷酞胺阳性药对照组 、 蔑龙方实 表 1 。
表 1 对 M N N G 诱发的大眼胃痛痛前疾病及胃痛的防治作用 (病变标本数 /被检总标本数 )
组 别 剂量
( m L / k g ) 萎缩性 胃炎异型增生
实验 1
%
3920164941278空 白对 照
蔑龙方
增生平
2
.
5
1 0
5
7 6 / 8 2
3 4 / 8 8
2 0 / 8 5
12 / 8 1
2 1 / 8 4
胃腺瘤 、
腺癌
3 1 / 8 2
1 6 / 8 8
1 0 / 8 5
6 / 8 1
1 2 / 8 4
姜 缩性胃炎
异型增生
实验 2
%
80 / 8 5
3 5 / 8 4
2 2 / 8 1
1 5 / 8 2
2 3 / 8 4
胃腺瘤 、
腺瘤
3 3 / 8 5
1 7 / 8 4
1 3 / 8 1
8 / 8 2
1 2 / 8 4
38*18l2’尸4
.-份*
八J习滩5石O曰护叫`r之, .了`
与空白对照组比较 : . 尸 < 。 . 0 5
表 1 显示蔑龙方对 M N N G 诱发 的大 鼠
胃癌 及癌前 疾病有较好 的防治作用 , 2 次实
验蔑龙方 液各组使 实验模 型动物发 生 胃腺
瘤 、 腺癌及慢性萎缩性 胃炎伴 异型增生 的百
分率显著下 降 ,并呈现剂量效应关系 。按等药
物剂量计算 , 其抑制作用强度与增生平相当 。
3
.
2 抗柔红霉素诱变 T A o s作用观察 : 茂龙
方 对柔红霉 素诱变的 T A g : 突变有 明显的抑
制作 用 , 且呈较 好 的浓 度 一效 应关 系 。 在 80
拜L /皿原液的剂量下 , 抑制率为 52 · 3写 ,抗致
突变作用肯定 , 见表 2 。
表 2 抗柔红霉紊诱变 T A , 。菌的作用
T A 10
2突变的抑制率 为 43 . 3% , 在 80 拌L /皿
原液的浓度下 , 抑制率达 76 . 0 % , 抑 制作用
十分显著并显示浓度效应关系 , 见表 3 。
表 3 抗丝裂拼寮 C 诱变 T A I。 菌的作用
组别 (浓度 /皿 ) 回变菌落数
(王士 s )
组别 (浓度 /皿 ) 回变菌落数
(王士 s )
阴性对照 一 46 士 12 . 0
柔红霉素 ( 1 0 拌g ) 11 20土 1 32· 0
蔑龙方 ( 2 0 拜L ) + 柔红霉素 ( 10 ” g ) 10 88土 2 79 . 6 6 . 2
( 4 0 拜L ) + 柔红霉素 ( 20 胖g ) 9 13土 20 1 . 0 ` 25 . 5
( 8 0 沙 )+ 柔红霉素 ( 10 拌g ) 5 13士 1? . 0 ` ’ 52 5
与柔红霉素组比较 : 赞 ` P < 。 . 01
3
.
3 抗丝裂霉素 C 诱变 T A 102 作用 : 蔑龙方
液在 20 拌L /皿浓度时抗丝裂霉素 C 诱 发的
《中草药 》 1 9 9 9 年第 30 卷第 1 期
阴性对照 一 2 31 士 2 9 7
丝裂霉素 C ( 16 拜g ) 22 56士 64 · o
茂龙方 ( 2 0 拼L ) + 丝裂霉素 C ( 16 胖g ) 12 29士 50 . 0 43 . 5 “
( 4 0匹 ) + 丝裂霉素 e ( 16 尸g ) 53 6士 14 5 . 7. ` 62 . 9 , ·
( 5 0 ; L ) + 丝裂霉素 e ( 26 ; g ) 5 42士 5 9 . 0 ’ 7 6 , o ` ·
与丝裂排素 C 组比较 : ` ’ 尸< 0 . 01
3
.
4 致突变作 用观察 : 蔑 龙方液在 有效抗
A m e s 试验 的浓度下无 自身致 突变作用 , 见
表 4 。
表 4 蔑龙方自身致突变作用` 士 : )
组别 (浓 度 /皿 ) T A g。回变菌落数 T A 102 回变菌落数
空 白对照 一 1 6 8士 1 1 . 8 16 6士 1 2 . 4
蔑龙方 20 拜L 1 5 9士 1 0 . 1 16 1士 1 1 . 3
4 0 拜 L 16 6士 1 4 · 7 1 6 9士 9 . 1
8 0 件L 1 7 4士 1 6 · 2 1 7 0士 1 3 . 6
3
.
5 抗微核 形成作用观察 : 表 5 显示 N I H
小 鼠灌 服各剂量 的蔑龙方液 4 d 后 , 由环磷
。
4 7
。
酞胺诱发的小 鼠骨髓嗜多染红细胞微核增多
明显受到抑制 ,并呈现较好的剂量效应关系 。
。 . l m L 1/ 0 9 的蔑龙方液即能使环磷酞胺诱
导 的微核形成率达 36 . 1% , 并呈显著性统计
学差异 (尸 < 0 . 0 5 ) 。
裹 5 抗小限骨位啥多染红细胞
阴性对照 一 3 . 7士2 . 34
环碑酞胺 (C T X ) ( 1 00 拜g /k g ) 38 . 0士 7 . 2 7
蔑龙方
( 0
.
1 m L / 10 9 ) + C TX ( 1 0 0 m g / k g ) 24
.
3士 3 . 4 3 3 6· 1璐
( 0
.
2 m L / 10 9 ) + C T X ( 10 0 m g / k g ) 22
.
0士 4 . 5 6 4 2 . 2 赞 粉
( 0
.
4 m L / 1 0 9 ) + C T X ( 10 0 m g / k g ) 1 5
.
5士 3 . 2 7 59 . 7 “
PCE
: 骨位嗜多染红细胞 ;
与环磷酞胺组比较 : . 尸< 0 . 05 , 份 尸< .0 01
4 讨论
蔑龙方对 M N N G 诱 发的新生大 鼠胃癌
癌前疾病和胃癌有较好的防治作用 , 结果显示
蔑龙方各剂量组能显著降低 M N N G 诱发 的
大 鼠第 56 周 的胃粘膜异型增生 、 胃腺瘤和腺
胃癌的发生率 。蔑龙方的作用总是高剂量 > 中
剂量 > 低剂量 ,呈现一定的剂量效应关系 。
癌的发生是一个 漫长的过程 , 至少经过
始发 、 促癌及演进三个阶段 。对于癌的化学预
防来说 ,控制始发突变和促癌极为重要 〔 5〕 。 抗
A m
e s 试 验和小 鼠骨髓 嗜多染红细胞微核抑
制是癌化学预防药研究经典的抗致突变实验
法 。 蔑龙方能显著抑制丝裂霉素 C 和柔红霉
素的致突变作用 ,而 自身则无突变作用 ; 预先
给小 鼠口 服不同剂量 的蔑龙方液 , 可明显降
低环磷酞胺诱发微核形成率 , 并呈一定 的剂
量效应关系 。 微核试验是检测化学诱变剂引
起染色体损伤的一种快速方法 。 当化学诱变
剂使染色体受到损伤后 ,在细胞有丝分裂后
期丧失着色点的染色体或染色体碎片被子代
细胞排除而形成微核游离于细胞中 。 染色体
结构的这种改变可为遗传物质的损伤提供易
于评定的形态学证据 。
茂龙方不但疗效好 ,长期应用还未发现
毒副作用 。 本研究证 明蔑龙方防治 M N N G
诱发的大 鼠胃癌和 胃癌癌前疾病较为理想 ,
又有较好 的抗癌始发 突变作用 。 因此深人研
究其作用机制 ,并将蔑龙方开发成治疗 胃癌
癌前疾病 的新药 ,是我们今后努力的方向 。
参 考 文 献
1 韩 锐主编 . 肿瘤化学预 防及药物治疗 . 北京 : 北京 医
科大学 中国协和 医科大学联合出版社 , 19 91 : 5 82
2 邓大君 ,等 . 中华病理学杂志 , 1 9 9 4 , 2 3 ( 5 ) : 2 9 3
3 S u m i Y
, e t a l
.
G A N N
,
1 9 7 8
, 6 9 : 8 0 5
4 韩 锐主编 . 新抗癌药物研究 及实验技术 . 北京 : 北 京
医科大学 中国协和 医科大 学联合出版社 , 1 9 97 : 3 03
5 L ip p m a n
,
S M
, e t a l
.
J C l in o n e o l o g y
,
1 9 94
,
1 2 ( 4 )
:
8 5 1
( 1 9 9 8
一
0 1
一
1 8 收稿 )
阴地旅中毒 2 例
湖南省新化县金凤乡笋芽村 ( 4 1 7 6 0 8) 戴恩富
李某 女 , 2 8 岁 。 1 9 9 8 年 3 月 8 日早餐食阴地
旅炖鸡 , 14 : 0 时许 , 在赶集 回 家的路上 ,忽感胁
肋 、 胸 背 、 腹部表皮疼痛 , 日益加剧 , 继 而全身瘫软 ,
面色苍白 , im 地塞米松 s m g x Z 支 、 复方安基比林 2
m L X Z 支 后转卫 生院治 疗 。 经抗胆碱药 、 葡萄糖及
葡萄糖钙静脉滴注 3 d 痊愈 。 其丈 夫一 同食 用也 出
现同样的中毒症状 ,但耐受 力稍 强 , 仅胸肋 、 腰背表
皮疼痛 , 也经上述治疗痊愈 。
《中药大辞典 》载 : 阴地旅为 阴地燕科植物 阴 地
旅 刀 ot 勺 c人i u m t e r n a t u m ( T h u n b . ) SW . 的带根全草 ,
。
4 8
。
性味甘苦 , 凉 。 具平肝 、 清热 、 镇 咳之功 , 用 于治疗头
晕头痛 、 咳血 、 惊痛 、 火眼 、 目璐 、 疮疡肿毒 。 《湖南农
村常 用中草药手册 》载阴 地旅为瓶尔 小草科植物 阴
地旅的带根全草 。 学名相 同 ,科属有别 , 功效亦异 ,能
补虚润肺 、 止咳化痰 、 退热消肿 。 当地农 民常用阴地
旅煮鸡炖肉吃 , 治疗头晕 头痛 、 咳嗽咯血诸证 , 但上
述 2 例食后 中毒 , 须引起注意 ,建议加 强对中草药毒
理实验的研究 , 以利正确 运用 中草药 达到 防治疾病
的 目的 。
( 1 9 9 8
一
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一
0 7 收稿 )