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HPLC法测定不同干燥方法的贯叶连翘中黄酮类化合物的含量
钱秋霞 1 ,丛晓东 2
( 1. 中国药科大学中药学院 ,江苏 南京　 210038;　 2. 山东省天然药物工程技术研究中心 ,山东 烟台　 264003)
摘　要: 目的　研究 HPLC测定条件 ,并测定不同干燥方法贯叶连翘中黄酮类化合物芦丁、金丝桃苷的含量。 方法
　色谱柱: Discovery C18 ( 5μm, 25 cm× 4. 6 mm) ;流动相:水 -乙腈 -磷酸 ( 825∶ 175∶ 1) ;流速: 1. 0 mL /min;检测波
长: 365 nm。 结果　 60℃ 烘干 4 h贯叶连翘中芦丁和金丝桃苷的含量最高 ,总含量可达到 1. 677%。芦丁的线性
范围为 0. 107～ 2. 675μg ,平均回收率为 99. 32% , RSD= 1. 007% ,金丝桃苷的线性范围为 0. 107～ 2. 675μg ,平均
回收率为 99. 54% , RSD= 3. 591%。 结论　该方法分析简便、灵敏、迅速、准确。
关键词: HPLC;贯叶连翘 ;芦丁 ;金丝桃苷
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 05 0407 03
Determination of flavonoids inHypericum perforatum processed by
different methods of drying by HPLC
QIAN Qiu-xia1 , CONG Xiao-dong2
　　 ( 1. Co lleg e o f Chinese Mate ria M edica, China Pha rmaceutical Univ e rsity , Nanjing Jiang su 210038, China; 2. Shandong
Enginee ring Resea rch Center o f Na tural Drug s, Yantai Shandong 264003, China )
Abstract: Object　 To develop a method fo r th e determination of f lav onoids in Hypericum perforatum
L. processed by dif ferent drying methods to provide a basis for the pro cessing of the natural herbs.
Methods　 The ch romatog raphic conditions were Discovery C18 co lumn ( 5μm, 4. 6 mm× 25 cm ) . detec-
tion w aveleng th 365 nm; mobi le phrase: w ater : acetoni trile : phospho ric acid ( 825∶ 175∶ 1) ; flow rate
1. 0 mL /min. Results　 The contents o f rutin and hyperin w ere a t their max imum when dried a t 60℃ for 4
h. Rutin had a good linea ri ty in the range o f 0. 107～ 2. 675μg, av erage recovery rate 99. 32% , RSD
1. 007% , and hyperin in the range o f 0. 107～ 2. 675μg, average recovery rate 99. 54% , RSD 3. 591% .
Conclusion　 Temperature is the main factor inf luencing the content of f lav onoids. The HPLC determina-
tion w as show n to be rapid, reliable and simple, and may be used for the quali ty cont rol o f H. perfora-
tum .
Key words: HPLC; Hypericum perforatum L; rutin; h yperin
　　贯叶连翘 Hypericum perforatum L. 是藤黄科
金丝桃属植物 ,含有多种具生物活性的化学成分 ,其
中主要是苯并二蒽酮类化合物、金丝桃素和伪金丝
桃素 ;多种黄酮类化合物 ,如芦丁、槲皮素和金丝桃
苷 ;间苯三酚类化合物如贯叶金丝桃素和加贯叶金
丝桃素 (拟 )以及挥发油和 xanthone类化合物等。
对贯叶连翘的质量分析多有报道 ,大多以金丝
桃素为质量指标 ,而金丝桃素含量很低 ,尚不能反映
药材质量。本文以黄酮类化合物芦丁 ( rutin)、金丝
桃苷 (hyperin)为质量指标 ,建立了同时测定芦丁、
金丝桃苷的 HPLC含量测定方法 ,该方法快速简
便 ,稳定性和重现性好 ,可用于药材的质量控制。 并
测定了不同干燥方法贯叶连翘中黄酮类化合物的含
量 ,探讨了温度对贯叶连翘中黄酮类化合物的影响 ,
为药材的加工、炮制提供一定的理论依据。
1　仪器与试药
色谱仪: Spect ra SYSTEM P1000高效液相色
谱仪 , Spect ra 100紫外可见光检测器 ;色谱工作站:
·407·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期
收稿日期: 2000-11-29作者简介:钱秋霞 ,女 , 1996年毕业于南京中医药大学 ,现为中国药科大学 98级研究生 ,专业生药学 ,研究方向为天然药物分析及质量标准化研究。
分析之星。芦丁、金丝桃苷对照品 (中国药品生物制
品检定所 ) ,贯叶连翘药材采自山东绿叶制药股份有
限公司植物园。实验用甲醇、乙腈均为色谱纯 ,水为
重蒸馏水。
2　色谱条件
色谱柱: Discovery C18 ( 5μm, 4. 6 mm× 25 cm ,
北京康乐林科技有限公司 ) ;流动相:水 -乙腈-磷酸
( 825∶ 175∶ 1) ;流速: 1. 0 mL /min;检测波长: 365
nm;柱温: 室温 ( 27℃ )。
3　方法与结果
3. 1　线性关系的考察: 精密称定芦丁对照品 10
mg、金丝桃苷 10 mg,分别定容于 10 mL甲醇中得
溶液 Ⅰ ,Ⅱ 。将溶液Ⅰ ,Ⅱ 稀释 10倍 ,吸取 1, 5, 10,
15, 20, 25μL分别进样测定 ,以进样量 (μg)为横坐
标 X ,峰面积积分值为纵坐标 Y ,进行线性回归得回
归方程 Y芦丁 = 742 539. 6X - 10 582. 8 (r = 0. 999
6 ) ,线性范围 0. 107～ 2. 675μg; Y金丝桃苷 = 1 025
968X+ 23 329. 23 (r= 0. 999 4) ,线性范围 0. 107～
2. 675μg。色谱图见图 1, 2。
tR < 5. 0为芦丁 , tR> 5. 0为金丝桃苷
图 1　对照品 HPLC图　　图 2　样品 HPLC图
3. 2　样品溶液的制备: 取贯叶连翘药材室温下阴
干 ,于烘箱中在 60℃ , 80℃ , 100℃烘 4, 8, 12 h,进
行正交实验 ,得 9组样品 (表 1)。药材粉碎过 40目
筛 ,精密称定 0. 5 g,定量加入 20 mL甲醇 ,超声 30
min,静置 ,过滤 , 5μL进样。
表 1　正交试验设计因素水平表
水平 因素
A温度 (℃ ) B时间 (h )
1 60 4
2 80 8
3 100 12
3. 3　精密度实验:按对照品溶液的制备项下操作 ,
配制一定浓度的标准溶液 ,连续进样 (n= 5) ,芦丁
和金丝桃苷的平均 RSD (% )分别为 0. 438, 1. 671。
表明仪器符合要求。
3. 4　稳定性实验: 制备芦丁和金丝桃苷的混标溶
液 ,分别于 1, 2, 4, 6, 8, 10 h进样测定 ,芦丁和金丝
桃苷在 10 h内稳定。
3. 5　重现性试验:取样品按拟定方法制备供试品溶
液测定 ,芦丁与金丝桃苷的平均 RSD (% ) 分别是
0. 343, 0. 423。 说明方法的重现性良好。
3. 6　回收率试验:精密称取适量已知含量的贯叶连
翘样品 ,加入适量芦丁、金丝桃苷 ,按样品溶液的制
备项下操作 ,芦丁的平均回收率为 99. 32% ,金丝桃
苷的平均回收率为 99. 5% , RSD (% )分别为
1. 007, 3. 597。
3. 7　含量测定: 本文共测定了 10组样品 ,结果见
表 2, 3。
3. 8　结论:正交试验结果分析表明温度是影响黄酮
表 2　不同干燥方法贯叶连翘中黄酮类化合物
含量测定结果 (% )
编号 温度 A 时间 B 芦丁 金丝桃苷 芦丁+ 金丝桃苷
1 A1 B1 0. 823 0. 855 1. 678
2 A1 B2 0. 822 0. 827 1. 649
3 A1 B3 0. 774 0. 765 1. 539
4 A2 B1 0. 632 0. 637 1. 269
5 A2 B2 0. 585 0. 612 1. 197
6 A2 B3 0. 699 0. 726 1. 425
7 A3 B1 0. 596 0. 612 1. 208
8 A3 B2 0. 621 0. 636 1. 257
9 A3 B3 0. 607 0. 634 1. 241
10 室温 ( 27℃ )阴干 0. 591 0. 616 1. 207
表 3　正交试验结果方差分析
芦丁 金丝桃苷 芦丁+ 金丝桃苷
温度 A 时间 B 温度 A 时间 B 温度 A 时间 B
K1 2. 419 2. 051 2. 447 2. 104 4. 866 4. 155
K2 1. 916 2. 028 1. 975 2. 075 3. 891 4. 103
K3 1. 824 2. 08 1. 882 2. 125 3. 706 4. 205
k1 0. 806 0. 684 0. 816 0. 702 1. 622 1. 385
k2 0. 638 0. 676 0. 658 0. 691 1. 297 1. 368
k2 0. 608 0. 693 0. 627 0. 708 1. 235 1. 402
R 0. 198 0. 017 0. 188 0. 0167 0. 387 0. 034
类化合物含量的主要因素 ,干燥时间影响不大。在
A1B1条件即 60℃干燥 4 h黄酮类化合物芦丁和金
丝桃苷的含量达到最高。 在一定温度范围内黄酮类
化合物含量随温度变化先升高后降低。
·408· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期
4　讨论
　　在摸索提取条件时 ,我们采取了加热回流、冷浸
和超声波震荡等提取方法 ,结果超声波提取方法方
便、迅速 ,提取完全。
参考文献:
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HPLC法测定更年安片中五味子甲素和五味子乙素的含量
崔兰贵 ,王　火 ,朱铁梁 ,刘明琴 ,刘继铁 ,胡迎庆 ,陈　虹
(武警医学院 ,天津　 300162)
摘　要: 目的　测定更年安中五味子甲素和五味子乙素的含量。方法　样品用环己烷超声提取 ,过滤 ,蒸干。残渣用
乙腈 -甲醇 ( 1∶ 1)溶解后 ,经 HPLC仪测定。 色谱柱: Phenomenex C18柱 ( 5μm, 250 mm× 4. 6 mm) ,柱温 22℃ ,流
动相:乙腈 -甲醇 -水 ( 15∶ 15∶ 10) ,检测波长: 254 nm。结果　更年安中五味子甲素和五味子乙素与其它成分分离良
好 ,保留时间分别约为 14. 6和 19. 1 min。 五味子甲素对照品线性浓度范围 1. 0～ 80μg /mL ,r= 0. 999 6,平均回
收率为 96. 5% , RSD为 3. 28% (n= 5)。五味子乙素对照品线性浓度范围 1. 0～ 80μg /mL ,r= 0. 999 8,平均回收率
为 94. 7% , RSD为 3. 49% (n= 5)。结论　本法灵敏度高、操作简便、结果准确 ,可用于更年安中五味子甲素和五味
子乙素的含量测定。
关键词: 更年安 ;五味子甲素 ;五味子乙素 ; HPLC
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 05 0409 03
Determination of deoxyschizandrin and schisandrin B in
GENGNIAN AN
*
TABLET by HPLC
CU I Lan-gui, W ANG Huo, ZHU Tie-liang, L IU M ing-qin, L IU Ji-tie , HU Ying-qing , CHEN Hong
　　 ( Medical Colleg e o f Chinese People s Armed Po lice Fo rces, Tianjin 300162, China )
Abstract: Object　 To determine th e concentra tion of deoxyschizandrin and schisandrin B in
GEN GNIAN AN TABIET by HPLC. Methods　 Samples of GENGNIAN AN T ABLET were ex tracted
w ith cyclohexone w ith the aid of supersonic wave, fi ltered and the fi lt rate evapo ra ted to obtain a residue
which w as disolov ed in methano l-acetonit rile ( 1∶ 1) and determined by HPLC using Phenomenex C18 ( 5
μm, 250 mm× 4. 6 mm ) a t a co lumn tempera ture of 22℃ , methanol-acetoni t rile-w ater ( 15∶ 15∶ 10) w as
used as the mobile phase, and detected at a waveleng th o f 254 nm. Results　 The peaks o f deoxyschizan-
drin and schisandrin B appea r at about 14. 6 min and 19. 1 min. The standard curv es o f bo th deoxyschizan-
drin and schisandrin B show ed linearity in the concentra tion range o f 1. 0～ 80μg /mL, and their r= 0. 999 6
and r= 0. 999 8. The average recovery rate of deoxyschizandrin and schisandrin B w ere 96. 5% RSD 3. 28%
(n= 5) and 94. 7% RSD 3. 49% (n= 5) respectiv ely. Conclusion　 This method w as found to be sensi tiv e,
quick and accura te fo r the determina tion of deoxyschizandrin and schisandrin B in GEN GN IAN AN
T ABLET.
Key words: GEN GN IAN AN TABLET, deoxyschizandrin; schisandrin B; HPLC
* GENGN IAN AN is a t raditiona l fo lk prescription containing Schisandra chinensis ( Turcz. ) Baill.
and many o ther herbal drug s fo r the t rea tment of discomfor ts during climacterium.
　　更年安片收载于《中华人民共和国药典》 1990
年版 ,由熟地黄、何首乌、泽泻、茯苓、五味子、珍珠
母、玄参、夜交藤、浮小麦等味药经加工而成 ,具有滋
阴清热、除烦安神等功能 ,用于治疗更年期出现的潮
·409·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期
收稿日期: 2000-12-26作者简介:崔兰贵 ( 1955-) ,男 ,河北平山县人 ,大学文化 ,主管药师。 现为武警医学院附属医院药剂科副主任。 研究方向:药物制剂。