全 文 ：·
89 8
· 中草药h Ci ne se Tr ad i tio n al and Her b al Dr ug s0 20 0年第 3 1卷第 1 2期
露醇标准品测混合熔点不下降 , I R 数据与文献 LS」报
道 的甘露醇相符合 。
参 考 文 献
l 宋治中 ,贾忠建 . 中草药 , 1 9 9 0 , 2 1 ( 1 2 ) : 4
2 国家 医药管理局 中草药情报中心站编 . 植物药有效成分手册 , 北
京 : 人 民卫生 出版社 , 1 9 86 : 1 0 0 3
赵余庆 ,衰 昌鲁 . 中国中药杂志 , 19 91 , 16 (7 ) : 4 21
R i t e h i e R G
,
C y r N a t s u k o
,
R o
r s e h B r i a n
, e t a l
.
C a n J Ch
e n ,
1 9 7 5 , 5 3
:
14 2 4
国家医药管理局中草药情报中心站 编 . 植物药有效成分手册 , 北
京 : 人 民卫生出版社 , 19 86 : 6 97
( 1 9 9 9
一
1 0一 2 7 收稿 )
大将军化学成分研究 ( I ) △
云南大学化学系 (昆明 6 5 0 0 9 1 )
云南省烟 草科学研究院
杨靖华 ’ 马 妮 李 良
汪云松
大将军 L o b e l i a 。 l a v a t a E . W im m . 是半边莲科
半边莲属植物 , 民间用于治疗腮腺炎 、 跌打损伤 、 风
湿痛 、 疹症 ,全草或根 、 叶 (有毒 )药用 ,分布于云南西
南部至南部 ,其化学成分的研究尚未见报道 。 为了明
确该植物的活性成分及其在该属植物中的化学分类
学意义 ,我们从云南省西双版纳采集大将军全草 , 预
试验显示有生物碱 、 菇类 、 糖 、 皂昔 、 有机酸和挥发油
等 。 从该属植物乙 醇提取物 中分离到 5 个化合物 , 经
I R
、
M S
、 `
H
, ’ 3
C N M R 光谱数据和理化性质的解析 ,
分别鉴定 为豆 街醇 ( I ) 、 齐墩果 酸 ( l ) 、 日一谷 街醇
( 皿 ) 、 日一香树脂 醇棕桐 酸酷 ( VI ) 、 日一香树 脂醇 ( V ) 。
这 5 个化合物均为首次从该种植物中分到 。 尽一香树
脂醇棕桐酸醋通过对老鼠中枢神经系统的药理研究
表 明 ,该化 合物是一种新 的重要替代物 , 具有类似
m i a n se ir n 作用类型的抗抑郁活性 lj[ 。 从该种植物中
分到的齐墩果酸 ,存在于许多中草药中 ,生理活性较
为广泛 , 对其结构修饰后合成的齐墩果酸磷酸醋单
钠 ,经体外药理实验证实 , 其抗肿瘤活性比齐墩果酸
高出 5 倍〔 2 ] 。
1 材料与仪器
实 验 所 用 植 物 大 将 军 L o b e l i a c l a v a t a E ·
W im m
. 采 自云南省西双版纳 。熔点仪未校正 。 I R 用
S h a m z d u I R
一
4 0 8 型仪测定 , K B r 压片 。 ` H 、 ` 3C N M R
用 B R U K E R A M 一 4 0 0 型 仪 测 定 , C D C I。 作溶 剂 ,
T M S 作内标 。 H R 、 E l 一 M S 用 V G A u t o s p e 。 质谱仪
测定 ( 7 0 e V ) 。 薄层层析用 G F 25 4硅胶板 , 柱层析用
1 0 一 2 0 0 目硅胶 ,青岛海洋化工厂生产 。
2 提取与分离
大将军全草 3 . 0 k g ,经粉碎后于室温下用 80 %
工业乙醇渗流 ,得浸膏 50 0 9 。 浸膏用 30 % H CI 水溶
液分散 , 调节 p H 一 2 ,用氯仿萃取 ,得提取物 25 9 。然
后用氨水调节 p H 一 10 ,氯仿萃取 ,得粗生物碱 12 9 。
2 0 9 非 生物碱部分用硅胶柱层析 ,依 次用石 油醚 、
乙醚 、 乙 酸乙 醋 、 甲醇梯度洗脱 , 得 F l 一 F 10 部分 。
F 4 部分经石油醚 (3 : 1) 洗 脱 , 得化合物 1 30 m g 。
F S
、
F 6 部分经石油醚 、 乙酸 乙醋多次柱层析得化合
物 1 4 6 m g 、 1 6 7 m g 。 F s 部分 以苯 一乙 酸乙醋 ( 8 ,
1) 为洗脱剂多次柱层析 , 得化合物 W 1 05 m g 、 V 82
m g
。
3 鉴定
化 合 物 x : 无色针 晶 (丙酮 ) , m p 1 6 5 ℃ ~ 1 6 8
℃ , L ie b e r m a n n 反 应 呈 阳性 , 1 0% H ZSO ` 显 紫色 。
xR
、 ’
H
, ” C N M R
、
E xM s 数据经与文献 [ ,〕对照 ,鉴定
化合物 I 为豆 菌醇 。
化 合物 l : 白色 针 晶 , m p 2 8 0 C ~ 2 8 2 ℃ ,
L i e b e r m a n n
一
B u r e h a r d 反应呈阳性 。 I R 、 ` H N M R 数
据经 与文献闭报道一 致 , T L C 检查 R f 值与标准品
一致 , 由此确证为齐墩果酸 。
化合物 l : 白色 针 晶 (丙酮 ) , m p 1 3 3 ℃ ~ 1 3 5
℃ , L i e b e r m a n n 反应呈阳性 , 10 % H ZS O 4 显紫色 。 与
件谷 幽醇对照 品 C O 一 T L C , R f 值一致 , 因此确证 l
为 p一谷 街醇 。
化合物 VI : 白色固体 , m p 7 7 cC 一 7 9 C 。 IR v m , 二
e m 一 ` : 2 9 8 0
,
2 9 6 0
,
2 9 3 0
,
1 7 3 0 ( C = O )
,
1 4 6 2
,
1 3 6 0
,
1 1 7 0
,
9 8 0
,
7 2 0
。
E l
一
M S m / z
: 6 6 4 [M ]
+ , 6 5 0
〔M 一 C H 3」+ , 4 0 9 , 2 1 8 , 2 0 3 , 1 8 9 , 1 7 5 , 1 3 5 , 1 2 1 , 10 9 ,
9 5
,
8 1
,
6 9
,
5 7
,
4 3
。 ` 3
C N M R 与文献报道的 件香树脂
(下转第 9 4 3 页 )
, 杨靖华 女 , 29 岁 , 副教授 。 19 9 6 年毕业于云南大学化学 系 , 获硕士学位 。 主持完成一项云南省应用基础研究基金资助项 目 , 作为主要完成 人 , 先后参与完成了两项云南省应用基础研究基金助项 目 , 1 9 9 9 年破格 晋升为副教授 。 主要从事活性 天然产物的提取分离 、 合成转化工作 ,在国内外学术刊物发表论文 10 余篇 , 申请中国发明专利 1 项 。△云南省应用基础研究基金资助课题
中草药 C h i n e s e T r a d it io n a l a n d H e r b a l D r u g s 2 0 0 0 年第 3 1 卷第 1 2 期 · 9 4 3 ·
质呈逐渐下降趋势 ; p H 值是不断降低 的 ,说明在发
酵 中有酸类物质分泌到胞外 , 即灵芝酸 。
2
二
3 胞外多糖的分离纯化 : 通过紫外分析可知 ,我们
所得到的灵芝多糖在 26 0 m m 及 2 80 m m 处无吸收
峰 ,也就是说无核酸及蛋白质存在 ,基本上证明多糖无
其他杂质 , 且通过发酵得到的多糖提取得率为 37 . 5
g k/ g干菌体 , 比文献报道川 34 . 4 9 k/ g 干菌体有提高 。
2
.
4 胞外多糖组分的层析分析 :通过凝胶层析所得
到的洗脱曲线见图 2 。
基的伸缩振动吸收峰 。
2
.
5
.
3 气相色谱分析 : 将胞外多糖组分 1 的酸水解
液乙酞化后作气相色谱 , 其结果如表 2 所示 。 乙酞化
方法是 : 取 20 m g 灵芝多糖溶于 3 m L 5 m ol / L 硫酸
中 ,封管在沸水中水解 s h ,水解液加人适量 B a C O 3
中和 ,过滤 。 滤液中加人 15 m g N a B H 、 ,放置过夜 ,然
后加人适量乙酸分解过量的 N a B H 、 ,重复 4 次 。 将上
面得到的溶液在 1 05 C 的烘箱 中烘干 , 冷却后转人
真空耳塞管 , 加人 1 m L 乙酸配 , 0 . 5 m I J 毗陡 , 然后
在 10 O C 下反应 Z h ,反应液冷却后加人 1 m L 水 ,
放人表面皿中蒸发至干 。 最后用 1 m l 一 氯甲烷提取 ,
提取液可直接进行气相色谱分析 (见表 2 ) 。
表 2 胞外多糖的气相 色谱 分析
, J
6众.0
保 留时间 峰面积
“ 犷寸一奋节下犷 -落石一右 几 孔
洗脱管数 (管 )
( m i n )
3
.
2 3 2
3 8 13
4 2 5 0
5
.
5 4 8
合计
校正因子
气ù432众
试侧报哪
3 9 7 3
2 1 9
6 1 5
7 1 3 8 9
7 6 1 9 6
含量
(写 )
5
.
2 1 4
0
.
2 8 7
0 8 0 7
9 3
.
6 9 1
1 0 0 0 0
l
,
00 0E 十 0 0 0
1
.
OOOE + 0 0 0
1
.
00 0E + 0 0 0
1
.
0 0 0E + 0 0 0
图 2 胞外多精的洗脱曲线
从图 2 可以看出 ,胞外多糖的成分复杂 ,分子量
大小不一 ,共有 5 个组分 。
2
.
5 多糖的单糖组成分析 :
2
.
5
,
1 纸层析 : 通过纸层析测定 R f 值与已知单糖
比较可知灵芝胞外多糖组分是由葡萄糖 、 甘露糖 、 果
糖组成的 。
2
,
5
.
2 胞外多糖红外分析 : 通过胞外多糖红外光谱
看 出 8 4 0 。 m 一 `及 7 6 1 Cm 一 `附近无吸收峰 , 8 9 2 e m 一 `
处有 吸收峰 ,表明灵芝胞外多糖具有 份D 一糖昔键 ;
8 0 0 c m
一 `处有一微弱的吸收峰表 明有甘露糖存 在 ;
1 1 10 o m
一 `处有吸收表明灵芝多糖的单糖为六元环
结构 ; 3 40 0 c m 一 ’ 处的强吸收峰为糖分子 中缔三经
从表 2 我们可以 看出 ,灵芝胞外 多糖组分 1 是
由 3 种单糖组成的 , 结合纸层析 的结果可知灵芝胞
外多糖中含有甘露糖 、 果糖 、 葡萄糖 ,其 中果糖是首
次报道 。
参 考 文 献
1 黄为群 ,吴其威 , 黄瑞珊 , 等 . 上海交通 大学学报 , 1 9 94 , 2 8 (2 ) : 83
2 罗立新 ,姚汝华 , 周少奇 . 食品工业科技 , 1 9 98 , (3 ) : 6
3 孙东平 . 液体发 酵红曲的应用研究 . 南京大学硕士研究 毕业论
文 , 1 9 9 7 : 1 9
4 袁 玉荪 , 朱婉华 , 陈钧辉 . 生 物化学实验 . 北京 : 高等教育 出版
社 , 1 9 9 5 : 13
5 袁玉荪 , 朱婉华 , 陈钧辉 . 生 物化学 实验 , 北京 : 高等教育出版
社 , 1 9 9 5 : 6 5
6 张承圭 , 王传怀 , 袁玉荪 ,等 . 生 物化学仪器分析 . 北 京 : 高等教
育出版社 , 1 9 9 0 : 2 0 3
( 1 9 9 9
一
1 1
一
2 4 收稿 )
司产司产司卜闷户司沙司产司产司泌司产喇卜司产司卜司协司夕诏泌侧产司夕翅卜招沙 心价诏产砚价龙夕` 梦 、 , 多 、昭少司产 `梦 、司价阅多 、 嘴多 ` ` 左卜司卜司沙 司产司卜` 梦、招泌司汾招泌心价司价 `多 、 喊乡、 昭多` 司产招卜理价诏夕 阅乡
(上接第 8 9 8 页 )
醇棕桐酸醋一致咖〕 。 由此 ,确证 刊 为 件香树脂 醇棕
桐酸醋 。
化 合 物 V : 白色 晶体 , m p Z o o C一 2 0 1 ℃ 。
I R v ,
a二 e m 一 1 : 3 3 2 0 (
一
O H )
,
2 9 0 0
,
2 8 0 0
,
1 4 6 0
,
1 3 8 4
,
1 3 6 2
,
1 0 5 0
,
1 1 0 0
。
E l
一
M S m / z
: 4 2 7仁M + +
z 」, 4 0 9 [M 一 O H j + 。 ` 3C N M R 图谱显示有 8 个甲基
( 2 8
.
4 2
,
1 5
.
6 0
,
1 5
.
5 1
,
1 6
.
8 0
,
2 6
.
2 5
,
2 8
.
0 5
,
3 3
.
3 2
,
2 3
.
7 5 )
,
1 0 个亚 甲基 ( 3 8 . 8 5 , 2 7 . 0 8 , 1 8 . 4 0 , 3 2 . 8 0 ,
2 3
.
6 1
,
2 7
.
3 6
,
2 6
.
2 5
,
4 6
.
9 7
,
3 4
.
8 5
,
3 7
.
2 5 )
,
5 个 次
甲基 ( 7 9 . 0 8 , 5 5 . 3 5 , 4 7 . 7 8 , 1 2 1 . 6 5 , 4 7 . 4 0 ) , 7 个 季
碳 ( 3 8 . 7 5 , 4 0 . 0 9 , 3 7 . 2 5 , 1 4 5 . 2 5 , 4 2 , 0 1 , 3 2 . 8 0 ,
3 1
·
0 6 )
,
1 4 5
·
2 5 和 1 2 1 · 6 5显示有一个双键存在 , 其
, 3
C N M R 与文献报道的 p一香树脂醇一致阶〕 ,故推测
其结构为 尽一香树脂醇 。
致谢 : 云 南大学生 物 系胡志浩教授鉴 定植物样
品 ,在此衷心感谢 !
参 考 文 献
1 S u b a
r n a s A
,
T a d a n o T
.
J P h
a r m P h a r m a e o l
, 1 9 9 3
, 4 5 ( 6 )
: 5 4 5
2 刘 明生 , 谷黎红 ,陈英杰 ,等 , 中国药物化学杂志 , 19 93 , 3( 1 ) : 42
3 H o l l a n d H
,
D i a k o w P R
,
T a y l o r G J
, e t a l
.
C a n J C h
e m
, 1 9 7 8
,
5 6 ( 2 4 )
: 3 12 1
4 齐一萍 , 郭舜民 ,夏志林 ,等 . 中国中药杂志 , 19 96 , 2 1 ( 4) : 2 34
5 龚运淮 甲 天然有机化合物的 ` 3C 一核磁共振位移 , 昆明 : 云南科技
出版社 , 19 8 6 : 1 3 1 , 1 2 ,
( 1 9 9 9
一
1 1
一
0 2 收稿 )