全 文 ：= 8
.
3 )
,
6
.
2 7 (I H
, s )
,
6
.
9 6 (I H
,
d
,
J=
8
.
8 )
,
7
.
4 0 (S H
,
m )
,
7
.
6 1 (Z H
,
t
,
J~ 7 )
,
7
.
7 4 (Z H
,
d
,
J= 7 )
,
8
.
1 4 (Z H
,
d
,
J~ 7 )
。
4 讨论
澳加成的办法分离 C , t 同制备色谱法相
比 , 可形成规模化生产 , 同 0 50 4 氧化法 〔7〕相
比 , 具有安全化 , 成本低 , 操作简单易行等优
点 。 实验 的关键处澳加成控温 < 20 ℃ , 反应
时间不超过 s m in 。
致谢 : 旋光 、熔点 、 H PL C 、 U V 均 由本公
司检浏 中心检测 ; IR , M S , ’H N M R 由 2 0 4 所
代测 。
参 考 文 献
W a n iM C
, 己t a l . J A m Ch e m So
e , 19 7 1
, 9 3 : 2 32 5
H a r r e y S D
, et a l
.
J C hr o m a t o g r
,
1 9 9 1
,
5 8 7
:
3 00
W ith e r u p K M
, e t a l
.
J L iq Ch r o m a to g r
,
19 8 9
,
12
:
2 1 1 7
Sh iff P B
, e t a l
.
N a t u r e (L o n d o n )
,
1 9 7 9
, 2 7 7 : 6 6 5
陈未名 , 等 . 药学学报 , 1 9 9 1 , 2 6 (10 ) : 7 4 7
S t a sk o M W
, e t a l
.
J Liq Chr o m a t o g r
,
1 98 9
,
1 2 (1 1 )
:
2 1 3 3
D a
v
id G l
,
et a l
.
J N a t P r o d
,
1 9 92
, 5 5 (2 )
:
2 5 9
(1 9 9 8
一
0 9
一
2 2 收稿 )
板蓝根抗流感病毒有效部位的筛选△
山东中医药大学药 学院 (济南 2 5 0 0 1 4) 刘 思贞 . 祝希娴 邵 玉芹 马天波
摘 要 利 用系统溶剂分 离法和 阳离子树脂 吸附交换 , 对板蓝 根的化学成分 进行 了分离 , 再利用
鸡胚 羊膜腔 半体内法进行抗 流感病毒 活性实验 , 最后 证明活性部位为亲 水性的 、被 阳离子吸附部
分 。
关键词 板 蓝根 抗流感病毒 有效部 位
靛 青系 十字花 科植 物 I sa tis in d ig o tic a
F or t
. , 其根作为板蓝根人药 , 具有清热解毒 ,
凉血之功效 。临床上广泛用于治疗肝炎 、腮腺
炎 、流感 、丹毒 、流脑和 扁桃体炎等病毒 、细菌
性疾病 。药理研究证实 : 板蓝根的水提液对枯
草杆 菌 、金黄色葡萄球菌 、八联珠菌 、大肠杆
菌等 8 种细菌均有强烈的抑制作用 。 长期以
来 , 人们一直认为靛昔是板蓝根抗病毒 、抗菌
的有效成分 , 并把它的含量作为控制板蓝根
制剂质量的指标〔‘一3〕, 但实验表明 , 靛昔在动
物的胃 、小肠和盲肠中均被分解破坏 , 而且 自
体内排出很快 , 体外也无明显的抗菌 、抗病毒
活性 。 为了搞清板蓝根抗流感病毒的有效成
分 , 同时也为 了给板蓝根制剂的质量控制提
供真 实可靠的指标 , 我们在预实验 即板蓝根
的水提液和 乙醇提取液对抗流感病毒活性实
验取得肯定结果的基础上 , 做了进一步的有
效部位的筛选工作 , 除确定其有效部位为阳
离子树脂 吸附部分外 , 还证实有效部位经酸
水解后 , 立即丧失活性 , 即有效部位为结合氨
基酸 。
1 材料
板蓝根 : 市售 , 为十字花科植物 Isat is in -
dl’ g ot ic a For t . 的根 ;鸡胚 : 济南养鸡场购进时
为 4 日龄 , 室内再孵化 s d ; 阳离子交换树脂 :
市售 , 73 2 型 , 郑州市化学试剂三厂 ;盐酸吗琳
双呱 : 市售 。实验用的流感病毒毒株 : 甲型流感
病毒株 , 在样品 I ~ vI 中用国家代表株 A /津
防 / 7 8 / 7 7 ; 在样 品 VI , 福 中用国家代表株 A /
粤防 / 4 4 / 8 9 。 乙型流感病毒毒株 , 在样品 I ,
I 中用国家代表株乙 /青岛 / 3 7 / 9 0 ;在样品 l
~ VI 中用国家代表株 乙 / 粤防 / 3 / 91 ; 在样品
·
A d d r e s s
:
L iu S iz h e n
,
C o lle g e o f Ph a r m a e y
,
S ha n d o n g U n iv e r s ity o f T r ad itio n al C hin e s e M e d iein e a n d M a t e r ia M ed i
-
e a , Jin a n△山东省 自然科学基 金资助项 目
一
6 5 0
.
妞 , 珊 中用国家代表株乙 / 沪防 / 3 / 9 1 。 至中性 , 再用 Z m ol / L 氨水洗脱 。 分段收集 ,
2 实验方法 每份约 10 0 m l, , 用硅胶 T LC 进行检查 , 合并
2
.
1 取靛青根粗粉 5 k g , 用 70 %工业 乙醇 斑点相同部分 。 第 16 一 26 流分减压浓缩 , 置
渗媲至提取液颜色极浅 , 旋转薄膜蒸发 回收 冰箱 内 , 析 出氨基 酸 的粗 结 晶 。 将 粗 品用
溶剂至醇味很淡 , 得乙醇提取物 3 7 O 0 m L 。 3 0 % 乙醇重结 晶 , 得精氨酸纯品 , 配成 0 . 01
取上述提取 液 3 70 m L (相 当于 原药材 g / m L 水溶液 , 用 乙 酸中和 至 p H S ~ 6 , 编号
50 0 9 )
, 依次用石油醚 、 乙酸 乙醋 、 正 丁醇萃 为 VI 。
取 。 分别得到石油醚 、 乙酸乙醋 、正丁醇部分 2 . 5 经树脂交换后的 B 部分 , 硅胶 T L C 显
和水层部分 。 前三部分分别回收溶剂至小体 示含脯氨酸 、谷氨酸 、 y一氨基丁酸 、 撷氨酸 、 酪
积 , 加 吐温 一 8 0 5 9 , 然后用 蒸馏水 配成 5 0 氨酸 。 用氨水中和 至 p H S一 6 , 编号为 VI 。
m L 溶液 。 水层经过适 当浓缩至每 毫升相当 2 . 6 被树脂吸附后用 2 m ol /l , 氨水洗脱下
于原药材 1 9 。 编号为 I , l , 班 , W 。 来 的氨基酸粗结晶 (第 4 一 12 流分 ) , 经硅胶
2
.
2 其余的乙醇提取物依照 方法 2 . 1 制成 T L C 检查主要含精氨酸 、谷氨酸和 y一氨基丁
4 个部分 : 前三部分 回收溶剂至无有机溶剂 酸 。 取此结晶配成 0 . 0 2 9 / m L 水溶液 , 乙酸
气味 , 水层适当浓缩至无明显正 丁醇气味 。 中和至 pH S一 6 , 编号为姐 。 它们抗流感病毒
2
.
3 将水层配成每毫升相当于 0 . 5 9 原药材 的活性情况见表 1 。
的水溶液 , 3 一 s m L / m in 的流速通过经预处 将 活性最强 的 班 和 IV 用 15 %的硫酸加
理过的强酸型阳离子交换树脂 。流出液分段收 热 至 90 C l h 后 , 即丧失活性 。 同时发现水
集 , 得到 A , B 两部分 。 A 部分对苟三酮反应呈 解后的门冬氨酸 、谷氨酸 、 甘氨酸和蛋氨酸的
阴性 , B 部分对苗三酮反应呈 阳性 。 从 A 部分 量均为水解前的 3 倍 , 因此 , 抗流感病毒的活
取出少量 , 用氨水调至近中性 , 编号为 V 。 性可初步确定为结合氨基酸 。
2
.
4 将阳离子交换树脂柱先用蒸馏水 冲洗
表 1 不同编号样品抗流感病毒活性结 果
样品
编号
不同浓度试样抗甲型流感病毒活性 不同浓度试样抗乙型流感病毒活性
10 1
:
2 0 1
: 4 0 1 : 80 10 1
: 20 1 : 4 0 1 , 80
~巨 _ _ 一
+ 一 一 一
+ 斗 + 十
+ 十 + +
丰 一一 一 + 一 一 一
斗 一一 一 .‘ 一 一 一
+ 十 + +
+ + + +
+ + 十 +
+ + + 十
+ + + +
+ + + +
+ + + +
+ + 一 一
十 + 十 + + + 十十 + + + 十 + + 十 + 一 一 一 一
+ 十+ + + + + 一 + + 十 + 十 + + + + + 一 一
珊
粗
+ 十 + 一
十 + + +
+ + + 一
+ + + +
十十 + 一
+ + 一 一
+ + + 一 + + + 一
十 + + 一
+ 十 十 一
+ + + 一
月
, ~ , 一 份 一
斗 一一 _
+ 小 + 一
干 + + 一
注 : + + 十 + 完全抑制病毒生长 十十 + 一 抑制大部分病毒生长
一 一 一 一 不能抑制病毒生长
3 小结
本实验证实传统中药板蓝根的抗流感病
毒有 效部位 为被 强酸型 阳离子树脂 吸附部
分 , 此结论在国内外尚未见报道 。此发现为科
学评价板蓝根制剂的质量提供了新的可靠依
据 , 也 为合理设计板蓝根提取 、分离工艺 , 为
制取更有效的板蓝根制剂提供了切实可行的
《中草药 》1 9 9 9 年第 30 卷第 9 期
+ + 一 一 抑制部分病毒生长 + 一 一 一 基本上不能抑制病毒生长
依据 。
参 考 文 献
l 张时行 . 中草药 , 1 9 8 3 , 14 (6 ) : 7
2 上海 药物研究所 . 中草药有效成分 的提取和 分离 . 上
海 : 上海科学技术 出版社 , 1 97 6 : 4 0 6
3 张时行 , 等 . 中成药研究 , 1 9 84 , (增刊 ) : 5
(1 9 9 8
一
12
一
0 2 收稿 )
.
6 5 1
-