全 文 ：a n o m e r 中 C 一 2 , 3 的化学位 移比 a , 日一D 一p y r a -
no g lu co se 中 C 一 2 , 3 的化学位移位于较低场 ,
而与其相邻的 C 一 1 , 4 却位于较高场 , 进一步
证实 了 H H D P 基位于葡萄糖核的 2 , 3 一位 。 由
以 上 分 析 确 定 该 化 合 物 的 结 构 为 2 , 3 -
H H D P
一
D
一
g lu e o s e ( W )
, 负离 子 F A B 一MS 给
出分子离子 4 8 1 [M + 一 1 ] , 与上述推测一致 。
参 考 文 献
刘延泽 , 等 . 天然产物研究 与开发 , 19 9 8 , 1 0 (1 ) : 14
O k u d a T
, 亡r a l
.
T e t r ahe d r o n I e tt
, 19 8 2
,
2 3 : 3 9 3 7
H a n L
, e t a l
·
C he m Pha r m B u ll
,
1 9 9 4
, 4 2 (7 )
:
13 9 9
Y o s hid a T
,
et al
.
C h em Ph a r m B u ll
, 19 9 2 , 4 0 (7 )
: 1 7 5 0
龚运淮 . 天然有机化合物的 ’3C 核磁共振化学位移 . 昆
明 : 云 南科技 出版社 , 19 86 : 4 03
(1 9 9 8
一
0 9一 1 6 收稿)
天然紫杉醇分离难点研究
西安天诚 医药 生物工程有 限公 司 (7 1 0 0 7 5) 薛迎春 ‘ 陈 冲 周 佳
摘 要 从红豆杉树皮 中提取分离 紫杉醇 , 采用 1 %柠檬酸渗 流 , 柱层 析分离 , 最后用澳加成 分离
紫杉醇和 ce p hal o m a n ni n , 可 容易得到高纯度的紫杉醇 。
关健词 紫 杉醇 分离 澳加成
点 , 这给它们分离带来很大困难 。 。 和 t 的部
分侧链结构见图 2 。
一 C尹,r-IN一
尸C,
/洲‘
C
紫杉醇 (p a e lit a x e l)〔‘〕是从红豆杉植物树
皮和 树叶中提取 的二菇类化合物 , 它是 当今
世界公认 的广谱性最好 , 活性最强的抗癌药
物 。 有关它的提取分离 已有较多报道 〔2一 ‘〕 , 多
采用乙醇回流提取 , 柱层析分离 , 再经过制备
高效液相 色谱 , 才 能得到高纯度 p ac h ta x el 。
在 天然 p a e lit a x el 的分 离过程 中 , 难点是 如
何快速有 效地分离 p a e lit a x e l(t )和 C e p ha lo -
m a n n in (e )
, 它们的化学结构式见 图 1 。
c( 部分侧链结构 )
e e Ph a 1O m a n m n
H O ,
_
j
_ 二动夕以r 户尸,
_又 ,厂夕际 二 ~ ~
Hs 妹 宁 里 “l.’ ’
H HO
t a x d
c势护之
图 1 ee p h a lo m a n n in 和 pa e lita x e l 的化 学结构式
可看出 , 它们结 构非常相似 , 只 有在 C 13
侧链上有微 小差异在薄层板 上几乎 同一斑
图 Z t 和 c 的部分侧链结构
在 c 的侧链结 构 中 , 由于 C S ‘ 一N 4 ‘ 的酞
胺影响 , C 7 ‘一C 。‘ 的双键 7t 电子云 向 C 6 ‘乃至
C S ‘方向偏移有利于澳的进攻 , 而 t 的此位置
系一苯环 , 相对于 c 其 电子云密度 比较均匀
而稳定 , 利用这一差异 , 我们采用溟加成的办
法 , 改变 c 的侧链结 构 , 使两者极 性有 了差
异 , 可采用普通的硅胶柱层析进行分离 。
1 仪器和材料
FA B M S 用 JM S 一5 X 1 0 2 质谱仪 ; E IMS
用 ZA B 一ZF 质谱仪 ; IR 用 6 0 S X F IR 仪器 (美
国 N ie o a le t 公 司 ) ; ’H N M R 用 Fx 一 9 0Q 型仪
器 (日本 G E C 公司 ) ; H PL C 用 W a te r s 6 0 0 一E
型 仪 ; 熔 点 用 K of le t 熔 点 仪 (温度 计 未 校
正 ) ;旋光用 W Z Z 一 1 型 自动指示旋光仪 (上海
A d d r e s s
:
X u e Y in g e h u n
,
X i
一
a n T ia n eh e n g D r u g s 衣 B io e n g in e e r in g C o
·
64 8
·
L t d
. ,
X i
一 a n
物理光学仪器厂 ) 。 薄层层析用硅胶 、柱层析
用硅胶均用青 岛海洋化工厂产品 。 其它试剂
均 用分 析 纯试 剂 。 标 准 品 p a elit a x e l (t )和
e e p ha lo m a n n in (e )由 S ig m a 公司提供 。
2 实验
2
.
1 加成样品的准备 : 将树皮用 1写柠檬酸
渗流 , 提取所得总枯经过 2 次柱层析 , 得到薄
层单一斑点 , 经 H PL C 检测含量可达 40 % ~
5 0 % 的粗品 。
2
.
2 澳加成 : 加成过程 的要点是 溶剂的选
择 , 澳量的选择 , 润柱溶剂的选择 , 反应温度 、
时间的控制 , 分别作了以下实验 :
2
.
2
.
1 澳量选择 : 称取 2 个 3 0 9 硅胶 (1 0 0 ~
1 2 0 目 ) , 用 C H C 13 湿法 _ L柱 , 称取 2 个 2 . 0 9
待加成样品溶于少量 C H CI : 中 , 分别移取 0 . 1
m L 和 。. 15 m l砂 漠 , 在搅拌条件下滴入样品液
中 , 搅拌后倾人柱顶 , 结果见表 1 。
表 1 澳加成过程的澳 t 选择
C 1
3 或 C C I; , 结果见表 3 。
表 3 溶澳溶剂的选择
硅胶量
(g )
样品量
(g )
溶荆及
用t (m L ) 结果
A 60 4
.
0 CH CI: 1 有放热反应
B 60 4
.
0 CCI‘ 0
.
5 效果很好
C 6 0 4
·
0 CCI。 l 有凝胶出现
2
.
2
.
5 反应温度和时间选择 : 夏天做此实验
时 , 经常在溶样烧杯 中有凝胶出现 , 有放热现
象 , 选择以下不同反应温度和反应时间 , 结果
见表 4 。
裹 4 反应温度和 时间的选择
样品量 CHC 场 C I; 澳盈 沮度
(g) 量(m l) t (m L) (m L) (℃)
、絮)
硅胶量
(g )
样品量
(g )
澳用量
(m L )
H PLC
结果(%)
A 3 0 2
.
0 0
.
1 3
.
9
B 3 0 2
.
0 0
.
15 0
.
1
以上结果表明澳量要过量才可以保证一
次除去 C 。
2
.
2
.
2 湿法上柱溶剂选择 : 同上 的实验 , A
柱选用 C H CI : , B 柱选用 C C 14 。 上样量相同 ,
结果表明用 C H C1 3 分离效果不佳 , 用 CCI ; 分
离效果很好 。
2
.
2
.
3 溶解样品的溶剂 、用量选择 : 我们对
溶样的溶剂进行选择 , 经过分析 , 应选择极性
小的试剂 , 结果见表 2 。
表 2 溶样的溶剂及用 . 的选择
硅胶量
(g )
样品量
(g )
溶剂及用
量(m L )
HPL C
结果 (写)
A 6 0 4
.
0 C CI
; 5 6
.
0
B 6 0 4
.
0 CHC 13 5 0
.
1
C 60 4
.
0 CCI‘ l 有凝胶出现
由于 C C I、 对 t 的溶解度很小 , 所 以应选
择少量的 CH C1 3 溶解 。
2
.
2
.
4 溶澳溶剂的选择 : 将嗅溶于极性小的
溶剂中 , 有利于加成反应进行 , 一般选择 CH -
(中草药 》19 99 年第 30 卷第 9 期
A 4
· 。 5 0 . 5 0 . 3 30 1 较多凝胶
B 4
.
0 5 0
.
5 0
.
3 10 5 较多凝胶
c 4
.
0 5 0
.
5 0
.
3 0 5 较少凝胶
D 4
.
0 5 0
.
5 0
.
3 0 1 效果好
根据以上实验结果 , 我们确认最佳条件 ,
放大至上 样量为 10 9 , 具体操作 如下 : 称取
1 5 0 9 1 0 0 ~ 1 2 0 目硅胶 , 用 C C I。 湿法上柱 ,
走 平 。 A : 称 取 1 0 9 等加 成样 溶于 2 5 m L
CHC I
: 中 , 使之溶解 ; B : 取 0 . 75 m L 澳溶于
1
.
3 m L CCI
; 中 。 将 B 滴人 A 中 , 搅拌 , 迅速
加人 柱 顶 , 用 CCI ; 洗 脱 至液 无 色 , 然 后用
C H C 1
3 洗脱 , 至浅黄色带不再移动时 , 加大极
性到 C HC 13 一M e O H = 1 0 0 , 0 . 5 , 等较纯 t 流
分流下 时 , 加大 至 CHC 13 一M eO H 一 1 0 0 : 1 ,
收集合并 t 流分 , 真空 浓缩得固体 5. 5 9 , 再
用乙醇 一水重结晶 , 得 9 9 . 2 1 % p a elit a x e l。
3 鉴定
p a e lit a x e l
: 白 色 结 晶 , m p 2 1 3 ℃一 2 1 5
‘
C
。
IR e m
一 l : 3 4 6 0 , 1 7 3 0 , 1 7 2 0 , 1 7 1 0 , 1
6 5 0
。
FA BM S m / z
:
8 54
,
7 9 4
,
5 6 9
。
E IM S m /
z : 5 5 0
,
4 9 0
,
4 3 0
,
4 0 4
,
3 8 6
,
3 2 6
,
3 0 8
,
2 2 2
,
2 1 0
,
1 9 3
,
1 6 5
,
1 4 7
,
1 2 2
,
1 0 5
,
9 1
,
7 7
。
‘
H N M R 占: 1 . 1 6 (3 H , s ) , 1 . 2 5 (3 H , s ) ,
1
.
6 9 (3 H
, s )
, 1
.
8 1 ( 3 H
,
d
,
J 一 1 . 1 ) ,
2
.
2 4
,
2
.
3 9 (各 3 H , s ) , 1 . 8 6 (I H , m ) ,
2
.
3 3 (Z H
,
m )
,
2
.
5 5 (I H
,
d d d
,
J = 6
.
6
,
9
.
7
,
1 4
.
9 )
,
3
.
8 0 (I H
,
d
,
J = 7
.
0 )
,
4
.
2 0
,
4
.
3 0 (各 I H , d , J一 8 . 5 ) , 6 . 2 4 (I H , br t , J
·
6 4 9
.
= 8
.
3 )
,
6
.
2 7 (I H
, s )
,
6
.
9 6 (I H
,
d
,
J=
8
.
8 )
,
7
.
4 0 (S H
,
m )
,
7
.
6 1 (Z H
,
t
,
J~ 7 )
,
7
.
7 4 (Z H
,
d
,
J= 7 )
,
8
.
1 4 (Z H
,
d
,
J~ 7 )
。
4 讨论
澳加成的办法分离 C , t 同制备色谱法相
比 , 可形成规模化生产 , 同 0 50 4 氧化法 〔7〕相
比 , 具有安全化 , 成本低 , 操作简单易行等优
点 。 实验 的关键处澳加成控温 < 20 ℃ , 反应
时间不超过 s m in 。
致谢 : 旋光 、熔点 、 H PL C 、 U V 均 由本公
司检浏 中心检测 ; IR , M S , ’H N M R 由 2 0 4 所
代测 。
参 考 文 献
W a n iM C
, 己t a l . J A m Ch e m So
e , 19 7 1
, 9 3 : 2 32 5
H a r r e y S D
, et a l
.
J C hr o m a t o g r
,
1 9 9 1
,
5 8 7
:
3 00
W ith e r u p K M
, e t a l
.
J L iq Ch r o m a to g r
,
19 8 9
,
12
:
2 1 1 7
Sh iff P B
, e t a l
.
N a t u r e (L o n d o n )
,
1 9 7 9
, 2 7 7 : 6 6 5
陈未名 , 等 . 药学学报 , 1 9 9 1 , 2 6 (10 ) : 7 4 7
S t a sk o M W
, e t a l
.
J Liq Chr o m a t o g r
,
1 98 9
,
1 2 (1 1 )
:
2 1 3 3
D a
v
id G l
,
et a l
.
J N a t P r o d
,
1 9 92
, 5 5 (2 )
:
2 5 9
(1 9 9 8
一
0 9
一
2 2 收稿 )
板蓝根抗流感病毒有效部位的筛选△
山东中医药大学药 学院 (济南 2 5 0 0 1 4) 刘 思贞 . 祝希娴 邵 玉芹 马天波
摘 要 利 用系统溶剂分 离法和 阳离子树脂 吸附交换 , 对板蓝 根的化学成分 进行 了分离 , 再利用
鸡胚 羊膜腔 半体内法进行抗 流感病毒 活性实验 , 最后 证明活性部位为亲 水性的 、被 阳离子吸附部
分 。
关键词 板 蓝根 抗流感病毒 有效部 位
靛 青系 十字花 科植 物 I sa tis in d ig o tic a
F or t
. , 其根作为板蓝根人药 , 具有清热解毒 ,
凉血之功效 。临床上广泛用于治疗肝炎 、腮腺
炎 、流感 、丹毒 、流脑和 扁桃体炎等病毒 、细菌
性疾病 。药理研究证实 : 板蓝根的水提液对枯
草杆 菌 、金黄色葡萄球菌 、八联珠菌 、大肠杆
菌等 8 种细菌均有强烈的抑制作用 。 长期以
来 , 人们一直认为靛昔是板蓝根抗病毒 、抗菌
的有效成分 , 并把它的含量作为控制板蓝根
制剂质量的指标〔‘一3〕, 但实验表明 , 靛昔在动
物的胃 、小肠和盲肠中均被分解破坏 , 而且 自
体内排出很快 , 体外也无明显的抗菌 、抗病毒
活性 。 为了搞清板蓝根抗流感病毒的有效成
分 , 同时也为 了给板蓝根制剂的质量控制提
供真 实可靠的指标 , 我们在预实验 即板蓝根
的水提液和 乙醇提取液对抗流感病毒活性实
验取得肯定结果的基础上 , 做了进一步的有
效部位的筛选工作 , 除确定其有效部位为阳
离子树脂 吸附部分外 , 还证实有效部位经酸
水解后 , 立即丧失活性 , 即有效部位为结合氨
基酸 。
1 材料
板蓝根 : 市售 , 为十字花科植物 Isat is in -
dl’ g ot ic a For t . 的根 ;鸡胚 : 济南养鸡场购进时
为 4 日龄 , 室内再孵化 s d ; 阳离子交换树脂 :
市售 , 73 2 型 , 郑州市化学试剂三厂 ;盐酸吗琳
双呱 : 市售 。实验用的流感病毒毒株 : 甲型流感
病毒株 , 在样品 I ~ vI 中用国家代表株 A /津
防 / 7 8 / 7 7 ; 在样 品 VI , 福 中用国家代表株 A /
粤防 / 4 4 / 8 9 。 乙型流感病毒毒株 , 在样品 I ,
I 中用国家代表株乙 /青岛 / 3 7 / 9 0 ;在样品 l
~ VI 中用国家代表株 乙 / 粤防 / 3 / 91 ; 在样品
·
A d d r e s s
:
L iu S iz h e n
,
C o lle g e o f Ph a r m a e y
,
S ha n d o n g U n iv e r s ity o f T r ad itio n al C hin e s e M e d iein e a n d M a t e r ia M ed i
-
e a , Jin a n△山东省 自然科学基 金资助项 目
一
6 5 0
.