全 文 ：制之一。
中性白细胞活性氧生成系统是一种 NADPH
氧化酶 , PAF与其受体结合可激活此酶 ,从而促进
中性白细胞释放 O÷2 [9 ]。 银杏内酯 B在 0. 1～ 40
μmo l /L对 2μmo l /L PAF刺激的中性白细胞 O÷2
的产生有明显的抑制作用 ,可能是其抗炎作用机制
之一。 进一步地证实银杏内酯 B可拮抗 PAF的生
物学活性。
Hoike曾报道 ,浓度为 0. 1μmol /L PAF即可
增加中性白细胞 [Ca2+ ]至峰值 ,随后细胞内钙水平
下降。 fM LP也可诱导快速的中性白细胞 [Ca2+ ]升
高 ,且能使 [Ca2+ ]维持在较高的水平。一般认为 ,在
中性白细胞 ,细胞内钙水平升高首先是内钙储库的
释放 ,然后是外钙的内流 ,从而导致细胞内 [Ca2+ ]的
进一步提高。选择性 PAF受体拮抗剂 WEB2086抑
制 PAF刺激引起的 IP3产生及内钙储库的钙释放 ;
而在 fM LP诱导的细胞反应中 , WEB2086不抑制
IP3的产生及内钙储库的钙释放 ,但抑制外钙的内
流 [8 ]。 本研究结果表明 ,银杏内酯 B明显抑制 1
μmol / L PAF刺激引起的 [ Ca2+ ]升高 ,而对 1
μmol /L fM LP诱导的 [Ca2+ ]升高抑制作用较弱 ,这
一结果与上述文献报道相一致。
综上所述 ,银杏内酯 B的抗炎作用可能与其抑
制中性白细胞溶酶体酶的释放、超氧阴离子的产生
以及细胞内钙水平的升高有关。
参 考 文 献
1　 Smith P F, Maclennan K, Darling ton C L. J Ethn oph armacol,
1996, 50( 3): 131
2　 Braquet P, Hos ford D. J Eth nopharmacol , 1991, 32( 1-3): 135
3　 Shukla S D. FASEB J, 1992, 6: 2296
4　 Yue T L,Varma D R, Pow ell W S. Biochim Biophys Acta, 1983,
751: 332
5　 Feinmark S J, Lindg trn J A, Claesson H E, et al . FEBS Letters ,
1881, 136: 141
6　王文杰 ,白金叶 ,程桂芳 ,等 . 中国医学科学院学报 , 1997, 19( 3):
220
7　 Stew art A G, Dubbin P N, Harri s T, et al . Proc Nat l Acad Sci
U SA, 1990, 87: 3215
8　 Koik e H, Imanishi N, Natsume Y, et al . Eu r J Ph armacol , 1994,
269: 299
9　 Shaw J O, Pinckard R N, Ferrigni K S, et al . J Immun ol , 1981,
1279(3): 1250
( 2000-01-21收稿 )
板蓝根二酮 B体外抗癌活性研究△
广西医科大学 (南宁 530021)　　梁永红 　侯华新　黎丹戎* *　秦　箐　邱　莉　吴华慧
摘　要　目的: 板蓝根二酮 B抗人肝癌 BEL-7402细胞、卵巢癌 A2780细胞体外活性研究。 方法: M TT法测定板
蓝根二酮 B对肝癌 BEL-7402细胞和卵巢癌 A2780细胞的抑制作用 ,集落形成实验观察药物的诱导分化作用 ,
PCR-ELISA试剂盒测定细胞的端粒酶活性。结果: 板蓝根二酮 B具有抑制肝癌 BEL-7402细胞、卵巢癌 A2780细
胞增殖的能力 ,其 IC50分别为 8. 2μg /mL和 7. 8μg /m L;且具有诱导分化作用 ,可降低端粒酶活性的表达。结论:研
究结果提示板蓝根二酮 B具有体外抗肿瘤活性。
关键词　板蓝根二酮 B　抗肿瘤活性　肝癌　卵巢癌
Studies on in v itro Anticancer Activity of Tryptanthrin B
　　 Guangxi Univ ersity of Medical Sciences ( Nanning 530021)　 Liang Yonghong , Hou Huaxin, Li Danrong , Qin Jing , Qiu
Li and Wu Huahui
Abstrast　　 To study the in vitro anticancer activi ty o f t ryptanthrin B, one o f the activ e consti tuent of
the roo t of Isat is tinctoria L. on BEL-7402 human hepatocellular carcinoma cell and A2780 human ovarian
cancer cel l. Cytotoxici ty assay was tested by M T T method. Signs o f induction di fferentia tion w as observed
by co lony forming uni ts assay. Telomerase activi ty in cell was determined by PCR-ELISA method. IC50 of
t ryptanthrin B on BEL-7402 and A2780 cell lines were 8. 2 μg /m L and 7. 8 μg /mL respectiv ely.
Telomerase activ ity w as dramatically declined and defferentia tion of bo th cancer cel l lines was observ ed.
Tryptanthrin B po ssesed anti tumo r activ ity in vitro.
·531·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 7期
Address: Liang Yonghong , Guangxi Univ ersi ty of Medical Sciences , Nanning梁永红　大学本科毕业 ,理学学士 ,高校讲师 ,现从事天然药物化学方面研究工作。
* * 广西肿瘤防治研究所△本课题为广西教育科研资助项目 ,桂 1999 [383 ]-5
Key words　　 Isatis tinctoria L.　 t ryptanthrin B　 hepatocellula r carcinoma BEL-7402　 ovarian
cancer A2780
　　板蓝根为菘蓝 Isat is t inctoria L. 的根 ,有镇痛、
凉血和解毒之功效。从 80年代开始 ,已从板蓝根中
分离、提取出几十种脂溶性组分 ,并发现这些组分具
有抗内毒素、活血、降血压、抗炎等作用 [1, 2 ]。 而板蓝
根的抗癌活性国内外尚未见报道。我们课题组在筛
选抗肿瘤药物过程中发现 ,脂溶性板蓝根提取
物—— 板蓝根二酮 B在体外对人肝癌细胞 BEL-
7402、卵巢癌 A2780细胞有较强的杀伤力。
1　材料
图 1　板蓝根二酮 B
( tryptanthrin)
1. 1　受试药物: 板蓝根二酮
B,吲哚并 [2, 16 ]喹唑啉酮-6,
12-二酮 ,其结构式如图 1。板
蓝根二酮 B由本课题组分离
提纯鉴定。 MT T(噻唑蓝 )为
Sigma公司产品 , RPM I1640
为 Gibco公司产品 ,端粒酶 PCR-ELISA检测试剂
盒购自德国 Boehringerr M anheiman公司。M R-300
酶标仪为美国产。 黑马 480DN A扩增仪为珠海产。
1. 2　细胞株: 人肝癌细胞 BEL-7402、卵巢癌
A2780细胞由广西肿瘤防治研究所免疫室传代保
株。
2　实验方法和结果
2. 1　细胞毒实验:取对数生长的人肝癌细胞 BEL-
7402、卵巢癌 A2780细胞 1. 0× 105 /mL,分装于 96
孔板 ,每孔 0. 1 mL,细胞板内的细胞常规培养于含
10% 小牛血清 , 10 mg /L青霉素和 10 mg /L链霉
素的 RPM I-1640培养液中 , 37℃、 5% CO2下培养
24 h后 ,分别加入不同浓度的板蓝根二酮 B,各组设
3个平行孔 ,空白对照为生理盐水。加药完毕继续孵
育 48 h ,实验终止前加入 2 mg /mL M TT液 ,再培
养 4 h ,测试前加入 DMSO,充分振匀后 ,测定每孔
490 nm下的吸光度 ( A)值 ,按下列公式求出生长抑
制率 ( IR)和半数抑制浓度 ( IC50 )。
IR(% ) = ( 1-
用药组平均 A值
对照组平均 A值 )× 100%
从表 1可见 ,在 3. 10, 6. 20, 12. 5, 25. 0, 50. 0
μg /mL浓度下 ,板蓝根二酮 B对人肝癌细胞 BEL-
7402、卵巢癌 A2780细胞生长抑制率随药物浓度的
升高而升高 , IC50分别为 8. 2和 7. 8 mg /L。
2. 2　端粒酶活性测定: 肝癌细胞 BEL-7402、卵巢
癌 A2780细胞用半数抑制浓度的板蓝根二酮 B处
表 1　板蓝根二酮 B对人肝癌细胞 BEL-7402、卵巢癌
细胞 A2780的 IR及 IC50值 (n= 3)
药物浓度
( mg /L)
抑制率 (% )
BEL-7402 A2780
IC50(μg /mL)
BEL-7402 A2780
3. 0 34. 26　 36. 12　
6. 2 40. 38　 47. 20　
12. 5 74. 22　 78. 12　 8. 2 7. 8
25. 0 82. 38　 85. 22　
50. 0 88. 02　 89. 16　
理不同时间后 ,制备端粒酶提取液。取细胞提取液 5
μL加入 25μL TRAP PCR扩增液 ,在 PCR扩增仪
上按以下步骤进行引物的延伸及扩增反应: 25℃
30 min、 90℃ 5 min循环一个周期 ,再以 94℃ 30 s
变性 , 50℃ 30 s、 72℃ 90 s延伸 ,共循环 30个周
期 ,平衡 72℃ 10 min。取上述 PCR产物 5μL加变
性液 20μL混匀 ,置室温 10 min,加入杂交液 225
μL混匀后取出 100μL包被于抗地高辛的酶标板
中 ,室温作用 2 h,加入过氧化物酶并与底物显色作
用 30 min后终止反应 ,测定 450 nm和 690 nm的
吸光值 ( A)。 结果经板蓝根二酮 B处理的 BEL-
7402细胞和 A2780细胞分别培养 1, 3, 5 d后 ,进行
端粒酶活性测定 ,其 A值分别为 0. 381, 0. 276, 0和
0. 341, 0. 277, 0,而未经药物处理的肝癌细胞、卵巢
癌细胞其 A值为 1. 60和 1. 46。
2. 3　集落形成实验:实验组和对照组各 3例 ,前者
加入一定浓度的药物 ,后者加入等量溶剂 ,接种于培
养瓶中 ,每瓶 5万个细胞 ,加培养液 1 mL,于 37
℃ , 5% CO2培养 1～ 3 d,瑞士染色 ,记数集落数 ,多
于 50个细胞者记为集落 ,按下式计算集落抑制率 ,
经相应的半数抑制浓度板蓝根二酮 B处理后的肝
癌 BEL-7402细胞、卵巢癌 A2780细胞集落形成数
明显少于空白细胞的集落。结果见表 2。
集落抑制率 (% ) = ( 1-用药组集落数对照组集落数 )× 100%
3　讨论
3. 1　从板蓝根二酮 B抗肝癌 BEL-7402细胞、卵
巢癌 A2780细胞活性表明 ,板蓝根二酮 B有体外抑
制肝癌 BEL-7402细胞和卵巢癌 A2780细胞的能
力 ,抑制作用均与浓度呈梯度关系 ,且抑制卵巢癌
A2780细胞的能力比肝癌 BEL-7402细胞强 ,这可
能是由于肝癌 BEL-7402细胞为诸多恶性肿瘤细胞
中增殖速度最快且又难以控制的种类之一 ,与许多
临床结果相一致 [3 ]。
·532· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 7期
表 2　板蓝根二酮 B对人肝癌细胞 BEL-7402、卵巢癌
细胞 A2780集落形成的影响
t
(d )
空白细胞集落
(个 )
BEL-7402 A2780
给药组集落
(个 )
BE L-7402 A2780
集落抑制率
(% )
BEL-7402 A2780
0 76 66 — —
1 109 98 86 74 21. 10 24. 48
2 234 219 46 37 80. 34 83. 10
3 388 298 19 10 95. 10 96. 64
3. 2　板蓝根是临床上常用的药物 ,但目前从板蓝根
中提取的化合物为数不多 ,尤其是象板蓝根二酮 B
这类具有抗肿瘤作用的活性物质尚未见报道。M TT
实验结果表明 ,板蓝根二酮 B对肝癌 BEL-7402细
胞、卵巢癌 A2780细胞具有较强的体外杀伤能力 ,
其半数抑制量分别为 8. 2μg /mL和 7. 8μg /mL,符
合 IC50 < 10μg /mL被认为有研究价值的要求 [ 4 ]。同
时集落形成实验也表明:板蓝根二酮 B具有逆转肿
瘤细胞向正常细胞转化的能力。
3. 3　端粒酶的激活是恶性肿瘤学上的一个共同途
径 ,而端粒酶则是各种恶性肿瘤细胞的一个共同的
分子标志物 ,大多数肿瘤细胞的增殖与端粒酶的活
化有关 ,抑制端粒酶的活性可以影响肿瘤的生物学
行为。大量实验表明 ,端粒酶的作用是在 DNA复制
期线性染色体末端添加 T TAGGG重复序列 ,从而
使细胞无限增殖 ,导致肿瘤发生和细胞永生化 [5, 6 ]。
本实验结果表明 BEL-7402细胞、卵巢癌 A2780细
胞具有非常高的端粒酶活性 ,而板蓝根二酮 B能抑
制 BEL-7402细胞、卵巢癌 A2780细胞的端粒酶活
性 ,且随着板蓝根二酮 B作用时间越长 ,其端粒酶
表达越弱。提示板蓝根二酮 B可能具有抑制肿瘤活
性能力 ,在临床抗肿瘤方面有潜在价值。对我们正在
进行板蓝根二酮 B构效关系的研究具有积极意义。
参 考 文 献
1　刘云海 .中国药科大学学报 , 1995, 26( 5): 297
2　 Honda G. Planta Med, 1980, 38( Mar): 275
3　李连弟 ,鲁凤珠 ,张思维 ,等 . 中华肿瘤杂志 , 1997, 19( 1): 4
4　徐叔云主编 .药理实验方法学 . 北京:人民卫生出版社 , 1982:
1443
5　赵冬兵 ,张　伟 ,金顺钱 ,等 . 中华肿瘤杂志 , 1998, 20( 3): 199
6　 Jerry W S, Woodring E W . Cu rr Opin Onconl , 1996, 8: 66
( 2000-01-27收稿 )
金复康治疗肝癌的实验研究
上海中医药大学附属龙华医院 ( 200030)　　李和根
上海医药工业研究院　　　　　　　　　　陈秀华　　姚玉龙　任文龙
摘　要　金复康口服液是治疗肺癌的中药验方 ,根据中医“异病同治”的原则 ,对金复康口服液进行了实验性肝癌
的治疗作用和对小鼠免疫功能影响的研究。 金复康口服液对小鼠肝癌 HAC和接种于裸鼠的人体肝癌 QGY的疗
效试验结果表明 ,金复康口服液对动物及人体移植性肝癌有一定的抑制作用 ;对小鼠体内脾淋巴细胞增殖、 IL-2和
自然杀伤细胞 ( NK细胞 )的活性试验表明 ,金复康口服液有明显的促进免疫功能的作用。
关键词　金复康口服液　移植性肝癌　 N K细胞　淋巴细胞　 IL-2
　　金复康口服液是根据上海中医药大学附属龙华
医院刘嘉湘教授的处方研制的治疗肺癌的中药验
方 [1 ] ,主要成分为生黄芪、北沙参、女贞子、麦冬、石
见穿、石上柏、七叶一枝花等十二味中药。 我们根据
中医“异病同治”的原则 ,研究了金复康口服液对实
验性肝癌的活性 ,显示了一定的治疗作用。
1　实验材料
1. 1　动物:昆明种小鼠 ,由上海医药工业研究院动
物房提供 ,♀ ,体重 19～ 21 g。 BALB /C裸鼠 ,由上
海肿瘤研究所提供 , ,体重 17～ 18 g。 C57BL /6小
鼠 ,由 BK公司提供 ,♀ ,体重 18～ 20 g。
1. 2　药物:金复康口服液 ,江西上饶制药厂提供 ,批
号为 961112,含量为 3 g 生药 /mL。 环磷酰胺
( C TX) ,华联制药公司生产 ,批号 940106。 香菇多
糖 ,福州梅峰制药厂生产 ,批号 911026,每毫升含香
菇多糖 2 mg。
1. 3　细胞株及动物移植性肿瘤: YAC-1细胞 ,小鼠
肝癌 HAC,人体肝癌 QGY。
1. 4　其它材料: 培养基: RPM I 1640内含 15%
NBS、巯基乙醇等。3 H-TdR: 上海原子核研究所 ,放
·533·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 7期
Address: Li Heg en, Aff ili ated Longh ua Hospi tal, shangh ai Universi ty of Tradi tional Chin ese Medicine and Materia Medica, Shanghai李和根　男 , 1988年毕业于上海中医学院 ,获学士学位。 主治医师。 主要从事肿瘤临床及实验研究。 参与多项国家“七· 五”、“八· 五”、“九· 五”及市局级科研课题。 曾获上海市科技进步三等奖。