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细脚拟青霉多糖Ⅰ的化学结构
陆 榕1,孙立崧1,王仲孚1, 田庚元1 , 吉田 孝2
( 1. 中国科学院上海有机化学研究所 生命有机化学国家重点实验室, 上海 200032; 2. 日本国北海道大学 理学
研究科, 札幌市 060-0810)
摘 要: 目的 研究细脚拟青霉多糖Ⅰ的分离纯化方法、相对分子量、单糖组成及其结合方式。方法 室温下水提
取出粗多糖, 采用 Sephadex G-100 柱层析纯化。经过酸全水解,利用阴离子交换柱测定单糖的组成。甲基化分析测
定单糖的结合方式。IR以及 NMR 光谱的研究确定糖苷键的类型。结果 经高效液相色谱检测为均一性组成,从以
后的 GC-MS 及 NMR 图谱也获得证明。结论 细脚拟青霉多糖Ⅰ为-( 1→6)连结的葡聚糖,相对分子量为 2. 05×
104 u。
关键词: 细脚拟青霉多糖;葡聚糖; 甲基化分析
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2001) 10 0865 03
Studies on chemical structure of polysaccharide Ⅰ obtained from
Paecilomyces tenuip es
LU Rong 1, SUN L i-song1, WANG Zhong-fu1 , T IAN Geng-yuan1, T akashi YOSHIDA2
( 1. Shanghai Inst itute o f Organic Chemistr y , Chinese Academy o f Sciences, Shanghai 200032, China; 2. Po lymer Sci-
ence Depar tment, G raduate Schoo l o f Science , Hokkaido Univ er sity, Kita-ku, Sappor o 060-0810, Japan)
Abstract: Object T o study the iso lation and purif icat ion of a poly saccharide, obtained from Pae-
cilomyces tenuip es Samson, its molecular w eight , sugar composit ion, and mode of linkage. Methods
Crude polysaccharide w as ex tr acted by w ater at ambient temperature and purif ied on Sephadex G-100 col-
umn. Its monosaccharide composit ion was determined by ionic ion-exchange column after complete hydrol-
ysis w ith acid. T heir mode of linkage w as determ ined by methylat ion and glyco sidic linkage established by
IR and NMR spectr a. Results HPLC spect rum show ed that the polysaccharide w as of homogeneous com-
posit ion, w hich w as also pr oved lat ter by GC-MS and NMR. Conclusion Poly sacchar ide obtained from
P . t enuip es Samson is -( 1→6) -l inked and composed of only D -g lucose. The molecular w eight w as 2. 05×
10
4
.
Key words : polysaccharide of Paecilomyces tenuip es Samson; glucan; methy lation analysis
细脚拟青霉 Paecilomyces tenuip es Samson 是
一种虫草属真菌,其多糖具有类似冬虫夏草的生物
活性[ 1, 2] ,价格却比冬虫夏草便宜数十倍, 多糖是冬
虫夏草的主要有效成分之一。从冬虫夏草中提取出
来的虫草多糖,对于其化学结构的研究已经有很多
报道[ 3～6] ,而根据我们的调查, 对细脚拟青霉多糖的
结构研究还未见报道。本文利用 Sephadex G-100柱
对细脚拟青霉多糖进行分离纯化并对其化学结构进
行了研究。
1 实验
1. 1 分离提取和纯化:将湿菌体置于红外灯下干燥,
得干品。干品为深棕色片状固体。取干品 100 g 加水
浸泡, 24 h 后离心,浓缩后加入 95%乙醇于冰箱静置
24 h, 得棕黑色沉淀。倾去上层清液,沉淀加水溶解,
离心除去不溶物,得到棕黑色溶液,冷冻干燥,得干品
粗多糖 6. 98 g , 收率约为 7. 0%。粗品经液相色谱
( GPC: TOSOH T SK-gel, G2500PWXL, G3000
PWXL, G4000PWXL , 7. 6 mm ×300 mm× 3, 66. 7
mmol / L , pH6. 86的磷酸缓冲溶液洗脱)检测, 发现
分别由保留时间为 25. 8和 28. 0 min的两个部分组
·865·中草药 Chinese T raditiona l and Herbal D rugs 2001 年第 32 卷第 10期
收稿日期: 2000-10-12基金项目:国家攀登计划( 970211006-4)资助项目
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成, 如图 1。粗多糖3. 5 g 用去离子水溶解后,反复上
Sephadex G-100柱( 120 cm×50 mm) ,去离子水洗
脱, 收集多糖部分,冷冻干燥。获得 0. 68 g 平均相对
分子量为2. 05×104的细脚拟青霉多糖( ptps Ⅰ)。
1. 2 单糖成分分析: 15 mg 多糖用 2 mol/ L 三氟醋
酸 100℃封管水解 8 h。上 Amide-80柱,没有二糖
或寡糖峰出现,表明分解完全。在 Amide-80柱上由
于不能分辨葡萄糖和半乳糖,上阴离子交换柱 Car-
boPac PA-1 ( Dionex , Osaka, Japan) , 20 mmoL/
NaOH溶液洗脱。
1. 3 甲基化分析: 按 Hakomori 法 [ 7] 甲基化后,
90%甲酸 100 ℃封管水解 10 h。反复加甲醇减压抽
干。NaBH4 还原、乙酰化[ 8]后进行GC-M S分析
1. 4 红外光谱及核磁共振分析:多糖微量、KBr 压
片、岛津 IR-8300红外光谱仪上按常规方法进行测
定。核磁共振分析在 -400 MHz NMR仪上进行,
DSS 为内标。
2 结果与讨论
从细脚拟青霉中提取所得多糖, 经 Sephadex
G-100 柱分离纯化, 获得一平均相对分子量为
2. 05×104的均一组分 ptps Ⅰ(图 1) , 比旋光度为
[] = + 15. 8°( c, 1. 0, H 2O)。经酸全水解, Amide-80
柱反相 HPLC (洗脱液: 乙腈-水= 4∶1; 温度: 80
℃)和 Dionex 阴离子交换柱层析发现只含有单一葡
萄糖, 证明该组分的多糖为葡聚糖。红外光谱存在
1 200～1 000 cm- 1处的强吸收说明组成的单糖为
吡喃型结构。856 cm - 1处的吸收峰证明该多糖的糖
图 1 细脚拟青霉多糖的 HPLC色谱图
苷键为 -型, 与比旋光度的结果相符。细脚拟青霉
多糖按 Hakomiri的方法进行甲基化,甲基化反复进
行直至红外光谱中～3 400cm - 1处的吸收峰消失。全
甲基化的多糖经 90%甲酸 100 ℃度封管水解 10 h。
还原,乙酰化后进行GC-MS 分析。在气相色谱上仅
获得保留时间为 8. 034 min 的单一峰,质谱碎片分
析表明是 2, 3, 4-trimethy l-1, 5, 6-triacetate-glucot i-
tol ,如图 2。
图 2 甲基化细脚拟青霉多糖Ⅰ的 GCMS谱图
细脚拟青霉多糖Ⅰ的 NMR 图谱及其归属如图
3。H-1的共振信号出现在 4. 97, C-1的共振信号位
于 101. 0,偶合常数 J1. 2太小不易测出, 表明是 -型
的糖苷键结构, 与作者合成并报道的线状 dex tran
(-1→6-Glc)的核磁共振谱图相类似 [ 9]。
图 3 细脚拟青霉多糖Ⅰ的13CNMR 和1HNMR 谱图
综上可知细脚拟青霉多糖Ⅰ的化学结构为 -
( 1→6)结合的葡聚糖,与天然存在的 dex t ran 多糖
的主链结构相类似。这是首次发现的天然单独存在
·866· 中草药 Chinese T raditiona l and Herbal D rugs 2001 年第 32 卷第 10期
的直链状的 -( 1→6)结合的葡聚糖。细脚拟青霉多
糖Ⅰ的生理活性正在研究之中。
致谢: 温州医学院吕建新教授提供细脚拟青霉
菌体。
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大蒜有机硫化合物的研究
陆茂松1 ,闵吉梅2 ,王 夔2
( 1. 启东市药品检验所, 江苏 启东 216200; 2. 北京大学 天然药物及仿生药物国家重点实验室, 北京 100083)
摘 要: 目的 对大蒜 A llium sativ um 的有机硫化合物进行了研究。方法 利用硅胶柱层析、硅胶薄层层析、高效
液相色谱进行分离, 根据化合物的光谱数据鉴定其结构。结果 从大蒜环己烷提取物中分得 9 个化合物,分别鉴定
为 Z-1, 6, 11-三烯-4, 5, 9-三硫杂十二烷-9-氧化物( Z-ajo ene, Ⅰ) , E-1, 6, 11-三烯-4, 5, 9-三硫杂十二烷-9-氧化物
( E-ajoene, Ⅱ) , Z-1, 6, 11-三烯-4, 5, 9-三硫杂十二烷-9, 9-二氧化物(Ⅲ) , E-1, 6, 11-三烯-4, 5, 9-三硫杂十二烷-9,
9-二氧化物(Ⅳ) , E-1, 7, 11-三烯-4, 5, 9-三硫杂十二烷-9, 9-二氧化物(Ⅴ) , Z-4, 9-二烯-2, 3, 7-三硫杂癸烷-7-氧化
物 (Ⅵ) , 2-乙烯基-4H-1, 3-二硫杂苯(Ⅶ) , 3-乙烯基-6H-1, 2-二硫杂苯-2-氧化物(Ⅷ) , 2-乙烯基-4H-1, 3-二硫杂苯-
3-氧化物(Ⅸ)。结论 化合物Ⅴ, Ⅵ,Ⅷ,Ⅸ为新化合物。
关键词: 大蒜; 有机硫化合物; E-1, 7, 11-三烯-4, 5, 9-三硫杂十二烷-9, 9-二氧化物 ; Z-4, 9-二烯-2, 3, 7-三硫杂癸烷-
7-氧化物; 3-乙烯基-6H-1; 2-二硫杂苯-2-氧化物, 2-乙烯基-4H-1, 3-二硫杂苯-3-氧化物
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2001) 10 0867 04
Studies on organosulfur compounds in Allium sativum
LU M ao-song 1, M IN Ji-mei2, WANG Kui2
( 1. Q idong Instit ut e fo r Drug Contr ol, Q idong Jiang su 216200, China; 2. National Key Labor ato ry o f Na tural and
Biomimetic Drugs, Beijing Univer sity , Beijing 100083, China)
Abstract: Object T o study the o rganosulfur compounds in garlic ( Al lium sativum L. ) . Methods
Compounds were separated by silica gel co lumn chromatog raphy , TLC, and HPLC. T heir str uctures were
elucidated by spect roscopic analysis. Results Nine compounds were isolated from the cyclohexane ex-
tr acts. T hey w ere ident ified as: Z-1, 6, 11-triene-4, 5, 9-trithiadodeca-9-ox ide ( Z-ajoene) (Ⅰ) , E-1, 6,
11-triene-4, 5, 9-tr ithiadodeca-9-ox ide ( E-ajoene) (Ⅱ) , Z-1, 6, 11-triene-4, 5, 9-trithiadodeca-9, 9-
diox ide (Ⅲ) , E-1, 6, 11-triene-4, 5, 9-trithiadodeca-9, 9-dioxide (Ⅳ) , E-1, 7, 11-triene-4, 5, 9-trithi-
adodeca-9, 9-dioxide (Ⅴ) , Z-4, 9-diene-2, 3, 7-trithiadeca-7-ox ide (Ⅵ) , 2-vinyl-4H-1, 3-dithiin (Ⅶ) ,
3-vinyl-6H-1, 2-dithiin-2-ox ide (Ⅷ) , 2-v inyl-4H-1, 3-dithiin-3-ox ide (Ⅸ) . Conclusion Compounds Ⅴ,
Ⅵ, Ⅷ, and Ⅸ were new .
Key words : A l livum sativum L. ; org ano sulfur compounds; E-1, 7, 11-triene-4, 5, 9-trithiadodeca-9,
9-dio xide; Z-4, 9-diene-2, 3, 7-trithiadeca-7-ox ide; 3-v inyl-6H-1, 2-dithiin-2-ox ide; 2-viny l-4H-1, 3-
dithiin-3-ox ide
·867·中草药 Chinese T raditiona l and Herbal D rugs 2001 年第 32 卷第 10期
收稿日期: 2000-09-21基金项目:北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室客座研究资助项目作者简介:陆茂松( 1965-) ,男,江苏启东人,主要从事天然产物化学的研究工作。E-mail: Lum s2001@ sina. com
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