全 文 ：.份卜 亡 ,叮 卜, 口 , ~ 刁闷~. 兰习 , r IJ二刁 日` 2二
R P
一
H P L C 法测定丹参培养物中
两种水溶性酚酸类化合物的含 t △
上海中医药大学 中药 生物工程研究室 ( 2 0 0 0 3 2) 黄炼栋 ’ 徐 寅泽 ` “ 胡之璧
摘 要 用 R P一 H P L C 法对丹参培养物 中迷迭 香酸和紫草酸 B 进行 了定量分析 。 在 N o va p a k CI :
色谱柱 上 , 以 M e O H 一M e C N 一H : 0 ( 37 : 1 : 6 2) , 甲酸调节 p H 至 2 . 67 为流动相 , 2 组 分分离完全 ,
工作曲线线性 良好 。 迷迭香 酸在 .0 6 61 一 5 · 51 0 拜g 、 紫草酸 B 在 .0 6 01 一 5 . 0 10 拌 g 范围 内均呈线性
关系 , 回收率分别 为 1 0 0 . 5% ( R S D 2 . 8 2% )和 1 0 0 . 2肠 ( R S D 2 . 5 3 % ) 。
关键词 H P L C 丹参培养物 迷迭香酸 紫草酸 B
D e t e r m i n a t i o n o f t h e C o n t e n t s o f T w o W a t e r S o l u b l e P h e n o l i e A e i d s i n
D e n 一 s h e n ( S a l v i a m i l t i o r kr i z a ) C u l t u r e s b y R P
一
H P L C
H u a n g L ia n d o n g
,
X u Y a n z e a n d H
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Z h i b i ( L a b o r a t o r y o f C h in e s e M
a t e r i
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M
e d i e a 色 B io e n g in e e r i n g ,
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a n g h a i U n i v e r s i t y o f T r a d i t io n a l C h in e s e M
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A b s t r a e t A R P
一
H P L C m e t h o d w a s e s t a b l is h e d f o r t h e s im u l t a n e o u s s e p a r a t io n a n d d e t e r m in a t io n o f
r o s m a r in ie a e id a n d l it h o s p e r m i e a e id B I n S a lv i a m i l t i o r r h i z a B u n g e e u l t u r e s o n a N o v a p a k C l : e o l u m n
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·
6 7 w i t h f
o r m ie a e id a s t h e m o b il e p h a s e
·
T h
e r e -
e o v e r i e s w e r e 1 0 0
.
5 %
,
R S D 2
.
8 2 % f
o r r o s m a r i n i e a e i d a n d 1 0 0
.
2肠 , R S D 2 . 5 3 % f o r li t h o s p e r m ie a e i d B ·
K e y w o r d s S a l v z a m i l t ; o r r h i z a e u lt
u r e r o s m a r i n i e a e id li t h o s p e r m i e a e i d B
丹参 S a l v i a m i l t i o r r h i z a B u n g e 是我国
重要的常用中药 , 其水 溶性成分 , 如迷迭香
酸 、 紫草酸 B 具有清 热 、 解毒 、 消炎 、 抗脂 质
过氧化 、 抗 胃溃疡 、 抗肝纤维化等作用 l[, 2〕 。 由
于丹参野生资源 日益减少 ,栽培 品种退化严
重 , 因此探讨丹参新资源 已成为 中药材生物
技术的重要研究 内容川 。 作者用 H P L C 法对
丹参培养物 中迷 迭香 酸和紫草酸 B 进行 定
量分析 ,此法分离完全 、 测定快速 、 灵敏度高 。
1 仪器与试剂
H P L C 仪 : W a t e r s 5 1 0 型泵 , 9 9 1 二极管
矩阵检测器 。 N o v a p a k C 1 8 ( 1 5 0 m m X 4 m m ,
4 拼m ) 色谱柱 (大连依利特科学仪器有限公
司 ) 。
甲醇 为重蒸 , 乙 睛为 H P L C 级 , 水为无
离子水 , 其余试剂均为分析纯 。
对照品迷迭香酸购于美国 I CN P h ar m a -
ce ut ic al s 公 司 , 紫草酸 B 由我校肝病研究所
刘平教授赠送 。
2 方法
2
.
1 液相色谱条件 : 流动相 : 甲醇 一乙 睛一水
( 3 7
:
1
: 6 2 )
, 甲酸调节 p H 值至 2 . 6 7 。 检测
波长 2 8 0 n m , 纸速 2 . 5 m m /m i n 。 在本条件
下 ,迷迭香酸和紫草酸 B 获得较好 的分离效
A d d r e s s
:
一
H u a n g L i a n d o n g
,
L a b o r a t o r y o f C h in e s e M a t e r i a M e d i e a 衣 B io e n g i n e e r i n g , S h a n g h a i U n i v e r s i t y o f T r a d i -
t i o n a l C h i n e s e M e d i e i n e a n d M a t e r i a M e d i e a
,
S h a n g h a i
黄炼栋 35 岁 , 副研究 员 。 1 98 5 年毕业于上海农学院 , 获农学学 士学位 。 1 9 9 1 年硕士研究生毕业于上海 中医 药大学 , 获
医学 硕士学位 。 参加和承担 了多项国家级和市部级重点研究课题 。 “ 紧缺药材黄连等细胞培养研究 “ 获上海市卫生局科技进
步三等奖 , “ 丹参细胞培养生物技术及其活性产物研究 ” 获上海市科技成果进步二等奖和上海市卫生局科技成果一等奖 , “ 洋
地黄植 物细胞培养 与强心 昔的生物转化研究 ” 获国家中医药管理局一等奖和国家科技进步二等奖
“ ’ 我校应届实习生
△上海市卫生局和上海市教委资助项 目
一
6 5 4
.
果 (图 1 )。 发展公司 )过滤 , 滤液作 H P L C 测定 。
2
.
5 加样回收率试验 : 精密称取一定量冻干
培养物 , 精密加入一定量标准 品 , 按以上方法
进行定量分析 , 将测 定结果扣除各组分 的平
均含 量 , 回 收 率为 迷迭 香酸 10 0 . 5% , R S D
2
.
8 2 % ; 紫草酸 B 为 1 0 0 . 2% , R S D 2 . 5 3 % 。
2
.
6 样品测定 : 按上述提取方法和色谱方法
进行测定 。 用所得标准曲线进行定量分析 。微
机给出样 品浓度 M ( m g /m L ) , 按下式求得 2
种水溶性酚酸类化合物的含量 ( C % ) 。
一 n / S O M 。 /七外 ~ 一1 不干 , 一 羚
W
时 间 考 (例 n )标准品 样品
1一迷迭香酸 2一紫草酸 B
图 1 高效液相色谱 图
2
.
2 精密度试验 : ①取 同一丹参细胞培养物
(5 o m g )提取液样品进行 6 次进样 , 每次 2 0
拼L , 求 得 迷 迭 香 酸 的 变 异 系 数 R S D 为
2
.
4 2%
, 紫草酸 B 为 2 . 53 % 。 ②取 同一丹参
细胞培养物 (5 O m g ) , 按样品测定方法 8 次
进样测定 。 求得迷迭香酸的 R S D 为 2 . 4 写 ,
紫草酸 B 为 3 . 34 % 。
.2 3 标准 曲线 : 在高精密度 (0 · 0 01 m g ) 天
平上 ,分别精密称取 2 种对照品各一定量 ,置
于 s m L 容量瓶中 , 60 %丙酮溶解至刻度 , 摇
匀 , 即得对照品液 。
用微量进样器分别吸取不同体积的对照
品溶液进样 。 微机给出校正曲线 。 各标准曲
线及相 关系数 为迷迭香酸 : Y ~ 0 . o 2 3 o X 十
2
.
3 10 2 X 1 0一 4
, r = 0
.
9 9 9 6
, 线性 范围 0 . 6 6 1 2
~ 5
·
5 1 0 0 拌g ; 紫 草酸 B 为 Y = 0 . o l 4 6X 一
3
.
7 5 2 6 X 1 0一 4 , r = 0
.
9 9 9 5
, 线性 范围 0 . 6 0 1 0
一 5 . 0 1 0 0 拜g 。
2
.
4 提取 方法 : 精密称取约 5 0 m g 冻 干丹
参培养 物于 20 m L 磨 口 具塞试 管 中 , 加人
6 0%丙酮 10 m L , 超声提取 3 O m in 。先用定量
滤纸过滤 (杭州富阳特种纸厂 ) ,再用样品过
滤器 (孔径 .0 45 拼m ,天津开发富集色谱技术
《中草药 》 19 9 9 年第 3 0 卷第 9 期
M
一微机给 出的样 品浓度 ( m g / m L ) ,
W
一培养物 的准确称样 量 (m g ) 。
3 结果和讨论
3
.
1 各种培养物 中水溶性酚酸类化合物含
量测定结果 : 见表 1 。
表 1 丹参培养物中迷迭香酸
和紫草酸 B 含 t (n = 3)
培养物 迷迭香酸 (写干重 ) 紫草酸 B (写干重 )
激素自养型细胞 2 . 8 144士 0 . 38 59 0
培养细胞① 5 . 8 536士 0 . 72 16 6 . 544 9士 0 . 1 4 12
培养细胞② 1 . 5 190士 0 . 09 34 0 . 240 0士 0 . 0 18 4
培养芽 1 . 7 145士 0 . 04 29 0
毛状根 158 34 ; 1 . 1 228士 0 . 07 86 0 . 97 77士 0 . 0 78 2
毛状根 940 2 * 0 0
! 毛状根 15 83 4 和毛状根 9 40 2分别由菌种 A g obr a c t e r i u m hr i z *
g e o e s L BA g魂02 和 A T CC 1 583 4 感染而来。
结 果表 明 ,不同丹参培养物中水溶性酚
酸类化合物的含量各不相 同 。 在毛状根 9 4 0 2
中 2 种 酚酸类化合物均未检测到 ,但 在丹参
细胞培养物① 中 , 迷迭香酸和紫草酸 B 都存
在 ,而且含量较高 , 均超 出了李静等闭报道的
丹参生药 中的含量 〔迷迭香酸 1 . 94 纬 , 紫 草
酸 B (丹酚酸 B ) 3 . 1 7% ] 。
3
.
2 长期放置对丹参细胞培养物 中水溶性
酚酸类 化合物含量 的影响 : 把冻干丹参细胞
培养物分别进行立 即测定和在干燥器 中放置
5 个 月后 再次测定 2 种酚酸类 化合物 的含
量 , 结果表明丹参细胞培养物 中迷迭香酸和
紫草酸 B 含量下降 , 见表 2 。
由于长期放置会影响酚酸类化合物的含
.
6 5 5
.
量 ,所 以对丹参培养物应及时测定 。
表 2 长期放 t 对丹参细胞物 中迷迭香
酸和紫草酸 B 含 t 的影响 (n 一 3)
放t 时间
(月 )
迷迭香酸
(%干重)
紫草酸B
(%干重 )
迷迭香酸
损失率(% )
紫草酸B
损失率(% )
5
.
8536二 0
.
72 16 6
.
5449士 0 . 1412
3
,
] 474土 0 . 4 530 5 . 2 153士0 . 7460 4 6. 23 20 . 31
参 考 文 献
张白嘉 , 等 . 中草药 , 1 9 9 6 , 2 7 ( 1 0 ) : 6 5改
刘 平 , 等 . 中国医 药学报 , 19 9 3 , 8( 增 ) : 5
胡之璧 ,等 . 上海 中医 药大学上海 中医 药研究 院学报 ,
19 9 7
,
1 0 ( 2 )一 1 1 ( l ) : 9 4
李 静 , 等 . 药学学报 , 1 9 9 3 , 2 8 ( 7 ) : 5 4 3
( 1 9 9 9
一
0 4
一
0 6 收稿 )
毛 白杨叶中酚普类成分含量测定方法的研究
中国医学科学 院
中国协和医科大学
药物研 究所 (北京 1 0 0 0 5 0) 丁 永胜 . 何丽一
摘 要 采用 高效薄层预制板 , 用二次展 开的方法分离测定 了毛 白杨叶 中的特里杨昔等三种酚昔
类 化合物 。 以二氯 甲烷 一乙 酸乙 酷 一甲醇 一水 (2 , 1 . 5 , 0 . 5 , 0 . 0 5) 为展开剂 , Q 蔡酚一硫酸试液为显色
剂 , 用 C S 一 9 3 0 薄层扫描仪 八 ~ 5 2 0 n m 波长处线性扫描 。 方法简便 、快 速 、 准确 。
关健词 H P T L C 毛 白杨 酚昔类 含量测定
S e P a r a t i o n a n d D e t e r m i n a t i o n o f P h e n o l i e G l y e o s i d e s i n C h i n e s e W h i t e P o P l a r L e a v e s
(尸口p u l u s t o m e n t o s a ) b y H P T L C
D i
n g Y o n g s h e n g a n d H e L i y i ( I n s t i t u t e o f M
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,
C h i n e s e A e a d e m y o f M e d ie
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K e y w o r d s
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0 5 ) a n d e o lo r d e v e lo pm e n t w it h a
一 n a p h t h o l
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一 e t h a n o l s o l u t i o n
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s m e t h o d w a s s im P le
, r a P id a n d a e e u r a t e
·
P oP
u l u s t o m e n t o s a p h
e n o lie g l y e o s i d e H P T L C
毛 白杨 P oP u l u s t o m e n t o s a C a r r . , 又称
杨构花 , 系杨柳科杨属植物 , 在我国主要分布
于华北等地区 。 《本草纲 目 》中记载 : 毛白杨苦
寒无毒 , 主治扑损痕血 , 有续筋骨 , 止痛止痢
等作用 。 民间用其叶煮水洗 、 敷 ,控制陈 旧性
软组织感染及化脓性骨髓炎疗效较好 。 毛白
杨叶中主要含有酚昔类化学成分 〔`一 3〕 。 为了
充分利用这一丰富的 自然资源 , 我们对植物
中的有效成分进行 了含量测定方法的研究 。
1 仪器与试药
薄层 扫描 仪 岛津 C S 一 93 0 , 定量 毛细 管
( D r u m m o n d S e i
·
C o
·
U S A )
, 高效 硅胶 薄 层
预制板 (烟台化工研究所 ) , 双槽薄层展开槽
( C A M A G 1 2 e m X 5 e m X 1 2 e m )
, 浸板槽
( 自制 1 1 e m X I e m X l l e m ) ,超声波清洗器
(无锡超声 电子设备厂 ) , 离心机 8 0一 1 型 (上
A d d r e s s
:
D i n g Y o n g s h e n g
,
I n s t i t u t e o f M a t e
r
i a M e d i e a
,
C h in e s e A e a d e m y o f M e d i e a l cS ie n e e s a n d P e k in g U n io n
丁永胜 男携蟹伙粼l辈翠斜背蒙古 医学院药学系 , 获学士学位 ; , 9。。 年毕业于 中国医学科学院中国协 和医科大学药物研究所 ,获硕 士学位 ; 1 9 91 一 19 96 年在 内策古 医药 总公司乌海分公司从事药 品质 t 检验及管理工作 , 现为主管药师 ,
具有执业药师资格证书 ;现 主要 从事 中草药中有效 成分分 析和药 品的质 t 控制 与检 验工作 。
.
6 5 6
.