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浙贝母鳞片细胞内酸性磷酸酶细胞化学的初步研究
车霎罄摹暮攀霞学 “ 用植 “ 研 “ 所 `北京 10 ()9 4, “ 文远 ’ 李志亮 “ 培根
摘 要 浙 贝母休 眠解除后 , 鳞 片近轴 面表皮 附近的几层 细胞首先衰退 , 不久形成 一条清晰的破
碎细胞带 。 对这些首先衰退 的细胞 , 在 体眠解 除前后进行 了酸性磷 酸酶 细胞 化学定位研究 。 休眠解
除后 细胞中酸性磷酸酶 的活性 明显高于休眠状 态的细胞 , 淀粉粒 、 细胞核 、 线粒体和细胞 壁上均有
酸性磷酸酶 的定 位 , 而休眠状 态的细胞 中则很难 发现酸性 磷酸酶 的定位 , 其活性较高表 明这些细
胞即将衰退 。
关键词 浙 贝母 鳞 片 休眠 酸性磷酸酶
浙 贝母 F r i t i l l a r i a t h u n b e r g i i M iq . 是
一种常用药用植物 , 其鳞茎有止咳 、 化痰等各
种功效 。 用 S C ~ I O C 的低温处理 5 d 左右
可 以解 除其鳞茎夏季的休 眠 ,使之在气候适
宜的秋 季再长一季 , 达到一年生长两季的 目
的 〔 1〕 。 休眠解除后 , 鳞片开始降解其 自身贮藏
的物质供应新生器官的生长 。光镜观察表明 ,
鳞片近轴面表皮附近的几层细胞首先衰退 ,
不久形 成一条清晰的破碎细胞带 ,而此时鳞
片其它部位的细胞仍保持完好 〔 3 : 。 为深入探
讨这种现象形成 的内在机制 , 我们以这 几层
首先衰退的细胞 为材料 , 采用酸性磷酸酶细
胞化学技术研究其在低温解除休眠前后的变
化 。
1 材料和方法
1
.
1 材料 : 实验 所用浙 贝母取 自本 所实验
地 。 待夏季浙贝母地上部位倒苗进人休眠状
态后 , 选取大小均匀 的鳞茎 , 用 清水洗净后 ,
置于 8 ℃ ~ I O C 的低温下进行处理 。 分别于
低温处理前和低温处理 5 d 后取鳞片近轴
面表皮附近的贮藏组织进行实验 。
1
.
2 方法 : 酸性磷酸酶的定位按 G il k `飞一的方
法 : 切取 小于 。 . 3 m m 3 的组织块 , 立 即投人
用二 甲肿酸钠缓冲液 ( p H 7 . 2) 配制的 4 % 甲
醛和 2 . 5%戊二醛混合 固定液 中 , 室温下 固
定 .1 5 h , 用 p H 7 . 2 的二 甲肿酸钠缓冲液冲
洗 2 次 , 再用 p H S . 2 的 T ir s 一H CI 缓 冲液冲
洗 2 次 ,共历时 3 h 以上 。 然后转移到反应液
中 ,室温下反应 Z h 。 反应液 中含有 5 0 m m ol /
I
J 的 ` f ir 、 一 H C I缓 冲液 , p H S . 2 , 0 . 1 m ol / L 的
价甘油磷酸钠和 0 . 02 m ol / L 的硝酸铅 。 对照
处理 : l) 反应液中不加 件甘油磷酸钠 ; 2) 反应
液 中加人 0 . 01 m ol / L 的氟化钠 。 反应后用
p H 丁. 2 的二 甲肿酸 钠缓 冲液 冲洗 2 次一 3
次 ,历时 l h , O ℃一 4 C下 2%饿酸中固定过
夜 。 洗 涤 后 , 采用 常 规 方 法脱 水 、 包 埋 , 在
L K B 型 超薄切 片机 _ [ 切 片 , 醋酸铀 一柠檬酸
铅染色 , JE M一 1 Oo C X 型 , 透射 电镜上 观察
只具布目。
2 结果与讨论
图 1一 1一 5 为经低温处理 ,休眠解除后的
鳞片细胞 中酸性磷酸酶的活性定位情况 ; 图
1
一
6一 9 为休眠状 态鳞 片细胞 中酸性磷 酸酶
的活性定位情况 , 可 以看出 ,二者之间有显著
差异 , 休眠解 除后的细胞中细胞核与淀粉粒
的表面均呈现酸性磷酸酶 的活性 , 一些囊泡
的 表面 和 内部 也呈 现酸 性磷酸 酶活 性 ( 图
1 )
。 这些细胞 中线粒体的表面也呈现明显的
A d d r e s s
:
G a o W e n y u a n
,
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C h i n e s e A e a d e m y o f M e d i e a l S e i e n e
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C h i n e s e
X i e h e M e d i e a l U n i v e r s i t y
,
B e i J一n g
.
6 9 2
-

细胞 内高尔基体上酸性磷酸酶活性反差很大
(图 1一3 、 8 )。 解除休眠后细胞的细胞膜上和
细胞壁内部均呈现酸性磷酸酶活性 , 而胞 间
连丝和细胞壁旁的囊泡上均不呈现酸性磷酸
酶活性 (图 1一 4 、 5 ) 。 休眠状态细胞的细胞膜 、
细胞壁 、 胞间连丝及细胞壁旁的囊泡上均不
呈现酸性磷酸酶活性 (图 1一 9 ) 。 在对 照处理
的切片中 , 均不呈现酸性磷酸酶活性 。
酸性磷酸酶是 一类专一性 较低 的水解
酶 , 参与各种生物大分子和降解 〔 5〕 。 R e h a n a
等 〔“ 、 ’ 〕的研究表明 ,细胞中的高尔基体和内质
网是酸性磷 酸酶分泌的重要场所 , 由这里分
泌的酶赊存在溶酶体 、 小囊泡和蛋白体中 ,呈
酶原或不活跃状态 , 当大分子物质降解时 ,这
些酶被活化释放出来 。 对浙贝母鳞片酸性磷
酸酶的活性测定结果表明 , 休眠状态 时酶 的
活性很低 , 低温解 除休 眠后酶的活性迅速提
高 `的 。 本文的酶活性超微结构定位结果与这
一致 。 实验所取的细胞是鳞片上首先衰退的
细胞 , 这些细胞 内部酸性磷酸酶活性 的明显
增加 , 为鳞片一定 区域 内贮 藏物质的降解作
好了准备 。 定位于淀粉粒表面的酸性磷酸酶
显然与淀粉的降解有关 。 而定位于细胞核 、 线
粒体 、 高尔基体及细胞壁上的酸性磷酸酶可
能与解除休眠后细胞 中活跃的周转代谢及大
分子物质的降解密切相关 。
参 考 文 献
1 李志亮 ,等 . 中草药 , 19 8 5 ; 1 6 ( l ) : 1 7
2 高文远 , 等 . 广西植物 , 1 9 9 4 ; 1 4 ( l ) : 6 5
3 高文远 , 等 . 植物学报 , 1 9 9 5 ; 3 7 ( 1 1 ) : 8 8 5
4 孙 敬三 ,等 主编 . 植物细胞学研究方法 。 北京 : 科学出版
社 , 1 9 8 7 : 3 1
5 M i t le P
.
T h e L y e i e C o m p a r tm e n t o f P la n t C e l l s
.
N e w
Y o r k
:
S p r in g e r
,
19 75
: 4
6 R e h a n a A
, e t a l
.
A m e r J I弘〕 t , 1 9 9 2 ; 7 9 : 1 1 3 4
7 C h a n d a r a K N
, e t a l
.
C a n T 致〕 t , 1 9 8 9 ; 6 7 : 1 0 9 6
8 高文远 ,等 . 中国 中药杂志 , 19 9 6 ; 2 1 ( 5 ) : 2 72
( 1 9 9 7
一
1 2
一
2 9 收稿 )
A C y t o e h e m i e a l S t u d y o f A e i d P h o s P h a t a s e i n t h e S e a l e C e l l s o f T h u n b e r g F r i t i l l a r y
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.
H ig h a e id p h o s p h a t a s e a e t iv it y in t h e d o r
-
m a n e y r e li e v i n g e e l ls i n d ie a t e s t h a t t h e s e e e l l s a r e g o i n g t o d e g r a d e
.
K e y w o dr s F
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