全 文 ：超临界流体萃取 一H PL C 法测定何首乌中大黄酸 、
大黄素及大黄素甲醚的含量
第二军 医大学药学院 (上海 2 0 0 4 3 3)
第二军 医大学附属长征 医院
中国人 民解放军 2 2 医院
袁海龙 ’
张 纯
李仙逸
柳正 良
郭 澄
摘 要 采用 超临界流体萃取 法 (S FE )提取 中药何 首乌 中的葱醒类成分 , 并用 R P 一H PI 尤 法进 行
分离测 定 。 在 SF E 中 , 通过对萃取条件的考察 , 确定萃取压力为 42 M P a , 温度 70 ℃ , 改性剂量 0 . 4
m L
, 静态萃取时 间 s m in 及动态萃取体积 s m L 。 R P 一H PI 尤 中 , 以 CS为固定相 , 甲醇 一0 . 2 % 磷酸溶
液 (7 0 : 30) 为流动相 , 检测波长 437 n m 。本法 准确可靠 , 何首乌 中各成分 的平 均回收率分别为大黄
酸 9 9 . 1 % (R S D 2 . 0 % ) 、大黄素 9 8 . 2 % (R S D 1 . 1 % ) 、大黄酚 1 0 0 . 7 % (R S D 2 . 6 % )和大黄素 甲醚
9 9
.
5 % (R SD 0
.
9 % )
。
关建词 超 临界 流体萃取 H PI , C 何首乌 葱醒类 成分
何 首乌 为 寥科 植 物 尸口ly g on u m m u lt 公
刀or u m T h u n b . 的块根 , 具有滋补强壮 、解毒
消痛 、润肠通便等功效 。 何首乌含有葱酿类 、
二苯乙烯昔类及磷脂等有效成分 , 其中 , 葱酿
类是重要活性成分 。 已有报道采用分光光度
法 [l1 、薄 层层 析法阁 及 高效液相 色谱 法 (3一 ‘’
等分析何首乌及其制剂中的蕙醒类成分 , 但
预处理繁琐费时 , 分离效率不高 。超临界流体
萃 取 (S F E )是 近代分 离领 域出现 的高新 技
术 , 除了可以减少有机溶剂使用外 , 还具有萃
取效率 和选择性 高 、省 时 、萃取 溶媒便 于挥
发 、提取物较为干净 、环境污染小 、操作条件
易于改变等特点 , 是一种较为理想的萃取方
法川 。 本文建立 了 S F E 一H P LC 法分离测定何
首乌 中的蕙醒类成分 , 为何首乌及其制剂 的
质量控制提供方法学依据 。
1 仪器与试药
1
.
1 仪 器 : S P 8 8 0 O 液 相 色 谱 仪 , U V 一2 0 0 0
检 测 仪 , S P 4 4 0 0 积 分 仪 (美 国 光谱 物 理 公
司 ) ; ISC O 1 0 0 注射 泵 , S FX 一 1 0 超 临界 流体
萃取仪 (美国 IS C O 公司 ) ; H A 一20 2M 电子天
平 (日本 ) 。
1
.
2 试药 : 大黄素 、大黄素甲醚 、大黄酚及大
黄 酸对 照 品 (中国药 品生 物制 品 检定 所 提
供 ) ; 何首乌药材购于安徽毫州药材市场 , 由
第二军医 大学药学院生药教研室鉴定 ; 甲醇
为色谱纯 , 氯仿为分析纯 。
2 实验方法
2
.
1 色谱条件 : 色谱柱 为 E e o n o s p he r e C 8 5
拼(2 5 0 m m X 4 · 6 m m ) , 流动相 为甲醇 一 o · 2 %
磷 酸 (7 0 : 3 0 ) , 流 速 1 . 2 m L / m in , 室温 , 检
测波长 4 3 7 n m 。
2. 2 SFE 萃取条件的选择
2
.
2
.
1 改 性剂的选择 : 超临界 CO : 流 体的
极性与正己烷相似 , 因此在萃取极性成分时 ,
一般要加入少量极性溶剂 , 以改善萃取效果 。
我们考察 了甲醇 、氯仿和 乙酸乙醋三种溶剂 ,
以选择 甲醇萃取效率 为最高 , 因此我们选择
A d d r e s s
袁海 龙 要
及质 量控 制 。 厄
·
2 5 8
.
:
Y u a n H a 一lo n g , C o lle g e 0 1 P h a r m a e y , ,1
’
h e S e e o n d M illt a r y M e d ie a l U n iv e r s ity
,
S h a n g h a i
;
,
1 9 9 2 年毕业于第二军 医大学药学 院 , 学 士学位 , 1 99 6 年攻读硕士研究生 。 主要研究方 向为 中草药提取工艺
玉获军队科技进步奖 1 项 , 先后发表论 文 10 余篇 , 其 中 1 篇获第三届 岛津杯优秀论 文三等奖 。
了甲醇作为改性剂 。
2
.
2
.
2 萃取压力的选择 : 超临界流体具有很
大 的可压性 , 在一定温度下 , 压力增加 , 超 临
界流体的密度增加 , 溶质在流体中的溶解 度
增大 , 萃取效率提高 。 固定其他参数 , 改变压
力从 2 8一 4 9 M Pa , 每隔 7 MP a 萃取一个点 ,
结果见图 1 一A 。 从 图可见 , 选择 42 M P a 作萃
取压力较好 。
2. 2. 3 温度的选择 : 恒压下 , 温度升高 , 流体
密度下降 , 但溶解度是溶质挥发度的函数 , 提
高温度可指数级地提 高溶质 的蒸气压 , 从 而
增加溶质的溶解度 , 提高萃取效率 。 改变温度
4 0 ℃ ~ 8 0 ℃ , 每隔 1 0 ℃萃取一个 点 , 结果见
图 1 一B 。 从图可见 , 选择萃取温度 为 70 ℃较
好 。
2
.
2
.
4 改性剂量的选择 : 加人一定量的极性
改性剂可提高萃取量 , 但过高的改性剂量将
使萃取状态在一种非 临界状态下进行 , 往往
达 不到理想的萃取效果 。 我们 选择 了 0 . 2 、
0
.
3
、
0
.
4
、
0
.
5 m l
洲 甲醇作为改性剂萃取效果
良好 。
2
.
2
.
5 静态萃取时间的选择 : 整个超临界流
体萃取过程既包含转运 、又存在扩散 , 体质一
定的静态萃取时间可提高萃取效率 。 我们选
择 了 3 、 5 、 7 m in 三个时间 , 结果见图 1 一D 。 由
图可见 , 静态萃取时间 s m in 较好 。
ƒ,、日„翻如
压力 (翻甲 . ) 砚度 ( ℃ )
黔卜认八 众 0,户嗽
:犷户泛 二U . . ‘二二‘‘~ ~ . . J‘二. . 一 卜~ - 一于‘二二闷卜
0
.
2 O
.
3 U 二 O 一 , _ _ 刁 ‘_ 尹_ ,改性刘t ( m L) 静石草职时阅 (~ )
A
一压力 B 一温度 C 一改性剂量 D 一静态萃取 时间 E 一动态萃取量 1 一大黄素 甲醚 2 一大 黄酸 3 一大 黄素
图 1 各 因素对萃取率的影响
2
.
2
.
6 动态萃取体积的选择 : 动态萃取体积
对萃取效率影响很大 , 固定其它 四种萃取条
件 , 改变萃取体积 3 、 5 、 7 m L , 结果见图 1 一E 。
我们选择 了 s m L 为动态萃取体积 。
2
.
2
.
7 SF E 萃取工艺 : 经系统法考察 , 我们
选择 了 以下萃取条件 : 萃取压力为 42 M P a ,
温度 7 0 ℃ , 改性剂量 0 . 4 m L , 静态萃取时 间
s m in
, 动态萃取体积 s m L 。
2
.
3 标准 曲线绘 制 : 精 密吸取各 对 照品适
量 , 用甲醇配制定容 , 使每 l m L 含大黄素 30
拌g 、大黄酚 3 2 拼g 、大黄素 甲醚 2 2 拜g 及大黄
酸 32 拜g 的甲醇混合溶液 。 精密吸取 0 . 5 、 1 、
2
、
4
、
s m L 置 10 m L 容 量瓶 中 , 甲醇定容后
依次进样 , 按上述色谱条件测定峰面积 , 以峰
面积积分值为纵坐标 , 对照 品进样量为横坐
标绘制标准曲线 , 其 回归方程为 :
Y 大黄酸 一 2 9 7 0 9 7 1 . 4 2X + 2 9 0 1 5 . 6 2 , r =
0
.
9 9 9 7
《中草药 》1 9 9 9 年第 3 0 卷第 4 期
Y 大黄素 一 4 3 5 7 2 1 6 . 1 4 X + 2 8 2 6 1 . 4 6 , r =
0
.
9 9 9 6
Y 大黄阶 = 3 6 1 9 4 6 6
.
7 2X + 3 2 0 4 3
.
7 6
, r -
0
.
9 9 9 6
Y大黄” 醚 = 2 1 6 4 9 3 3 . 6 7X 十 2 2 9 2 . 7 7 , r 一
0
.
9 9 9 2
2
.
4 精密度实验 : 取样品测定项下对照品混
合溶液 , 重复进样 5 次 , 每次 10 拼L , 对照 品
峰 面 积 积 分 值 的 R S D 值 分 别 为 大 黄 酸
1
.
2 %
、大 黄素 1 . 7 % 、大 黄酚 0 . 9 % 、大黄素
甲醚 1 . 3 % 。
2
.
5 加样 回收率试验 : 取已知含量的何首乌
药材 0 . 5 9 , 分别加人对照品溶液适量 , 挥干 ,
按样 品方法萃取及测 定 , 5 次测得平均 回收
率分别为大黄酸 9 . 1 % ( R S D 2 . 6 % ) 、大黄
素 9 8 . 2 % ( R S D 1 . 1 % ) 、 大 黄 酚 1 0 0 . 7 %
( R S D 2
.
6 % ) 和 大 黄 素 甲醚 9 9 . 5 % ( R S D
0
.
9 % )
。
.
2 5 9
-
2
.
6 样 品测定 : 取何首乌药材粗粉 0 . 5 9 , 精
密称定 , 以上述最佳萃取条件进行萃取 , 定容
1 0 m L
, 精取 1 0 拜L 直接进样 , 结果是 大黄酸
为 0 . 0 0 8 9 m g / g , 大黄素为 0 . 0 7 3 5 m g / g , 大
黄素甲醚为 0 . 0 8 9 3 m g / g , 大黄酚未检测到 ,
见图 2 。
A
一对照 B 一何首乌
1
一大黄酸 2 一大黄素 3一大黄酚 4一大黄素 甲醚
图 2 对照 品与样品色谱 图
3 讨论
本 文考察 了 SF E 与文献报 道圈 的提取
方法的提取效率 , 其结果见表 1 , 经 t 检验 , 尸
值 皆小 于 0 . 05 , 说 明 两种 方法无 显著 性差
异 , 但 S FE 时间短 , 效率高 , 后处理简单 。
表 1 提取方 法比较(n ~ 3)
提取方法 溶媒 提取时 间 大黄 酸 大 黄素 大黄素 甲醚
(m in ) (m g / g ) (m g / g ) (m g / g )
S FE CO Z 2 0 0
.
0 0 8 9 0
.
0 7 3 5 0
.
0 8 93
超声波 甲醇 氯仿 18 0 0 . 0 08 7 0 . 0 74 0 0 . 0 5 24
本 文建立 的 H PL C 法使葱醒类成分得
到很好 的分离 , 并对何首乌 中大黄酸作了定
量分析 。 本文的固定相采用 C : 柱 , 柱的极性
强于 C 1 8柱 , 而大黄酸极性较强 , 经 C : 柱 出峰
时间较为合适 , 分离效果 良好 。蕙醒类属弱酸
性成分 , 流动相呈弱酸性条件下其保 留行为
得到改善 。 本文考察了以磷酸甲醇水溶液分
离得到的峰形对称 , 分离效果 良好 。
参 考 文 献
1 姚桂根 , 等 . 中成药研究 , 1 9 8 2 , 4 (4 ) : 1 2
2 孙彤云 , 等 . 中成药研究 , 1 9 8 5 , 7 (1 1 ) : 8
3 姚桂根 , 等 . 中成药研究 , 1 9 8 4 , 6 (3 ) : 8
4 徐凯健 , 等 . 中国 医院药学杂志 , ”89 , 9( H ) : 5 4 4
5 大岛俊幸 , 等 . 药物分析杂志 , 1 9 9 6 , 16 (4 ) : 2 19
6 吴振洁 , 等 . 中国药科大学学报 , 19 9 7 , 2 8 (2 ) : 1 2 3
7 G a w d z ik J
, e t a l
.
J H ig h R e s o lu t io n Ch r o m a t o g r
, 19 9 5 ,
18
: 78 1
(1 9 9 8
一
0 8
一
1 0 收稿 )
D e te r m in a tio n o f R h e in
,
E m o d in a n d P hys c io n in T u b e r F le ee eflo w e r
(Po ly g
o n u m m u lt价o ru m ) by Su Pe r c r itie a l Flu id E x t r a e tio n 一H P L C
Y u a n H a ilo n g
,
Z ha n g C hu n
,
L i X ia n yi
, e t a l
.
(P h a r m a e e u tie a l C o lle g e o f t he S e e o n d M ilit
a r y M
e d ie a l U
-
n iv e rs it y
,
S h a n g h a i 2 0 0 4 3 3 )
A b s tr a c t S u p e r e r itie a l flu id e x t r a e tio n (S FE ) w a s u s e d t o e x tr a e t a n t h r a q u in o n e s in P oly g
o n u m m u lz公
刀o r u m T h u n b a n d e o n te n ts o f r he in , e m o d in a n d p hy s e io n in th e e x t r a c t w e r e d e te r m in e d b y R P 一H PIJ C .
SF E e o n d itio n s
:
p r e s s u r e 4 2 M P
a , te m Pe r a tu r e 7 0 ℃ , 0 · 4 m L m e t ha n o l a s m o d ifie r , s ta tie e x t r a e t io n 5 m in
a n d d yn a m ie e x t r a e tio n v o lu m e 5 m L
·
H PL C e o n d itio n s
: th e H P LC e o lu m n w a s p a e k ed w ith C s (5 拌m ) ; th e
m o b ile p h a s e w a s m e th a n o l
:
0
.
2 % ph
o s ph o rie a e id (7 0 : 3 0 ) ; th e d e te e tio n w a v e
一
le n g t h w a s 4 3 7 n m
.
T h e
m e t h o d w a s a c e u r a te a n d re lia ble
.
T h e m e a n r e e o v e r y w a s 9 9
.
1 % (R S D 2
.
0 % ) f
o r r h e in
,
9 8
.
2 % (R S D
1
.
1 % ) f
o r e m o d in
,
1 0 0
.
7 % (R S D 2
.
6 % ) f
o r e h r ys o p h a n o l a n d 9 9
.
5 % (R S D 0
.
9 % ) f
o r p h ys e io n
·
K ey w o r d s P I卿 g o n u m m u ltifl o r u m T h u n b . s u p e r e ritie a l flu id ex tr a e tio n (SFE ) H P LC
a n t h ra q u in o n e s
·
2 6 0
·