全 文 ：1-阴性液　 2-样品液　 3-对照品液
图 1　零阶紫外吸收光谱
1-阴性液　 2-样品液　 3-对照品液
图 2　一阶导数光谱
横坐标 ,回归方程为 Y = 6. 74C - 0. 004 8, ( r=
0. 999 9) ,表明在 10～ 50μg /mL范围内 ,一阶导数
光谱振幅值和邻氨基苯甲酸浓度有良好的线性关
系。
2. 6　加样回收率和稳定性考察:精密量取对照品溶
液 ,加入已知含量的样品液中 ,依上法测定 ,平均加
样回收率为 96. 66% , RSD= 1. 09% 。将样品液避光
冷藏 ,分别在不同时间进样 , 3 d内测定结果无明显
变化 , RSD= 2. 31% 。
2. 7　样品测定:取样品液 1 m L置于 10 mL容量瓶
中 ,以乙醇定容 ,依上法测定 351～ 354 nm振幅谷
处的 (Δ A /Δλ)值 ,用标准曲线法计算大青叶样品中
邻氨基苯甲酸含量 ,为 ( 375. 88± 0. 89)μg /mL。
2. 8　方法比较:采用高效毛细管电泳法对大青叶中
邻氨基苯甲酸含量进行测定 ,结果为 ( 382. 62±
1. 15) μg /mL。 将两种方法测定结果进行统计学处
理 ,表明两者没有显著性差别 ( P> 0. 05,n= 5)。
3　讨论
导数光谱法具有简便、快速的优点 ,在中药材及
其制剂化学成分的含量测定方面的应用已有报
道 [4～ 6 ]。本文以一阶导数光谱法对大青叶中邻氨基
苯甲酸的含量进行了测定 ,通过线性关系、加样回收
率和稳定性考察 ,以及与高效毛细管电泳法比较 ,表
明该法能简便准确地测定大青叶药材中的邻氨基苯
甲酸含量 ,为该类药材的质量控制提供了简便、准确
的方法。
参 考 文 献
1　中华人民共和国药典 . 一部 . 广东:广东科技出版社 ,北京:化学
工业出版社 , 1995: 15
2　 Wu Xiaoyun, Liu Yunhai, Sh eng Wangun, et al . Plant Med,
1997, 63: 55
3　王　寅 ,尹　茶 ,乔传卓 . 第二军医大学学报 , 1999, 20( 6): 370
4　龙沛霞 ,王玉珍 . 中草药 , 1996, 27( 9): 531
5　陈　鸣 .中国中药杂志 , 1996, 21( 5): 282
6　刘克仲 .华西药学杂志 , 1994, 9( 1): 67
( 1999-11-24收稿 )
正交法优选醋炙三棱最佳炮制工艺
南京中医药大学 ( 210029)　　陆兔林 　毛春芹　叶定江
摘　要　以三棱总黄酮、扭体镇痛法及抗凝血作用为指标 ,选择炒制温度、炒制时间、醋用量 3个因素 ,用 L9 ( 3)4正
交设计表 ,采用综合评分和方差分析的数学分析方法 ,对三棱进行醋制工艺优选。结果表明 ,每 100 kg三棱用醋 25
kg ,温度 130℃ ,炒 10 min为最佳工艺。
关键词　三棱　正交设计　总黄酮　镇痛　抗凝血
·665·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期
Address: Lu Tulin, Nanjing Universi ty of TCM, Nanjing陆兔林　男 ,讲师 ,博士。毕业于南京中医药大学中药系。主要从事《中药炮制学》教学和中药饮片质量标准及新药开发研制工作。主持或承担多项科研课题 ;在《中草药》、《中成药》、《中药材》等刊物发表科研论文 10余篇。
Optimization of Process ing Technique of Sparganium stoloniferum by
Orthogonal Experimental Des ign
　　Nanjing Univ e rsity of T raditional Chinese Medicine ( Nanjing 210029)　 Lu Tulin, Mao Chunqin and Ye Ding jiang
Abstract　　 The optimum condi tions for the processing of Sparganium stolonif erum Buch-Ham. w ith
vinegar w ere studied by L9 ( 3)
4
o rthogona l experimental design, as guided by decrease of w ri thing rate in
analgesic test and anticoagulant activi ty. The results show ed that the best pro cessing condi tions w ere sti r
f rying of the raw S. stoloni ferum with the addi tion o f 25 kg o f vinega r per 100 kg of crude drug at 130℃
fo r 10 min.
Key words　 　 Sparganium stoloni ferum Buch-Ham. 　 o rthogonal experimental design　 to tal
f lav onoids　 analgesic action　 anticoagulant activ ity
　　通过对三棱炮制研究 ,表明醋炙法优于其它炮
制方法。历版《中华人民共和国药典》及全国大部分
地方规范中都将醋炙法作为其炮制方法。 但炮制过
程中影响饮片质量的因素较多 ,各地对醋炙三棱质
量要求不一 ,炒制程度各异 ,没有全国统一使用的规
范工艺 ,对成品质量影响较大。为此本文选择炒制温
度、炒制时间、用醋量 3个主要因素 ,选用 L9 ( 3) 4正
交设计 ,以与三棱功效相对应的镇痛、抗凝血作用及
其代表性成分总黄酮 [1 ]为指标 ,采用综合评分和方
差分析两种分析的方法对醋炙三棱的炮制工艺进行
研究 ,确定醋炙三棱的最佳工艺参数。
1　实验材料
三棱药材购自南京市药材公司 ,经本校鉴定教
研组陈建伟副教授鉴定为黑三棱科植物黑三棱
Sparganium stoloni ferum Buch -Ham削去外皮的
干燥块茎。米醋: 镇江恒顺香醋厂生产。
752紫外分光光度计 (上海第三分析仪器厂 ) ;
芦丁由植化教研室李祥老师提供 ,其他所用试剂均
为分析纯。
昆明种小鼠 ,体重 18～ 22 g ,由本校实验动物中
心提供。
2　实验方法与结果
2. 1　正交试验设计醋炙三棱炮制工艺:选用 L9 ( 3) 4
因素水平表 ,各因素水平见表 1。根据正交安排 9种
炮制工艺 ,见表 2。
表 1　正交设计醋炙三棱工艺的因素水平表
水平 因　　　　　　素
A炒制温度 (℃ ) B炒制时间 (min) C用醋量 (% )
1 100 5 15
2 130 10 20
3 160 15 25
2. 2　炮制品的制备:等量称取 9份样品 ,以表 2的
9种工艺组合按醋炙法操作 ,将三棱饮片与醋拌匀
后 ,置经预试的电炒锅内 ,分别制得 9种醋炙样品 ,
备用。
2. 3　样品中总黄酮的含量测定: 按文献 [2 ]中总黄酮
含量测定下方法测定各样品中的总黄酮。结果见表
2。
表 2　三棱总黄酮 L9 ( 3)4正交试验数据及计算表
序号 A B C D 总黄酮 (% )
1 1 1 1 1 0. 2928
2 1 2 2 2 0. 3705
3 1 3 3 3 0. 4794
4 2 1 2 3 0. 3398
5 2 2 3 1 0. 5221
6 2 3 1 2 0. 3204
7 3 1 3 2 0. 3847
8 3 2 1 3 0. 2825
9 3 3 2 1 0. 3119
2. 4　三棱各炮制品对化学刺激引起小鼠扭体反应
的影响:药液制备: 称取三棱各炮制品 100 g ,分别加
水煎煮 2次 ,过滤 ,滤液合并浓缩至 100 mL,备用。
按文献法 [3 ]进行实验 ,观察小鼠扭体反应次数。结果
见表 3。
2. 5　三棱各炮制品对小鼠凝血时间的影响: 按文献
法 [4 ] ,小鼠灌服给药 1 h后用玻璃毛细管插入小鼠
内眦球后静脉丛 ,深约 4～ 5 mm,轻轻转动再缩回。
自血液流入管内开始计时 ,血液注满后取出毛细管 ,
每隔 30 s折断毛细管约 0. 5 cm ,并缓慢向左右拉
开 ,观察折断处是否有血凝丝 ,至血凝丝出现为止 ,
所历时间即为血凝时间。 结果见表 3。
2. 6　最佳炮制工艺方案优选
2. 6. 1　各实验结果方差分析:以总黄酮为指标对表
2正交试验结果进行方差分析 ,结果表明 ,因素 A、 C
对醋炙三棱的质量有显著的影响 ,因素 B无显著差
异 ,其影响程度为 C> A> B。 醋炙三棱的最佳工艺
组合应为 A2B2 C3。
以醋酸扭体反应为指标对表 3正交试验结果进
行方差分析 ,结果表明 ,因素 A、 B、 C对醋炙三棱的
镇痛实验结果有显著的影响 ,其影响程度为 A> B
·666· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期
表 3　正交设计三棱各炮制品对醋酸扭体反应及小鼠凝血时间的影响
序号 A B C D t值与对照组比较
扭体反应次数
(x± s )
t值
与对照组比较
凝血时间
( x± s )
对照组 23. 3± 3. 199 83. 7± 2. 731
1 1 1 1 1 3. 40 15. 7± 6. 094 　　　　 5. 98 112. 8± 15. 117
2 1 2 2 2 4. 77 15. 9± 3. 719 5. 21 97. 7± 8. 039
3 1 3 3 3 3. 34 17. 2± 4. 803 3. 53 97. 6± 12. 103
4 2 1 2 3 5. 83 14. 3± 3. 683 16. 06 211. 3± 24. 966
5 2 2 3 1 6. 48 13. 6± 3. 489 23. 67 209. 6± 16. 590
6 2 3 1 2 3. 38 13. 8± 8. 297 10. 27 130. 7± 14. 196
7 3 1 3 2 4. 06 16. 1± 4. 606 14. 14 188. 7± 23. 313
8 3 2 1 3 3. 40 17. 5± 4. 343 11. 56 135. 9± 13. 996
9 3 3 2 1 3. 24 16. 6± 5. 701 2. 58 103. 1± 23. 414
> C。 醋炙三棱的最佳工艺组合应为 A2 B2 C3或 C2。
　　以小鼠凝血时间为指标对表 3正交试验结果进
行方差分析 ,结果表明 ,因素 A、 B、 C对醋炙三棱的
小鼠凝血时间实验结果有显著的影响 ,其影响程度
为 A> B> C。 醋炙三棱的最佳工艺组合应为
A2B2 C3。
2. 6. 2　各实验结果综合加权评分分析:根据上述几
项实验结果 ,以综合加权评分的方法对各炮制品中
总黄酮含量 (样品中总黄酮含量× 10 /总黄酮最高含
量 )、醋酸扭体反应、小鼠凝血时间 ( t值 )等 3项指
标进行综合评价 ,评分结果见表 4。
　　由表 4综合加权评分的结果和上述方差分析结
表 4　正交设计各样品实验指标综合评分结果
序号 A B C D 总黄酮 扭体反应 凝血时间 综合得分
1 1 1 1 1 5. 61 3. 40 5. 98 14. 99
2 1 2 2 2 7. 10 4. 77 5. 21 17. 08
3 1 3 3 3 9. 18 3. 34 3. 53 16. 05
4 2 1 2 3 6. 51 5. 83 16. 06 28. 40
5 2 2 3 1 10. 0 6. 48 23. 67 40. 15
6 2 3 1 2 6. 14 3. 38 10. 02 19. 54
7 3 1 3 2 7. 37 4. 06 14. 14 25. 57
8 3 2 1 3 5. 41 3. 40 11. 56 20. 37
9 3 3 2 1 5. 97 3. 24 2. 58 11. 79
果均表明 ,因素 A、B、 C对醋炙三棱的质量有显著影
响 ,同时采用综合加权评分法和采用方差分析法结
果一致。根据分析结果 ,醋炙三棱的最佳工艺组合应
为 A2 B2 C3 ,即用 25%的米醋与三棱饮片拌匀吸尽
后 ,于 130℃时不停翻炒 10 min,取出 ,放凉即得。
3　小结与讨论
三棱为临床常用药 ,具破血化瘀止痛作用。实验
显示 ,三棱中黄酮类成分具显著的生理活性 ,本实验
选择与三棱功效相对应的镇痛、抗凝血作用及其代
表性成分黄酮为指标 ,以对成品质量影响较大的炒
制温度、炒制时间、用醋量 3个主要因素 ,采用正交
试验法研究三棱炮制工艺采用单指标和多指标综合
分析两种方法对醋炙三棱的炮制工艺进行优选 ,筛
选出醋炙三棱的最佳工艺参数。本实验结果为进一
步制定三棱饮片质量标准提供参考依据。
参 考 文 献
1　陆兔林 ,叶定江 ,毛春芹 ,等 . 中草药 , 1999, 30( 6): 439
2　陆兔林 ,毛春芹 ,叶定江 ,等 . 中成药 , 1998, 20( 3): 23
3　徐叔云 ,陈　奇 ,沈映君 ,等 .药理实验方法学 .北京: 人民卫生
出版社 , 1991: 700, 695
4　陈　奇 ,徐秋萍 ,沈映君 ,等 .中药药理研究方法学 . 北京:人民
卫生出版社 , 1994: 484
( 1999-08-23收稿
2000-04-21修回 )
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