全 文 ：中微温使溶解,待冷至室温后加 0. 1 mol / L 盐酸至
刻度,摇匀(含巯嘌呤 0. 5 mg / mL)。
2. 4　样品的制备:取 40 ℃干燥并粉碎过 100目的
狗爪豆粉 160 mg ,精密称定,置 10 mL 量瓶中加酸
性乙醇 ( 9 mL 盐酸加 85%乙 醇至 1000 mL)到刻
度,摇匀后浸渍 2 h, 于超声提取器中超声提取 40
min,离心,取上清液 5. 0 mL 于蒸发皿中 45 ℃水浴
上挥干, 加入内标溶液 5. 0 mL 溶解残渣, 经 0. 45

m 微孔滤膜过滤制得样品溶液供 HPLC分析用。
2. 5　线性关系及校正因子的测定:取左旋多巴对照
品 25 mg 精密称定, 置 25 mL 量瓶中, 用内标溶液
溶解并稀释到刻度, 摇匀,精密量取 1. 0, 2. 0, 4. 0,
6. 0, 8. 0 mL 分别置于 10 mL 容量瓶中,用内标溶
液稀释到刻度,摇匀,连同本液在上述色谱条件下分
别进样 20
L, 测定峰面积,以峰面积比为纵坐标,
对应左旋多巴浓度为横坐标进行线性回归, 结果左
旋多巴含量在100～1 000 mg/ L 范围内呈良好的线
性关系,回归方程为:
Y= ( 6. 304+ 1. 863X )×10- 3 , r= 0. 999 9。
根据 6种不同浓度溶液进样后的峰面积计算校
正因子为 1. 069 0, RSD = 0. 67%。
2. 6　样品及回收率的测定:吸取样品制备液 20
L
注入色谱仪, 根据峰面积计算含量,结果狗爪豆种子
中左旋多巴含量为 3. 61%, RSD= 0. 63%( n= 3)。
　　取已知含量的样品粉末 0. 1 g ,共 3 份, 精密称
定, 置 10 mL 量瓶中, 分别加入左旋多巴对照品
2. 0, 2. 5, 3. 0 mg , 加酸性乙醇至刻度, 按 2. 4 项提
取制备, 并进行加样回收测定,计算回收率,结果在
100. 81%～101. 42%之间, RSD 小于 0. 68%。
2. 7　稳定性试验: 取校正因子测定用对照液( 0. 5
mg/ mL)于 50℃水浴中加热 1 h放冷至室温,分别
于 0(当时) , 12 , 24 h 进样分析,结果左旋多巴与内
标峰面积比值与 2. 5项测得比值基本一致。
3　小结和讨论
3. 1　狗爪豆种子中富含脂肪与蛋白质,用酸性水溶
液提取时易形成乳浊液而难分离, 为防止污染柱子,
经多次分离实验,结果以 0. 1 mol/ L 盐酸的 85%乙
醇溶液分离效果最好, 且经浸渍并超声提取 40
m in, 再于 4 000 r/ m in 离心 10 min,左旋多巴可全
部提出。
3. 2　酸性乙醇提取液直接进样对左旋多巴和巯嘌
呤的峰形均有干扰, 因此须在 45 ℃水浴中挥去乙
醇, 残渣用等量的内标溶液溶解, 可消作干扰, 峰形
较好。
3. 3　建立的高效液相色谱法,可使杂质、内标物与
左旋多巴实现良好的分离, 准确测定了狗爪豆种子
中左旋多巴含量, 用该法还同时测定了狗爪豆茎中
左旋多巴含量为 0. 59%,豆荚中为 0. 094%。
参考文献:
[ 1]　蔡　军,朱兆仪 . 黎豆属植物中左旋多巴资源的研究[ J ] . 中
草药, 1990, 21( 3) : 7-8.
[2]　卫生部药典委员会编 . 临床用药需知[ M ] . 北京:化学工业出
版社, 1995.
[3]　北京医学院药学系 74届学员 . 黎豆中左旋多巴的提取和含量
测定[ J ] . 中草药通讯, 1974, ( 4) : 20-22.
[4]　陈　勇,甄汉深,许学健,等 . 薄层扫描法测定猫豆和黎豆中左
旋多巴的含量[ J] . 中草药, 1993, 24( 6) : 294-295.
HPLC法对天麻素及其制剂中天麻素的定量分析
谢笑天1 ,郑　萍1,杨明惠2,徐树光3

( 1. 云南师范大学 化学系, 云南 昆明　650092; 　2. 大理师范高等专科学校, 云南 大理　671000;　3. 昆明制药
股份有限公司, 云南 昆明　650100)
摘　要:目的　测定天麻素及各制剂中的含量。方法　采用 RP-HPLC 法, Shim-pack CLC-CN 柱 ( 150 mm×6. 0
mm, 5
m) , 咖啡因为内标物,乙腈-水( 10∶90)为流动相,检测波长 270 nm。结果　从天麻素对照品及原料中分离
出一种未知物,建立了 HPLC 法, 加样回收率为 99. 87% , R SD= 0. 46% ( n= 5) ,天麻素在 1～10
g 内与峰面积呈
良好线性关系, r= 0. 999 9。结论　方法准确、精密、快速、简便,可用于天麻素及制剂中天麻素的含量测定。
关键词: 天麻素;制剂; HPLC ;含量测定
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 06 0513 03
·513·中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2001 年第 32卷第 6期

收稿日期: 2000-08-14作者简介:谢笑天( 1962-) ,男,硕士,云南师范大学化学系副教授。从事天然有机化学、药物分析及精细化工的研究。参加或主持多项国家自然基金项目、云南省省院省校合作项目、云南省教委自然科学基金项目及企业委托项目。
Determination of gastrodin and preparations of gastrodin by HPLC
XIE Xiao-tian1, ZHENG P ing 1, YANG Ming-hui2, XU Shu-guang 3
　　( 1. Depar tment of Chemist ry , Yunnan Normal U niver sity , Kunming Yunnan 650092, China ; 2. Dali Normal Co lleg e,
Dali Yunnan 671000, China; 3. Kunming Pharmaceutical Co . L td. , Kunming Yunnan 650100, China)
Key words : gast rodin; prepar at ion; HPLC; quantitat ive deferm inat ion
　　天麻 Gastrodia elata Bl. 是我国著名的中药,
主治诸风湿痹,风虚眩晕,头痛等症。天麻素是天麻
中的主要有效成分,结构为 4-羟甲基苯-
-D-葡萄吡
喃糖苷半水合物,人工合成的天麻素物理化学性质
和结构与天然天麻素一致,药理作用也完全相同[ 1]。
其含量测定方法有紫外分光光度法、薄层扫描法及
HPLC 法[ 2, 3] ,经研究不适用于本品。本论文建立和
完善了 HPLC 测定天麻素及制剂的方法。同时发现
在天麻素对照品及原料中,存在一个未知杂质, 为
此,我们进行了研究,使天麻素峰与杂质峰良好离,
得到了较满意的色谱条件。
1　仪器与试药
1. 1　仪器:日本岛津 LC-6A 高效液相色谱仪, SPD-
6AV 紫外可见检测器, C-R3A 色谱数据处理仪。
1. 2　试药:天麻素对照品,中国药品生物制品检定
所提供,采用归一化法进行纯度检查,结果在本文的
高效液相色谱条件下, 纯度为 95. 2%。同法测定咖
啡因内标, 纯度为 99. 7%, 由昆明滇池制药厂提供。
天麻素原料、片剂、胶囊剂和针剂由昆明制药股份有
限公司提供。乙腈 HPLC级,二次亚沸水。
2　实验部分
2. 1　色谱条件
2. 1. 1　色谱柱:日本岛津 Shim-pack CLC-CN ( 150
mm×6. 0 mm , 5
m)柱, 流动相: 乙腈-水 ( 10∶
90) , AU FS: 0. 16, 流速 1. 0 mL/ min,检测波长: 270
nm;进样量: 10
L。
2. 1. 2　柱子的选择: 采用 Shim-pack ODS 柱,
CLC-C8 柱, L ick-RP C18, 氨基柱等进行实验, 从峰
形、分离度及色谱分析时间考察, Shim-pack CLC-
CN 柱较理想。
2. 1. 3　内标选择:本文对咖啡因、安替比林、对氨基
苯磺酸等进行了测定, 考察与天麻素及未知物的分
离情况,结果表明: 咖啡因的保留时间比较理想,且
与其它峰互不干扰。
2. 1. 4　样品溶剂的选择:用甲醇、乙腈、四氢呋喃和
水等,结果表明, 选用乙腈-水( 10∶90)流动相作为
溶剂与样品相配, 获得的峰形及分离效果最佳。
2. 1. 5　系统适用性测定: 在本实验色谱条件下, 精密
称取天麻素与咖啡因适量,用流动机溶解。取10
L 进
样,色谱图见图 1A, 保留时间为:天麻素: 3. 85 min,
杂质: 4. 80 min,内标: 6. 46 min。理论塔板数:天麻素
为3191, 内标为 13850; 拖尾因子为 0. 95, 0. 75;分离
度:天麻素与杂质为 2. 27,天麻素与内标为 4. 0。
A-对照　B-片剂、胶囊阴性空白　C-针剂阴性空白
1-天麻素　2-杂质　3-咖啡因
图 1　样品色谱图
3　测定结果
3. 1　对照品贮备溶液和内标溶液的配制:精密称取
80 ℃干燥 1 h的天麻素对照品适量,用流动相配成
2. 8 mg / mL 的溶液,另精密称取咖啡因适量, 用流
动相配制成 0. 32 mg / mL 的溶液作为内标溶液。
3. 2　样品溶液的配制
3. 2. 1天麻素原料:精密称取本品的 2. 5 mg, 置 50
mL 量瓶中,另精密吸取 2 mL 内标溶液加入, 用流
动相溶解、定容。进样 10
L,测定。
3. 2. 2　片剂、胶囊: 天麻素片剥去糖衣后,取 20片,
精密称量, 研细,取细粉适量, 加流动相超声溶解后
定容,过滤。精密量取续滤液适量配成 0. 5 mg / mL,
余同原料的含量测定方法。胶囊的测定同片剂。
3. 2. 3　针剂: 精密吸取注射液适量,另精密吸取 2
mL 内标溶液加入, 用流动相稀释配成 0. 5 mg / mL
的溶液,余同原料的含量测定。
3. 3　校正因子测定: 精密量取对照品贮备溶液 5
mL 与内标溶液 1 mL 置于 25 mL 量瓶中, 用流动
相稀释至刻度, 得校正因子测定用溶液, 进样 10

L,连续进样 5次,计算校正因子。
3. 4　线性范围和最低检测限:精密量取对照品贮备
溶液 1, 2, 3, 4, 5, 6 mL 分别置于 25 mL 量瓶中, 各
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精密加入内标溶液 1 mL, 用流动相稀释至刻度,摇
匀,依本文方法进行测定,以进样量 X 为横坐标,峰
面积 Y 为纵坐标, 绘制标准曲线,其回归方程为: Y
= 0. 796 1+ 9 920. 87X , r= 0. 999 9。天麻素进样量
在 1～10
g ,内标物在 0. 32
g 时与峰面积呈良好
的线性关系。在本文液相色谱分离条件下, 当信噪比
为 3∶1时,天麻素的最低检测限为 0. 05
g。
3. 5　加样回收率测定:精密称取已知含量的同一批
天麻素原料约 20 mg 共 3份, 分别置于 50 mL 量瓶
中,各精密加入对照品 3. 1, 6. 5, 7. 3 mg , 再各加 2
mL 内标溶液, 用流动相溶解并稀释至刻度, 照
3. 2. 1项下方法操作, 测定平均回收率为 99. 87%,
RSD 为 0. 46%, ( n= 5)。
3. 6　制剂回收率测定:取天麻素适量精密称定,按
照片剂、胶囊剂及针剂处方制备模拟样品各 5份,各
份均依制剂含量测定项下方法操作;计算方法回收
率, 分别为: 片剂 99. 30%, RSD 为 1. 20%; 胶囊
99. 8% , RSD 为 0. 88% ; 针剂 100. 2% , RSD 为
0. 60% ,证明方法精密度良好。
3. 7　精密度实验:取线性范围测定用 3种浓度的溶
液, 分别进样 10
L, 重复测定 5 次, RSD 为
0. 57% ,证明精密度良好。
3. 8　稳定性实验: 取原料及各制剂测定用溶液,在
不同时间进样、分析, 测定日内、日间 RSD 皆小于
0. 7%及 0. 8% ,证明方法稳定性良好。
3. 9　干扰性实验:各精密称取按处方配比的天麻素
片剂辅料、胶囊剂辅料细粉适量,精密吸取天麻素针
剂不添加主药的空白溶剂适量, 用流动相溶解。按各
制剂项下含量测定方法操作,进样分析, 在天麻素、
内标物、杂质的保留时间处均无任何峰出现, 表现各
剂型的辅料均不干扰(图 1-B, C)。
3. 10　样品的测定结果: 用本文测定方法检验的原
料及制剂含量, 结果见表 1。
　　表 1　样品中天麻素的含量测定结果( n= 4) ( % )
编号 含量 R SD
原料-1 91. 56 0. 7
原料-2 93. 08 0. 6
原料-3 92. 45 0. 5
片剂-1 100. 21 1. 2
片剂-2 98. 36 1. 02
片剂-3 98. 90 0. 85
针剂-1 101. 25 0. 8
针剂-2 100. 37 0. 7
针剂-3 101. 70 0. 7
胶囊-1 98. 25 1. 1
胶囊-2 99. 60 0. 9
胶囊-3 100. 54 0. 8
4　讨论
4. 1　在 HPLC 法测定天麻素时, 发现在天麻素对
照品与原料中都存在一相同保留时间的杂质峰, 根
据研究资料, 推断此杂质可能为天麻素水解苷元
——对羟基苯甲醇。用归一化法计算,天麻素对照品
中, 该杂质含量为 4%～5% ,原料中为 9%～11% ;
同样,该未知物也存在于天麻素的各种制剂中。
4. 2　本法准确度高,重现性好, 简便、快速,可作为
天麻素及其系列制剂的质量控制方法。
参考文献:
[1]　杨世林,兰　进,徐锦堂 . 天麻的研究进展[ J] . 中草药, 1999,
31( 1) : 66.
[2]　中国药典[ S ] . 二部 . 1995.
[3]　云南省药品标准 . 天麻素[ S] . 滇 Q/ WS 616-1980.
[4]　袁倚盛 . HPLC系统的故障排除[ M ] . 南京:南京大学出版社,
1991.
聚酰胺薄层扫描法测定清喑颗粒中黄芩苷的含量
倪　艳1 ,刘桂霞2,刘　霞1,李先荣1

( 1. 山西省中医药研究院, 山西 大原　030012; 　2. 天津中医学院,天津　300193)
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 06 0515 02
　　清喑颗粒是由黄芩、薄荷、玄参、诃子等多味中
药组成的复方制剂,经提取精制成颗粒制剂,药理实
验及多年临床实践证明, 本品具有疏风散热、消肿止
痛、清肺开音之功效, 多用于风热毒邪壅肺之急喉
·515·中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2001 年第 32卷第 6期

收稿日期: 2000-06-12作者简介:倪艳( 1965-) ,女,山西五寨人,副主任药师,理学学士学位, 1986年毕业于沈阳药科大学中药系, 一直在山西省中医药研究院从事中药新药的开发研究,主要负责其中制备工艺的设计与研制,质量标准的制定等工作。电话: 0351-4168040　　传真: 0351-4168050