全 文 ：行抗血小板聚集比较 ,发现桃仁木香合剂作用更显
著 ,优于单味药桃仁和木香 ,与祖国医学行气活血的
理论相吻合 ,从实验角度说明理气药行气加强活血
作用 ,其机制或许在于其抗血小板聚集作用。
参考文献:
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绞股蓝总苷对全脑缺血再灌注大鼠海马及齿状回的保护作用
齐　刚 ,张　莉 ,宋月英 ,汪　超 ,陈小义 ,李积胜
(武警医学院 中心实验室 ,天津　 300162)
摘　要: 目的　观察绞股蓝总皂苷 ( GP)对全脑缺血再灌注大鼠海马及齿状回 DN A和 RN A的保护作用。方法　采
用 4-血管阻断 ( 4-VO )方法建立大鼠急性全脑缺血模型 ,用吖啶橙染色法进行 GP对全脑缺血再灌注大鼠海马及齿
状回的 DN A和 RN A保护作用的研究。 结果　与正常对照组比较 ,全脑缺血再灌注大鼠海马及齿状回 DN A和
RN A吖啶橙染色后的荧光强度 (反映 DN A和 RN A含量 )明显减弱 , GP 100 mg /kg ig给药组海马及齿状回 DNA
和 RNA吖啶橙染色后的荧光强度强于全脑缺血再灌注模型组 ,与正常对照组相似。 结论　 GP可明显减轻缺血再
灌注对大鼠海马及齿状回 DNA和 RN A损伤。
关键词: 绞股蓝总皂苷 ;脑缺血再灌注 ;海马 ;齿状回
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 05 0430 02
Protective effect of gypenos ides on cerebral ischemia-reperfusion injury of
hippocampus and dentate gyrus of rat
QI Gang , ZHANG Li, SONG Yue-ying , W ANG Chao, CHEN Xiao-yi, L I Ji-sheng
　　 ( Depa rtment o f Pharmaco log y, Medica l Co llege o f Chinese People s Arm ed Po lice Fo rces, Tianjin 300162, China )
Abstract: Object　 To observ e the ef fect o f gypeno sides ( GP) on DN A and RN A in hippocampus and
dentate gy rus of cerebral ischemia-reperfusion injured ra t. Methods　 Modified 4-vessel occlusion ( 4-VO )
method w as used to establish the models of acute g lobal ischemia. Acridine orange ( AO) method was ca r-
ried out to study the pro tectiv e effect of GP on cerebral ischemia-reperfusion injury in hippocampus and
dentate g y rus of rat. Results　 The fluo rescent intensity o f the DN A and RN A in hippocampus and dentate
g yrus o f cerebral i schemia-reperfusion injury of ra t is abated as compared w ith the no rmal control w hi le the
g roup wi th ig GP ( 100 mg /kg ) is enhanced when compared wi th the ischemia-reperfusion injury model,
and show ed the same deg ree of intensi ty w ith the no rmal control g roup. Conclusion　 It i s show n that the
injury on DN A and RN A in hippocampus and dentate g y rus o f ischemia-reperfusion of ra t could be allev iat-
ed by GP.
Key words: g ypenosides ( GP) ; cerebral ischemia-reperfusion; hippocampus; dentate gy rus
　　绞股蓝 Gynistemma pentaphyllum ( Thunb. )
Mak. 为葫芦科绞股蓝属植物 ,其主要有效成分为
绞股蓝皂苷 ( gypeno sides, GP)。目前已分离鉴定出
80余种皂苷 ,其中皂苷Ⅲ ,Ⅳ ,Ⅷ ,Ⅶ 的化学结构与
人参皂苷 Rb1 , Rb3 , Rd, F2结构相同 [1 ]。 已有报道 ,
GP对大鼠全脑缺血再灌注损伤及家兔急性不完全
性脑缺血具有保护作用 [2, 3 ] ,对老龄大鼠学习记忆有
改善作用 [4 ] ,认为 GP对缺血脑组织的保护作用不
仅与其抑制自由基的产生、清除氧自由基和脂质过
氧化有关 ,而且与其对缺血脑组织的神经细胞膜及
·430· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期
收稿日期: 2000-08-10作者简介:齐　刚 ( 1962-) ,男 , 1996年毕业于北京医科大学 ,医学硕士 ,副教授。现任武警医学院中心实验室负责人。主要从事心脑血管药理学研究。 Tel: ( 022) 24372788-78496　　 E-mai l: qgang @ eyou. com.
微血管的稳定性的保护作用相关。作者就 GP对全
脑缺血再灌注损伤大鼠海马及齿状回的影响进行了
研究。
1　材料
1. 1　动物: 雄性 Wistar大鼠 ,体重 240～ 260 g;天
津市职业病防治中心动物室提供。
1. 2　药品和试剂: 绞股蓝总皂苷 (含量大于 90% ) ,
华光实业有限公司提供 ;吖啶橙 sigma公司出品 ;其
它试剂均为市售分析纯。
1. 3　仪器:恒冷箱冰冻切片机 ,英国 Bright公司出
品 ; UⅢ荧光显微镜 ,日本 Nikon公司出品。
2　方法
2. 1　大鼠全脑缺血再灌注损伤模型的制备 [5 ]: 取大
鼠 30只随机分为 3组 ,即 GP 100 mg /kg全脑缺血
再灌注损伤组: ig GP 100 mg /( kg· d) ,连给 7 d, ip
戊巴比妥纳 40 mg /kg麻醉固定后 ,切开颈部皮肤 ,
分离椎旁肌 ,暴露第一颈椎翼状孔 ,电灼烧凝固双侧
椎动脉 , 24 h后 ,乙醚浅麻醉下切开腹侧颈中皮肤 ,
分离双侧颈总动脉 ,用动脉夹夹闭 30 min,打开动
脉夹 ,再灌注 1 h后进行灌注固定并取材切片。全脑
缺血再灌注损伤模型对照组: 按给药组相同体积每
日 ig蒸馏水 ,连续 7 d,同法手术制备模型。 伪手术
对照组:同样进行手术但不灼烧椎动脉、不夹闭颈总
动脉。
2. 2　取材和切片: 取上述各组已灌注 1 h的大鼠 ,
ip戊巴比妥钠 40 mg /kg麻醉固定后 ,开胸 ,从左心
室快速依次灌注生理盐水 100～ 150 mL, 4%多聚甲
醛 500 mL ( 4℃ )。迅速取脑 ,置 4℃的上述同样的
固定液中固定 7～ 9 h后 ,移入 20%蔗糖溶液中浸泡
12 h以上 ,以恒冷箱冰冻切片机切片 (片厚 50μm) ,
pH 7. 4的 0. 01 mol /L PBS接片。
2. 3　吖啶橙染色 [6 ]及镜检: 取固定好的切片用 AO
染色液进行染色 2～ 3 min,以磷酸缓冲液洗 1 min,
用氯化钙溶液分化 30 s后 ,以磷酸缓冲液漂洗 3
次 ,荧光显微镜下观察结果并拍照。
3　结果
在荧光显微镜下 (图 1见封 3) ,对照组海马
CA1区、 CA3区及齿状回 DNA和 RNA呈黄绿色 ,
均匀分布于 CA1区和 CA3区的锥体细胞层和齿状
回的颗粒细胞层 (图 1-1～ 3) ;缺血再灌注模型组海
马 CA1区、 CA3区及齿状回 DNA和 RNA荧光反
应强度 (反映 DNA和 RNA含量 )明显减低 (图 1-
4～ 6) ; GP 100 mg /kg给药组海马 CA1区、 CA3区
及齿状回 DNA和 RNA荧光反应强度较缺血再灌
注模型组明显增强 (图 1-7～ 9) ,与对照组反应强度
和分布模式基本相同。
3　讨论
　　脑缺血可导致细胞活动和功能障碍 ,甚至导致
神经元死亡 ,进而引起痴呆、学习记忆能力下降。 许
长庆等发现 , GP对沙土鼠短暂性脑缺血后海马
CA1区神经元坏死有保护作用 ,使该区神经元密度
显著提高。一般认为海马 CA1区、 CA3区及齿状回
颗粒细胞为脑缺血再灌注的易损区 ,脑缺血再灌注
可导致海马 CA1区、 CA3区神经元及齿状回颗粒细
胞热休克蛋白基因 ( HSP70基因 )的转录和翻译几
乎均被破坏 , HSP具有改变细胞、增加脑细胞对缺
氧的耐受性 ,抵抗进一步坏死的作用。缺血再灌注可
导致细胞桨内钙离子增多 ,激活钙 /镁依赖的核酸内
切酶 ,将 DNA切割成大小不一的寡核苷酸片段 ,形
成 DNA梯 ,此为细胞凋亡的特征 [7 ]。本研究结果显
示 ,脑缺血再灌注模型组海马 CA1区、 CA3区及齿
状回 DNA和 RNA荧光反应强度明显减低 ,即
DNA和 RNA含量降低。而 GP对全脑缺血再灌注
大鼠海马及齿状回具有保护作用 ,抑制了缺血再灌
注导致的海马 CA1区、 CA3区及齿状回神经细胞的
凋亡。长记忆的形成与脑内新蛋白的合成有密切关
系。 DNA和 RNA与蛋白质的合成密切相关 ,此作
用的机制及其与 GP抗衰老、改善学习记忆及对缺
血脑组织保护作用的关系 ,有待于进一步研究。
参考文献:
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更　正
《中草药》杂志 2001年第 32卷第 4期 p351论文“天麻及其伪品的毛细管电泳鉴别及天麻素的测定”的第三作者应为刘海兴 ,
特此更正。 《中草药》杂志编辑部
·431·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期