全 文 :b ut yl ox y
一
4
,
5
,
7
一 t r ih y d r o x y
一
6
一
h y d r o x y m e t h y l
一
2
一 o x a b i e y e l o
一〔4 . 1 . 0〕一 h e p t a n e .
K e y W o r d s M
. 口刀飞` i n a l is H o w . 1一 b u t y l o x y 一 4 , 5 , 7 一 t r i h y d r o x y 一 6一 h y d r o x y m e t h y l一 2 一 o x a b ie y e l o -
〔4 . 1 . 0〕一 h e p t a n e o f fi e in a ! is i n
茜草多糖 Q A : 的分离纯化及组成分析
兰州军区后勤部药品检验所 ( 7 3 0 0 20) 王红霞 斑 王秉极 ”
摘 要 从东北茜草提取得到的粗多糖经离子交换 、 D E A E 一纤维素和 SeP h ad ex G 一 50 柱层析得到
多糖 Q A Z 。 Q A Z经 H PI 刃 的 L on aP k S 803 柱层析为单一对称峰 ,证明为均一多糖 ,并测得其分子量为
5 0 0 0
。
T L C 和 G C 分析表明 Q A : 由 R h a 、 A r a 、 X y l 、 M a n 、 G IC 和 G a l组成 ,其单糖摩尔 比为 1 . 0 :
2
.
5
:
1
.
4 : 2
.
8 : 2 7
.
7 : 15
.
3
。 红外光谱分析含 俘型糖贰键 。 药理实验结果表明 Q A : 具有较强的
清除自由基的作用 , 清除率为 94 . 59 % 。
关键词 茜草 中性杂多糖 自由基清除
茜草为茜草科 ( R u ib ac ea ` )茜草属植物
茜草 R “ ib a ` 。 dr ifo il a L
. 的根及根茎 , 具有
行血止血 、通经活络 、止咳祛痰之功效川 。 茜
草的化 学成分主要是葱醒及其衍生物 , 还有
蔡醒 、菇类及环肤类化合物 。药理实验表明茜
草具有止血 、 抑 菌 、 止 咳祛痰 、 “ 升白” 、 抗肿
瘤 、抗心肌缺血等生物活性 。但是关于茜草多
糖的研究 , 国内外尚未见报道 。
1 材料与方法
1
.
1 材料 : 茜草 R z`b i a ` o dr ifo l i a L
. 购于北
京同仁堂药店 , 由军事医学科学院放射医学
研究所孙仲治高级工程师鉴定 。
1
.
2 试剂 : D E A E 一纤维素 ( D E 一 2 2 )为 W h a t -
m a n 产品 。 已知分子量的 D e x t r a n , S e p h a d e x
G
一
5 0 为 p h a r m a e i a 公司 产品 。 标准单糖为
E
.
M er c k 产品 。 其它均为国产分析纯试剂 。
.1 3 仪器与方法
1
.
3
.
1 多糖的提取与纯化 : 茜草经水煎提取
3次 ,合并滤液减压浓缩至于原生药比为 1 :
1
.
5
, 缓慢加入 95 % 乙 醇 , 使乙醇终浓度为
30 %
,静置 、 离 心 、 除 去沉淀 , 上清液中加入
95 % 乙醇使 乙醇终浓度为 75 % , 离 心 , 沉淀
常规脱水得粗多糖 Q 。 Q 经 D E A E 一纤维素柱
层析 ( D E 一 2 ) , 依次用蒸馏水和 7%氨 水洗
脱 ,分为 Q A 和 Q B 两部分 。 Q A 经大孔树脂
( D
一 1 0) 柱层析 , 以水为洗脱剂 , M ol is h 反 应
阳性部分浓缩至适当浓度后加入 95 % 乙醇 ,
使 终 浓 度 为 50 % , 静 置 , 上 清 部 分 经
S e p h a d e x G
一
5 0 柱层析 ( 2 . 6 。 m 又 1 0 0 C m )精
制 , 以蒸馏水为洗脱剂 ,分管收集 , M ol is h 反
应检测 , 收集到 1 个单峰部分 , 冰冻干燥得
Q A
: 。
1
.
3
.
2 纯度鉴定及分子量测定川 : 本实验用
高效液相色谱法鉴定多糖纯度并测定其分子
量 。 高效液相色谱仪 为 W a t e r s 2 4 4 , I o n p a k
5
8 0 3色谱柱 , w a t e r 、 4 0 1 型示差折光检测器 。
M
一
73 0 型微处理机 。 流动相为 0 . 1 m ol / L
N a
Z
S O
; , 流速为 0 . 7 m L /m i n 。
在色谱柱的排阻限以 内 , 多糖分子量对
数与保留时间成反 比 : L o g M 一 a 十 b R T 。 以
不同分子量的标准品多糖 ( D e x t r a n 9 7 0 0 ,
1 0 5 0 0
,
4 0 1 0 0 ) 相继上柱 ,求出 a , b , 根据样
品的保留时间即可算出其分子量 。
1
.
3
.
3 部分理化性质的测定 : 通过硫酸咔
哩 〔 3〕反应和苟三酮反应分别检测 己糖醛酸和
氨基酸及肤的存在 。
寮
A d d r e
s s :
W a n g
* , 军事医学科学
,
L a n z h o u M i li t a r y R e g i o n M u n i e ip a l I n s t i t u t e f o r D r u g C o n t r o l
,
L a n z h o u
学研究所
《中草药 》 1 9 98 年第 29 卷第 4 期 . 2 1 9 .
之· 未 4 QA :的组成分析及摩尔 比测定 : QA Z
的完全酸水解 :称取 QA Z 0 1mg , 加入 1 m ol /
I
, 硫酸 二 ;二 L 于安瓶中 ,封管 ,水浴煮沸 4 h .
碳酸钡 中和 ,离心 , _仁清液浓缩 , 供薄层层析
用 。
薄层 层 析川 : 薄层 板 为 自制的含 0 . 1 5
m ( ) l / L N a
:
H P O
; , 。 . 5% C M C 的硅胶 H F ( 青
岛海洋化工厂生产 )板 。 以丙酮一水 ( 96 : 4) 为
展并剂 ,邻苯二 甲酸 一苯胺显色 。 完全酸水解
后的 Q A 。 与标准单糖鼠李糖 、 木糖 、 阿拉伯
糖 、 一甘露糖 、 葡萄糖 、 半乳糖对照点样鉴定糖
基组成 。
气相色谱分析 : 将 Q A Z 的完全酸水解产
物彻底干燥后按文献困方法制成相应的糖睛
乙酸酷衍生物 , 用少量氯仿溶解后进样分析 ,
与标准单糖的糖睛乙酸酝衍生物的保留时间
对照鉴定糖基组成 。 气相色谱仪为 H P 5 8 9 。
S e r i e
、 肚 , F 丁D 检测器 , O V 一 I ( 1 2 扭 X O一 Z m , , 、
只 0 . 3 3 肛m ) 弹性石英毛细管柱 , 程序升温 :
1 6 5 C ( 8 jIT in 过二卫鱼华 2 10 ℃ , 气化 室 温 度 :
26 0 C
,
FI D 温度 : 2 80 ℃ ,以氮气为载气 ,柱头
压 : 6 8 . 9 4 k P a 。
组成单糖的摩尔 比测定 仁S〕 : 由于各种糖
对检测器的响应值不 同 , 因而 测定糖基摩尔
比需要先测定其定量校正因子 。 精密称取上
述 各标准 一单糖 ,使各单糖与内标 的重量 比在
几 4 户一乙 6 之间的 5 个不同浓度 , 按前法制备
糖肪乙酸酷衍生物并进行气相层析 , 求出各
单糖 的 斜 率 b 即 定 量 校 正 因 子 ( K 一
W i / W
S
、
A i/ A
、 ’ “
样品的摩尔比测定条 件与定量校正 因子
相 同 , 以 I、 一鼠李糖为标准测定各糖基的峰面
积 ,乘以 K /M (M 为分子量 ) , 所得之值即为
摩尔比 。
上 .3 马 Q A : 贰键构型 的分析 : 红外光谱用
凡 。 一 R a d F r s 一 6 5 A 红外分析仪测定 。 测定方
法为漫反射 。
由基 ( O H · ) : 5 拜L Z m n l o ] / L F e s O 4 , 2 0 2, r ,
O
·
8 m m o l / L D M P O
, 5 拌L 5 0 m m o l / L E D -
T A
,混合后加入 5 拼L H ZO Z , 再加入 2 5 拼I J 双
蒸水或茜草多糖 , 混匀后 立即装入石英毛细
管 , 1 m i n 后测定 。
实验仪器及条件 : 仪器 : E S P 3 0 型 E S R
( 自旋共振 )波谱仪 ; 温度 : 室温 ; C F (中心磁
场 ) : 3 4 7 o G S ; SW (扫宽 ) : Z o o G S ; M F (调制
频率 ) : 2 5 K H z ; M A (调制幅度 ) : I G S ; C l (时
间常数 ) : 5 4 5 ; P (功率 ) : 1 0 m w 。
称取茜草多糖 Q A : ,加入双蒸水配制成
浓 度为 1 0 0 m g /m l 矛 的溶液 , 分别以 1 : 1 ( V
,
V )的比例加入羚 自由基体系 , 以同样比例
的双蒸水为空白对照 ,测定 E S R 波谱信号并
计算清除率 。
清除率 以下式计算 : E (% ) 一 h( o 一 h 二 )/
h o X 1 0 0 h o 是对照体系 E S R 波谱峰高 , h x
是加样品后对应峰的高度 。
2 结果与讨论
2
.
1 Q A
Z 为白色粉末 , 易溶于水 。 硫酸咔哩
反应和苟三酮反应均呈阴性 ,证明不含 己糖
醛酸及氨基酸或肤 。 Q A Z 经 H P L C 分析 ,结
果为单一对称峰 ( 图 1 ) ,证 明为均一多糖 。
H P L C 测得多糖分子量与保留时间的相关方
程式为 : L o g M 一 9 , 1 6一 0 3 9 R T (相关系数 , -
一 一 0 . 9 9 5 2 ) . 保 留时’ }旬 子、 为 1 3 . 8 4 m i l: , 计
算得其分子量为 5 0 0 ,元素分析 C , H , N 含
量为 40 . 84 % 、 6 . 02 % 、 0 . 06 % , 紫外扫描 无
2 6 0 n m 的核酸特征吸收峰和 2 8 0 n m 的蛋白
特征吸收峰 。
时间 t( ~ )
图 i 多糖 Q A Z 在 I o n p a k 5 8 03柱上的 H P L e 图谱
.1 .3 6 Q A
: 的清除 自由基作用 :
材料和方法 : 按照 F e n ot n 反应产生经 自
。
2 2 0
·
2
.
2薄层 层析 (图 ) 2
结果表明 , Q A Z 的糖基
组成为 : 鼠李糖 、阿拉伯
糖 、 木糖 、 甘露糖 、 葡萄
糖及半乳糖 。 气相色谱
分析结果 (表 l) 与薄层
层析结果完全一致 。 各
单糖的定量校正 因子结
果为鼠李糖 : 0 . 7 0 85 ;阿
表 1
O
标准单糖及 Q A : 水解单枪的枪睛乙酸酣
衍生物在气相色谱上的保留时间
组成 保留时间
m in
O
标准单糖 Q A : 水解单糖
O O
.5nlZ0
I L
一
R h a
Z L
一
A r a
3 L
一
X y l
4 D
一
M a n
5 0
一
G le
6 D
一
G a l
5
.
4 4
5
.
7 3
5
.
9 9
5
.
4 5
5
.
7 1
O
O
1 1
.
6 3
9 6
.
6 8
00
1 1
.
8 7
1 2
.
3 5
.
9 1
.
3 9
O勺了p6O5一拉伯糖 : 0 . 6 2 1 8
o
·
6 8 1 6 ;甘露糖 :
0
·
5 7 2 9 ;葡萄糖 :
o
·
6 8 0 2 ;半乳糖 :
; 木糖 ’ 图 2
l
一
L
一
R h a
多箱 Q A : 的薄
层色谱图
2
一
D
一
X y l 3
一
L
-
A r a 4
一
Q A
2 5
一
D
一
M a n
6
一
D
一
G l e 7
一
D
一
G a l
O
·
6 4 7 7
。 糖基的摩尔比
测定结果 , 鼠李糖 一阿拉伯糖 一木糖一甘露糖一葡
萄糖 一半乳 糖为 1 . 0 : 2 . 5 : 1 . 4 : 2 2 . 8 :
2
.
7 7 : 1 5
.
3
。
2
.
3 红外光谱分析 Q A Z 具多糖类物质的特
征吸收峰 , 89 0 c m 一 `处有 p一毗喃糖贰键的特
征吸收峰 , 证明 Q A Z 结构中含 母构型的糖贰
键 。
2
.
4 药理实验表明 Q A Z 具有较强的清除自
由基的作用 , 清除率为 93 . 2 % 。 这对进一步
研究茜草的药理作用和开发利用茜草可能有
一定的意义 。
参 考 文 献
1 江苏新医院编 . 中药大辞典 . 下卷 . 上海 : 上海科技出
版社 , 1 9 9 7 . 1 5 6 7
2 陈轶兰 , 等 . 军事医学科学院院刊 , 1 9 8 , 12 ( 1 1 ) : 70
3 O i s e h e Z
.
J B i
o l C h e m
,
1 9 4 7
,
1 6 7
:
1 8 9
4 张惟杰主编 . 复合多糖生化研究技术 , 上海 : 上海科学
技术出版社 , 1 9 8 7
s 李铁林 ,等 . 分析化学 , 1 9 8 2 , 10 ( 5 ) : 2 72
6 孟延发 ,等 . 生物化学杂志 , 19 9 3 , 9 ( 2 ) : 22 4
( 1 9 9 7
一 0 2
一
1 7 收稿 )
I s o l a t i o n
,
P u r i f i e a t i o n a n d S t r u e t u r a l A n a l y s i s o f P o l y s a c e h a r i d e
Q A
: f r o m I n d i a M a d d e r ( R u bi a e o dr ifo l i
a )
W
a n g H
o n g x ia
,
W
a n g B in g ji ( I n
s t i t
u t e f o r D r u g C o n t r o l
,
L o g i
s t i
e
D
e p a r t m e n t o f L a n z h o u M i li t
a r y H
e a d
-
q u a r t e r
,
7 3 0 0 2 0 )
A b s t r a e t P
o l y s a e e h a r id e Q A
:
w
a s
i
s o l a t e d a n d p u r if i e d b y d e e o e t i n g w i t h w a t e r
,
f o l l o w e d b y a l e o h o l p r e
-
e i p it a t i o n a n d D E A E
一 e e l l u l o s e
,
g e l f il t r a t i o n e h r o m a t o g r a p h y ( S e p h a d e x G
一
5 0 )
.
I t
s
h
o m o g e n e it y w a s p r o v e d b y
H P L C o n I o n p a k 5 5 0 3 e o l u m n
,
T h e a v e r a g e M W w
a s 5 0 0 0
·
A e e o r d i n g t o T L C a n d G C a n a l y s i s
,
Q A
:
w
a s e o m
-
p o s e d o f r h a m n o s e
, a r a
b in
o s e , x y l o s e
,
m a n n o s e
,
g lu e o s e a n d g a la e t o s e i n m o la r r a t i o o f 1
.
0
,
2
.
5
, 一 4 , 2 2 . 8
: 2 7
.
7 : 1 5
.
3
.
IR
s p e e t r u m in d ie a t e d t h a t i t h a s a p
e o n f ig u r a t io n
.
P r e lim in a r y p h a r m a c o lo g i e a l t e s t s s h o w e d
t h a t Q A
:
h
a s s t r o n g s e a v e n g in g e ff e e t o n f r e e r a d ie a ls o f h y d r o g e n in t h e f r e e r a d ie a l O H
’
g e n e r a t in g s y s
-
t e m
·
T h e s e a v e n g i n g r a t i o 15 9 4
.
5%
.
K e y W
o r d s R
.
c o
dr ifo l i
a L
·
P
o ly s a c e h a r id e I s o la t io n a n d P u r if ie a t io n F r e e r a d i e a l
· 补充 ·
本刊 1期 16 页 “ 高效液相色谱法测定清宫龙凤宝中淫羊蕾贰的含量 ”文中补充第二作者黄牧 。
《中草药 》 1 9 98 年第 29 卷第 4 期 · 2 2 1 ·