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Tissue culture of stem segment and plantlet regeneration of resources plant-Apocynum venetum

资源植物罗布麻的茎段组织培养与植株再生



全 文 :表 2 不同蜜环菌菌株对天麻产量的影响
菌株 产量 ( kg /m
2 )
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Xt
差异显著性
测验 菌株
产量 ( kg /m2)
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Xt
差异显著性
测验
A1白麻 5. 4 4. 9 5. 7 5. 33 b* A7白麻 3. 8 3. 5 4. 1 3. 80 bc
箭麻 6. 1 6. 6 5. 7 6. 13 ab 箭麻 4. 0 3. 9 5. 1 4. 33 bc
A2白麻 1. 6 1. 4 2. 1 1. 70 d A8白麻 2. 4 1. 8 2. 3 2. 17 c
箭麻 1. 5 1. 7 1. 8 1. 67 cd 箭麻 2. 3 2. 9 2. 1 2. 43 c
A3白麻 1. 3 1. 5 1. 1 1. 30 d A9白麻 7. 9 8. 1 7. 9 7. 97 a
箭麻 1. 0 2. 1 1. 6 1. 57 cd 箭麻 8. 0 7. 9 8. 6 8. 17 a
A4白麻 4. 9 5. 3 6. 2 5. 47 b A10白麻 8. 1 7. 4 8. 3 7. 93 a
箭麻 5. 6 7. 3 5. 8 6. 23 ab 箭麻 7. 2 7. 9 6. 8 7. 30 a
A5白麻 5. 8 5. 5 6. 1 5. 80 ab A11白麻 1. 1 1. 5 2. 0 1. 53 cd
箭麻 6. 5 6. 9 7. 1 6. 83 ab 箭麻 0. 4 0. 0 0. 2 0. 20 d
A6白麻 2. 1 2. 3 1. 9 2. 10 c
箭麻 2. 5 3. 1 2. 7 2. 77 c
    * 相同字母者表示差异不显著 ( P < 0. 05)
参考文献:
[1 ] 徐锦堂 ,郭顺星 .天麻与紫萁小菇和蜜环菌营养关系及其在栽
培中的应用 [ J ]. 医学研究通讯 , 1991, 20( 10): 31-32.
[2 ] 郭顺星 ,徐锦堂 . 蜜环菌索发育的研究 [ J ] . 真菌学报 , 1992,
11( 4): 308-313.
[ 3] 郭顺星 ,徐锦堂 ,肖培根 .蜜环菌隔膜发育的超微结构的研究
[ J ]. 中国医学科学院学报 , 1996, 18( 5): 363-369.
资源植物罗布麻的茎段组织培养与植株再生
马 淼 ,陆嘉惠 ,周玲玲 ,吴 玲
(石河子大学 生物科学系 ,新疆 石河子  832003)
摘 要: 目的 为探索一科学、经济、新颖的方法 ,加速资源植物罗布麻的人工繁殖。方法 以带侧芽的罗布麻嫩茎
段作外植体 ,培养在附加不同成分的 M S培养基上 ,其中附加了 6-BA( 2. 0 mg /L)、 N AA( 0. 2 mg / L)、水解乳蛋白
( 300 mg / L)的 MS培养基对侧芽的诱导分化与增殖效果均为最佳 ,而附加了 IAA( 0. 2 mg /L )、水解乳蛋白 ( 300
mg / L)及蔗糖 15 g /L的 M S培养基的生根效果最好 (生根率达 93. 3% )。 结果 分别以珍珠岩、锯末、砂土为基质
进行试管苗移栽试验 ,生长在珍珠岩与砂土中的幼苗长势较好 (成活率分别为 100%与 93% ) ,但又各具优势。结论
为我国开发这一重要的植物资源探索出了一条行之有效的途径。
关键词: 罗布麻 ;植株再生 ;组织培养
中图分类号: R282. 13   文献标识码: B   文章编号: 0253 2670( 2001) 09 0841 03
Tissue culture of stem segment and plantlet regeneration of
resources plant-Apocynum venetum
MA Miao , LU Jia-hui, ZHOU Ling-ling , WU Ling
   ( Depa rtment o f Bio science in Shihe zi Univ er sity , Shihezi Xinjiang 832003, China )
Key words: Apocymum venetum L. ; plantlet reg eneration; tissue cul ture
  罗布麻 Apocynum venetum L.亦称为披针叶茶
叶花 ,系夹竹桃科野生直立半灌木植物 ,因其茎部韧
皮纤维光泽优、弹性好、抗曲挠性强 ,可用于精细纺
织的原料 [1 ] ,是重要的野生纤维植物 ;其叶泡水可直
接服用 ,其中含有多种有效化学成分 ,具强心、降压、
降血脂、利尿等多种功效 [2 ] ,故又是一种重要的药用
植物 ;其植物体中富含乳汁 ,可提取工业橡胶 ,所以
长期以来倍受植物学及药学界的重视和青睐 ,有着
广阔的开发前景。由于野生状态下资源质量不稳 ,难
以形成机械化收割的规模 ,虽也曾有过人工栽培的
·841·中草药  Chinese T raditional and Herbal Drug s  2001年第 32卷第 9期
收稿日期: 2000-10-22作者简介:马 淼 ( 1972-) ,男 ,回族 ,山西省人 ,讲师 ,硕士学位 ,博士研究生。1992年 7月毕业于新疆师范学院生物系 ; 1994年 9月 -1997年 8月取得硕士学位 ; 1998年评为讲师 ; 2000年考取复旦大学生命科学学院博士研究生 ,该项论文为 1999-2000年石河子大学科研基金资助研究成果之一。 主要研究方向:植物系统分类与演化及生物多样性。 已发表论文 15篇。
一些报道 [3 ] ,但可操作性不佳 ,在实际操作中存在种
种困难 ,均未能大面积推广。随着人们对天然纤维及
医药保健品需求量的日益增加 ,大规模的引种栽培
已势在必行 ,急需探索一种科学、经济、新颖的方法
加速这一资源植物的人工繁殖。通过组织培养手段 ,
我们筛选出了适合罗布麻快繁的培养基及适宜的栽
培方法 ,培育出了完整健壮的植株 ,为我国开发这一
重要的植物资源探索出了一条行之有效的途径。尽
管郝玉荣等 ( 1986)曾做过罗布麻的组织培养工
作 [4 ] ,但他们是以子叶和下胚轴作为外植体的。相比
之下 ,以茎段作为植体 ,操作简单易行 ,有着更广泛
的开发前景。而且这方面的研究目前还未有公开
报道。
1 材料和方法
1. 1 材料:于 1999年 5月份 ,选取新疆石河子地区
自然生长健壮、无病虫害的罗布麻幼嫩茎段作外
植体。
1. 2 方法:将采回的罗布麻嫩茎剪去叶片及叶柄 ,
用自来水冲洗干净 ,切成 5 cm长的茎段 ,用 84消毒
液浸泡洗涤 15 min,自来水充分冲洗 3~ 4 h,然后
移至超净工作台上 ,用 75%的酒精浸泡 30 s,再用
0. 2%的升汞溶液消毒 15 min,取出后用无菌水冲
洗 3次 ,切成长度约 0. 5 cm左右的小段 ,每段上包
括一个顶芽或一对侧芽 (罗布麻的枝、叶呈对生状 ) ,
按无菌操作的规程接种在 MS培养基上。 将培养瓶
置于 25℃的光照培养箱中 ,光照时间每天为 12 h,
光照强度为 2 000 lx。 6 d后于叶腋处有侧芽萌发 ,
待芽长至 1 cm左右时 ,把芽从茎段上切下进行继代
培养 ,当苗高 2 cm左右时转入生根培养基中 ,待苗
基部生出 3~ 5条粗壮长达 2 cm左右的根时 ,将瓶
口的覆膜打开 ,置于室内的阳光下锻炼 2 d,然后取
出生根苗 ,轻轻地洗去基部的培养基 (避免使根毛区
受伤 ) ,分别栽种于盛有经高温灭菌处理过的珍珠
岩、锯末及砂土的花盆中 ,并覆盖薄膜 , 2 d后去掉
覆膜 ,空气相对湿度保持在 90%水平 , 3周后观测移
栽成活率及成活苗地上与地下器官的生长情况。以
MS为基本培养基 ,分别附加不同种类及浓度的激
素 , pH为 5. 8。 具体如下:
芽诱导分化与增殖培养基配方为:
I-1 M S+ 6-BA( 1. 0 mg /L )+ N AA( 0. 2 mg /L)+
水解乳蛋白 ( 300 mg /L) ;
I-2 M S+ 6-BA( 1. 5 mg /L )+ N AA( 0. 2 mg /L)+
水解乳蛋白 ( 300 mg /L) ;
I-3 M S+ 6-BA( 2. 0 mg /L )+ N AA( 0. 2 mg /L)+
水解乳蛋白 ( 300 mg /L)。
生根培养基的配方为:
S-1 M S+ IAA( 0. 1 mg /L )+ 水解乳蛋白 ( 300 mg /
L)+ 蔗糖 ( 15 g /L) ;
S-2 M S+ IAA( 0. 2 mg /L )+ 水解乳蛋白 ( 300 mg /
L)+ 蔗糖 ( 15 g /L) ;
S-3 M S+ IAA( 0. 3 mg /L )+ 水解乳蛋白 ( 300 mg /
L)+ 蔗糖 ( 15 g /L)。
2 结果
2. 1 芽的诱导与增殖培养:接种两周后观察结果。
实验发现 , 6-BA与 NAA的组合能诱导侧芽的分化
与增殖 ,但是不同浓度的 6-BA对侧芽分化与增殖
的诱导效果是不同的 ,其结果如表 1。
2. 2 生根培养:生根培养 3周后 ,观察结果见表 2。
2. 3 移栽试验:不同栽培基质中移栽苗生长状况见
表 3。
表 1  6-BA对侧芽诱导与增殖的影响
培养基 接种茎段数* (个 )
侧芽萌发
天数 ( d)
侧芽增殖量
(个 )
侧芽增殖
倍数
I-1 40 6 112 1. 40
I-2 40 6 146 1. 82
I-3 40 6 348 4. 35
  * 每个茎段具有一对侧芽
表 2  IAA对生根培养的影响
培养基 接种数
(个 )
生根率
(% )
根数
(条 ) 根生长情况
S-1 15 40. 0 1~ 2 短、细
S-2 15 93. 3 3~ 5 长、粗、根毛发达
S-3 15 73. 3 1~ 3 短、粗
表 3 不同栽培基质对移栽苗生长的影响
栽培
基质
移栽苗数
(株 )
成活率
(% )
日均根增长
量 (条 /日 )
日均根长增长
量 ( cm /d)
日均茎高增长
量 ( cm /d)
日均侧枝增长
量 (枝 /日 )
日均叶数增长
量 (片 /日 )
叶面积日增长
量 ( cm2 /d )*
珍珠岩 15 100 5~ 7 3~ 6 0. 352 0. 220 1. 350 0. 015
锯末 15 60 1~ 2 4~ 7 0. 251 0. 155 0. 055 0. 012
砂土 15 93 3~ 6 3~ 6 0. 374 0. 285 1. 650 0. 012
    * 叶面积用“叶长×叶宽”来简单拟合
3 结论与分析
3. 1 随着 6-BA浓度的提高 ,罗布麻茎段切口处愈
伤组织的量逐渐减少 ,而侧芽的分化率逐渐提高 ,侧
芽的增殖倍数也随之增大 ,苗体长势亦愈显茁壮。说
·842· 中草药  Chinese T raditional and Herbal Drug s  2001年第 32卷第 9期
明低浓度的 6-BA有利于愈伤组织的诱导形成 ;而
当浓度升高时 ,则有利于侧芽的分化与增殖。在附加
6-BA( 2. 0 mg /L )、 NAA( 0. 2 mg /L )、水解乳蛋白
( 300 mg /L)的 MS培养基上 ,侧芽的萌发天数较短
(仅 6 d) ,芽体茁壮 ,侧芽的分化率及增殖倍数较高 ,
所以在侧芽诱导分化与增殖培养过程中 , 6-BA的浓
度以 2. 0 mg /L为宜 ,这与 Pa til等的结果是相一致
的 [5 ] ,而与郝玉荣等的结果不同 ,这可能是由于植物
不同器官的组织特异性造成的。
但这 3种配方的培养基对 48个只具有顶芽的
茎段却毫无诱导效果 ,既无芽的分化 ,在茎段切口处
也无愈伤组织形成。这可能是由于植物内源激素在
顶芽与侧芽之间差异分配的缘故。故以带侧芽的罗
布麻嫩茎茎段作外植体效果较好。
3. 2 由表 2可以看出 ,无论 IAA浓度低于或高于
0. 2 mg /L时 ,生根率都明显降低 ,而当 IA A浓度为
0. 2 mg /L时 ,罗布麻茎段的生根率达到 93. 3% ,且
诱导出的根数多 ,根长而粗 ,根毛发达 ,苗体生长
茁壮。
3. 3 从表 3的结果中可以发现生长在锯末中的苗
体成活率最低 (仅为 60% ) ,新增根数最少 ,根纤弱 ,
细长 ,植株矮小 ,分枝少 ,叶小且新增叶片数目最少 ,
所以光合面积较小 ,叶片颜色较浅 ,植株长势较弱。
生长在珍珠岩及砂土中的苗体存活率较高 (分别为
100%与 93% ) ,新增根数多 ,根系发达 ,植株较高 ,
分枝多 ,新增叶片数目多 ,植株生长茁壮 ,但又各有
优势。其中生长在珍珠岩中的苗体根系最发达 ,叶面
积最大 ;而砂土中的苗体植株最高 ,茎的分枝最多 ,
新增叶片数目最多 ,但叶片较小。后二者的光合面积
较大 ,叶片颜色较深 ,植株长势较好 ,从中也体现了
植株地上部分与地下部分的生长相关性 ,根系发达
则植株生长茂盛。
参考文献:
[1 ] 董正钧 .罗布麻 [M ] .北京:科学出版社 , 1958.
[ 2 ] 《中草药汇编》编写组 . 中草药汇编 [M ] . 第二版 .上册 . 北
京:人民卫生出版社 , 1996.
[3 ] 刘士侠 . 高级纤维植物—— 罗布麻 [M ]. 上海:上海科技出版
社 , 1959.
[4 ] 颜昌敬 . 植物组织培养手册 [ M ] . 上海:上海科学技术出版
社 , 1990.
[5 ]  Pati l V M, Jayanthi M . Microp ropagation of two species of
Rouv olfi a ( Apocynaceae) [ J ] . Cu rren t Science ( Bangalore) ,
1997, 72( 12): 961-965.
甜牛大力和苦牛大力的生药研究
陈黄保
(广东省湛江市药品检验所 ,广东 湛江  524037)
摘 要: 目的 为牛大力的鉴别和开发利用提供科学依据。 方法 利用药材性状、显微特征、紫外吸收和薄层层析
等鉴别方法对甜牛大力和苦牛大力进行生药鉴定对比研究。结果 两者性状、显微及成分均有较大区别。结论 两
者应区别入药。
关键词: 甜牛大力 ;美丽崖豆藤 ;苦牛大力 ;绿花崖豆藤 ;生药研究
中图分类号: R282. 710. 3   文献标识码: A   文章编号: 0253 2670( 2001) 09 0843 03
Pharmacognostic studies on Tianniudali (Radix Millettia speciosa ) and
Kuniudali (Radix Millettia championi)
   ( Zhanjiang Institute fo r Drug Cont rol, Zhanjiang Guangdong 524037, China )
Key words: Tianniudali; Millett ia speciosa Champ. ; Kuniudali; Millettia championi Benth. ; pha rma-
cognostic identification
  牛大力始载于《生草药性备要》 ,称大力牛 [1 ] ,近
代本草中多有收载。主要用于病后体弱 ,肺结核咳
嗽 ,腰肌劳损等 [ 2]。 70年代始作为壮腰健肾丸、强力
健身胶囊等的原料用于中成药生产 ,在两广地区广
泛应用。 其来源于豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤
Millet tia speciosa Champ. 的干燥根 ,习称甜牛大
·843·中草药  Chinese T raditional and Herbal Drug s  2001年第 32卷第 9期
收稿日期: 2000-09-14作者简介:陈黄保 ( 1966-) ,男 ,广东遂溪人 , 1989年毕业于广州中医药大学中药专业 ,理学士 ,主管中药师。 从事中药检验及质量标准研究工作 ,曾参与药典 ( 1995年版 )及部颁标准起草工作 ,先后在《中国药学杂志 》、《中药材 》、《广东药学》等杂志上发表论文 4篇。 Tel: ( 0759) -3212439