全 文 ：红花黄素注射液细菌内毒素检测方法的实验研究
王著宇 1 ,李冬生 1 ,钱　进 2
( 1. 郑州化学药业有限公司 ,河南 郑州　 450052;　 2. 天津药物研究院 ,天津　 300193)
摘　要: 目的　建立测定红花黄素注射液细菌内毒素的方法。方法　通过进行红花黄素注射液的干扰试验考察 ,对
30批红花黄素注射液进行了热源检查和细菌内毒素检查的对比试验。结果　红花黄素注射液对细菌内毒素检查法
鲎试剂反应没有干扰作用 ,可以用鲎试剂法作内毒素检查。且本法的结果与家兔法检查热源的结果比较 ,符合率为
100%。 结论　方法简便、快速、准确。 用本方法检测红花黄素注射液中的细菌内毒素是可行的。
关键词: 细菌内毒素试验 ;干扰试验 ;红花黄素注射液
中图分类号: R954　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 06 0508 02
Experimental studies on bacterial endotoxin test of SAFFLOR INJECTION
W ANG Zhu-yu1, L I Dong-sheng1 , Q IAN Jin2
　　 ( 1. Zheng zhou Chemical Medicine Co . L td. , Zheng zhou Henan 450053, China; 2. Tianjin Institute of Pharmaceutical
Resear ch , Tianjin 300193, China)
Abstract: Object　 To establish a method fo r the determination of bacterial endotoxin in SAFFLO R
IN JECT ION
* . Methods　 Thirty batches of SAFFLOR IN JECTION were subjected to Limulus lysa te test
in comparison w ith py rogen test to ascer tain whether there are any interference betw een the lysate and
SAFFLO R IN JECTION. Results　 SAFFLO R IN JECTION showed no inhibi tion o r enhancement actions in
bacterial endo toxin test wi th Limulus lysate, while show ed a 100% coincidental rate wi th py ro gen
test. Conclusion　 This method w as found to be simple, quick, accura te and is suitable fo r the determina-
tion of bacterial endo toxin in SAFFLO R IN JECTION.
Key words: bacterial endo toxin test; interfering test; SAFFLO R IN JECTION
* SAFFLOR IN JECTION is an injectable ex tra ct o fCarthamus tinctorius L. used fo r the trea tment o f co rona ry hear t dis-
ease, angina pecto ris and acute myoca rdial infarction.
　　红花黄素注射液是从菊科植物红花 Carthamus
tinctorius L. 的干燥花中提取分离得到的有效组分
配制成的注射剂 ,主要成分为红花黄素 A( saff lon
yel low-A) ,具有活血祛瘀 ,通经止痛之功效 ,主治冠
心病、心绞痛和急性心肌梗死。 为有效控制产品质
量 ,保证临床用药安全有效 ,参考文献报道 [1～ 4 ] ,研
究建立了红花黄素注射液细菌内毒素检测方法。
1　仪器、试剂和试药
　　微量取液器 QYQ-200(航空工业部青云仪器
厂 ) , ZH-2型涡漩混合器 (天津药典标准仪器厂 )。
鲎试剂 (湛江海洋生物制品厂 ,批号: 990903,规
格: 0. 25 EU /mL, 0. 1 mL /支 )。
细菌内毒素工作标准品 (批号: 990924,规格: 5
EU /支 ) ,为湛江海洋生物制品厂提供。
细菌内毒素检查用水: 批号: 991217,规格: 2
m L /支 ,为湛江海洋生物制品厂提供。
测试样品: 红花黄素注射液 (规格: 100 mL: 175
mg ,批号: 20000401, 2000402, 20000403)均为郑州
化学药业有限公司研制产品。
2　方法及结果
2. 1　细菌内毒素限值 (L )的确定: 参照 USPXXⅢ
版 ( 1995)规定 ,红花黄素注射液的热原试验家兔注
射剂量 (M )为 6 mL /kg和我国细菌内毒素标准品
的致热阈 (K ) 5 EU /kg[3 ] ,计算出红花黄素注射液
理论限值 ( L )。
L= K /M= 5 /6= 0. 833 EU /mL
或根据文献 ,M按人每公斤每小时输注该制品
的最大剂量计算 ,即 M= 10, L= K /M= 0. 5 EU /
mL。综合两者 ,取限值 ( L )为 0. 5 EU /m L。
2. 2　干扰试验有效浓度 (C )的计算:参考文献 [4 ]报
道 ,根据公式:
Cmin= C原λmin /L和 Cmax= C原λmax /L
故: Cmin= C原 0. 03 /0. 5= 0. 06C原
Cma x= C原 1 /0. 5= 2C原 ,由此确定样品稀释倍
·508· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 6期
收稿日期: 2000-11-27作者简介:王著宇 ( 1965-) ,男 ,河南省获加县人 , 1986年毕业于中山大学化学系 ,工程师 ,主要从事药品质量控制工作。
Tel: 0371-7987789。
数。当选用 0. 25 EU /mL鲎试剂时 ,样品稀释倍数
E= L /λ= 0. 5 /0. 25= 2倍。
2. 3　鲎试剂灵敏度复核:以细菌内毒素检查。 用水
将细菌内毒素工作标准品稀释成 0. 5, 0. 25, 0. 125,
0. 06 EU /mL。取 20支小试管 ,每支加入 0. 1 mL待
复核鲎试剂溶液并排列 5列 ,每列 4支 ,其中 4列分
别加入不同浓度的细菌内毒标准品溶液 0. 1 m L,另
一列为阴性对照 ,每支加入细菌内毒素检查用水
0. 1 mL。轻轻混匀后 ,封闭管口 ,垂直放入 ( 37± 1)
℃水浴中 ,保温 ( 60± 2) min。观察结果 ,并计算鲎试
剂实测λ值 ,确认其符合药典规定可用于实验。结果
见表 1。
2. 4　红花黄素注射液干扰试验:将样品以细菌内毒
素检查用水 1∶ 1稀释作为供试溶液 ,再用此溶液及
细菌内毒素检查用水分别将细菌内毒素工作标准品
稀释成 1. 0, 0. 5, 0. 25, 0. 125 EU /mL不同浓度的
溶液 ,按 2. 3的方法进行实验。结果见表 2。根据用
供试品及水制得的内毒素测得的鲎试剂 λ值在
50% ～ 200%以内 [4 ] ,结果表明 ,样品稀释 2倍时对
灵敏度为 0. 25 EU /mL的鲎试反应无干扰作用 ,可
用鲎试法作内毒素检查。
3　供试品的内毒素检查
表 1　鲎试剂灵敏度复核结果
样品 批号 鲎试剂标示λ
( EU /mL)
管号 细菌内毒素标准品溶液 ( EU /m L)
0. 5 0. 25 0. 125 0. 06 0. 03
阴性
对照
实测λ
( EU /mL)
无 1 + + + - - -
热 991217 0. 25 2 + + + - - - 0. 18
源 3 + + + - - -
水 4 + + + - - -
表 2　红花黄素注射液干扰试验结果
样品批号 细菌内毒素浓度 ( EU /mL)
1. 0 0. 5 0. 25 0. 125 0. 06 阴性对照
实测λ值
( EU /m L)
20000401 + + + + + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 0. 21
20000402 + + + + + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 0. 18
20000403 + + + + + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 0. 20
水溶液 + + + + + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 0. 25
3. 1　供试品的内毒素检查法: 取红花黄素注射液 ,
用细菌内毒素检查用水稀释成 1∶ 1的溶液作为供
试液。吸取内毒素检查用水 0. 1 mL,加入 0. 1 mL /
支 0. 25 EU /mL鲎试剂中使试剂溶解 ,再加入上述
供试液 0. 1 mL,于涡漩混合器上混和 30 s后 ,封闭
管口。 同时做阳性对照、样品阳性对照及阴性对照 ,
每项做 4管 ,照药典方法测定。
3. 2　细菌内毒素检查法与热原检查法对比试验:取
红花黄素注射液 30批 (经兔法热原检查合格 ) ,按
3. 1方法操作 ,结果均为阴性。
4　讨论
4. 1　红花黄素注射液属中药注射剂 ,由于天然药物
中大分子物质较难去除 ,常易引起热原问题 ,而兔法
热原检查费时 ,操作繁琐 ,影响因素多 ,给研制工作
带来不少麻烦。由于细菌内毒素法有灵敏、快速、操
作简便、重现性强等优点 ,作为确定该药物的热原反
应的方法是可行的。
4. 2　本实验将 L值定为 0. 5 EU /mL,当使用灵敏
度为 0. 25 EU /m L的鲎试剂检测时 ,样品可进行 2
倍稀释。这比按热原检查法注射剂量 6 m L /kg计算
出的 L值小 ,要求更严格 ,用于控制热源反应更加
准确、可靠。同时细菌内毒素检查与热原检查两法比
较试验 ,符合率为 100% ,亦说明此 L值是合理的。
参考文献:
[1 ]　中国药典 [ S] . 1995.二部 . 98年增补本:附录 4
[2 ]　 USPXXⅢ . & NFXVⅢ . 1995: 483
[ 3 ]　夏振民 . 药品细菌内毒素检查的限值 [ J] . 药物分析杂志 ,
1995, 15( 3): 54-55.
[4 ]　曲道杰 ,芮跃伍 ,黄清泉 ,等 . 20% 、 25% 、 50%葡萄糖注射液细
菌内毒素检测方法的实验研究 [ J ] . 药物分析杂志 , 1996, 16
( 5): 305-308.
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