全 文 ：蜂胶可以有效地抑制四氧嘧啶致小鼠肝脏自由基浓
度的升高。
机体过量的自由基可以引发生物膜不饱和脂肪
酸发生脂质过氧化 ,产生 MDA和过氧化脂质 ,它们
的含量变化可以定量反映生物膜如线粒体膜、细胞
膜等的受损程度。从实验结果可知 ,蜂胶给药组和阳
性对照组 MDA的含量远低于模型对照组 ( P <
0. 01) ,但略高于正常对照组的水平。进一步表明 ,蜂
胶在体内不仅有清除自由基的作用 ,对自由基引发
的膜脂过氧化反应也有抑制作用。
综上所述 ,氧自由基可以引发小鼠肝微粒体发
生脂质过氧化反应 ,其产物 MDA的含量明显高于
对照组 ( P < 0. 01) ,蜂胶可以抑制肝微粒体 MDA
含量的升高 ,表明蜂胶在体外可能通过清除氧自由
基来保护肝微粒体。体内试验表明 ,蜂胶可以有效的
抑制四氧嘧啶引发小鼠肝脏自由基的升高 ,降低肝
脏 MDA的含量 ,蜂胶对四氧嘧啶致小鼠肝脏损伤
有显著的保护作用。我们的研究结果表明 ,蜂胶是一
种天然、安全的抗氧化剂 ,对化学物质致肝脏损伤具
有一定的保护作用。
参考文献:
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褐藻多糖硫酸酯的抗凝和纤溶活性
彭　波 1 ,许实波 1 ,许东晖 1 ,赵金华 2⒇
( 1. 中山大学 ,广东 广州　 510275; 2. 深圳海王生物工程股份有限公司 ,广东 深圳　 518054)
摘　要: 目的　研究褐藻多糖硫酸酯 ( FPS)抗凝血和纤溶激活作用。 方法　测定 FPS对内源性和外源性凝血途径
以及纤溶系统的影响。 结果　 FPS对内源性和外源性凝血途径均有较强的抑制作用 ,并且能够增强纤溶系统的活
性。 小鼠 ip FPS 40, 20, 10 mg /kg后 30 min与对照组相比 ,血凝时间分别延长 1 267% , 302% , 83%。 FPS 2. 5, 5,
10 mg /m L使大鼠离体凝血酶原时间比生理盐水对照组分别延长 207% , 1 627% , 4 561%。大鼠 10 mg /kg舌下 iv
30 min后取血 ,用试剂盒测得其能使血浆 t-PA活性提高达 107%。 结论　 FPS具有较强的抗凝血作用 ,其作用机
制可能与肝素类似。
关键词: 褐藻多糖硫酸酯 ;抗凝血 ;促纤溶
中图分类号: R286. 3　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 11 1015 00
Anticoagulation and fibrinolys is activity of fucoidan
PENG Bo1 , X U Shi-bo1 , XU Dong-hui1 , ZHAO Jin-hua2
　　 ( 1. Zhong shan Univ er sity , Guang zhou Guangdong 510275, China; 2. Shenzhen Neptunus Biotechnique Sto ck CO. ,
Ltd. , Guang zhou Guangdong 518054, China)
Key words: fucoidan ( FPS) ; anticoagula tion; fibrinoly sis
　　近代研究表明 ,存在于多种褐藻中的水溶性硫酸
酯多糖具有抗凝血、调血脂和肮肿瘤等活性 ,
Springer等人从墨角藻中分离的褐藻多糖硫酸酯在
体内和体外实验中都表现出强抗凝活性。这些硫酸酯
·1015·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
⒇收稿日期: 2000-02-27作者简介:彭　波 ( 1973-) ,女 ,河北省唐山市人 ,助教 ,硕士学位。 1992年考入中山大学生物系 , 1996年保送攻读本校生理学专业硕士研究生 ,研究方向为天然产物生理活性研究 , 1999年毕业留任生物系动物生理研究室教师 ,从事基础教学与科研工作。通讯地址:广州市中山大学生命科学学院动物生理教研室 ,邮编: 510275
多糖在临床应用中对心脏、肾血管病 ,特别对改善肾
功能 ,挽救尿毒症患者有显著效果。 我们研究了从海
带目 ( Laminariales)海带科 ( Lamina riaceae) 海带
属 ( Lam inaria Lamx. )海带 L . japonica中提取的
褐藻多糖硫酸酯的抗凝血和促纤溶的药理学活性。
1　实验材料
1. 1　样品: 褐藻多糖硫酸酯 ( Fucoidan, 简称 FPS)
是从海带 Laminaria japonica中提取的一种天然硫
酸酯多糖 ,由中国科学院海洋研究所徐祖洪教授提
供。分子式: ( C6 H9O3 )· SO4· M [ M是金属离子
K、 Na、 Ca1 /2、 Mg1 /2等 ] ,平均分子量约 7. 7× 105 u
[粘度法、激光散射 (拉曼光谱 )法 ]。
1. 2　试剂: 藻酸双酯钠 ,沈阳市三环制药厂 ;肝素
钠 ,徐州生物化学制药厂 ;凝血酶 ,珠海特区生物化
学制药厂 ; t-PA和 PAI-1活性测定试剂盒 ,上海医
科大学分子遗传学研究室 ; CaCl2 ( AR) ,广州化学试
剂厂 ;柠檬酸钠 ,广州化学试剂厂生产 ;草酸钾
( AR) ,广州化学试剂厂。
1. 3　动物: 18～ 20 g N IH系小鼠 (合格证号:
97A018) , 250～ 300 g SD系大鼠 (合格证号:
97A017) ,均由广东省医学实验动物中心提供 ;新西
兰大白兔 (合格证号:医动字 26-97043号 ) ,由广东
省南海市黄歧泌中威龙养殖场提供。
2　方法和结果
2. 1　对小鼠凝血时间的影响: 小鼠 60只 ,雌雄兼
用 ,随机分成 6组 ,分组 ip生理盐水 ( N S) 0. 1 mL /
10 g , FPS 40, 20, 10 mg /kg , 或 PSS 10, 5 mg /kg。
30 min后 ,毛细管法测定凝血时间 [1 ] ,与生理盐水
对照组进行显著性测定比较。结果表明 ,与生理盐水
对照组 ( 1. 81± 0. 38) min的凝血时间比较 , FPS
10, 20, 40 mg /kg能够显著延长小鼠凝血时间 ,分别
为 ( 3. 31± 0. 55) min ( P < 0. 001) , ( 7. 28± 1. 23)
min (P < 0. 001) , ( 24. 76± 3. 79) min ( P < 0. 001)。
阳性对照药 PSS 5, 10 mg /kg也能显著延长小鼠凝
血时间 ,分别为 ( 7. 73± 0. 84) min ( P < 0. 001) ,
( 12. 36± 1. 03) min (P < 0. 001)。
2. 2　对复钙凝血时间的影响: 制备 0. 1% 草酸钾
兔血浆 [2 ]。 10支内径 8 mm试管 ,各加血浆 0. 1 mL
后分成 4组 ,分别加 0. 1 mL N S,或 0. 33, 0. 11,
0. 037 mg /mL FPS或 0. 11 mg /mL PSS。 37℃ 水
浴 1 min后 ,每管加入 0. 025 mol /L CaCl2溶液 0. 1
m L,混匀 ,再水浴孵育 ,并开始计时。 1 min后每隔
10 s缓慢倾斜试管 1次 ,记录纤维蛋白形成 (液面
不动 )所需的时间 ,重复 5次 ,取均值作为复钙凝血
时间 ,结果见表 1。 FPS 0. 04, 0. 11和 0. 33 mg /mL
可显著延长草酸钾兔血浆复钙凝血时间 ,且具有剂
量依赖关系 , PSS 0. 11 mg /mL亦能显著延长凝血
时间。
表 1　 FPS对草酸钾兔血浆复钙凝血时间的影响
组　别 剂量 (mg /mL) 复钙凝血时间 ( min)
N S - 2. 14± 0. 16
PSS 0. 11 10. 87± 0. 38* * *
FPS 0. 04 3. 33± 0. 15* * *
0. 11 5. 46± 0. 12* * *
0. 33 > 60* * *
　　与 NS组比较: * * * P < 0. 001
2. 3　对离体凝血酶原时间的影响: 大鼠摘眼取血 ,
3. 8%枸橼酸钠 1∶ 9抗凝 ; 3 000 r /min× 10 min离
心分离血浆。将内径 8 mm洁试管分为 5组 ,每管加
入凝血活酶和 25 mmo l /L CaCl2各 0. 1 mL后 ,分
别加入 0. 1 mL N S,或 10, 5, 2. 5 mg /mL FPS, 或
2. 5 mg /mL PSS。然后迅速加血浆 0. 1 mL,混匀后
置 37℃ 水浴恒温 ,开动秒表 ,不断倾斜试管进行观
察 ,当管内出现凝胶状纤维蛋白 ,液面不动时 ,停止
计时。这段时间即凝血酶原时间 [3 ] ,结果见表 2。FPS
2. 5, 5, 10 mg /mL均能显著延长管内出现凝胶状纤
维蛋白的时间 ,且具有量 -效依赖关系。 PSS 2. 5
mg /mL亦能显著延长该时间。
表 2　 FPS对大鼠离体凝血酶原时间的影响
组　别 浓度 (mg /mL) 凝血酶原时间 ( min)
N S - 0. 51± 0. 07
PSS 2. 5 20. 0± 3. 15* * *
FPS 2. 5 1. 57± 0. 29* * *
5 8. 81± 1. 02* * *
10 23. 77± 3. 55* * *
　　与 NS组比较: * * * P < 0. 001
2. 4　简易凝血活酶生成试验:新西兰大白兔 ,颈动
脉取血 ,每 0. 04 mL血加入 0. 5 m L蒸馏水中制备
溶血液 (内含血浆内各种凝血因子 ,用红细胞溶解后
释放的磷脂代替 PF3 ) ;耳缘静脉给予受试样品
14. 8 mg /kg后 ,重复前述过程制备第 3份溶血液。
分别加入 0. 5 mL的 1. 8% 氯化钠溶液 (空白对
照 ) ;含 4 mg /mL受试样品 (体外给药组 ) ; 1. 8% 氯
化钠溶液 0. 5 mL (体内给药组 )。每份溶液中再加
入 0. 025 mol /L CaCl2溶液 0. 25 mL,混匀 ,置 37
℃ 水浴中。于 2, 5, 8, 12, 16 min各吸取溶血液 0. 1
mL, 0. 025 mol /L CaCl2溶液 0. 1 mL,分别测定其
使正常血浆凝固的时间 ,结果见表 3。 FPS体内给药
14. 8 mg /kg、体外给药 4 mg /mL均能显著延长血
浆凝固时间 ,有抑制凝血活酶生成的作用。
2. 5　凝血酶时间测定: 大白兔颈动脉取血 ,全血迅
·1016· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
表 3　 FPS对简易凝血活酶形成的影响 ( s)
组别 剂量 2 min 5 min 8 min 16 min 12 min
N S - 24. 3± 2. 9 23. 8± 3. 4 14. 3± 2. 9 9. 5± 2. 3 9. 8± 1. 7
FPS　体内 14. 8mg /kg 66. 5± 7. 5* * * 59. 0± 5. 7* * * 55. 8± 5. 1* * * 21. 0± 2. 2* * * 30. 0± 4. 4* * *
体外 4. 0 mg /mL 432± 79* * * 361± 50* * * 212± 30* * * 40. 0± 8. 12* * * 51. 0± 7. 8* * *
　　　　与 N S组比较: * * * P < 0. 001
速以 2 500 r /imin× 10 min离心 ,制取贫血小板血
浆 ;含凝血酶 10 U /mL Tris缓冲液于 37℃ 下温
育 20 min作为凝血酶工作液 ; 13 mm× 100 mm试
管内加入正常血浆 0. 2 mL后分为 7组 ,分组加入
0. 2 m L Tris缓冲液或 0. 5, 0. 71, 1. 0, 1. 41, 2. 0,
4. 0 mg /mL受试样品缓冲液 ,混合 ,温育 1 min后 ,
加入 0. 2 mL凝血酶工作液 ,并启动秒表 ;镍铬丝襻
以每秒 2次的频率在混合液内挑动 ,至形成凝块 ,
停表 ,记录时间 ,即凝血酶时间 [4 ] ,结果见表 4。 FPS
体外给药 0. 71 mg /mL即可显著延长血浆凝固时
间 ,剂量为 1. 41 mg /mL时 ,超过 30 min血浆才开
始凝固 ,剂量为 2 mg /mL时 ,血浆不凝固。
表 4　 FPS对凝血酶时间的影响
组　别 剂量 ( mg /m L) 凝固时间 ( s)
NS - 16. 78± 0. 64
FPS 0. 5 16. 77± 0. 47
0. 71 22. 05± 0. 22* * *
1 26. 34± 0. 33* * *
1. 41 > 30 min
2 不凝
4 不凝
　　与 N S组比较: * * * P < 0. 001
2. 6　全血浆凝块溶解试验:结果见表 5。 FPS 7. 4
mg /kg就可使血浆凝块溶解时间显著缩短。
表 5　 FPS对血浆凝块溶解时间的影响
组别 剂量 ( mg /m L) 溶解时间 (h )
NS - > 48
FPS 7. 4 28. 3± 3. 34
14. 8 21. 8± 2. 74*
　　与 N S组比较: * P < 0. 05
2. 7　组织型纤溶酶原激活剂 ( t-PA)和纤溶酶原激
活剂抑制物 ( PAI-1)的活性测定试验: 大鼠以 12%
水合氯醛 ( 350 mg /kg ) ip麻醉后 ,仰卧固定 ,分离
右颈动脉 ,穿刺动脉留置导管固定 ,供采血用。以
0. 13 mol /L枸橼酸钠为抗凝剂 ,抗凝剂与全血之比
为 1∶ 9。试管 4℃ 预冷 ,动脉血入试管混匀后立即
4℃ 冰浴 , 2 500 r /min离心 15 min,分离血浆 ,一
部分血浆于 Ependof f管中待测 PAI-1活性 ,一部
分血浆以等体积酸化液 ( 1 mo l /L pH3. 9乙酸钠 )酸
化 ,以消除 PAI-1活性对 t-PA活性的影响 ,再于
Ependo ff管中待测 t-PA的活性 ,待测血浆 - 70℃
冰箱保存 [5 ]。 FPS舌下 iv ,用药前及用药后 30 min
各采血 1 mL。 t-PA和 PAI-1活性测定按试剂盒说
明书进行。 在酶标仪上测定标准品及样品孔波长
405 nm处吸光度 ( A405 ) ,以标准品制作标准曲线 ,
计算待测样品的 t-PA活性 ; PAI-1活性测定法同
t-PA。实验结果表明 , FPS有使 t-PA活性增强的作
用。给药前的 t-PA活性为 ( 205. 25± 31. 97) U /mL
( n= 6, x± s ) , 10 mg /kg舌下 iv FPS 30 min后取
血 ,用试剂盒测得其能够使血浆 t-PA活性显著升
高至 ( 424. 83± 39. 93) U /mL ( P < 0. 001) ; iv FPS
后 ,血浆中的 PAI-1活性与给药前相比 ,差异无显
著性 (给药前后分别为 ( 11. 49± 1. 62)和 ( 11. 64±
2. 73) U /mL(n= 6, x± s )。
3　讨论
凝血过程可分为 3个阶段、凝血酶原激活物的
形成 ;凝血酶原被激活成凝血酶 ;纤维蛋白原转变成
纤维蛋白。凝血酶原的激活有两种途径 ,即内源性途
径和外源性途径 [6 ]。 正常人和动物的血浆中存在着
抗凝物质和纤溶系统 ,后者使凝血过程所形成的纤
维蛋白变为可溶纤维蛋白分解产物 ,使已凝固的血
块重新化为液体。 t-PA是纤溶系统中主要的激活
物 ,其抑制物为 PAI-1。 t-PA /PAI比值是纤溶系统
活性高低的主要指标之一 ,它们之间的生理平衡对
调节血流通畅起重要作用 [7 ]。 本研究发现 FPS体
内、体外均可显著延长血凝时间。
血浆复钙凝血时间的测定是检验内源性凝血系
统功能的简便方法 , FPS对剂量依赖性地延长草酸
钾兔血浆复钙凝血时间 ,表明 FPS对内源性激活的
凝血途径具有抑制作用。 凝血酶原时间可以反映药
物对于外源性凝血系统的影响。 FPS能够明显延长
大鼠凝血酶原时间 ,并且具有剂量依赖性 ,说明
FBS对外源性凝血过程也有抑制作用。血检查凝血
第一阶段内源性途径的简易凝血活酶生成试验表
明 ,其对凝血活酶的生成有抑制作用 ;检查第三期凝
血过程中纤维蛋白原利用度的凝血酶时间测定法离
体试验表明 ,随着剂量的增大凝血酶时间显著延长。
内源性和外源性激活的最终途径结果均为激活
凝血酶而使纤维蛋白原凝结。鉴于 FPS对两种途径
形成的凝血均有抑制作用 ,且 FPS与肝素一样 ,同
为硫酸酯多糖 ,因此推测 FPS的作用靶点可能类似
·1017·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
于肝素 ,即抑制凝血酶原的激活 [8 ]。
全血浆凝块溶解试验表明 ,其使凝块溶解时间
缩短 ; t-PA试验表明其能升高 t-PA活性 ,提高
t-PA /PAI的百分比 ,表明 FPS可能不仅能够抑制
凝血途径 ,对纤溶途径还有激活作用。
参考文献:
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不同成熟度香蕉果肉抗胃溃疡作用研究
朱　惠 ,林建峰 ,郑幼兰⒇
(福建省医学科学研究所 药理室 ,福建 福州　 350001)
摘　要: 目的　比较不同成熟度 ( 5成熟、 7成熟、 8～ 9成熟、成熟 )的香蕉果肉的抗溃疡作用。 方法　采用大鼠水浸
应激性胃溃疡和乙酸烧灼型胃溃疡模型。结果　 7成熟香蕉果肉能使溃疡指数降低 ,溃疡面积变小 ,溃疡容积减少 ,
与生理盐水对照组比较疗效显著 ; 5成熟虽有疗效 ,但不如 7成熟香蕉果肉 ; 8～ 9成熟疗效较差 ,成熟无效。结论　
7成熟香蕉果肉疗效最好 ,疗效与 7成熟香蕉果肉 (胃舒康 )质量标准所控制含糖量 2. 0% ～ 5. 5% 具有相关性。
关键词: 香蕉果肉 ;抗胃溃疡 ;果肉成熟度
中图分类号: R286. 56　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 11 1018 02
Studies on antigastrelceosis of pulp ofMusa paradis iaca var. sapientum during
different maturation
ZHU Hui, LIN Jian-feng , ZHENG You-lan
　　 ( Depa rtment o f Pharmaco log y, Fujian Institute of M edical Science, Fuzhou Fujian 350001, China)
Key words: Musa paradisiaca L. va r. sapientum O. Kuntze; antig astrelceosis; pulp during dif ferent
maturation
　　香蕉系芭蕉科芭蕉属植物 ,主要含 2, 4, 6-三硝
基苯二酚的 2-( 3, 4-二羟基苯 )乙胺盐、三萜类成分
31-去甲环波罗酮、葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉及多种
酶。我国南方部分省市及印度等国家与地区民间采
用未成熟的香蕉果肉 (Musa paradisiaca L. v ar
sapientum O. Kuntze)治疗胃溃疡。我们曾报道了
胃舒良 ( 7成熟香蕉果肉 )对大鼠应激性、消炎痛性、
幽门结扎性及慢性醋酸性实验性胃溃疡具有保护作
用 [1 ]。本文主要研究不同成熟度的香蕉果肉对大鼠
实验性胃溃疡的影响。
1　材料
1. 1　药物:香蕉果肉干粉由福州市医科所提供 ,批
号 931105,不同成熟度香蕉果肉的含糖量分别是: 5
成熟 ( A) 1. 78% 、 7成熟 ( B) 4. 24%、 8～ 9成熟
( C) 7. 89% 、成熟 ( D) 16. 3%。 试验时将香蕉果肉
A、 B、 C、 D干粉过 100目筛 ,用蒸馏水配制成 200
mg /mL混悬液。 雷尼替丁:汕头市化学制药厂 ,批
号 930503。
1. 2　动物: SD大鼠 ,♀ 兼用 ,体重 200～ 250 g,
购自中外合资上海 SIPPR /BK实验动物有限公司 ,
清洁级 ,合格证号 0001572。
2　方法与结果
大鼠按性别、体重随机分为实验组和对照组。实
验组分别给予不同成熟度的香蕉果肉 1～ 4 g /kg,
·1018· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
⒇收稿日期: 2001-05-14作者简介:朱　惠 ( 1971-) ,女 ,福建省福州市人 ,技师 ,大专学历。主要从事抗生免疫、肿瘤药理以及新药药效学与毒理研究工作。 Tel: 0591-
7514999