全 文 ：复方止咳冲剂中甘草酸和绿原酸的
高效液相色谱法测定
北京医科大学药学院 ( 1 0 0 0 5 3 荣志芬 . 张慰 青 胡文 洁
许克宁 邹安庆
摘要 用 R P一 H P L C一 U V法同时测定了复方冲剂中的甘草酸和绿原酸 , 以 甲醇 ( 0 . 5% 酷 酸 )一水
( 。
.
5纬醋酸 ) 为流动相 , C ; 。柱 , 外标法 。
关键词 H P L C 甘草酸 绿原酸 冲剂
复方止咳冲剂由甘草 、 金银花等 ; o几味中药与赋形剂制备而成 。 本文建立了 同时测定冲
剂中甘草酸和绿原酸的 H P L C方法 , 由于甘草酸和绿原酸 的极性相差较大 , 且.复方制剂中成
分复杂 , 因此选用改变流动相 比例的方法 同时测定两者 , 用外标法定量 , 测定了 3批样品 ,得
到满意结果 。
1 实验方法与结果
1
.
2 仪器与试剂 : V a r i a n H P L C 9 0 20泵 , g o s o U V检测器 , 4 2 7 0积分 仪。
对照品 : 甘草酸和绿原酸由中国药品生物制品检定所提供 ; 止咳冲剂样品由药学院应 用
药物研究所提供 ; 其余试剂均为分析纯 , 水为重蒸去离子水 。
1
.
2 色谱条件 : C 1 8 ( 1 0件 ) 3 . g m m x 2 5 o m 不锈钢柱 , 保护柱 : C 1 8 ; 流 功 相 : A . 甲 醇
( 0
.
5 %醋酸 ) , B . 水 ( 。 . 5 %醋酸 ) 。
洗脱方法 : a ) A 一 B ( 2 5 : 7 5 ) , 保持 x s m i n 测定绿原酸 t r一 1 0 , , l i n , b ) A 一 B ( 2 5 ,
1 o m i n
7 5—一 7 0 : 3 0 ) , 线性梯度 , c ) A 一 B ( 了。 : 3 0 ) 保持 一。 m i n 测 挂甘草 咬 t r 一 3 `)二 i n , 流速 l . o m l / m i n , 检测波长 2 5 4 ,飞 11飞。 灵敏 f望o . o 5 A U F S 。
1
.
3 标准曲线 : a ) 对 照品溶液的配制 : 分 别称取 一甘草酸和绿原酸对照品齐川二 g , 精密 称
定 , 置 10 m l容量瓶中 , 用 50 % 乙醉定容 ,
为对`照品的贮备液 , 浓度 为 ] m g / m l 。 贮存
于冰箱中 , 临用前再用 5 0 %乙醇稀释至浓 )_生
为 0 . 05 m g / m l 。 b ) 标准 曲线的测定 : 将 _ !:
述对照品溶 液 2 、 4 、 6 、 8 和 1 0时依次进
样后 , 测峰面积 , 以对照品的进样最对峰面
积进行回归处理 , 得 回归方程 。 对 甘 草 酸
Y = 2 4 6 7
.
d X + { 4 5
.
9 , r = 0
.
9 9 9 ;对绿 原峻 :
Y = ] 2 4 5
.
3 X + 1 0 9
.
9 , r 二 0 . 9 9 9 6 。
1
.
4 样品测定 : 样品溶液 的制备 : 取 适 量
的待 测 冲 剂 , 研磨 后过 60 目筛 , 精密称定
细粉 19 , 于 1 0 m l容量瓶中 , 加适量 80 % 乙
醇 , 超声振荡 30 m in , 取上清液 , 经达当稀
鱼鱼卫塑丝丝鲤鲤够膜过滤 , 进样 , 。时 ,
黑2
吃
图 样品 色谱图
e A
一绿原酸 G A 一甘 草酸
得 色谱图 。
.
A d d r e s 侣 . R o n g Z h i f e n , S e h o o l o f P h a r m a c y , B e i抓 n g M e d i e a l U n i v e r s i t y , B e i j i n :
现在地址 : 北京阜外医院药剂利
《 中草药 》 1 , , s年第 2 6卷第 4期
1
.
5样 } W:测定的精密度 :测定了 3批样品 , 甘草酸的 C V 二 1 . 8% , 绿原酸的 C V = 2 . 7 % 。
2 讨论
2
.
1 色谱条件的选择 : 选用 C , 8柱和 sC 柱得到相符的结果 , 最后选用更为普遍的 C 1 8柱 。
流动相选用过 3种 , 即甲醇一水 , 乙醇一水 ; 乙睛一水 , 其中乙腊效果最好 , 但价格昂贵 ,
乙醇粘度大 , 常引起高柱压 , 最后选用甲醇 。
检测波长的选择 : 经紫外扫描 , 甘草酸的几。 . 1在 2 5 4n m , 绿原酸的几二。 二在 3 2 6n m ; 但 在
2 5 4 n m也有吸收 , 因样品中绿原酸的含量较高 , 所以选择在 2 5 4 n m测定 , 不影响绿原酸的检
出 。
2
.
2 由于绿 原酸的极性比 一甘草酸的大得多 , 两者在柱上的保留特性也相差很大 , 且样 品 成
分复余 , 因元我们采用改变流动相 比例的方法进行洗脱 , 使甘草酸和绿原酸能与其他杂峰分
开 , 又缩短了分析时间 。
2
.
3 样品的处理 : 由于样品是中药复方冲剂 , 其中赋形剂糖粉和糊精都是水溶性的 , 当 进
样量大时 , 易在柱中析出而堵柱子 , 为此 , 我们 用 80 %乙醇提取 , 然后再稀释后进样 , 即可
避免上述现象 。
( 1 9 9 4
一 0 4一 1 1收稿 )
H P L C 法测定桅子产地加 工炮制品酶解前后桅子贰 含量
中国药品生物制品检定所 ( 北京 10 00 50 )
桅子为茜草科植物 桅 子 G a r d en id j as m `” -
io d e : E l s的成熟果实 , 是常用中药 , 具有泻火除
烦 , 清热利尿 , 凉血解毒等功效〔 1 〕。 自古以来多以
生品及炒黄 、 炒焦 、 炒炭 、 姜炙等炮制品应用于临
床 , 其中有效成分为桅子试 。因为含有贰类的中药
多数受相应的酶易产生酶解作用 , 使其试类成分降
低 , 所以根据杀酶保试的机理 , 检测桅子产地加工
及炮制品酶解前后桅子贰的含量 , 以考察杀酶保贰
的效果 , 为炮制和制定饮片标准奠定基础 。
1 仪器 、 试剂与祥品
仪器 : 岛津 L C 一 6 A高效液相色谱仪 , 5 P D 一 6
A V 紫外检测器 , C一 R 3 A色谱处理机。
试药 : 所用试剂均为分析纯 。 桅子贰 , 内标物 ,
芍药贰 , 均为本所提供 。
样品 : 桅子及炮制品 ( 炒黄 , 炒焦 , 炒炭等 )
均按中国药典 90 版桅子项下操作 。
2 色谱条件
分析柱 : N u e l e o s i l C , : 1 0卜m ( 4 . 5 x 2 5 4
m m ) O D S柱 , 流动相 : 水一乙睛一醋酸 ( 86 : 14
: 0
.
0 1 )
, 检测波长 : 2 3 a m m , 流 速 : 0 . s m l /
m i n
, 灵敏度 : 0 . o a A U F S , 纸速 : Zm m / m i n ,
进样 : 10 时 , 内标法定量 , 内标物 : 芍药贰 。
赵淑杰 . 普 静 陈德 昌
溶液制备
1 桅子贰对照品溶液 : 精密称取桅子试约 2 . 0 0
2曰O
m g于 10 m l的容量瓶中 , 甲醇溶解业稀释至刻度 。
3
.
2 内标溶液 : 精密称取芍药贰 13 . 0 m g于 25 m l
容量瓶中 , 甲醇溶解业稀释至刻度 , 摇匀 , 待用 。
3
.
3 标准溶液 : 精密吸取桅子讯对照品溶液及 内
标溶液各 l m l于 s m l容量瓶中 , 甲醇定容 , 待用 。
3
.
4 供试品溶液 A 的制备 : 精密称取干燥恒 重 的
桅子及炮制品粉末 ( 过 40 目筛 ) 约 10 m g于三角瓶
中 , 加 甲醇一水 ( 1 : 1 ) 混合溶剂 ( 以下简称 混 合
溶剂 ) 4 0 m l , 于超声波振荡器提取 0 . 3 h后 , 转移
入 50 m l容量瓶中 , 业用混合溶剂定容 , 摇匀 , 滤
过 , 取续滤液及内标液各 l m l于 5 m l量瓶中。
3
.
5 供试品溶液 B的制备 : 精密称取供试品 溶 液
A项下的同批样品粉末约 10 0 m g , 于三兔瓶中 , 加
Z o m l水 , 置于水浴锅中 , 50 “ C酶解 Zh , 取出 , 再
加入 20 m l甲醇摇匀 , 以下按供试品溶液 A项 下 从
“ 超声波振荡… …摇匀 ” 止 , 依次操作 , 即得 。
4 测定方法及结果
4
.
1 校正因子的测定 : 取标准溶液按上述色谱条
件进样 10 时 , 测定校正因子 3一 5次 , 取其平 均 值
( 下转 第 19 2页 )
.
1 8 2
·
AB ST R AT C O SF O R I GIN L A ART ! CE L S
S tu di eo s n t h eC h emi c al Co ns ti tu e n tso f Sar g e n tl go r y vi n e
( S
ar go e to do 义 a eu a n e ta )
Mi o aK a ngl i
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Z h a n g J i a n z h o n g
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W a n g F
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5 ix e o m P o u n d s w e r e i s o l a t e d f r o m t h
e E t O H e x t r a c t o f s t e m s o f S a r g e ” t o d o 劣 a e 别 ” e a t a
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T h e y w e r e i d e n t i f i e d a s p
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s i t o s t e r o l ( I )
, 口一 d a u e o s t e r o l ( 1 ) , m a d a s i a t i c a c id ( 1 ) , a c a n t h -
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, s a r g e n e u n e s i d e ( V )
, a n d s u c r o s e ( VI ) o n t h e b a s i s o f c h e m i e a l a n d s P e e t r a l
a n a l y s e s
.
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o n g t h e m
,
V 15 a n e w c o m P o u n d
。
( o r i g i n a l a r t i e l e o n P a g e 1 7 1 )
A S t u d y o n P o ly s a e e h a r id e o f t卜e H o n g s t、 i e r ( U m b f l i e a r i a h夕 P o e o e c i n e a )
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U M H P o l y s a e e h a r i d e w a s i s o l a t e d a n d P u r if i e d w i t h a l c o h o l P r e e i P i t a t i o n f r o m h o t w a t e r
e x t r a c t o f U 爪 b i l艺e a r i a 八〕 P o c o e e ; 路 e a L i a n o 。 B y S e P h a d e x G 一 1 5 0 e o l u m n e h r o m a t o g r a P h y , U M H
w a s s h o w n t o b
e a s i n 妙 e h o m o g e n e o u s s u b s t a n c e , s u g a r e o n t e n t 9 0 。 4 % 。 B y g a s e h r o m a t o g r a 卜
P h y a n a l y s i s
,
U M H w a s e o m P o s e d o f g l u c o s e
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P e r i o d a t e o x i d a t i o n a n d S m i t h d
e g r a d a t i o n s h o w e d t h a t t h e m
a i n c h a i n o f U M H 15 e o m P o s e d
o f a ( 1令 6 ) a n d ( 1* 4 ) l i n k a g e , a n d w a s a n a c i d i e h e t r o s a e c h a r i d e .
( o r i g i n a l a r t i c l e o n P a g e 17 5 )
S t 。 d i e s o n t h e C h e m i e a l C o n s t i t u e n t s B ig f l o w e r R h o d i o l a ( R h o d f o l。 e r e n u l a t 。 )
P e n g J i a n g n a n
,
M a C h e n g y u
,
G e Y
o n g e h a o
, e t a l
F i v e e o m P
o u n d s w e r e i s o l a t e d f r o m t h
e r h i z o m e a n d r o o t s o f R 六o d i o l a e r e ” 别 l a t a S . H . F u .
T h e y
g a l l i e
w e r e i d e n t i f i e d a : r h o d i o n i n ( I )
, r h o d i o s i n ( 1 )
, t y r o s o l ( l )
, s a l i d r o s i d e ( lV ) a n d
a e i d ( V )
, r e s P e c t i v e l y
,
b y U V
,
M S
, `
H
a n d ` 3 C N M R s P e c t r o s c o P i c a n d c h e m ie a l
r e a e t i o n s
。
( O r i g i n a l a r t ie l e o n P a g e 1 7 7 )
D e t e rm i n a t i o n o f G ly e y r r ll i z i e A e id a n d C h l o r o g e n i c A e i d b y H尸L C
R o n g Z h i f e n
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d i c i n a l P r e P a r a t i o n b y R P
一
H P L C
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M o b i l e P h a s e
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5% H A c ) , C
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( o r i g i n a l a r t i e l e o n
i n C h i n e s e m e
·
( 0
.
5% H A c )
P a g e 1 8 1 )
Q u a n t i t a t i v e D e t e l
·
m i n a t io n o f B o r n e o l In Y u q i n g a n L iq u i d
W
e i X i a o s h u
B o r n e o l i n Y
u q i n g a n l i q u i d w a s d e t e r m i n e d q u a n t i t a t i v e l y b y G C
.
T h e s a m p l e w a s r i r s t
e x t r a e t e d b y e r h y l a c e t a t e a 口d e o m P o n e n t d e t e r m i n e d b y t w o t y P e s o f e o l u m n P a e k e d w i t h
2 0肠 o V 一 l 了 a n d 1 0 ;舀 p E G 一 2 0M / c l , r o m o s o r 飞, W I{ p r e s p e e t l v e l y . N 一 t e t r a d e e a n e w a s u s e d a s a n
《 中草药 》 1 9 9 5年弟26 售第 4 ;幻 ·
2 2 3
·