全 文 ：粉防己中三种双节基异哇琳生物碱的
高效液相色谱法测定△
中国医 学 科 学院中国协和医科大学药物研究所 ( 北京 1 0 0 05 0 ) 李宝明 段宏瑾
大正制药株式会社 , 总合研究所 , 日本
何 丽一 .
相架和彦 大岛俊幸 平山总 良
摘要 建立了同时测定粉防己 tS e P h a爪 a ` et r a o d ar S . M 。 。 er 中粉防己碱 、 去甲粉防己碱及小
壁胺等 3种双节基异哇琳生物碱含量的简便精确的高效液相色谱法 , 用 Y G W一 C , : 10 件m 为固定相
及 甲醇一乙睛一水 ( 3 : 1 : 1 ) 含 0 . 06 %二乙胺为流动相 , 种生物碱在 10 m in 内可以完全分离 。
关健饲 粉防己 粉防己碱 去甲粉防己碱 小鬓胺 高效液相色谱法
粉防己为防己科千金藤属植物粉防己 tS e P ha 滋 。 t et ar o d ar S . M o or e的块根 , 主 要成
分为生物碱 , 已知的有双节基异唆琳生物碱粉防己碱 ( 又称汉防己碱 et t ar n d r i n e ) 、 去甲粉
防己碱 ( 防己诺林 d e m e t h y l t e t r a n d r i n e , f a n g e h i n o l i n e ) 小巢胺 ( b e r b a m i n e ) 及一
种季胺生物碱轮环藤酚碱 ( e y e l a n o l i n e ) 等。
粉防己为传统中药 , 具祛风除湿 、 利尿消肿 、 行气止痛的作用 , 由于产地不 同 , 含量也
有差异 。 文献报道上述 l~ 3种生物碱的分离方法有薄层法〔幻 、 高速反流色谱法 〔 2〕、 低 压 柱
层析及p H梯度法〔3〕 , 定量方法有容量法〔`〕 、 薄层扫描法 〔5, “ 〕等。 本文建立了粉防己中 3种双
节基异哇琳生物碱的反相高效液相色谱测定法 , 方法简便 、 准确 。
1 实验部分
1
.
1 样品来源 : 福建 、 浙江 、 江西样品为中国医学科学院药用植物资源开发研究所冯毓秀研究
员提供并鉴定 , 广东大埔 、 浙江临安 、 浙江 、 江西德安 、 江西抚州样品为所在地药检所提供
并鉴定 , 福建 、 安徽样品为市售商品 。
1
.
2 仪器 : 日本岛津 L C 一 4A 高效液相色谱仪 、 S P D 一 Z A S紫外检测器 、 C一 R : A X 数据处理机 、
不 锈钢柱 2 5 o m m x 4m m I D , 填充 Y W G 一 C ,。 1 0卜m ( 天津化学试剂二厂 ) 。
1
.
3 试剂 、 药品 : 小璧胺 、 粉防己碱 、 去甲粉防己碱均重结晶 2次 , 色谱单峰 , 甲 醇 、 乙 睛
均为色谱用规格 , 重蒸馏水 , 二乙胺 ( A R , 北京化工厂 ) 。
1
.
4 色谱条件 : 流动相甲醇一乙睛一水 ( 3 : 1 : 1 ) 含 0 . 06 %二乙胺 , 超声波脱气 , 温度 20 ~
2 5℃ , 流速 x . o m l / m i n , 检测波长 2 4 2 n m , 纸速 o . 2 5m m / m i n 。
2 结果及讨论
2
.
1 小璧胺 、 去甲粉防己碱及粉防己碱的分离: 分离条件如上 , 结果见图 。
实验结果证明以甲醇及水作流动相不能达到分离的目的 , 流动相中必须含有一定量的乙
腊 , 使系统呈微碱性 , 二乙胺的浓度 0 . 1% 、 0 . 08 % 、 0 . 06 %及 0 . 04 %时分离效果 相 似 , 以
0
.
06 %最合适 ; 流动相 甲醇一乙睛一水的比例为 3 : 1 : 1时最佳 , 3种双节基异唆琳生 物 碱 在
10 m in 内可 以达到基线分离 。
2
.
2 精密度试验 : 相同进样量 8次 , 小璧胺 、 去甲粉防己碱及粉防己碱色谱峰面积的 R SD分
.
A d d r e s s
:
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,
I . s t i t u t e o f M a t o r i a M e d i e a
,
C h i p
e s e A e a d e m y o f M e d i e a l S e i e n e e s
,
B e i j i n g
△本文曾参加 1 9 9 2年第三届生物医药色谱学术会议
喂中草药 》 19 9 4年第 25 卷第 12 期 · ’ 6 2 9
别为 1 . 1 4%、 1 . 1 1%及 x . 2 2 %。
2
.
3 标准曲线 : 将 3种生物碱配成不 同浓度的混合液 , 进样各5时 , 用上述色谱条件分离测得
其回归方程及相关系数为 . 小聚碱 y = 19 8 02 . 8 3x 一 3 38 . 20 , r = 0 . 9 9 9外 去 甲 粉 防己 碱
y = 5 3 5 5 2
.
o 7 x 一 9 7 1 . 9 0 , r = 0 . 9 9 9 9 ;粉防己碱 y = 6 0 . 0 0 + 2 6 8 5 2 . 5 5 x , r = 0 . 9 9 9 9 。线性范围约
在 0 . 2~ 1 . 5卜 g之间 。 裹 1 样品提取条件比较
2
.
4 样品提取条件的比较 : 样品分别用氨
性氯仿、 甲醇及流动相作为提取溶剂 , 分别
用冷浸 、超声波提取及热回流提取进行比较 ,
结果以流动相为提取溶剂 , 浸 泡样品 12 h后
超声波提取 30 m in 结果最高 , 见表 1 。
2
.
5 回收率试验 : 将一定量的标准品加入样
品 , 按样品提取方法提取 , 分离后测得小粱
胺 、 去 甲 粉防己碱 、 粉防己碱的回收率分
别为 9 7 . 5 4% 、 2 02 . 1 5%及 20 1 . 3 6% 。
2
.
6 样品分析方法 : 精密称取 0 . 19 过 40 目筛
的样品于 5 m l容量瓶中 , 加 4 m l 流动 相 冷浸
12 h 时 , 超声波提取 30 m in , 放置澄清后 , 取
上清液 5林 1进样 ,用上述条件分离后 , 测得峰
面积用外标法计算各样品中生物碱的含量 ,
结果见表 2 、 图。
分析结果表明 , 除广东 、 福建外 , 其余
产地的样品均不含小桑胺 , 去甲粉防己碱的
含量为 0 . 4 54 % ~ 1 . 5 68 % , 粉防己碱的含量
色谱峰面积提取溶剂 提取方法 去甲粉防己碱
氨性氯仿 言; l;
粉防己碱
7 1 6 6
11 3 71
醉 3 3 1全
4 9 2 2 石粼
流 动 相
冷浸超声热 回流
冷浸超声热回流
冷浸超声热回流 ;:;;
1 1 4 24
1 1 7 9 4
表 2 粉防己样品分析结果
含 量 (% )
去甲粉防己碱 粉防己碱
广东大埔
福 建
福建市售
浙江临安
浙 江
浙 江
江西德安
江 西
江西抚州
安徽市售
采集
年份
1 9 8 6
!
1 9 7 9
1 9 9 2
1 9 9 2
1 9 7 9
1 9 8 5
1 9 9 2
1 9 5 6
1 9 9 2
1 9 9 2
小桑胺
0
。
2 5 3
0
。
0 5 8
0
。
1 4 5
0
。
8 9 8
0
。
5 6 8
0
。
9 9 0
0
。
7 7 5
l
一
0 2 3
0
。
7 9 8
0
。
4 5 4
0
。
5 3 1
0
。
7 2 7
0
。
8 7 1
2
。
1 9 6
3
。
5 3 7
1
。
9 1 5
1
。
2 7 4
1
。
5 2 9
1
。
7 6 1
1
。
1 8 7
0
。
9 9 1
2
。
1 6 8
1
。
3 7 8
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图 粉防己中生物碱的离效液相色谱图
1
·小奥胺 2一去甲粉防己碱 3一粉防己碱
A
·广东大埔 B ·福建 C 一福建市售 D 一浙江临安 E 一浙江 F · 浙江
G
一江西德安 H一江西 I 一江西抚州 J一安徽市售 K 一对照品混合物
为 0 . 991 % ~ 3 . 5 37 % 。 由此可贝.粉防己产地不同 , 生物碱的质与量均有较大差异 。
参 考 文 献
1 楼风昌 。中草药 , 1 5 5 1 , 2 2 (一) : 7 4 陆蕴如 . 中草药通讯 , 1 , 7 8 , 10 : 1 0
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,
5 吴志荣一等 . 中草药 , l , 88 , 1 9 ( 8 ) : 1 3
1 9 8 8
,
1 1 ( s )
:
16 6一 6 杨义方 , 等。 中药通报 , 1 . 8 8 , 1 3 ( 1 2 ) : 7 4 0
8 陆新民 , 等 · 中草药 , ` 9 8 5 , ` 6 ( ` o ) : a ( 1 9 9 3一 1卜 0 7收稿 )
, 雌3 Q .
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l o r i d e ( 恤 ) , a t i s i n u m c h l o r i d 。 ( lX ) , a n d G u a n 一 F u b a s o z ( X ) f r o m t h e r o o t . C o m P o u n d s l
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