全 文 ：粉防己中汉防己甲素和乙素提取条件的优化
张家口医学院基础部 (0 7 50 0 0 )
清华大学分析中心
甄 攀.
陈培榕 王鹤 泉
摘要 利用正交试验方法 , 研究了影响粉防己 中汉防己 甲 、 乙素的提取效率的各种 因素 , 得 到
的最佳提取条件为 : 用含 3 3 . 3 %氨水的无水乙醇溶液浸饱 h8 , 超声震荡提取 h4 。 在 此 条 件下
测得的汉防己甲素的含量为。 . 678 % , 乙素的含量为 0 . 61 6% 。 汉防己 甲 、 乙素的含量 用 高效 液
相色谱 ( H P L C ) 检测 , 最低检出限分别为 3 . 8 7 x 10 一和 2 . 4 8 x 1 0 一 3 m m ol /L 。
关健词 粉防己 汉防己甲素 汉防己乙素 正交试验 高效液相色谱
汉防己是防己科千金藤属植物粉防己St e P 人。 爪 a t 。汁。 。 d , a 5 . M o r e的干燥块 根 , 有
效成分为汉防己碱 , 其中主要为汉防己甲素 ( et rt a n d r ni e ) 和汉防己 乙 素 ( d o m o ht y l t -
et ar n dr ni e ) 0 〕
。 汉防己碱具有镇痛 、 消炎 、 降压 、 抗菌 、 抗肿瘤 、 松驰横纹肌等作用 〔幻 ,
近来研究发现汉防己碱具有抗心率失常作用〔 3〕。 汉防己碱的含量是粉防己药材 质 量 的重要
指标之一 , 有关研究汉防己碱的测试工作曾有报道〔刁一 6〕 , 但没有看到有关研究汉防己 碱提
取条件的报道 。 我们在已建立的色谱分析方法的基础上 , 利用正交试验 , 以汉防己甲 、 乙素
的百分含量为指标 , 进行了提取条件的优化 , 为提取汉防己甲 、 乙素提供了科学依据 。
1 实验部分
1
.
1 仪器与试剂 : 高效液相色谱仪 : 岛津 L C 一 10 A , S P D 一 10 V A紫外检测器 , 超声震荡器,
, r
.百.`护r臼口卜
I B R A N SO N B 一 52
。
汉防己甲素 : 由中国药品生物制品检定
所提供 ; 汉防己乙素 : 由北京医科大学植物
化学教研室提供 , 粉防己 : 由北京市海淀药
店提供 。
所试用剂均为分析纯 , 水为重蒸去离子
水 。
.1 2 色谱分析
分离条件 : 采用正相色谱体系对汉防己
甲 、 乙素进行分离与检测 , 色谱柱为小4 . 6m
m x 1 5c m M IC r o p a r k 5 1一 5硅胶柱 , 流动相
6
。
1 18 6
。
114
甲素
4
二 了8 8
l
为 : 三氯甲烷一无水甲醇一 氨水 ( 30 : 6 8 . 9 :
1
.
1 )
, 检测波长为 2 2 8 n m , 柱温 30 ℃ , 流速 圈 1 粉防己色谱图 图 2 汉防己甲 、 乙索色奋田
o
.
3 m 丫nI ni , 六通阀进样 , 进样量 6叭 。 分离谱图见 图 l 。 图 2为汉防己甲 、 乙素标准对照品
的色谱图 。 用保留时间定性 , t R = 6 . l sl m im 的峰 为汉防 己甲素峰 , t R = 7 . 12 m ni 的峰为汉
防己 乙素峰 。
1
.
3 工作曲线方程 : 准确称取一定量的汉防己甲 、 乙素标准对 照品 , 分别用 无 水 乙 醇溶
解 , 配成一系列不同浓度的标准挤液 , 进样分析 , 用峰面积对浓度作图 , 得到汉防己甲 、 乙
甲
A dd
r e s s : Z h
e n P a n
,
Z h
a n g j i a k
o u M e d i c a l C o l l e g e
,
Z h a n g j i
a k o u
《 中草药 》 1 9 9 4年第 25 卷第 1 期 一 5 7 5 .
素的工作曲线 。 见表 1 .
市售粉防己经千燥后粉碎 , 称取 3 . 0 9粉末 , 按以下各种方法处理 , 进样分析 , 利用上述
汉防己甲 、 乙素工作 曲线即可求出它们 的百分含量 。
2 结果与讨论
2
.
1 提取溶剂的比较 : 根据汉防己 甲 、 乙 农 2 扭取溶荆的比较
序号 提取溶 剂 提取时间 ( h ) 汉防己乙素( % )素甲
)己%防(汉
素的化学性质以及有关文献 的报道 , 研究了
几种常见 易得的溶剂 如水 、 三氯甲烷 、 无水
乙醇以及含有氨水的无水 乙醇对汉防 己甲 、
乙素提取效率的影响 。 结果见表 2 。
表 1 汉防己甲、 乙 素的工作曲线
汉防 进样 线性范围 相关系工作曲线己 次数 ( m m o l/ L ) 数
甲索 5 0 . 0 1~ o . i y = 8 . , 6 1 x + 。 . 通 5. 5 0 . , , s a
乙索 5 0 . 0 1~ o . i y = 8。 通o 6x + 0 . 5, 2 3 0 . , 9 8 6
水
三氯甲烷
无水乙 醇
1 4
.
3%氨水的无水乙醇
0
。
0 7 6
0
。
2 1 0
0
。
2 4 0
0
.
6 7 5
:::
0 。 1 3 6
0
。
5 1 0
注 : y 为峰面积 ( x 10 . 件.v s ) , x 为 浓度 ( m 血 ol /
L )
.
2
.
2 L 。 ( 4 x 2
`
) 正交设计选择提取条件 :
在上述研究的基础上 , 我们认为 提取 溶 剂
中氨水浓度是主要影响因素 , 其次还有浸泡
时间以及超声振荡提取 时 间 。 采用 L : ( 4 x
2 ` ) c73 正交设计表安排试验 , 提取溶剂中氨
水浓度安排 4 个水平 , 浸泡时间和超声振荡
提取时间均安排 2个水平 , 以汉防己 甲 、 乙
素的百分含量为指标 。 考查因素水平列于表
3 , 正交试验结果见表 4 。
从表 2中看出 , 14 . 3 %氮水的无水 乙醇
溶液的提取效率明显优于其他 3种 , 因此选
择含有氨水的无水 乙醉溶液作为提取溶剂 ,
作进 一步的研究 。
衰 4 L 。 ( 4 x 2 . ) 正交试验
序号 A B C
2 2
2 4 0
4 3 7
2 1
0
。
5 7 0
0
。
6 7 5
0 。 6 7 8
0
。
6 0 2
0
。
6 7 7
0
。
6 0 7
0 。 1 3 6
0
。
3 6 5
0
。
2 2 5
0
。
5 1 0
0
。 5 2 5
0
。
3 6 9
0
。
6 1 6
0
。
4 8 5
”4580牡13剐已2厂57a..…TzI叭.Q甲素表 3 考查因素水平A B C
提取溶剂中 浸泡时间 超声震荡提
氨水浓度 ( % ) ( h ) 取 时间 ( h )
。
1 6 5 2
。
0 1 9
。
3 2 1 2
。
4 6 7
艺
4
。
4 8 6
艺
3
。
2 3 1
0
ǎ1ù
1 7
。
7
;:
::: :::
0
.
0 0 ` 0 . 0 2 6 Q T = 0 . 1 6 3 , Q E = 0
.
0 0 1
l
。
5 0 2 1
。
2 1 5
1
。
7 2 9 2
。
0 1 6
4 3 3
。
3 l
。
1 0 1
0
. 。。 6 0 . 0 0 6 0 . 0 5 0 Q T = 0 。 1 8 4 , Q E 二 0 . 0 0 1。
-生.U41TQ
乙素考查平水
从正交试验表上 T 值看出 : 对 于甲素 , 最优条件为 A ` B : C : 或 A 3 B厂 2 , 对 于乙素 , 最优
条件为 A 4 B : C : , 因此我们选择提取汉防己 甲 、 乙素的最佳条件为 A B4 Z C : , 即提取溶剂 中氨
水浓度为 3 3 . 3 % , 无水乙 醇为 6 7 . 7 % , 浸泡时间为 s h , 超声振荡提取时间为 4 h 。
2
.
3 方差分析 : 对以上正交试验结果进行方差分析 , 分析结果见表 5。
方差分析结果 : 对 于汉防己 甲素和乙素提取溶剂中氨水浓度 、 超声振荡提取时间的影响
.
5 7 6
·
均高度显著 , 浸泡时间在本文所取的范围内对两者的影响均不显著 。
2
.
4 结论 : 通过正交试验 , 找到了提取汉防己甲 、 乙素的最佳条件 。 在此条件下测得 汉 防
己甲素的百分含量达到最大值为。 . 6 78 % , 汉防己 乙素的百分 含量达到最大值为 0 . 6 1 . % , 提
高 了 汉 防 己碱 的提取效率 , 提取液 组份简
单 、 稳定 , 提取条件和色谱条件有 良好的兼
表 5 方差分析 容关系 。
变 差 自 方 差方差来源 由 F 值平方和 度 估计值
F 0
.
0 5
( f
一 ,
f
: )
显著性
氨水浓度 0 . 13 2
甲 浸泡时间 0 . 0 04
提取时间 0 。 0 2 6
素 试验误差 0 . 0 01
总和 0 。 1 6 3
氨水浓度 。 . 0 96
乙 浸泡时间 0 . 0 06
提取时间 O 。 08 0
素 试验误差 0 . 0 0 1 9
总和 0 . 1 8 4
3 0
。
0 4 4 8 8
1 0
。
0 0 4 8
1 0
。
0 2 6 5 2
2 0
。
0 0 0 5
7
1 9
.
1 6
18
。
5 1
1 8
。
5 1
显著
不显著
显养
3 0 。 0 3 2 4 0
。
1吐 19 。 1 6
1 0
。
0 0 6 7
。
5 18
.
5 1
1 0
。
0 8 0 1 0 0 18
。
5 1
2 0
。
0 0 0 8
7
著著
不显著
显著
参 考 文 献
北京中医学院主编 . 中药化学 . 上海 : 上海 人 民
出版社, 2 9 7 6 . 8 5
江苏 新医学院 主编 . 中药大辞典 . 上海 : 上海人
民 出版社, 1 9 7 7 . 9 8 1
娄建石, 等 . 中国药理学报 , 1 , 8 8, 9 ( 5 ) ’
4 1 2
杨义方 。 中草药 , 1 9 8 5 , 1 6 ( 6 ) , 4 1
陈浩 按 , 等 . 中国中药杂志 , 1 9 9 3 , 18 ( 4 ) ,
4 1 2
Z h a n g T Y
, e t a l
.
J L i q C h r o m
a t o g r a
,
1 9 8 8
, 1 1 ( 8 )
: 1 6 6 1
。
邓勃编著 . 数理统计在分析化 学 中的应用 。 北京 :
化学工业 出版社, 1 9 8 4 . 3 0 6
防汉己
( 1 9 9 3
一 12 一 2 5收稿 )
( 上接第5 7 2 页 )
表 1 麻黄碱 、 士的宁含 t 测定结
果 ( n = 4 )
表 2 回收率洲定结果 ( n = 4 )
`
1,1473通9口匕.…nJ,`0,二幼二02né00臼ù合户0lbù勺OJ.…Ró.性Où月口80曰OQn户J. cJ``,王1通,二,曰,ù厅`Rōó衬OJOC98R. .…劝土,人,二,盛人no八”ó匕0nu.二OJ.…2j.二
提取方法 样 品
寐 黄
回流 马线子
九分散
含量 (% ) R S D (% )
回收率 R S D
(% ) 心% )
0
。
6 4
0
。
9 7
0
。
1 0
0
。
0 2
提取 样 品
方法
麻 黄
马线子
回流 九分散
标准品添 加量
(m g )
实测量
( m g )
2 。 4
3
。
6
2
。
1
0
。
4
振荡
寐 黄
马钱子
九分散
测定成分
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士的宁
0
。
6 7 0
。
3
0
。
9 9 0
。
8
0
。
0 9 2
。
3
0
。
0 2 3
。
0
麻 黄
马钱子振荡 九分散
测定成
分
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士 的宁
9 0
。
5 0
9 5
。
5 0
9 1
。
0 0
9 3
。
3 3
nù01匕nù0QJ
.…,山,曰,`.工
3 小结与讨论
实验结果表明 , 用 H P L C 法经 1次测定即可对九分散中的麻黄碱和士的宁进行满意 的 定
量 , 从而为九分散的质量控制及检测提供了更为简便可靠的方法 。
样品测定及 回收率测定结果表明用两种方法提取所测 含量相近 , 但振荡法操作简便 , 被认
为是一个更加实用的方法 。
( 1 9 9 3
一 1 2一 3 0收稿 )
《 中草药 》 1 9 9 4年第 25 卷第 1 期 。 5 7 了 ·
份 e e r re l ia b l二
(o rg i in a la r ric l。 。往 Pa 启e 5 73 )
On t he Op t im iz a t io n o f Ext ra ct io n C o n d it io n so T fe t ra n d rin e a n d
o e me t hy lt e t ra n d rln e f ro m Fo u s rt a me n S t e Pha n ia (S t
e P ha n ` a t e t a rn da r)
Z h .n Pa n
,
C h o n P e i
r o n g - . t a l
S o v e r
a l f a c t o r s in f l u e n c i n g t h . o x t r a c t i o n o f t e t r a n d r i n e ` n d d e m e t h y l t e t r a n d r i n o f r o m
C h i n e s e m . d i c in a l h e r b s
,
S *
e P人a ” i a t e t r a 移 d r a 5 . M o o r e w . r e s t u d i o d b y m e a n s o f o r t o g o n a l
m e t h o d
.
T h . o P t i m u m C o n d i t i o n w a s o i g h t h o u r s s t e e P i n g
,
i n 3 3
。
3% a m m o n i a i n a b s o l u t e a lc
-
o h o l f o r f o u r h o u r s u n d e r u l t r a s o n ic a g i t a t i o n
.
T e t r a n d r i n e a n d d e m e t h y l t . t r a n d r i n o w e r 。
d . t e c t . d b y H P L C
.
T h e c o n t e n t s w e r e o
。
6 7 8%
a n d 0
.
6 26沁, t h e d o t e c t io n l i m i t s w o r o s 。 8 7 x l o一
a n d o
。 ` a x l o一 m m o l / L r e s P e c t i v e l y 。
( o r i g i n a l a r t i c l e o n P a g e 5 7 5 )
T h e H o r m o n e ! n g r e d ie n t i n t h e E g g 一 0 11 o f C h i n e s e W o o d f r o g
( R
a n a t e o P o r a r i a c h e n s宕。 e 。 s ` s ) a n d t h e e f f e e t o f E g g 一0 11
o n P l a t e le t A g g r e g a t i o n a n d b l o o d L I P id
L 1 e h e n g y i
,
C h e n G u a n g r o n g
,
S u n W
e n w o i
H o r m o n e i n g r e d i e n t i n t h o e g g
·
0 11
, e g g a n d o v i d u c tu s R a n a . o f R a . a t e 川P o r a r ` a c h e n : ”` e ” : l
1 5 D a v i d 下 c r o s t u d i e d a s w . ll a 一 t h . e f f o c t o f e g g 一 0 1 1 o n P l a t o l. t a g g r o g a t i o n a n d b l o o d l i P -
i d
。
R . s u l t s P r o v e d t h a t t h二 s t r a d i o l c o n t e n t i n t h e . 9 9 一 0 1 1 15 v e r y h i g h 。 T h . e g g 一 0 1 1 c a . o b v -
10 让 一l y i n h ib i t b lo o d P l a t . l e t a g g r e g a t i o n a n d . h o w e d a n h y P o li P em i a a c t i v i t y 。 I t i一 。 x P e c t c d ·
t h a t t h o e g g
一 0 1 1 o f R
。
t e m P
o r a r i a c h e ” 5 1” e ” 5 15 c a 血 b e d e v e l o P e d a s a n e f f i c i e n t m e d i c i n o f o r
t h e P r e v o n t i o 皿 a n d c u r o o f a t h c r o s c le r o s i s a n d h y P e r l i P e m i a i n e l d e r l y 。
( o r i g i n a l a r t i c le o n P a g e 5 8 ` )
P r o t e c t i v e E f f e c t s o f P o l y s a c c h a r id e o f M e m b r a n o u s
M i lk v e t e h ( A
s t r a g a lu ; 。 e m b r a o a e e u s ) o n
A c u t e M y o e a r d i a l l y I n f a r c t e d H e a r t i n D o g
a n d 】t s M a e h a n l s m o f A c t弓o n
L u w . n w o i
,
L . i C h u n l i
,
C h e n Y u
, e t a l
S o v . n t e e n P h y s i o lo g i c a l
,
b i
o c h e m i c a l a n d m o r P h o lo g i c a l i n d e x e s c o n s i s t e n t l y s h o 可 e d t h a t A一
t r a g a l u s P o l y s a c c h a r i d e
m y o c a r d i a l i n f a r e t i o n
,
w a s a b l
e t o e n h a n c拼 t h e m y o c a r d i a c o n t r a c t i l i t y , a t t e n u a t e t h e a r e a o f
a n d r e d u c e t h e d e g r e e o f m y o e a r d i a l d a m a g e
d o g h e a r t i n v i v o
.
T h e m e c h a n i s m m i g h t b e r o l a t e d t o t h e i n h ib i t i o n
& t h
e a n t i
一
f
r e e 一 r a d i e a l
一
d a m
a g e a e t i o n
.
o f m y o c a r d i a l ly i n f a r c t e d
o
f N a
+ 一
K
r 今
A T P a s e a c t i v i t y
( 0 r i g i n a l a r t ie l e o n p a g e 5 8 6 )
《 中草药 》 1 9 , 4年第 2 5卷第 1 1期 · 6 1 5 .