全 文 ：用高效液相色谱法同时测定九分散中麻黄碱
和士的宁的含量
沈阳药学院 (2 1 1 0 05 )
日本北海道药科大学
陈 发 奎 .郭 允珍
鹿野美弘
摘要 用高效液相色谱法在同一测定条件下 ,经一次测定同时对九分散中麻黄碱 ( e p h e d r in e) 和士
的宁 ( s tr y c h in n e ) 进行定量 ; 井对样品提取方法进行了考察。 为九分散的质量控制提供了一个
简便 、 可靠的方法 。
关健词 九分散 麻黄碱 士的宁 高效液相色谱法
九分散为传统中成药 , 处方 由麻黄 、 马钱子 、 乳香及没药各等量组成 , 散剂 , 具活血散
痕 、 消肿止痛功能 。 外用或内服治疗跃打损伤 , 疲血肿痛 ( 90 版药典 36 7页 ) 。 其中 麻兔 中
的麻黄碱和马钱子 中的士的宁均为有效成分 , 且士的宁为毒性成分 , 故可作为含量 侧定的指
标成分 〔陈发奎 , 等 . 药学学报 , 19 9 2 , 27 ( 1 1 ) : 8 5 3〕。 关于九分散中麻黄碱和士的宁测定
方法虽有研究报道 , 但用同一种方法同时对两者进行含量测定未见.报道 。 本文用高效液相色
谱法在同一测定条件下同时对九分散中麻黄碱和士的穿进行含量测定 。
1 对照品及药品
盐酸麻黄碱及士的宁购于中国药品生物制品检定所 ; 各单味中药均为市售品 , 经鉴定为
正品 , 九分散为营口中药厂生产 。
2 实验方法与结果
2
.
1 样品溶液的制备
2
.
1
.
1 回流提取法 : 精密称取九分散 4 9及麻黄 、 马钱子 、 乳香 、 没药粉末 ( 2 0目 以 下 ) 各
gl
, 作为阳性对照 , 同时精密称取缺一味模拟散剂 ( 即缺麻黄 、 缺马钱子 、 缺乳 香 、 缺 没
药 ) 各 g3 , 作为阴性对照 。 分别置圆底烧瓶中 , 准确加流动相项下流动相溶液 20 m l , 水浴 回
流提取 Zh , 滤过 , 残渣再加流动相溶液 15 m l同法提取 。 合并滤液 , 挥散溶剂并定容至 20 m l ,
以滤膜 ( 孔径 0 . 45 卜m ) 滤过 , 即为各自的样品溶液 。
2
.
1
.
2 振荡提取法 : 同上法精密称取九分散及各阳 、 阴性对照样品分别置带盖试药瓶中 , 准
确加流动相溶液 20 m l , 密闭 , 于 50 ℃水浴中振荡提取 hl , 滤膜滤过 , 即为各 自的样品溶液 。
2
.
2 H P L C测定条件及考察 : L C一 S A泵 , S P D 一 Z A 检 测器 , In e r t s i l O D S一 2 , 4 . 6 m m 欠
2 50 m m柱 。
检测波长 : 经测定麻黄碱 、 士的宁的最大吸收波长分别为 20 6 . 9n m 、 Z o 7 . sn m , 同 时
士的宁在 2 5 3 . 6 n m处也有较强吸收 。 成分的最大吸收波长极为相近 , 可把 2 0 7n m作为其共同
测定波长 。 波长选择图谱见,图 1。
流动相 : 选用不同比例的乙腊 、 水 、 磷酸 、 硫酸月桂酸钠进行色谱分析 , 当乙睛一水一磷
酸一硫酸月桂酸钠 ( 3 8 : 6 2 : 0 . 1 , 0 . 5 ) 时吸收峰可较好分离 , 民保 留时间较短 , 故选 为 流
动相 。 考察色谱图见 图 Z A 。
.
A d d r e s s
: C h e n F a k u i
,
S h e n y a n g C o l le g e o f P h a r m a c y
,
S h e n y a n g
《 中草药 》 1 9 9 4年第 25 卷第 1 期
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2 5 0 3 0 0 3 5 0
波 长 几 ( mn )
图 2 流动相与柱沮选择色诊圈
A
一流动相选择 : 左 一乙睛 一水一磷酸一硫酸月 桂碱
钠 ( 3 5 : 6 5 : 0 。 1 : 0 。 5 ) 、 中一 ( 3 8 : 6 2 : 0 。 1 : 0。 5 )
右一 ( 4 0 : 6 0 : 0 。 1 : 0 。 5 )
B
一柱温选择 : 左 一 3 0 . C 中一` 0 . C 右 一 s o O C
色谱峰 . E 一麻黄碱 S 一士 的宁
柱温为 40 ℃时吸收峰可较好分离 , 且保 留 时间较
短 ,
2
.
3
图 1 麻黄碱和士的宁萦外吸收奋
1
一士的宁 2 一麻黄碱
柱温 : 调整不同柱温进行色谱分析 ,
故被选用 。 考察色谱图见 图 Z B 。
标准曲线的绘制: 精密 配 制 麻 黄 碱 0 . 08 一 0 . 8协 g / m l , 士的宁 0 . 08 ~ 0 . 56 卜g / m l浓
度的对照品溶液各 7份 , 分别按以上色谱条件各进样 10衅进行色谱分析 , 由峰面积值绘制标
准 曲线 , 两成分的回归方程式为 :
麻黄碱 : Y = 2 5 . 3 4 7 X 一 1 . 4 3 0 ( n = 7 , r = 0 . 9 9 9 9 )
士的宁 : Y = 6 2 . 3 0 6X + 3 . 2 16 ( n = 7 , r = 0 . 9 9 9 7 )
2
.
4 样品定量色谱峰的确认 : 准确吸取九分散及各阳性对照样品溶液各 15时 , 按选定的色谱
条件测定 , 绘制色谱图 , 对照分析 , 初步确认九分散图谱中的麻黄碱峰 ( 用 E表示 ) 和士 的
宁峰 ( 用 s 表示 ) , 见 图 3 A 。 同样 , 各阴性对照溶液也同法进行色谱分析 , 由色谱图进一步
证实以上确认是正确的 , 且麻黄碱 、 士的宁吸收峰不受处方中其它药味吸收峰的干扰 , 见图
一 B 。
阵日凤ō卜队以ō.日队一ō卜日队ō厂l际ō画!以ō
,哪日以一ùA卜日以ē盯陇声ō
图 5
A
一阳性对照 : I 一九分散
n
一缺马钱子 1
麻黄碱 、 士的宁吸收峰确认色工
n
一麻黄 nI 一马线子 VI 一乳香 V 一没药 B 一阴性对照 : I 一缺麻黄
缺乳香 W 一缺没药 色谱峰 : E 一麻黄碱 S 一士的宁
2
.
5 样品测定 : 准确吸取用 2种方法制备的九分散及麻黄 、 马钱子样品溶液各 15 川 , 按选定
的色谱条件进行色谱分析 , 由峰面积计算样品中麻黄碱和士的宁含量的结果 , 如表 1。
2
.
6 回收率测定 : 精密称取麻黄粉末及九分散各 0 . 19 , 分别加盐酸麻黄碱 Z m g ; 同 样 , 精
密称取马钱子粉末及九分散各 0 . 19 , 分别加士的宁 Zm g 。 以上各取 8份 , 分别按样品溶液 制
备项下 2种方法提取 , 按样品测 定项下方法测定 , 计算回收率 , 结果见 表 2 。 (下转 第5 7 页 )
57 2
均高度显著 , 浸泡时间在本文所取的范围内对两者的影响均不显著 。
2
.
4 结论 : 通过正交试验 , 找到了提取汉防己甲 、 乙素的最佳条件 。 在此条件下测得 汉 防
己甲素的百分含量达到最大值为。 . 6 78 % , 汉防己 乙素的百分 含量达到最大值为 0 . 6 1 . % , 提
高 了 汉 防 己碱 的提取效率 , 提取液 组份简
单 、 稳定 , 提取条件和色谱条件有 良好的兼
表 5 方差分析 容关系 。
变 差 自 方 差方差来源 由 F值平方和 度 估计值
F 0
.
0 5
( f
一 ,
f
: )
显著性
氨水浓度 0 . 13 2
甲 浸泡时间 0 . 0 04
提取时间 0 。 0 2 6
素 试验误差 0 . 0 01
总和 0 。 1 6 3
氨水浓度 。 . 0 96
乙 浸泡时间 0 . 0 06
提取时间 O 。 08 0
素 试验误差 0 . 0 0 1 9
总和 0 . 1 8 4
3 0
。
0 4 4 8 8
1 0
。
0 0 4 8
1 0
。
0 2 6 5 2
2 0
。
0 0 0 5
7
1 9
.
1 6
18
。
5 1
1 8
。
5 1
显著
不显著
显养
3 0 。 0 3 2 4 0
。
1吐 19 。 1 6
1 0
。
0 0 6 7
。
5 18
.
5 1
1 0
。
0 8 0 1 0 0 18
。
5 1
2 0
。
0 0 0 8
7
著著
不显著
显著
参 考 文 献
北京中医学院主编 . 中药化学 . 上海 : 上海 人 民
出版社 , 2 9 7 6 . 8 5
江苏 新医学院 主编 . 中药大辞典 . 上海 : 上海人
民 出版社 , 1 9 7 7 . 9 8 1
娄建石 , 等 . 中国药理学报 , 1 , 8 8 , 9 ( 5 ) ’
4 1 2
杨义方 。 中草药 , 1 9 8 5 , 1 6 ( 6 ) , 4 1
陈浩 按 , 等 . 中国中药杂志 , 1 9 9 3 , 18 ( 4 ) ,
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Z h a n g T Y
, e t a l
.
J L i q C h r o m
a t o g r a
,
1 9 8 8
, 1 1 ( 8 )
: 1 6 6 1
。
邓勃编著 . 数理统计在分析化 学 中的应用 。 北京 :
化学工业 出版社 , 1 9 8 4 . 3 0 6
防汉己
( 1 9 9 3
一 12 一 2 5收稿 )
( 上接第5 7 2 页 )
表 1 麻黄碱 、 士的宁含 t 测定结
果 ( n = 4 )
表 2 回收率洲定结果 ( n = 4 )
`
1,1473通9口匕.…nJ,`0二幼二02né00臼ù合户0lbù勺OJ.…Ró.性Où月口80曰OQn户J.cJ``,王1通,二曰ù厅`Rōó衬OJOC98R.…劝土,人二,盛人no八”ó匕0nu. .二OJ.…2j .二
提取方法 样 品
寐 黄
回流 马线子
九分散
含量 (% ) R S D (% )
回收率 R S D
(% ) 心% )
0
。
6 4
0
。
9 7
0
。
1 0
0
。
0 2
提取 样 品
方法
麻 黄
马线子
回流 九分散
标准品添 加量
( m g )
实测量
( m g )
2 。 4
3
。
6
2
。
1
0
。
4
振荡
寐 黄
马钱子
九分散
测定成分
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士的宁
0
。
6 7 0
。
3
0
。
9 9 0
。
8
0
。
0 9 2
。
3
0
。
0 2 3
。
0
麻 黄
马钱子振荡 九分散
测定成
分
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士的宁
麻黄碱
士 的宁
9 0
。
5 0
9 5
。
5 0
9 1
。
0 0
9 3
。
3 3
nù01匕nù0QJ
.…,山,曰,`.工
3 小结与讨论
实验结果表明 , 用 H P L C法经 1次测定即可对九分散中的麻黄碱和士的宁进行满意 的 定
量 , 从而为九分散的质量控制及检测提供了更为简便可靠的方法 。
样品测定及 回收率测定结果表明用两种方法提取所测 含量相近 , 但振荡法操作简便 , 被认
为是一个更加实用的方法 。
( 1 9 9 3
一 1 2一 3 0收稿 )
《 中草药 》 1 9 9 4年第 25 卷第 1 期 。 5 7 了 ·
A BST RA CT SO FO R! 6 I NA LT A R CIL ES
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T h r . e c y c l o a i t e o 一i d . s 、 r e r e 1 s o l a t . d f o r t h o f i r s t t i m o f r o 也 t h o n 一 B u O H
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M S
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e n t i f i e d r o s P o c t i v o l y a s c y c l o s i e v o r : i o s i d o B
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, ’ . e N M R
,
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.
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l a u n o b i n 。 ( I ) , l i n d c a r P i n e ( 1 ) , l a u r o l i t s i n e ( 皿 ) , 士 P i n o s t r o b i n ( W ) , 士 P i n o e e m b r i n ( V ) ,
o c t a c o s a n o i c a c i d ( 砚 ) a n d 日一 s i t o s t e r o l ( 恤 ) o 立 t h e b a s i s o f e h o m i c a l a n d s P e c t r a l a n a l y s 。一。
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一 s i t o s t . r o l ( I )
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,
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·
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一 e i n n a m a t e ( W ) a n d d a u c o s t o r o l ( 砚 ) 。
( o r i g i n a l a r t i e lo o n P a g e 5 6 9 )
5 im u l t a n e o u s Q u a n t i t a t i
v e De t e r m i n a t i o n o f E Ph e d r i n e a n d S t r y e h n i n e
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C h e n F . k u i
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, 5 1也 P l e a n d s o n s i t i v e m e t h o d
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t i o n a l ` d i c i n e \ J o u f e n 一 a n , b y H P L C . S a m P l e o f 、 J o u f e u s a n , w a s e x t r a c t e d b y s o l v e n t , a n d
t卜e e x t r a c t i o n a n a l y s e d b y H P L C u s i n g a n i n e r t s i l O D S c o l u m n w i t h a s o l v e n t s y . t e m , a c e t o -
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·
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P h o s P b o r i c
a c i d一 o d i u m d o d o c y l s u l f a t e ( 3 a : 6 2 * 0 . 1 * 0 . 5 ) a t ` OO C a n d U V d e t -
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T h e n e w m o t h o d w a s r o li a b l e f o r t h o e v a l u a t i o n o f e p h e d r i n . a n d s t r y c h n i n e i n 叭 J o u f -
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Q u a n t i t a t i
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M a c r o Po r o u : R e s i n P r e : e Pa r a t i o n一 T L C D e n s i于o m e t r y M e t h o d
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r e s i n G D X 一 0 4 a n d i t s s u b s e q u e n t q u a n t i t a t i v o d e t e r m i n a t i o n b y d o u b l e w a v e l e n t h T L C s e a
皿 n I n g w a s d e v o l o P e d . T h r o u g h s a m P l e 吕C a n n i n g -
i t r o v e a l s t h a t t h e s u g g e s t e d m
e t h o d w a s p r e e i s 。
5 t a b i l i t y i n
v e s t i g a t i o n a n d r e c o v . r y t e s t s
,
a n d a e c u r a t e
, t h o r o s u l t s o f d e t e
r m ; n a t i o n
.
6 1 4
.