全 文 ：3 讨论
S O D广泛存在于一切动植物组织中〔5 〕 ,
它能清除自由基的毒性作用 。 L P O 是 自由基
对细胞毒性作用下产生的 。 正常情况时 ,抗氧
化剂 、 抗氧化酶类及一些 中草药是对 自由基
反应的天然 防御物质 ,它 们保护着机体健康
和维持生命 。 S O D 此酶清除了超氧 自由基
( O矛 ) ,从而保护了细胞膜结构及正常功能 。
在实验中 , 我们观察到随着大鼠增龄 , 血
清 中和肝 、 脑 、心 、 肾及肺等组织 中 L PO 均有
显著增加 , 与此同时 SO D 在红细胞中和组织
中有不同程度的明显降低 ,这可能是老龄大
鼠红细胞及组织中脂质过氧化对 SO D 损伤
所致 。
实验表 明 , 赤阳子可提高老龄大鼠红细
胞和肝 、 脑 、 心 、 肾及肺等组织 中 S ( ) D 活性 ,
降低血清及相应组织中 L P O 的浓度 ,具有一
定抗 自由基的作用 , 对抑制 自由基反应所导
致 的损伤和 引起基因突变或癌变 、 衰老等方
面 ,都有保健价值 。
参 考 文 献
1 羊茂 · 滇南本草 . 第 l 卷 . 第二版 . 昆明 : 云南出版社
2 柴 立 ,等 . 贵阳中医学院学报 , 19 8 8 ( 1) : 39
3 丁克祥 , 等 . 老年学杂态 , 19 8 7 , l ( 2 ) : 4 2
4 陈顺志 ,等 . 临床检验杂志 , 19 84 , 2( 1 ) : 8
5 李 文杰 . 生命的化学 , 1 982 , 2 (5 ) : 49
( 1 9 9 6
一
0 3一 2 7 收稿
1 9 9 6
一
0 8
一
2 7 修 回 )
E f f e c t s o f F r u e t u s o f F o r t u n e F i r e t h o r n (产少。 c a n t h a of 材 u n e a n a )
o n S O D a n d L P O i n A g e d R a t
W
a n g H
e s h e n g
,
C h a i L i
,
1 1 S h o u l a n
E f f
e e t s o f f r u e t u s o f yP
r a c a n th a fo rt
u n e a n a o n SO D
a e t iv i t y in t i s s u e s a n d
r e
d
c e
l l
s a n
d l
一
P〔) e o n t e n t in
t i s s u e s a n d b l
o o
d
o
f
a g e d
r a t w e r e s t u d ie d
.
A
e t iv i t i e s o f S O D i
n t i s s u e s a n d r e d e e l l s w e r e d e t e r m in e d b y t h e
m
e t h o d o f p y
r o g a l l ie a e id a u t o x id a t io l l
.
C o n t e n t s o f I P ( ) in t i s s u e s a n d b lo o d w e r e d e t e r m i n e d b y t h e m e t h o d
o
f t h i
o
b
a r
b it
u r ie a e id
e o
l
o r im e t r y
.
R e s 、一lt s s h o w e d t h a t t h e a e t iv i t y o 王S ( ) D in r a t t is s u e s a n d r e d e e ll s g iv e n
f r u e t u s o f P
.
fo rt
u , e a n a w e r e s ig n if i
e a n t l y h ig h
e r t h a n t h a t o f e o n t r o l ( P < O
·
0 5
.
P < 0
.
0 1
,
P < 0
.
0 0 1 ) a n d t h
e
e o n t e n t s o f L P O i
n r a t t i s s u e s a n d b l
o o
d w
e r e s i g n i f ie a n t l y l
o w e r t h a n t h a t o f
e o n t r o l ( P < 0
.
0 5
,
P < 0
.
0 1
,
P
< 0
.
0 0 1 )
.
T h e s e r e s 、 l lt s d e m o n s t r a t e d t h a t f r u e t u s o f P
。
fo rt
u n e a n a
h
a s e e r t a i n a n t is e n il
e e
f f
e e t
.
葛根提取物体外对 T N F 、 11厂 1 及 IL 一 2 产生的影响△
四川省中药研究所 (重庆 6 3 0 0 6 5) 杜德极 来 轰 梅 ` ’ 杨 薇 胡友梅 ’ `
摘 要 体外用 L P S 刺激小鼠腹腔巨噬细胞 (P M叻分泌 T N F 及 I L 一 1 , 用 P H A 刺激小鼠脾细胞
分泌 IL 一 2 的方法来观察葛根提取物对这些细胞因子分泌的影响 。 结果表明葛根提取物在 0 . 08 一 2
拜g /m L 浓度时 ,对 L P S 刺激 P M 甲 T N F 的分泌无影响 , 而对 L P S 刺激 P M甲分泌 .l , 1 , P H A 刺激
脾细胞分泌 .I 一 2 有抑制作用 。 在 10 拌 g /m L 时 ,对 T N F 、 -I 一 1及 1 一 2 的分泌均呈抑制作用 。
关键词 葛根提取物 T N F I L 一 1 I L 一 2
葛根提取物在动物体内能激活腹腔巨噬 细胞的吞噬功能 ,可启动 p ic b an il ( O K 43 2 ) 或
带 A dd r e s s
:
D u D e j i
,
S ie h
u a n I n s t it u t e o f C h i n e s e M
a t e r i a M
e d i e a
,
C h o n g q in g
, ’ 第三军医大学管理教研室 △国家自然科学基金资助项 目
·
1 6 0
.
脂多糖 ( . IP S)在动物血清中产生肿瘤坏死 因
子 ( TN F )〔`〕 。 为 了进一步研究葛根对N T F
产生影响的机理及对其它细胞因子产生的影
响 ,作者观察了体外葛根对 L P S 诱导小鼠腹
腔巨噬细胞产生 T N F 及 IL 一 1 ,对 P H A 刺激
小鼠脾细胞产生 I L 一 2 水平的影响 。
1 材料和方法
1
.
1 药物 : 葛根提取物为稀醇提取物 ( G D ) ,
由本 所 中药制剂 室 提供山 。 刀 豆 蛋 白 A
( C o n A )
、 细菌脂多糖 ( L P S ) 、 放线菌素 D 均
为 iS g m a 产品 。 植物血凝素 ( P H A , 广州医工
所 ) , 地 塞 米松 ( D e x , 成都制药 一厂 ) , R P -
M l l 6 4 o ( (二ib e o ) , 3H 一T d R ( 一上海 原子能研究
所 ) ,均 由第三军医大学药理教研室提供 。
1
.
2 动物及细 胞株 : B A L B c/ 小 鼠 , 雌雄不
拘 , 鼠龄 8一 10 周 ,体重 20 士 2 9 , 第四军医大
学动物实验 中心提供 。 L 9 29 及 c T L I J 细胞
株 由第三军医大学药理教研室保存和提供 。
1
.
3 小鼠腹腔巨噬细胞 T N F 及 n 一 1 的诱
生 〔2〕 :取小鼠数只 ,在无菌条件下 以无胎儿牛
血清 ( F C S ) 的 R P M I 1 6 4 0 收集 腹腔巨噬细
胞 , 经离 心 , 洗 涤 , 用 含 10 % F c s 的 R PM I
1 6 4 0 液调其细胞浓度为 2 X I护 / m L ,将其加
于 2 4 孔板 , 1 m L /孔 , 置 3 7 ` C , 5 % C 0 2 孵箱
内培养 , Z h 后吸弃上清 ,再每孔加入 20 拜g /
m L 的 L P S 及 不 同 浓 度 的 药 液 或 R P M I
1 6 4 0 液 ,总体积 1 m L ,另设 D e x 阳性对照及
空白对照 。 培养一定时间 (取 T N F 样品培养
6 h
, 取 IL 一 1 样 品培养 24 h) , 收集上 清 , 测
T N F 或 I L 一 I 活性 。
1
.
4 T N F 活性检测 〔` , 3〕 : 采用 I洲 9 29 细胞生
物法 , 结 晶紫染色后 , 在 5 40 n m 处测定 O D
值 。 活性以使 50 % I J 92 9 细胞死亡时相应稀
释倍数 计算 ,并 与 r h T N F 标准品校准 。
1
·
5 H
J 一
1 活性检测 〔4〕 : 采用小 鼠胸腺细胞
为靶细胞 ,将胸腺制成单个细胞悬液 ,浓度为
l x 1 0丫m L , 加入 9 6 孔板 x o o 拌L /孔 。然后将
收集 L清样品加入各孔 ,每个样品多个复孔 ,
在 C ( ) : 孵箱中培养 7 2 h , 终 1卜前 s h 加入 3 H -
T d R 10 拼L ( 1 8 . s k B q /孔 ) 。 终止时用多头细
《中草药 》 1 9 9 7 年第 28 卷第 3 期
胞收集器将细胞收集于玻璃纤维膜上 , 80 ℃
3 o m in 烘干 , 置闪烁液中测定 D P M 。
1
.
6 小鼠脾细胞 .lI 一 2 的产生 〔 5〕 : 无菌取 出
小鼠的脾脏 ,将其分散 ,过滤 , 以 0 . 9 % N H 4 e x
破坏 其红 细胞 , 以无 F C S 的 R PM I 1 6 4 0 液
洗脾细胞 2一 3 次 ,再用 1 0% F e s 的 R P M I
1 6 4 0 液调其细胞浓度为 1火 1 0 6 /m L ,加入 9 6
孔板中 , 每孔 1 0 0 拼I才 , 然后加 P H A (终浓度
10 0 陀 /m L ) 及 不 同浓 度 的药液 或 R P M I
1 6 4 0 液 , 总体积 2 0 拌L /孔 。 另设 eD x 阳性
组及空白对照组 ,在 37 ℃ , 5% C O : 培养箱中
温育 24 h ,收集上清液立即测定 I L 一 2 活性 。
1
·
7 IL
一
2 活性检 测 〔 6 , : 采 用 C T L L 细胞生
物法 , 取 96 孔板 , 每孔 加入 C T L L 细 胞液
(用完全 R P M I 1 6 4 0 液调制为 4 x 1 0 5 /m L )
10 0 皿 J , 再加入 脾细胞培养上清 , 于 37 ℃ ,
5% C O
Z 孵箱中培育 2 4 h , 每孔再加入 1 8 . s k B q
3
H
一
T d R
, 继续培育 4 h ,将细胞收集于玻璃纤
维上 ,于液闪中测定 D P M 。
2 结果
.2 1 G D 对 L P S 刺激小鼠腹腔巨噬细胞产
生 T N F 的影响 : 先观察了 L P S 在 20 拜g /m L
时对小鼠 P M甲产生 T N F 时相变化 ,在 6 、 12
及 24 h 培养 _ L清的 T N F 活性分别为 57 . 6
士 1 6 . 8 、 4 4 . 0 士 8 . 4 及 3 6 . 8士 1 . 6 u /m L 。 表
明 L P S 诱导 P M 甲产生 ’ r N F 高峰在 6 h 。 因
此以 6 h 为作用时点 ,观察了 G D 对 L P S 刺
激 P M 甲产生 T N F 的影响 ,结果见表 1 , o , O8
一 2 拼g /m L 对 T N F 产生无影 响 , 当高浓度
1 0 拌g / m l 一 时对 L P S 刺激 T N F 产生有一定
抑制作用 (p < 0 . % ) 。
表 1 葛根对 I_ P S 刺激 P M甲 产生 T N F 的影响
药浓 (拜g / m l )
0
D e x
0
.
0 8
0
.
4
2
l 0
T N F u /m l
, 上清液
5 7
.
8士 1 6 . 8
4 3
.
6士 8 . 4
5 5
,
6士 9 . 6
4 5
.
6士 6 . 8
4 7
.
2士 2 . 8
4 2 4士 4 . 4 任
与 。 比较 ` P < 。 . 05
.2 2 G D 对 L P S 刺激小鼠腹腔 巨噬细胞产
·
1 6 1 .
生 L I一 1的影响 : L P S在 20 拌 g / m IJ时对小鼠
P M, 产生 I L 一 1 的时相变化 ,结 果为 : 6 、 1 2 、
2 4
、
3 6 h 的 上 清 d p m 分 别 为 2 5 2 5 . 6 士
3 2 7
.
3
、
3 0 7 8
.
6 士 5 0 1 . 0 、 5 5 7 2 . 9 士 6 9 8 . 1 及
3 3 1 2
.
5士 4 3 2 . 8 ,表明峰值时间为 2 4 h 。 因此
以 2 4 h 为作用时间 , 观察了 G D 对 L P S 刺激
P M甲产生 lL 一 1 的影响 。 结果见表 2 , 0 . 08 一
10 照 /m L 的 G D 对 L P S 刺激作用有显著抑
制作用 。 高浓度 10 拌g /m L 抑制率达 74 % 。
表 2 G D 对 L P S 刺激 P M , 产生 .l1 一 1的影响
药浓 (雌 /m L ) 11 一 2 d p m /m L
0
.
0 8 3 0 0 7
,
3士 5 4 7 . 3 盛 资
葛 0 . 4 3 7 22 . 4士 6 8 7 . 7 怪
根 2 · 0 36 0 6 · 3士 6 6 5 · 8 .
10
.
0 14 4 0
.
7士 1 2 5 . 0 . 公
L P S 2 0 55 72
.
9士 6 9 8 1
.无x 5 Q 4 8 7 8 . 7士 5 7 7 . 2
0 5 7 9
.
5士 6 8 . 7
C o n A 3 2 6 0 8
.
0士 3 4 0 . 9
用与体内的作用不完全相 同 , 体内 G D 除了
可能与 M , 的直接作用外 , 还有机体一系列
反应过程参与的多方面作用之故 。 本次实验
结果还表明 G D 在 浓度很低 时 ( 0 . 08 拌g /
m L )就可以抑制 20 拌g / m L I一 P S 刺激 M ? 分
泌 IL 一 1及 1 0 拜g /m L P H A 刺激脾细胞分泌
n
碑 ~
2 的作用 。 由于 G D 是稀醇提取物 , 内含
成分复杂 , 因此对 3 种细胞因子的影响是来
自于相同物质或 不同物质 , 以及对这些细胞
因子的影响有无因果关系等问题都需要进一
步研究 。
表 3 G D 对 P H A 刺激小鼠脾细胞上清液
I L
一
2 的影响 x( 士 、 )
与 I P S 比 ` P < 0 . 0 5 , ` 份 P < 0 . 0 1 ( n 一 7 )
2
.
3 G D 对 P H A 刺激小鼠脾细胞产生 I L 一 2
的影响 : 脾细胞在 1 0 拼g /m L P H A 刺激 24 h
产 生的上清 I L 一 2 活性很高 , 葛根对 其 I L 一 2
产生的抑制作用随着浓度增加而增强 , 见表
3
。
3 讨论
G D 在动物体内可促进 L P S 诱导家兔血
清 产生 T N F 〔 ,〕 , 而 本次研究采 用在体外与
P M ? 直接接触 , 观察对 T N F 诱生的影响 , 结
果 G D 在 2 拜g /m L 浓度 以下对 L P S 刺激
M甲分泌 T N F 无影响 , 而在 10 陀 /m L 时呈
抑制作用 ,这表明 G D 在体外与 M甲直接作
药物 ( “ g /m l ) x r 一 2 d p m / m x
0
,
0 8 1 30 55 4士 12 7 63 任
葛 0 . 4 1一沮碑7士 13 3 2 0 ·
根 2 . 0 7 1 34 9士 4 8 3 4 ` “
1 0
.
0 62 56 6士 4 8 6 3 件 苦
PH A 1 0 0 16 93 8 0士 19 2 2 4
I ) e x 5 0 1 1 30 9 5士 7 9 6 4 资 资
0 5 2 3 5 8士 6 9 1 8
与 P H A 比 畏 P < 0 . 0 5 , ` ’ P < 0 . 0 1 ( n ~ 6 )
参 考 文 献
杜德极 ,等 . 中药药理与临床 , 19 5 , 1 1 ( 1 ) : 16
X i a n g D a o B in
, e t a l
. 中国药理学报 , 19 93 , 1生( 4 ) : 3 3 2
T o m k i n s P
, e t a l
.
J Im n
i u n o l M e t h o d s
, 19 9 2
, 15 1 : 3 1 3
杨四旬 ,等 . L海免疫学杂志 , 19 89 , 9 ( 6) : 3 63
陈 奇 , 等主编 . 中药药理研究方法 学 . 北京 : 人 民卫生
出版社 , 1 9 9 4 . 7 7 4
G i l l i s S
, e t a l
.
J Im m u n o l
, 1 9 7 8 , 1 2 0 ( 6 )
:
2 0 2 7
杜德极 ,等 . 中药药理与临床 , 1 9 9 4 , 1 0 ( 2 ) : 1 6
( 1 9 9 5
一
0 6
一
0 5 收稿 )
《中华藏本草 》出版发行
罗达尚主编 , 民族出版社出版 , 医药类 , 16 开 , 1 2 0 0 干字 ,精装定价 : 1 2 8 0 0 元 , 1 9 9 7 年 3 月出版 , ( 1阴N 7 -
1 0 5
一
0 2 6 6 4
一
2 /R
·
5 1 )
。
《中华藏本草 》共收载藏药 1 8 5 9 种 ,其中矿物药 60 种 ,植物药 1 4 1 种 、 92 变种 ,动物药 26 6 种 。 每种药一
般记载有名称 (汉文名 、 藏文名及译音 、拉丁学名 ) 、来源 、 生境分布 、 采集加工 、 药材性状 、 化学成分 、 药理作用 、
功能主治 、 附方 、 附注等项 ,有插图 70 余幅 。 全书 120 余万字 。
该书收载品种多 ,资料丰富可靠 , 可供国内外天然药物学 、 传统药物学之教学 、 科研 、 药检 、 医疗 、 开发利
用 、 生产经营 、 引种栽培等科学工作者及相关部门参考使用 。
购书款汇寄 1 0 0 0 1 3 北京安外和平里北街 14 号民族出版社发行部收 。 外地单位购书须加 2既邮挂费 ,个
人购书须加 1 0% 的邮挂费 。 联系电话 : ( 0 1 0 ) 6 4 2 3 4 4 1 1一 6 2 3 6 ; 6 4 23 4 4 2 1一 6 2 3 7 ;开户行 :工商行北京和平里分
理处 ; 户名 : 民族出版社北京图书发行部 ;帐号 : 。 6 5 1。。一 1 6 。
·
1 6 2
·