全 文 ：绞股蓝总皂试对血小板聚集和血栓形成的影响
武警医学院药理室 (夭津 30 0 1 62)
北京医科大学药学院
齐 刚 专
李长龄
张 莉
马 健 苏亚峨
摘 要 研究了绞股蓝总皂贰 ( gy p eno sid es, G P) 灌服给药对血小板聚集和血栓形成的影响 。 结果
发现 G P ( 50 、 10 m g k/ g , 19 )对二磷酸腺贰 (A D P) 、 花生 四烯酸 (A A )及胶原诱导的大鼠血小板聚
集有明显的抑制作用 ;体外实验表明 G P( F C 10 0 、 20 雌 /m L )对血小板活化因子 ( P A F) 诱导的家兔
血小板聚集有明显的抑制作用 。 G P ( 10 、 2 0 m g k/ g , 19 )对大鼠实验性脑血栓 、 体外动脉血栓及小
鼠肺血栓的形成均有明显的抑制作用 。 并呈剂量依赖关系 。 提示绞股蓝总皂贰为一血小板功能抑
制剂 。
关键词 绞股蓝总皂贰 血小板聚集 脑血栓 动脉血栓 肺血栓
绞 股 蓝 伪 nt’ st e m m a Pe nt Pa 勺 lul m
( T h u n b
.
) M ka
. 为葫芦科绞股蓝属植物 , 主
要 有效成 分 为 绞股 蓝 皂贰 ( g y p e n o s id e s ,
G P )
。 目前已分离鉴定出 80 余种皂贰 ,做为
五加科以外唯一含有与人参皂贰结构相似皂
贰的植物 , 已引起国内外学者的普遍重视 〔` 〕 。
作 者在研 究 G P 灌 服给 药对 二磷 酸 腺 贰
( A D P )
、 花生 四烯酸 ( A A ) 及胶原诱导 的大
鼠血小 板 聚 集及体外对血小 板 活 化 因 子
( P A F) 诱导的家兔血小板聚集的影响的基础
上观察 了 G P 对大鼠实验性脑血栓 、 体外动
脉血栓及小鼠肺血栓的形成的抑制作用 。 为
临床用药提供理论依据 。
l 材料
1
.
1 动物 : 雄性 W i s at r 大鼠 2 0 0一 2 5 0 9 ;雄
性昆明小 鼠 18 一 2 9 ; 雄性家兔 2 . 2一 2 ` 5
吨 ;北京医科大学实验动物中心提供 。
1
.
2 药品与试剂 : G P (含量大于 90 % ) , 华
光实业有限公司提供 ; G P 片 ( 20 m g /片 ) , 陕
西安康中药厂出品 ; 阿斯 匹林 (A s A )北京市
朝阳门药品分装厂出品 ; A D P , Fl u k a 公司出
品 ; A A 胶原 ( e o l la g e n ) , S ig m a 公 司 出 品 ;
P A F
,
Be hc
a m 公司 出品 ; 凝血酶 , 广 东珠海
经济特区生物化学制药厂出品 ;伊文思蓝 ,上
海新兴化工厂 出品 ;柠檬酸钠 , 无水硫酸钠 ,
丙酮等 ,均为市售分析纯试剂 。
1
.
3 仪器 : D P 一 2 4 7 E 型血小板聚集仪 ( S ie n -
oc
, 玩 c ) ; 7 2 1一分光光度计 , 上海第三分析仪
器厂 ; T J一 R 型离心机 ( B e e km a n ) 。
2 方法和结果
.2 1 G P 体内给药对大鼠血小板聚集的影
响 〔, · 3〕 :取大鼠 , 随机分为对照组 、 G P ( 50 、 1 0
m g /k g )组及 G P 片 ( 1 0 0 m g /k g ) 组 , 分别按
剂量 19 给药 s d , 于末次给药后 l h , 以戊 巴
比妥钠 Pi 40 m g / k g 麻醉 , 腹主动脉取血 (以
3
.
8 %柠檬酸钠 z : 1 0 抗凝 ) , 1 5 0 0 r 离心 1 0
m in 制备富血小板血浆 ( p R P ) , 3 0 0 o r 离心
1 0 m in 制备贫血小板血浆 ( P P P ) , 以 P P P 调
节 P R P 为等浓度 , 取 0 . 3 m L P R P 加入 比浊
管 中 , 于 37 ℃温育 l mi n , 分别加 入 A D P 、
A A 及胶原适量 , 以血小板聚集仪测量 P R P
浊度的改变 , 记录聚集率 , 计算聚集抑制率 :
结果表明 G P ( 5 0 , 1 0 0 m g / k g ) 19 给药 s d , 对
A D P
、
A A 及胶原诱导的大鼠血小板聚集 , 均
有 明显的抑制作用 , 其中对 A A 诱导的血小
板聚集抑制作用最强 , 与阳性对照药相 比 , 相
同剂量 G P 的作用无显著差异 。 见表 1一 3 。
2
.
2 G P 体外给药对 P A F 诱导的家兔血小
板聚集的影响 : 取健康家兔 , 经耳动脉取血 ,
以 3 . 8%柠檬酸钠 1 : 10 抗凝 , l 0 0 0 r 离心
A d d
r e s s :
Qi G
a n g
,
T h
e A r m e d P o l ie e f o r e e s o f P L A M
e
d i
e a
l C
o ll
e g e
,
T ia n j i
n
《 中草药 》 1 9 9 7 年第 28 卷第 3 期 . 1 6 3 ·
10min
, 制备 P R P ,取 0 . 3 m L P R P 加入 比浊
管中 , 37 ℃温育 1 m ni , 加入 G P 或空白溶剂
适量 , 1 m ni 后加入 P A F 适量 , 同上测定并
计算聚集抑制率 。
表 l 灌服 G P 对 A D P 诱导的大鼠血小板
聚集的影响 ( x 士 : )
组别 剂量 动物数
(m g / k g ) (只 )
聚 集率
( % )
抑制率
(% )
对照 H 朋 . 5士 7 . 3
G P 5 0 9 2 0
.
0 8士 8 , 0 5 . 份 7 0 . 6 6
G P 1 0 0 9 1 7
.
8 9士 7 . 4 5 母 . 7 3 . 8 3
G P 片 1 0 0 1 1 1 7 . 8 0士 6 . 2 3 ’ “ 7 4 . 0 1
与对照组 比较 “ 尸< 0 . 05 ’ ` p < 。 . 0 1 (下同 )
表 2 灌服 G P 对 A A 诱导的大鼠血小板
聚集的影响 (x 士 、 )
组别 剂量 动物数 聚集率 抑制率
( n
l g / k g ) (只 ) ( % ) ( % )
对照 一 H 60 . l 士 .7 3 一
G P 5 0 1 0 4
.
4 2士 1 . 9 0 . 哥 9 2 . 6 0
G P 1 0 0 1 1 3
.
3 0士 0 . 9 5 任 号 9 4 . 5 0
G P 片 1 0 0 1 1 2 . 4 7士 1 . 2 7 ’ ` 9 5 . 9 0
2 0 0 m g / k g ) 组及 A S A ( 3 0 m g / k g ) 组 , 分别
按剂量 19 给药 s d , 于末次给药后 1 1飞 , 以戊
巴 比妥钠 i p 30 m g / k g 麻醉 , 分离右侧颈总
动脉 , 结扎近心端 , 向远心端方向注入复合血
栓诱导剂 1 m L k/ g ( A D P I . 25 m m ol / L : 凝血
酶 1 2 . 5 拜 /m L : 肾上腺 素 1 m g /m L ; 10 0 :
2 0 0 , 5 )
,
5 m i n 后 注 入 0 . 2%伊 文 思 蓝 5
m L k/ g
, 再过 5 面 n , 迅速断头 , 取两大脑半
球 , 称重 , 剪 碎置于 匀浆器 中 , 加 入 0 . 5%
N a
Z s o
。 3m L 及丙酮 7 m l, 制成匀浆 , 密封静
置 l h 后 , 3 0 0 o r 离心 1 0 m i n , 取 上清液 , 以
N S 调零 , 在 6 20 n m 处比色测定吸收度 ( A )
值 , 以吸收度与脑重 的比值表示伊文思蓝的
含量 , 以此表示脑血栓的严重程度 。 结果 G P
( 5 0一 2 0 0 m g / k g ) 19 给药 s d , 对大鼠实验性
脑血栓的形成有显著的抑制作用 。 见表 5 。
表 5 灌服 G P 对大鼠实验性脑血栓
形成的影响 (二士 、 )
表 3 灌服 G P 对胶原诱导的大鼠血小板
聚集的影响 x( 士 , )
_ _
_
. 荆量 动物数 聚集率 抑制率纽另吐
( m g / k g ) (只 ) ( % ) (% )
对照 一 8 6 9 . 1士 8 , 0 一
G P 50 8 15
.
0 0士 6 , 7 2 价 怪 7 8 . 3 0
G P 10 0 9 5
.
3 3士 3 . 9 1 黄 并 9 2 . 3 0
G P ) ;
一
10 0 10 4
.
4 0士 1 . 8 8 ` , 9 3 . 6 5
组别 剂量 ( m g / k g ) 动物数 (只 ) A 脑重 ( / g )
对照 一 9 0 . 0 9 5士 0 . 0 04
G P 5 0 1 0 0
.
0 3 9士 0 . 0 12 母 姗
G P 1 0 0 8 0
.
0 3 6士 0 . 0 1 1 价 贾
G P 2 0 0 9 0
.
0 3 3士 0 . 0 15 甘 肠
A S A 3 0 8 0
.
0 3 2士 0 . 0 17 母 资
G P 体外给药 , 在终浓度 为 50 一 20 0 拌g /
m L 时对 P A F 诱导 的家兔血小板聚集有不
同程度的抑制作用 , 以 1 0 、 20 0 拌g /m L 作用
显著 , 并呈剂量依赖关系 。 见表 4 。
表 4 体外 G P 对 P A F 诱导的家兔血小板
聚集的影响 (王士 , )
组别 终浓度 动物数 聚集率 抑制率
( 拜g /Yn l ) (只 ) (% ) ( % )
对照 一 5 8 5 . 34 士 1。 · 5 4 一
G P 5 0 3 7 4
.
0 0士 8 . 7 2 1 1 . 9 2
G P 1 0 0 5 6 2
.
3 0士 1 2 . 6 6 苍 28 . 5 4
G P 片 2 0 0 5 5 1 . 6 0士 1 2 . 6 0 “ 3 9 . 6 6
.2 3 G P 对大 鼠 实验性脑血栓形 成 的影
响 〔` , 。 取大鼠 , 随机分为对照组 、 G P ( 5 0 、 1 0 0 、
·
1 6 4
.
.2 4 G P 对大鼠体外动脉血栓形成的影响 :
取大 鼠 , 随机 分为 对照组 、 G p ( 5 0 、 1 0 0 、 2 0 0
m g k/ g )组及 A S A ( 30 m g k/ g )组 。 分别按剂
量 19 给药 s d , 并 于末次给药后 l h , ip 戊巴
比妥 钠 40 m g k/ g 麻 醉 , 腹 主动 脉 取血 1
m I
J , 注入血栓检测管中 , 3 7 `C 置 于血栓检测
器中检测血栓形成 , 以血栓长度及 50 `C 干燥
s h 后干重表示血栓形成的程度 。 结果 , G P
( 50 一 2 0 0 m g / k g ) 可降低大 鼠体外血栓形成
的长度和重量 ,其 中以 G p ( 1 0 0 、 2 0 0 m g / k g )
作用显著 , 并呈剂量依赖关系 。 见表 6 。
.2 5 G P 对小 鼠急性肺血栓形成的影响〔” :
取小 鼠 , 随 机分为对 照组 、 G p ( 5 0 、 1 0 0 、 2 0 0
m g k/ g )组及 A S A ( 30 m g k/ g ) 组 , 分别按剂
量连续 19 给药 s d , 并于末次给药后 l h , 于
尾 静脉注射 A D p ( 7 0 0 m g / k g ) , 观察 3 m i n
内死亡动物数 , 以死亡动物数 /实验动物数表
示药物对小鼠肺血栓形成的抑制作用 。 结果
表明 , G P ( 5 0一 2 0 0 m g / k g ) 可降低动物的死
亡率 , 对小鼠肺血栓的形成具有抑制作用 , 以
1 0
、
20 0 m g / k g 组作用显著 , 并呈剂量依赖关
系 。 见表 7 。
表 6 灌服 G P 对大鼠体外动脉血栓
形成的影响 (二士 、 )
组别 剂量 动物数 血栓长度 一于重
(m g / k g ) (只 )
对照 9 3 4 . 0 8士 1 4 . 0 5 2 6 . 1 8士 1 3 . 0 8
(子P 5 0 1 0 2 5 . 3 1士 1 0 . 5 1 1 6 . 2 8士 4 . 9 4 务
G P 10 0 9 1 7
.
3 3士 5 . 3 6 否 . 1 2 . 2 2士 4 . 3 5 且 戈
G P 2 0 0 8 1 4
.
9 5士 3 . 3 2 漪 份 1 0 . 5 4士 4 . 0 9 苍 朴
A S A 3 0 8 2 2
.
2 0士 8 . 0 3 朴 1 2 . 1 4士 3 6 0 . 备
表 7 灌服 G P 对 A D P 引起的小鼠急性
肺栓塞的影响
组别 剂量 动物数 死亡数 存 活率
( m g / k g ) (只 ) (只 ) ( % )
对照 一 1 0 8 2 0
G P 5 0 1 0 5 5 0
G P 1 0 0 1 0 3 晋 7 0
G
一 、 2 0 0 1 0 3 苍 7 0
A S A 3 0 1 0 7 3 0
3 讨论
本实验结果表明 , G P 口服可明显抑制
A D P
、
A A 及胶原诱导的大鼠血小板聚集 , 其
中对 A A 诱导的血 小板聚集抑制作用最强 ,
但对上述 3 种诱导剂无明显的选择性 。 已有
实验表明 G P 抑制血小板聚集与其抑制血栓
素 A : ( T X A : ) 合成酶 环节有关 〔 6〕 , 而 T X A Z
是血小板聚集和释放反应很强 的诱导剂 , 血
小板聚集的生理途径取决于 T X A 。 的产生 。
近常认为 , 刺激血小板聚集可导致膜内磷脂
酶的激活 , 继之释放 A A 并转变为前列腺素
内过氧化物及 T X A : , 进而引起血小板聚集 ,
这可能是 G P 对 A A 诱导的血小板聚集抑制
作用较强的原因 。 体外实验发现 G P 对 P A F
诱导的家兔血小板聚集有 明显的抑制作用 ,
表 明 G P 对 血小板聚集的抑制作用 可能与
G P 抑制血小板 活化的三条主 要途径川 : 即
A D P 途径 、 A A 的环氧化酶代谢途径和 P A F
有关 。
G P 对大 鼠实验性脑血栓 、 体外动脉血
栓及小鼠急性肺血栓的形成均有 明显的抑制
作用 , 而这一作用是其抑制血小板聚集作用
的结果 。 在复合血栓诱导剂中 A D P 使纤维
蛋 白原与相应位 点结合 , 并使血小板 内贮的
C a Z + 释放 , 进而促进内源性 A A 释放而致血
小板聚集 , G P 对 A D P 及 A A 诱导的血小板
聚集有抑制作用 ; 而这种抑制作用可能与降
低细胞内 C a Z斗浓度有关 。 G P 对细胞内 C a “ +
浓度的影响及作用机制有待进一步研究 。
临床上多以 G P 做为降血脂药应用 , 而
我们的实验结果表 明 , G P 是一种血小板 功
能抑制剂 , 为临床用于血栓疾病的 防治提供
了理论依据 。
参 考 文 献
1 周和平 . 药学通报 , 1 95 5 , 2 3 ( 1 2 ) : 72 0
2 吴基 良 , 等 . 中国药理学与毒理学杂志 , 1 99 1 , 5 (2 ) : 84
3 B o r n G V R
.
N
a t u r e , 1 9 6 2 , 1 9 4 : 9 2 7
4 周以华 , 等 . 药学学报 , 29 8 8 , 2 3 ( 5 ) : 3 3 2
5 王银叶 , 等 . 巾国药理学通报 , 19 5 , 1 1 ( l ) : 82
6 李 林 , 等 . 中国药理学通报 , 19 8 9 , 5 ( 4 ) : 2 1 3
7 V
a r a g a f i t ig B B
, e t a l
.
B lo e h
e
m P h
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m
a e o l
, 1 9 8 1 , 2 4 : 2 6
( 1 9 9 6
一
0 5
一
0 4 收稿 )
安徽高校联合培训部中医 、兽医函授班招生
经省教委批准 , 第六期兽医 、 第十一期中医函授班继续向全国常年招生 , 使用全国高等院校统编教材 , 由
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《 `寸`草药 》 19 9 7 年第 艺8 卷第 3 期 一 1 6 5 .