全 文 ：石上柏和蒲葵子对蛋白激酶
活性的影响△
广东医学院医用生化研究所
湛江
  !

黄 才
卓燕梅 梁念慈
摘姿 采用


 柱层析法部分纯化大 鼠中的蛋白激酶
, 研究了石上柏和蒲葵子醇提物对蛋白激
酶
活性的影响。 为了证明测定系统的可靠性 , 观察了多粘菌素

已知蛋白激酶
抑 制剂
对蛋
白激酶
活性的影响 。 表明
石上柏醇提物对蛋白激酶
有强烈的抑制 作 用 ,

。。


协







卜



的蒲葵子醇提物对蛋白激酶
的抑制率为




, 降低药物浓度抑制作用减弱
多 粘菌
素
对蛋白激酶
有抑制作用 ,

。。






。
关锐词 石上柏 蒲葵子 蛋白激酶

蛋白激酶





是一仲


十和磷脂酸丝氨酸


激活的蛋白激酶, 在细胞跨膜信
号传递中起着重要作用〔
〕。 己有许多证据〔


〕表明 , 蛋白激酶
与细胞增殖有关 , 许多蛋白
激酶
抑制剂对细胞增殖有抑制作用 , 而一 些抗癌药本身就是蛋 白激 酶
的抑制剂。 因此 ,
寻找新的蛋 白激酶
抑制剂可能是研制和开 发新抗癌药的 有效途经 。
许多中草药有抗癌活性 。为了从中草药中筛选蛋白激酶
的抑制剂 , 我们观察了石上柏及
蒲葵子醇提物对蛋白激酶
活性 的影响 。

材料
组蛋 白

,
 ,






,
 ! 为



产品



为上海东风 试 剂 厂 产 品,


为




产 品 ,
  纤 维 素




为






产品 , 〔
一
,
〕














购自北京福瑞生物工程公司 , 多粘菌素
为



产品 , 石上柏 , 蒲葵子 采自广东
地区 , 经本院中心实验室关雄泰教授鉴走 。 大鼠购自广东医学院动物中心 。

方法



醇提物的制备
石上柏或蒲葵子

, 加

乙醇
 ℃回流抽提


, 过滤收集滤 液 ,
抽千 。 称取醇提物千品, 加少量


溶解 , 临用前用双蒸水稀释 。



蛋 白忿激酶
的提取及部分纯化
将大鼠

只
处死 , 迅速取出脑组织 。以下操作在。一

℃进行 。 用生理盐水洗涤脑组织 , 然后加入
倍体积的

















一

 ,





,








蔗糖 ,







 ! ∀ ,








 ,











冰浴匀浆。 匀浆液于





离心




, 取上清液 。 用






















一

,




,
·







 ! ,











,

,






一琉基乙醉

平衡
一
柱







, 然后将上清液上柱 , 用含










的






流 洗
未被吸附蛋白质。 最后用




含














的






进行线性梯度洗脱 ,
流速




。 分管收集洗脱液 , 测定蛋白激酶
的活性 。



蛋白激酶
活性的测定〔
〕
反应混合物总体积
 协
, 内含










一

,





,










,












,

件

,
”






,
 卜
组蛋 白兀
,


协




〔丫一

〕



卜


, 酶蛋白约
林
, 并根据实验设计加入适量的药物。 以上
条件下测得的活性减去用







 ! 代替


十 ,
和






所欢
得的活 性 , 即 为













,









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△国家自然科学基金资助项 目
一
4 1 4
活性 。反应温度30 ℃ , s m in , 用 10时冰醋酸终止反应 。 将反应液 滴在滤纸片上 , 阴干 场
滤纸片依次用 10 % 三氯醋酸 (含 , m m o l/ L A T P ) , 95 % 丙酮处理 , 然后进 行 液 闪计数。
3 结果和讨论
3.1 蛋白激酶C 的部分纯化 : 图1示大 鼠脑蛋 白激酶C 在D E 52 上的 层析谱 。 活性曲线 上 出
现2个峰 , 1个出现于 som m o l/L N a C I处 , 另1个 出现于 110m m o l/L N a C I处 。 取 第 1个
峰活性高的管进行 以下实验。
3
.
2 石上柏醇提物对蛋 白激酶C 活性的影响: 结果见图2 , 4 0 件g / m l的 石上柏醇提物对蛋 白
激酶C 的抑制率为90% , 半数抑制浓度 ( IC 6。 ) 为2.2协g / m l, 表 明石上柏醇提物对蛋白激
酶C 有强烈的抑制作用 。
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图1 大鼠脑蛋白激醉C在O E 52上的层析图 图2 石上柏醉提物对蛋白激醉C 活性的影晌
3 .3 蒲葵子醇提物对蛋白激酶C 活性的影响: 结果见表1, 1 0 0 卜g / m l的蒲葵子醉提物对蛋白
激酶活性的抑制率为 66 .6% , 降低药物浓度抑制作用减弱 。
3
.
4 多粘菌素B对蛋白激酶C 活性的影响: 多粘菌素B是 已知的蛋白激酶C 抑制剂〔7〕。 图3 示
多粘菌素B对蛋白激酶C 有抑制作用 , 半数抑制浓度 ( IC 。。 ) 为17.7u/m l : 说明本测定系统
是可靠的 。
蛋白激酶C 是肌醇脂质信使系统中的一个关键酶 、 在细胞 的增殖分化中起 着 重 要 的作
用 。 现 已发现 , 蛋白激酶C 的抑制剂对细胞增殖有抑制作用 , 而一些临床上使用的抗癌药 如
tam oxi fen , 阿霉素就是蛋 白激酶C 的抑栩剂〔“〕。 因此筛选蛋白激酶C 的抑制剂是 开 发 新
封奚”粉基鬓一(J价)斗履琴
抗癌药的一个有效途径 。
表 蒲葵子醇提物对蛋白激酶C
活性的影晌
药物浓度
(卜g / m l )
蛋白激酶C 话
性(e p m )
抑制率(% )
蒲葵子 0 3795土 1 2 _
蒲葵子 40 1660土 1 2 5 5 6 .2
蒲葵子 100 126 , 士3 9 6 6 . 6
据文献〔幻报道 , 石上柏和蒲葵子具有 抗
癌活性 , 本实验表明石上柏和蒲葵子醇 提物
对蛋白激酶C 有抑制作用 , 提示其抗 癌 活性
多枯菌东B 月: U 加1
图3 多钻菌紊B对蛋白激醉C 活性的影晌
可能与此有关 。 深入研究石上柏和蒲葵 子 抑制蛋 白激酶C 的成分有可能发现新的杭癌药 ,
或发现新的 蛋 白激酶C 的抑制剂 。 本研究有助于阐明石上柏和蒲葵子抗癌的 分 子 机理汤‘
( 下转第4冷页 )
《中草药 》1 9 9 5年第26 卷第8期
. 4 15 .
异不显著 。 但从中可以看出一用药后升高的趋势。
2
.
3 用药3周对大鼠翠丸D N A 含量 的影响: 结果见表3 。 空 白对照组D N A 含量最低 ( 2 .85
士 0 .9 6m g / g ) , 各组与该组 比较 , 其D N A 含量均有所升高 , 尤以蚂蚁水提液组和中药 组
比较显著 ( 尸< 0 . 05 ) , 复方蚂蚁口服液小剂量组亦与阳性对照组 ( 丙酸皋丸素 ) 接近 。
3 讨论
现在人们越来越重视D N A 、 R N A 的生物学活性 。 D N A 一R N A 结构与功能的研究能解释
细胞 的许多生命现象 , 而D N A 、 R N A 含量的测定也能在一定程度上说明生命现象 。 D N A
是细胞生物功能及遗 传 信 息 ·的载体 , 而 D N A 控制并从D N A 模板_仁转录的R N A 具有许多
生物学活性 。 这些物质含量的多少决定着细胞功能的强弱 。 在皋丸中进入分裂周期的精原细
胞越多 , 则单位重量 的D N A 含量越多; 肇丸间质细胞功能越活跃 , 则单位重量 的R N A 含
量越多。 以往我们 用叮陡橙荧光染色的方法已经发现服用蚂蚁提取物的诀验动物除能增强免
疫功脂外 , 胸腺细胞 、 淋巴细胞及皋丸间质细胞和精母细胞内的D N A 、 R N A 含量增加 。 本
文进一步检测了应用不同方法提取和不同剂量的大黑蚂蚁提取液与复方蚁制剂的大鼠皋丸中
D N A 、 R N A 含量 , 并作定量分析 。 再次证明蚁提取液能够使被试动物攀丸重童及其脏器指
数增加 , 攀丸组织中R N A 与D N A 含量用药后与不用药组 比较有一显著增高的趋势。 这与我
们另一研究成果 , 即应 用蚂蚁制剂 4 周能够提高性腺重量 , 分泌皋酮的间质细胞数增多 , 电
镜下见用药组分化旺盛 、代谢活跃 , 血清性激素水平增高的结论相一致 。
关于蚂蚁制剂能够增加翠丸组织中的核酸含量的作用机制尚不清楚 。 初步分析可能与该
制剂富含微量元素M n 、 Z n 、 S e 及大量人体必需的氨基酸 , 维生素E 和卜胡萝 卜素等有关〔5〕。
维生素E缺乏则出现雄鼠争丸萎缩 , 不产生精子 。 雌鼠则会导致胎盘萎缩与流产 。 M n 可 激
活 R N A 与D N A 聚合酶 , 促进核酸的合成〔6 , 7 〕。 其它元素亦是多种酶类的组分或激活 剂 ,
又是维持正常生殖 的必需元素。
因此 , 蚂蚁提取物及其复方制剂对生殖系统与核酸代谢的作用可能是各种因素综合作用
的结果 。 对此有待进一步深入研究。
参 考 文 献
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(上接第415页 )
参 考 文 献
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o n s in d iff ere n t d o sa g es o n th e a m o u n t o f R N A a n d D N A in th e testes o f m iee w ere ob ser -
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t h e t e s t e s w e r e e x e i s e d a n d w e i g h e d 。 T h e R N A a n d D N A i n t h e t e s t e s w e r e i s o l a t e d a n d
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