全 文 ：构祀多糖中中性糖的含量测定
华中农业大学生命科学技术学院 (武汉 4 3 0 0 7 0) 何 进 岑 梁运祥 阎淳泰
摘 要 采用苯酚 一硫酸法显色 , 探讨了测定波长的选择 、标准 品的配制以及半乳糖醛酸干扰的
校正等问题 , 建立了测定拘祀多糖中中性糖含量的简便方法 。
关键词 拘祀多糖 中性糖 含量测定
拘祀多糖 (L B P )具有增强免疫力 、抗癌 、 室 自制 。
抗衰老等方面的药理作用〔‘一 月 。 但 目前 L BP 1 . 2 试剂 : 各种单糖均为上海试剂二厂生产
的药理及临床试验 , 多以其粗制品进行 , 样品 的生化试剂 . 半乳糖醛酸 (S ig m a 公司生产 )
未达到应有的纯度 , 活性说不清楚 、结构无法 及其它试剂均为分析纯 。
确 定 。 何进等从 构祀 中分离得 到 L B P一 I 、 1 . 3 仪器 : 岛津 U V 一 2 6 5 FW 紫外可 见分光
L B P
一
l
、
L B P
一
l
、
L B P
一
IV 4 种 LB P , 都是 由 光度计 , Ic m 色皿 。 波长扫描使用峰检测功
A r a
、
R ha
、
X y l
、
M a n
、
G a l
、
G le 与 G a lA 组 成 能 , 读取最大吸收波长及最大吸收值 。
的酸性杂多糖同多肤或蛋白质构成的复合多 2 方法与结果
糖 。 复合多糖中氨基酸含量 以氨基酸 自动分 采用苯 一硫酸法川测定中性糖含量 , 应注
析仪测定 ; G al A 以咔哇一硫酸法 〔们测定 , 此时 意 2 个问题 : 第一 , 由于每种 多糖含多种单
中性糖无 干扰 ;单糖组成的摩尔 比以 G C 法 糖 , 不同单糖显色反应 的最大吸收波长与最
测定 。 G C 法操作复杂 . 样品在操作过程中有 大 吸收值有一定差异 (表 1 ) , 如何选用标准
损失 , 直接计算各种单糖 含丝 . 误差很大 。 本 及测定波长是本实验的关键 ; 第二 G al A 能
文着重讨论各种 L BP 中中性糖含量的测定 参 与显色反应 . 其显色特 征 (见表 1) 与单糖
方法 。 有很大差异 。 这样 , 多糖中 G al A 的存在 (含
1 材料与仪器 址 见表 2) 对 中性糖含量的测定产生干扰 。
1
.
1 样 品 : L BP 一 l 、 L B P一 l 、 L B P一 IV 本实验
表 1 6如g / ml 各种糖溶液的苯酚 一硫酸显色特征
显色特征 R h a D e x t r a n A r a G le
最 大吸收波长 (n m )
最大吸收度值
4 7 8
.
3
1
.
4 12
M
a n
4 8 9
.
4
1
.
0 5 4
4 8 0 9
l
,
0 5 0
48 7
.
5
0
.
94 6
4 7 9
.
0
0 8 5 4
4 8 7
.
7
0
.
8 2 2
4 8 8
.
9
0
.
6 9 1
G
a
lA
4 8 1
.
4
0
.
3 0 0
为解决上述问题 , 采取以下两种措施 。
第一 : 分别采用与相应 L BP 中单糖组成
摩尔比 : 相同的单糖混合物作标准 , 在显色反
应 的 呱 a 、处测 定吸收 值 (A B S )建立 回归方
程 。 xJB P一 亚的标准以 IOOm g A r a 、 SOOm g R h a 、
so m g M a n
、
Zo o m g G a l
、 及 x 5 Om g G le 溶 于
l o o m l 水 中 , 稀 释成 浓 度 (C O N C )为 10 一
10 0拌g / rn l 的标 准 系列 , 显 色 . 在 入。a 、 4 8 2 n m
处 测 定 A B S . 建 立 回 归 方 程 : A B S 一 。
、
A d d r e s S
:
H e Jin
,
In s tit u t e o f L ife S e ie n e e a
W
u h a n
0 1 2 3 OC ()N C + 0
.
O 1 9 3 9
. r
= 0
.
9 9 9 9
。
L BP
一
l
、
L BP
一
W 单糖组成基本 一致 , 采用同一标准 ,
即 以 ZOOm g A r a 、 4 5 Om g R ha 、 I OOm g X y l、
SOm g M a n
、
IOOm g G I
。 溶于 IOOm l水中 , 稀释
成 C()N C 为 10 一 10 0拼g / m l的标准系列 , 显
色 , 在 孤。、 4 8 2n m 处测 定 A B S , 建立 回归方
程 , A B S = 0 . 0 1 2 9 3 C O N C + 0 . 0 2 7 14 , r = 0 .
9 9 9 9
。
n d T e eh n o lo g y
,
M id dl
e C h in a A g r ie u lt u r a l U n iv e r s ity
,
配制 10 。“g / m l 左右 的各种 多糖溶液 , 样品中 G al A 的含量 , 可以计算出它在 L B P
在各 自的 入ma 二 (均为 4 8 2 n m )处测定其 A B S 。 显色反应中产生的 A B S (结果见表 2 ) 。
第二 , 建立与不同标准 (或样品 )比色波 样 品 的 A B S 与样 品 中 G al A 产 生 的
长相对应的 G al A 的苯酚 一硫 酸显色反应 的 A B S 之差即为中性糖所产生的 A B S , 再根据
回归方程 , 由于 L BP 一 l 、 L BP一 w 及其标准的 对应标准的回归方程计算出该样品中中性糖
硫a 二相 同 , 只需 建立 一 个 回 归方 程 : A BS 一 含量 , 结果见表 2 。
0
.
OS O8 4 CO N C 一 0 . 0 0 5 0 2 3 , r = 0 . 9 9 9 6 。 根据
表 2 中性枪含量的计算 (入为 4 8 2 n m )
构祀多糖 浓度
(拜g / m l)
吸收度值
(4 8 2n m )
半乳搪醛酸
含量 (% )
半乳糖醛酸
吸收度值
中性糖
吸收度值
中性糖
含量 (% )
总糖
含量 (% )
I B P
I
_
B P
I B P
1 0 2
.
0
1 1 6
.
3
1 0 1 3
0
.
9 9 5
0 9 8 1
0
.
6 8
8
.
2 6
3 3
.
33
5 8
.
35
0
.
0 3 8
0
.
1 9 2
0
.
2 9 5
0
.
9 5 7
0
.
7 8 9
0
.
3 7 3
74
.
7 3
50
.
6 6
2 6
.
4 1
8 2
.
9 9
8 3
.
9 9
8 4
.
7 6
3 讨论
3
.
1 采用 M ck el v y 改进的苯酚 一硫酸法测定
多糖 , 不需要加热 , 试剂用量少 , 显色稳定 , 灵
敏度高 , 重复性好 。 氨基 己糖 , 蛋 白质的存在
对反应无影响 。 但要求操作迅速准确 。
3
.
2 目前 , 使用苯酚 一硫酸法测定样品中多
糖含量 , 普遍存在以下问题 : 一是没有选用适
当的标准 而直接以 Gl c 或 D ex t r a n 作标准 ;
二是以 4 9 o n m 作为测定波长 。 从表 1 可以看
出 , 戊糖 、 6 一脱 氧 己糖 、糖 醛 酸 显色 反 应 的
硫a 、在 4 8 o n m 附近 , 己糖显色 反应 的 硫a 二在
4 9 0n m 附近 , 多糖显色反应 的 硫a 二随单糖 的
组成不同 ,最好对其显色产物进行波长扫描 ,
选定其 入rna 、作为测定波长 。 对于含糖醛酸的
酸性多糖 , 以苯酚一硫酸法进行多糖组份研究
时 , 由于没有考虑到糖醛酸的影响产生下列
错误 : 一是直接以多糖 的 A B S 计 算总糖 含
量 , 认为总糖含量减去糖醛酸含量后即为中
性糖含量 ;二是直接以多糖的 A B S 计算中性
糖含量 ,再加上糖醛酸含量得出总糖含量 。所
得结果前者偏低 , 后者偏高 ,均不能反应真实
值 。
3. 3 G al A 的苯酚 一硫酸显 色反应 的 孤a 二接
近各种多糖总的 弋a 、 , 这样各种 L BP 与其对
应标准 显色反应的 硫a x 一致 , 不 会由于代入
回归方程计算而产生误差 。 L BP一 I 因量少未
能进 行本实验 , L B P一 I 己糖含量高 , 显色反
应的 孤 a二在 4 85 处 。 G al A 的存在可能使其标
准 (若按单糖组成摩尔比配制 )与样品显色反
应 的 入~ 、有微 小差别 。 只是 由于 该样 品 中
G a 1A 含量仅 3 . 69 % , 其影响是可以 忽略的 。
3
.
4 本实验 采用经纯 化的各种 L BP , 无单
糖的干扰 , 样品基本无色 , 对测定无影响 , 校
正了 G al A 的干扰 , 所得结果可靠 。 通过此种
处理 , 也为含糖醛酸复 杂多糖组份 的研究建
立了一种方法 。
参 考 文 献
l 李东阳 , 等. L于1 草药 , 2 98 9 , 2 0 (10 ) : 2 6
2 仁柏昆 , 等 . 中国药理学与毒理学 杂志 , 1 98 , 2 (2 ) : 127
3 戴寿芝 , 等 . 老年学 杂志 . 1 9 9 0 , 10 (2 0 ) : 94
4 李好枝 , 等 . 中草药 , 1 9 9 5 , 2 6 (7 ) : 34 7
5 M e k
e
lv y J F
, e t a l
.
A r eh B io eh e m B io p hy
s , 1 9 6 9 , 1 32
(l )
: 9 9
(1 9 9 5
一
0 3
一
2 3 收稿 )
S t u d ie s o n th e T o ta l C o n t e n t o f M o n o s a e e h a r id e s in B a r b a r y W
o lfb e r r y
(Z沙e iu m b a rb a ru m )P o lys a e c h a r id e s
H e Jin
A s im p lifie d p h e n o l
一 s u lfu r i。 a e id C o lo rim e t r ic d e t e r m in a t io n o f m o n o s a e e h a r id e s in Ly
e iu m ba rb
a r u m
p o lys a e e ha r id e s w a s d e v e lo p e d
.
T h e s e le e tio n o f w a v e le g t h
,
p r e p a r a t o n o f s t a n d a rd s a n d e o r r e e tio n o f g a la e t u r
-
o n ie a e id in te rfe r e n ee w e r e d is eu s se d
.
《中草药》1 9 9 6 年第 2 7 卷 第 2 期 , 8 5 ,