全 文 ：· 药理实验与临床观察 ·
三七三醇皂试对动物血小板
功能及血栓形成的影响
国家医药管理局天津药物研究院 ( 3。。 1 9 ) 3苏 稚 .赵益桂 张宗鹅 岳 南
摘 耍 三七三醉皂贰 ( P TS )在体外 ( 1 ~ 4m g/m l )和体内+ 二指肠给药 ( 75 ~ s o om g/k g) 都明显
抑制由 A D P 、胶原 、 花生四烯酸 (A A )诱导的大鼠及家兔血小板聚集 ,同时亦抑制胶原诱导大鼠血
小板 T X A : 释放 ,而对大鼠胸主动脉壁 P G I: 生成无明显影响 . P T S ( 50 ~ 2 0 m g k/ g )明显抑制大鼠
实脸性血栓形成 ,剂 t 与效应相关 . 提示 : P T S 抗血栓作用与其抑制血小板聚集和 T X A : 释放有
关 。
关性词 三七三醉皂贰 血小板聚集 T X B : GP I : 血栓
三七 P a n a x n ot 呀 i n s e n g ( B u r k ) F . H .
Cha n 为五加科人参属植物的根 。 具滋补强
壮 、 止血 、 活血化疲 、 消肿止痛的功效〔” 。 近年
来研究三七有抗心绞痛 、 治疗血栓的作用 〔幻 。
在三七活血有效成分的研究中 , 我们筛选出
三七三醉皂贰 ( P T s) 具有较强的抑制血小板
聚集作用 , 鉴于血小板在心脑血管疾病发生
发展中起着重要作用 , 我们观察了 P T S 对血
小板功能和实验性血栓的影响 。
1 实验材料
药物 : P T S 黄色粉末 , 溶于水 ,人参皂贰
R
, 1含量 65 %以上 , 由本院植化室提供 。 实验
前用蒸馏水配成一定浓度的溶液使用 。
阿斯匹林 : 做阳性对照药 , 由市场购买 ,
用 1% C M C 配成混悬液和用 1% N a ZC O : 调
p H 至 6 配成水溶液 ,两种剂型使用 。
试剂 : A D P (美 国 iS g m a 公 司产 ) , 用生
理盐水配制成 1 . 06 m m ol / L 溶液置冰 箱备
用 。
胶 原溶液 : 取家免 主动 脉 壁 , 按 湿 重
l o o m g 加 l m l 生理盐水磨成匀浆 , 以 3 0 0 o r /
m in 离心 20 m in ,取上清液置冰箱备用 。
花生四烯酸 ( A A 美国 S i g m a 公司产 ) :
用 0 . sm o l / L N a ZC O 3 溶液配成 3 3m m o l / L 的
钠盐溶液 ,置冰箱备用 。
T X B
: 及 6一 K e t o 一 P G F ; 。放免药盒 : 购于
中科院基础所 。
动物 : 大鼠 、家兔 , 由我院动物室提供 ,合
格证号 ,津实动设施准第 。 01 号 .
2 方法与结果
.2 1 P T S 对血小板聚集功能的影响
2
.
1
.
1 体内实验 : 取雄性 SD 大鼠 ,体重 1 80
~ 2 2 0 9
,随机分为对照组和给药组 ,每组 6~
1 0 只 ,戊 巴比妥钠麻醉 ( 4 o m g / k g , ip ) ,十二
指肠给药 ,对照组给等容量燕馏水 , 阳性药对
照组灌胃给予阿斯匹林 , h1 后腹主动脉取血
(3
.
8%拘椽酸钠抗凝 , 抗凝剂和全血的比例
为 1 : 9 ) , 制备富血小板血浆 ( P R P )和贫血
小板血浆 ( P P P ) ,调 P R P 血小板浓度为 4 0
万 /m m 3 , 取 0 . Zm l P R P , 采用 比浊法〔3 , , 在
P A M
一
3 型双通道血小板聚集仪 (江苏省丹阳
无线电厂产 ) , 观察对 A D P 、 胶原 、 A A 引起
血小板聚集的影响 。根据描记曲线 ,计算血小
板聚集程度 ,结果采用两组均数统计分析 t
值法进行处理 ,结果如表 1 。 P T S 十二指肠给
药明显抑制 由诱 导剂 A D P 、胶原 、 A A 诱导
一 A dd r e s s : S u Y a
,
T i
a n
j i
n
I
n s t i t u t e o f Ph a r m a c e u t ie a l R e s e a r e h
,
S t
a t e P h
a r
m
a e e u t ie a l A dm in is t r a t i o n o f
C h in a
,
T i a n ji
n
.
6 6 6
·
的大 鼠血小板聚集 , 并 随剂量增加 , 作用增 强 。
农 1 P sT 对 A D P 、 胶原 、 A A 诱导的大皿血小板聚集的影响
剂量
( m g / k g )
血小板最大聚集百分数` 士 : )组别
A D P ( n )
对照组
P T S
P T S
P T S
P T S
阿斯匹林
胶原 ( n )
5 2
.
6士 9 . 1 ( 10 )
A A ( n )
5 3
.
8士 1 4 . 0 ( 10 )
3
:
5 5
1 5 0
3 0 0
1 5 0
4 4
.
1士 8 . 3 ( 1 0 )
4 0
.
0士 8 . 5 ( 8 )
3 3
.
9土 8 . 0 . ( 9 )
2 7
.
9士 5 . 6 . ` 份 ( 9 )
2 3
.
3士 8 . 7二 , ( 7 )
3 5
.
3士 13 . 6 二 ( 7 )
3 1
.
4士 15 . 2 0 . ( 7 )
2 3
.
6士 12 . 6 二 。 ( 7 )
1 1
.
6士 1 6 . 4 二 份 ( 7 )
40
.
3士 1 5 . 4 ( 1 0 )
3 1
.
5土 1 8 . 6 “ “ ( 9 )
2 4
.
9士 1 3 . 4… ( 1 0 )
9
.
4士 1 0 . 5 . 份 . ( 6 )
n : 动物数 ,与对照组比较 . 尸 < 。 . 05 . “ 尸 < 。 . 01 . ` 尸 < 。 . 。。 1( 下同 )
2
.
1
.
2 体外实验 : 取雄性家兔 , 体重 2 ~ 小 板聚集程度 , 观察药物对 A D P 、 胶原和
.2 s k g
,戊巴比妥钠麻醉 ( 30 m g / k g , iv) ,颈总 A A 诱导血小板聚集的影响 , 结果见表 2 。
动脉取血 (3 . 8 %构椽酸钠抗凝 ,抗凝剂与全 P T S 体外有明显抑制由 A D P 、 胶原 、 A A 诱
血的比例为 1 , 9 ) ,按常规制备 P R P (血小板 导家兔血小板聚集作用 ,该作用与剂量呈相
浓度 30 万 /m m , )和 P P P 。 采用比浊法测定血 关性 。
表 2 PT s 体外对 A D P 、 胶原 、 A A 诱导的家免血小板聚集的影响
终浓度
( m g / m l )
血小板最大聚集百分数 (荃士刃药物
A D P ( n )
4 7
.
4士 4 . 0
39
.
7士 6 . 8 .
2 9
.
7士 5 . 3 0 . 份
2 7
.
0士 7 . 3二 “
5 6
.
4士 9 . 9
胶原 ( n ) A A ( n )
对照
P T S
P T S
P T S
对照
阿斯 匹林
阿斯匹林
阿斯匹林
阿斯匹林
5 2
.
8士 9 . 0
4 8
.
7士 10 . 6
3 0
.
9士 15 . 2 .
1 3
.
3士 11 . 7…
5 1
.
9士 4 . 8
::
6士 4 . 0
7士 7 . 3书
5 0
.
3士 5 . 9
2 1
.
9士 10 . 1 . 份 .
2 0
.
0士 5 . 5 . 件 .
5 1 1士 7 . 6
4 1
.
4士 19 . 3
3 6
.
3士 1 6 . 7
2 3
.
3士 1 6 . 7二
5 6
.
3士 7 . 6
4 7
.
6士 1 6 . 3
3 8
.
1士 1 7 . 6
2 4
.
2士 1 6 2二
2 0
.
3士 4 . 0…
753015
n : 实验次数 ,均 为 6 次
2
.
2 P T S 对血小板释放功能的影响 : 用放
免法测 T X A : 稳定代谢产物 T X B Z 〔` 〕 。取雄性
SD 大鼠体重 1 80 一 2 鲍 , 随机分为 4 组 , 每
组 6 一 7 只 , 戊 巴 比妥钠 腹腔麻 醉 ( 40 m g /
k g )
,
P T S 十二指肠给药 ,对照组给予等容量
蒸馏水 , 阳性对照药阿斯匹林灌 胃给药 。 h1
后腹主动脉取血 ( 3 . 8%构椽酸钠抗凝 , 抗凝
剂与全血 比例为 1 : 9 ) ,按常规制备 P R P 和
P P P
, 调 P R P 中血 小板浓 度至 4 0 万 / m m 3 ,
采用上述 比浊法进行血小板聚集实验 , 加诱
导剂胶原 , s m i n 后立即加终浓度为 60拼g / m l
的消炎痛终止反应 。 聚集后的 P R P 和空白
P P P 以 3 5 0 Or /m i n 离心 1 5 m i n ,取 5 0拼l 上清
液测 T X B : 含量 ,结果见表 3 。 P T S 可明显抑
《中草药 》 1 99 6 年第 2 7卷第 1 1 期
制胶原诱导大鼠血小板 T X B : 的释放 。
表 3 P T S 对胶原诱导大鼠血小板释放 T X B : 的形响
组别 剂量 动物数
( m g / k g ) (只 )
T X B : 含量
( n g / 2义 1 0 9 血小板 )
对照
P T S
P T S
阿斯匹林
1 1 9
.
6士 2 9 . 0
8 1
.
8士 5 3 . 5
79
.
6士 3 6 . 7 .
55
.
7士 4 7 . 4 .
2
.
3 P T S 对动脉壁前列环素 ( PG I Z )活性的
影响 : 用放免法测 P G I : 稳定代谢产物 6一 ke -
ot
一
P G F I
。川 。 取 雄性 S D 大 鼠 , 体 重 18 0 ~
2 09
, 随机分成 5 组 ,每组 5一 9 只 ,戊巴 比妥
钠腹腔麻醉 ( 4 o m g / k g ) , P T S + 二指肠给药 ,
对照组给予等容量蒸馏水 , 阳性对照药灌胃
给予阿斯匹林 , h1 后迅速剪下胸主动脉置于
·
6 6 7
.
冰冷生理盐水中剥净周围结缔组织 , 切成约
Zm m 小段 ,称重 。 将动脉环加入磷酸缓冲液
中 (每 4m g 组织加 l m l磷酸缓冲液 ) ,龄 3 7 oC
温育 3Om in 后 , 立即取出组织放入冰浴中终
止反应 ,取 10 川采用放免法测定温育液中前
列环素 ( P G I : )稳定代谢产物 6一 k e t o 一 P G F I 。含
量 。 结果如表 4 。 P T S 对大鼠胸主动脉壁
P G I : 生成虽有增加趋势 , 但无显著影响 , 而
阿斯匹林却可明显抑制其 P G I: 活性 。
农 4 P T S 对大皿脚主动脉盛 P G I: 活性的影响
组别 剂 t 动物数
( m g / k g ) (只 )
对照组
阿斯匹林
9
7 5 9
1 50 9
3 00 9
1 50 5
6
一
k e t o
一
PG F I
。含 t
( pg / 0
.
o 4 m g )
3 18
.
9士 10 0 . 1
3 33
.
3士 10 0 . 5
3 71
.
0士 12 6 . 5
38 4
.
4士 12 0 . 7
36
.
4士 58 . 3…
5PT
2
.
4 P T S 对大鼠实验性血栓的影响 : 取雄
性 S D 大鼠 ,体重 3 0 0 ~ 3 5 09 , 随机分成 6 组 ,
每组 7 只 , 戊巴比妥钠腹腔麻醉 ( 4 o m g k/ g ) ,
十二指肠给药 ,对照组给予等容量蒸馏水 ,阿
斯匹林灌胃给药 ,药后 h1 采用动静脉旁路的
方法 〔幻进行手术 ,建立血循环 。 结果见表 5 ,
P T S 明显抑制大鼠实验性血栓 ,剂量增加 ,
作用增强 。
衰 5 P T S 对大砚实验性血栓形成的影响
组别 剂量 动物数
( m g / k g ) (只 )
血栓湿重
( m g )
对照组
P T S
P T S
P T S
P T S
阿斯匹林
3 讨论
2 5
5 0
10 0
20 0
30 0
3 6
.
6士 8 . 4
3 5
.
9士 7 . 3
2 3
.
4士 12 . 2 .
19
.
6士 10 9二
1 8
.
1士 10 . 9 . ,
2 3
.
4士 1 1 2 .
不同诱导剂引起血小板聚集 ,表明影响
血小板活化的途径是多环节多方面的 。 本文
选用 A D P 、 胶原和 A A 为诱导剂观察 P T S
对血小板聚集功能的影响。 结果表 明 , P T S
体内外均能明显抑制这三种诱导剂诱导的家
兔和大鼠血小板聚集 ,提示 P T S 抑制血小板
的途径也是多环节多方面的 。
血小板活化时释放的许多活性物质又促
进 血小板 聚集 , 促进血栓形成 。 实验表明 ,
P T S 能抑制 T X A : 的释放 ,表明 P T S 的抗血
小板聚集作用也与抑制血小板释放活性物质
有关 。
T X B
: 和 6一k e t o 一 P G F I。分别是 T X A : 和
P G I
: 的稳定代谢产物 ,测定 T X B : 和 6一k e t o -
P G F
, 。的量直接反映了 T X A : 和 P G I: 含量的
变化 。 T X A Z 和 P G I Z 保持平衡是机体一种重
要生理作用 , P T S 能抑制血小板 T X A : 的生
成 。 对 P G I Z 的生成也有增加的趋势 ,但无统
计学差异 , 此点与环氧酶抑制剂阿斯 匹林抑
制动脉壁 P G I : 生成是有所不同的 。 能否通过
增加体内给药剂量和次数而明显升高主动脉
壁 P G I Z 含量 ,有待进一步研究 。
综上所述 , P T S 抗血栓作用与其抑制血
小板聚集和释放功能有关 。
参 考 文 献
1 江苏新 医学院 . 中药大辞典 . 上册 . 上海 : 上海人民出版
社 , 1 97 7 . 5 4
2 张征忠 . 中草药 , 19 8 3 , 1 4 ( 1 ) : 2 8
3 致〕 r n G V R . N a t u r e , 19 6 2 , 1 9 4 : 92 7
4 S i e s s W
, e t a l
.
T h r o m b H a e m o s t
,
19 8 1
,
4 5
:
20 4
5 S h i Y Q
, e t a l
.
A e t a A e a d M
e d s in
, 1 9 8 6
,
8
:
3 1Q
6 徐叔云 , 等 . 药理实验方法学 . 北京 : 人民卫生 出版社 ,
1 9 8 2
.
84 5
( 1 9 9 6
一
0 3
一
12 收稿 ) _
E f f e e t s o f P a n a x a t r i o l S a P o n i n s I s o l a t e d f r o m S a n e h i
( aP
n a x 夕s e u d o 一g i n s e n g v a r . n o t o g in s e n g ) o n A n im a l P l a t e l e t F u n e t i o n a n d T b r o m b o s i s
S
u
Y
a ,
Z h
a o Y ig u i
,
Z h a n g Z o n g p o n g
, e t a l
护a n a x a t r io l s a p o n in ( p T S ) , i s o la t e d f r o m p a n a x Ps e u d o 一 9 1, s e n g v a r . n o t o g i n s e n g , l ~ 4m g / m l in h i b i t e d
r a b b i t p l a t e l e t a g g r e g a t io n i n d u e e d b y A D P
, e o
l la g e n a n d a r a c h id o n ie a e i d r e s p e e t i v e ly i n v it r o
.
I n r a t
,
P T S 7 5
~ 3 o o m g / k g i n t
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u o d e n a l l y i n h ib it e d d o s e
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e n t l y p l a t e le t a g g r e g a t io n in d u e e d b y t h e s e i n d u e e r s
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.
66 8
.
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,
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n o t a f f e e t t h e f o r m a t i o n o f a o r t ie
w
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,
P T S 5 0一 Z o o m g / k g s ig n if ie a n t l y in h i b i t e d e x p e r im e n t a l t h r o m b o s i s i n r a t s . T h e s e r e s u l t s s h o w e d
t h
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e a n t i
一 t h r o m b o s i s a e t io n o f P T S m a y b e d u e t o it s i n h ib it o r y a e t i o n o n p l a t e l e t a g g r e g a t io n a n d T X A Z
r e le a s e
.
淫羊霍试的体外免疫调节作用研究△
山东医学科学院基础所免疫室 (济南 25 0 0 01 ) 赵 勇夸 张 玲 王 芸 毛海婷 崔正言
摘 要 淫羊霍贰是从朝鲜淫羊霍中提取的主要单体 。 采用依赖细胞株法和乳酸脱氢酶 h4 释放
法 , 分别检测 了淫羊霍贰协同诱生 I L 一 2 、 I L 一 3 、 I L 一 6 , 及对 N K 、 L A K 细胞杀伤活性的影响 。 结果表
明 :淫羊蕾贰可协同 P H A 诱导扁桃体单个核细胞产生 I L 一 2 、 3 、 6 呈剂量依赖关系 ,动力学观察表
明 : I L 一 2 、 I L一 6 的分泌高峰时相为作用后 4h8 , lL 一 3 的分泌高峰时相为作用后 7h2 。 淫羊着贰可以提
高扁桃体单个核细胞 N K 、 L A K 细胞杀伤活性 ;动力学观察表明 :在诱导第 5 天时 L A K 细胞杀伤
活性最强 。 提示淫羊蕾贰是一种有效的生物反应调节剂 。
关键词 淫羊霍贰 白细胞介素 2 白细胞介素 3 白细胞介素 6 N K 细胞 L A K 细胞
近年来 , 中药免疫调节作用的研究取得
了很大进展 ,人们对中药的化学成分 、 结构和
药效进行 了深入的研究 ,发现了许多活性多
糖和贰类物质〔` 〕 。 淫羊霍贰 ( ie a r ii n , I C A )是
从朝鲜淫羊蕾 (EP im e d i u m 走o er a n u m N a k a i )
中提取的主要单体成分 。 文献报道 〔, , 3 , : 淫羊
霍贰可以促进抗体的生成 ,对小 鼠 T s 细胞
的产生有减弱作用 。 关于淫羊蕾贰协同诱生
白细胞介素 2 、 3 、 6 ,及对 N K 、 L A K 细胞杀伤
活性的影响 , 尚未见文献报道 。 现报告如下 。
1 材料
1
.
1 淫羊蕾贰 : 从朝鲜淫羊茬 ( E . ko er a n u m
N a k a i ) 中提取 ,纯度在 9 6%以上 。
1
.
2 细胞因子 : lr L 一 2 , 军事医学科学院基础
所和 中化生物 技术研 究所联 合研 制 , 批号
94 0 2 05
。 r I L
一
3 购于北京 医科大学免疫学教
研室 。 rI L 一 6 , 由山东省医学科学院肿瘤生物
治疗中心田志刚博士赠送 。
1
.
3 细胞株 : C T L L 一 2 为 I L 一 2 依赖性细胞
株 ,本室常规传代培养 。 T F 一 1 为人 I L 一 3 依赖
性细胞株 ,引自北京医科大学免疫学教研室 。
M H 60
·
B S F Z 为 IL 一 6 依赖性细胞株 , 引自
日本大阪大学细胞工程中心 。 K 56 : 为人红 白
血病细胞 , 本室常规传代培养 。 H L 一 60 为人
急性早幼粒 白血病细胞 , 引自中国医学科学
院血液病研究所 。
1
.
4 试剂 : P H A 为广州医工所产品 。 M T T ,
3
一
( 4
,
5
一二甲基唾哇 一 2一 y l关 2 , 5一乙苯基一四哇
嗅 盐 〔3一 ( 4 , 5一 d im e t h y l t h i a z o l一 2一 y l 卜 2 , 5 -
d iP h e n y l t e t r a z o l iu m b r o m id e 〕 , S i g m a 。
2 方法
2
.
1 扁桃体单个核细胞的制备 : 扁桃体由山
东医科大学附属医院耳鼻喉科门诊提供 。 三
抗 (青霉素 Z 0 0 0 u /m l 、 链霉素 Z 0 0 0 u /m l 、 二
性霉素 B 25 拼g /m l) 常规处理后 ,取组织块置
于 2 0。 目不锈钢 网上研磨 ,细胞悬液层加于
淋巴细胞分离液上 , 分离 、 洗涤 ,用培养液调
细胞至适宜浓度 ,备用 。
2
.
2 不同剂量 IC A 协同 P H A 诱生 I L 一 2 、 3 、
6 的观察 : 取 24 孔板 , 加入扁桃体单个核细
,
A d d
r e s s : Z h
a o Y o n g
,
I n s t it u t e o f B
a s i e
,
S h
a n
d
o n g P
r o v
i
n e ia l A e a d e m y o f M e d ie a l S e ie n e e s
,
Ji
n a n
△ 山东省自然科学基金资助项 目
《中草药 》 19 9 6 年第 2 7 卷第 1 1 期 . 6 6 9 ·