全 文 ：黄蔑不同提取工艺多糖含量的比较
中国中医研究院基础理论研究所 北京 李树珍 赵红霞 白卫 国
摘要 用水煮醇沉法和超滤法制备黄茂多糖粗提物 , 采用苯酚硫酸法测定多糖含量 , 并对多搪粗
提物进行了定性鉴别 。 结果超滤法较水煮醇沉法含量高出 肠左右 。
关健词 黄茂 提取工艺 多糖
近年研究表 明 , 黄茂多糖具有提高小鼠应激能力 , 增强免疫功能 , 双向调节血糖 , 保 护
心血管系统 , 加速遭受放射性损伤机体的修复等作用〔, 幻 。
当前将黄蔑多糖制成各种固体制剂如冲剂等 , 用水煮醇沉法制备 , 其 口服剂量大 , 含量
均较低 。 为此对黄蔑不同提取工艺的多糖含量进行了比较 , 以便确定多糖含量高的提取工艺 ,
为生产试制提供依据 。
材料与仪器
药材来源 黄茂为豆科植物蒙古黄蔑姓 。 。
, 夕 的千燥根 。 炮炙成饮片 , 产地 山西辉源县 。 苯酚水溶液
苯酚 加 铝片 预先用稀酸处 理 及 碳酸氢钠 , 经蒸馏得新鲜苯酚 , 避
光保存 。 取 新鲜重蒸馏水 , 加入 新鲜苯酚 , 混匀
型 分 光光 度计 , 中空纤维超滤器 , 中空纤维超滤膜聚讽材料分子量 ’
截留率 天津 纺织工学院膜天膜技术开发部 。
方法与结果
样品的制备 水煮醇沉法 称取黄茂饮片 , 加水 、 倍量 , 分别煮沸 、
分别过滤 , 合并 次滤液 , 浓缩至 生药相当 , 加倍量 乙醇沉淀 , 放置
以上 , 离心 , 沉淀蒸干 , 称重 , 即 次醇沉后蒸 干 物。 将蒸 干 物平均分成 份 , 分别
按 , 比例 即 蒸干物溶至 , 蒸千物溶至 , 蒸千物溶
蒸馏水中 溶 解 , 以 下简称 , 放置后 , 离心 , 分别取上清液 ,
再 加 入 倍 量 乙醇沉淀 , 冷藏后离心 , 沉淀物蒸千 , 分别称重 , 即 次醇沉后多糖粗提
物。 超滤法 称取黄茂饮片 , 加水倍量 , 煎煮时间同 法 , 合并 次滤液 , 冷藏后 ,
离心 , 取上清液用中空纤维超滤后 , 截留分子量 以上的药液 , 浓缩至 生药相当
加 倍量 乙醇沉淀 , 以下按 项下蒸干物分成份进行 , 即 次醇沉后多糖粗提
物 。 结果见表 。
黄蔑不同提取工艺多糖含量测定 采用苯酚一硫酸法测定黄茂多糖含量 。
回归方程的建立 精密称定 一葡萄糖 恒重 置 容量瓶 中 , 加
水使完全溶解 , 于 波长处 比色 , 测定吸收度 , 经直线回归处理 , 做标准曲 线 。
回归方程 , 。
样品含量测定 精密称定上述不同提取工艺制备的 次醇沉多糖粗提物各 , 移至
容量瓶 中 , 加水至刻度使溶解 , 摇匀 。 精密量取该溶液 、 , 分别 置 容
量瓶中 , 加水稀释至刻度 , 摇匀。 再精密量取土述 种浓度溶液各 , 用苯 酚一硫 酸 法 以
蒸馏水为空白对照 , 干 波 长处比色 , 测定吸收度 , 计算多糖含量 。 结果见表
, , 八 军 耳
,
表 不同提取工艺黄蔑多粉粗提物褥
且 、 收娜率比较 表
方法 批号 一次醇沉蒸千物得量 二次醇沉多糖粗提物得量
方法
黄蔑不同提取工艺多抽含 比较
批号 多糖粗提物含量
吸 ‘ 声” ‘ “ 方 , ,
!
均值
收得率
超 通遵
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法 ! ∀
均值
收得率
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均 值
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水煮醇沉法
,‘行了 ! ∀…
丹舀,J怪‘叹曰跪匕O甘斤月了‘尸口.…卜,二1五丹」,曰O01Jbt厂‘心亡,d..…水煮醇沉法
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94042 1
940505
均 值
67 。 4 1
7 2
。
4 6
7 5
。
7 0
7 1
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7 8
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3 5
滤法超:::
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2
.
3 黄茂多糖的纸层析鉴别
2.3.1 称取1 : 50 比例的不同提取工艺制备的多糖粗提物各0.59 , 分别溶于 25 m l水中 , 分
别加入3m ol /L 硫酸溶液Zm l, 置沸水浴中加热 2h , 放冷 , 加饱和氢氧化钡溶液 , 调 pH 至中
性 , 过滤 , 滤液蒸干 , 加适量无水乙醇洗至醇液无色 , 沉淀蒸千 , 加水 10 m l溶解 , 离 心 ,
上清液浓缩至 sm l, 为水解液 。
2
.
3
.
2 另取上述相应样品各0.19 , 加2m l水溶解 , 离心 , 上清液备用 , 为未水解液 。
2
.
3
.
3 称取无水D ( + ) 一葡萄糖 , 无水L 一阿拉伯糖 , 无水鼠李糖标准品各0.029 , 溶 于2
m l水中 , 作对照品 。
将对照品葡萄糖液、 阿拉伯糖液 、 鼠李糖液各l卜1 , 水解液 、 未水解液各2时 , 分别 点 于
层析滤纸上 , 以正丁醇一毗陡一水 ( 6 : 4 : 3 ) 混合液展开 , 以邻苯二 甲酸一苯 胺 的水饱 和 正
丁醇液显色。 结果见 图。 川 BA O080凸 舀 。 3 。 吕 3
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.内b一 。a.一匀…C34.口 _ _ _ 一- 一~目 .. .门 .. . .门 .月 .户 户..图 黄蔑多抽纸层析
A 一水煮醇沉法 B 一超滤法 1一 。‘0 3 一8 ( z : 1 ) 1 : 5 0水解物 2 ·日‘0 3 0 7 ( 1 : 1 ) 1 , 5 0 水解物 3 一 9 4 0 3 0 4 ( 1 : 1 ) 1 : 5 0 水
解物 4一 9 4 0 3 1 8 ( l : 1 ) 1 : 5 0 未水解物 5 一 9 4 0 4 2 0 ( z : 1 ) 1 : 5 0 未 水 解 物 6一 , 4 0 4 10 ( 1 : 1 ) l : 5 0 水 解 物 7 一 9 吐0 42 2
( 1 : 1 ) 1: 5 0水解物 5 940 505(1 :力) z : 5 0水解物 , 一 9 通0 42 1 ( 1 :1 ) 2 . 5 0未水解物 20 一 g 通0 5 0 5 ( z: 1 ) l : 5 0未水解物a 一 葡萄搪标 准 品 b 一 阿拉 伯 搪标准品 c 一 鼠李糖标准品
《中草药 》 19 9 5年第26 卷第8期 4 0 9
讨论3.1 文献报道黄茂多糖分子量在1~ 5万左右〔3一5〕, 因此在不同提取工艺中 , 用超滤法选择超
滤膜分子量为6000, 以便将多糖提取完全。
3
.
2 表1、 2 表 明水煮醇沉法提取的黄蔑多糖粗提物 , 3 批含量均在50 % 左右 , 含量偏低 , 而得
量较超滤法高 , 说明杂质多 , 作为 口服给药 , 必须增加 口服剂量才能达到有效剂量 。 而超滤
法较水煮醇沉法提取的多糖粗提物, 收得率低 , 而含量高 , 达70 % 左右; 较水煮醇沉法增加
了20 % 左右 , 可降低 口服给药剂量 。
3
.
3 文献报道c1 〕, 黄蔑中有几种多糖 , 结构分别为a ( 1, 4 ) 葡聚糖 为 主 链 , 每10 个 重
复单元有一个 6一。位分支的葡聚糖, 另有a ( 1, 4 ) ( 1毒6 )葡聚糖; 由乙糖醛酸 、葡萄糖 、
鼠李糖和阿拉伯糖组成的水溶性杂多糖和由葡萄糖 , 阿拉伯糖和鼠李糖组成水溶性杂多糖,
及由葡萄糖和阿拉伯糖组成的多聚体 。
本实验纸层析鉴别初步表明 ( 见图 ) , 该黄蔑多糖粗提物主要是 由D ( + ) 一葡 萄 糖
和L 一阿拉伯糖组成的多聚糖。
3
.
4 在不同提取工艺中 , 用一次醇沉蒸干物 , 再分别按l : 100 , 1 : 50 、 1 : 25 不同比 例 的
燕馏水溶解者再加乙醇沉淀 , 比较蒸干物溶解是否完全 , 多糖粗提物 收 得率 、 含 量 有 否 不
同 , 结果 , 多糖含量超滤法中 ( l : 100、 l : 50 比例较1 , 25 比例高 , 而 1 ‘ 50 含量 最 高。 可
考滤制定工艺时 , 用 1 : 50 比例溶解蒸干物 , 再加乙醇沉淀时 , 可少加 1八量的乙醇 。
1
.
5 在水煮醇沉工艺中 , 用水煮后 , 上清液浓缩成1 : 1、 1 : 1 . 5 ( 即浓缩1g 生药相当lm l’
铭生药相当1.sm l) 对多糖粗提物和含量进行对比实验 , 结果上述2种比例的浓缩液 , 醇 沉
后 , 其多糖粗提物收得率和含量没有明显差异 。
参 考 文 献
容一民 .华西药学杂志 , 1 9 , 2 , 7 ( 3 ) : 1 7 ‘
吴寿金 , 等 .中草药 , 1 9 9 2 , 2 5 ( 一。) : 5 4 3
顾学裘主编.抗衰老 , 抗癌中药的研究及展望 .北
京: 中国医药科技出版社 , 1 9 8 9 . 5 5
柯铭清主编 .中草药有效成分理化与药理特性(修
正本 ) 。 长沙: 湖南科学技术出版社 , 1 9 8 2 . 5 0 5
5 方积年 。 ’ 化学学报 , 1 9 8 8 之46) : 1101
( 一9 9 4一 x o 一 1 0 收稿 )
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4 1 0