全 文 ：· 药理实验与临床观察 ·
海洋三经基幽醇抗炎作用的研究
中山大学生命科学学院药理研究室 (广州 51 0 2 7 5) 许实波 带 胡 群 赵金华
王正谦 “ 刘 清 ` ”
摘 要 从中国南沙群岛附近海域的唇软珊瑚中分离得到的化合物三轻基当醇 ,能明显抑制二甲
苯致小鼠耳肿胀 , 对鸡蛋清致大鼠足趾肿胀 、 棉球肉芽肿增生和毛 细血管通透性增加及大鼠急性
胸膜炎均有明显的抑制作用 。 该三经基街醇具有膜稳定性作用 , 能够使大鼠炎性组织释放的 P G E Z
明显减少 。
关键词 三轻基幽醇 (M C T ) 抗炎作用 醋酸可的松 肉芽肿 毛细血管通透性
三轻 基 街醇 ( 24 一亚 甲基 一 5一胆 街烯一 3俘,
7日, 1 9一三 醇 , 2 4一m e t h y le n e 一 s a 一 e h o l e s t e n 一 3俘,
7日, 1 9一 t r i o l , M e T ) , 该化合物是从 中国南海
南 沙群岛附近 海 域 的 唇 软珊瑚 N Pe ht h ea
b ar si n c a 中提得的新结构化合物 , 为无色片
状结晶 , 由光谱数据定出该化合物的结构式 。
报道对其抗炎作用的研究 。
1 实验材料
三轻基街醇 (M C T ) 由中山大学化学系
天 然有机化学研究室李瑞声教授提供 , 纯度
为光谱纯 ; 醋酸可 的松 , _仁海第九制药厂产
品 ; 其它化学药品均为市售购得 。 N IH 纯系
小鼠 、 S D 大鼠由中山大学生命科学学院药理
室实验动物养殖场提供 。
2 方法与结果
2
.
1 对二 甲苯致小 一鼠耳肿胀的抑制作用 : 健
康雄性小鼠 50 只 , 体重 20 士 2 9 , 随机分为 5
组 ; 高剂量组 (H ) , 中剂量组 (M ) , 低剂 量组
( I
子
)
, 生 理盐水对照组 ( C o n t r a l , C o n ) , 醋酸
可的松阳性药对照组 ( e o r t is o n e , C o r ) ; 给药
剂量如表 1 所示 , i p 给药 30 m ni 后 , 每 鼠左
耳涂 30 川产 的二甲苯 , 右耳涂等量的蒸馏水
作对照 。 致炎后 Z h 脱颈椎处死小 鼠 , 剪下双
耳 , 用直径 8 m m 打孔器在对称处取下耳片 ,
用扭力天平称重 ,左右耳重量差为肿胀度 〔` 〕 ,
结果提示 : M C T 能显著抑制二 甲苯对小 鼠
耳的致炎作用 , 且具明显的量效关系 。
表 1 M c T 对二甲苯致小鼠耳肿胀的
保护作用 x( 士 s )
剂量 一耳廓增加重量 抑制率组芳JI n
( / k g ) ( m g ) (% )
C o n N S 1 0 m l
, 1 0 2 2
.
8 5士 5 . 8 9 一
H O
·
9 7 9 m g 1 0 8
.
50士 4 . 4 1 奋 二 6 2 . 80
M O
·
3 7 4 m g 1 0 12
.
38士 5 . 4 1 苍 圣 份 4 5 . 8 2
I
,
0
·
1 6 3 m g 1 0 14
.
4 0士 7 . 7 9 奋 二 3 6 . 9 8
C ( ) r 10 m g 1 0 1 1
.
5 0士 5 . 6 7 赞 . 母 4 9 · 6 7
与对照组 比较 . “ 尸< .0 01
2
.
2 M C T 对鸡 蛋清致大 鼠足趾肿胀的保
护作用 : 选取 2 0 士 2 9 大鼠 32 只 , 随机分为
4 组 , 每组 8 只 , 按表 2 剂量 i p 给药 3 0 m i n
后 , 立即于 鼠左后足内注射 10 %鸡蛋清 。 . 1
m L
, 用毛细管放大法测量致炎前后大鼠足趾
体积的变化 , 致炎后于 3 0 、 6 0 、 9 0 、 15 0 m i n 测
量足趾体积变化〔即 (用致炎足和未致炎足趾
体积差来反映 ) 。
,
A d d
r e s s : X 一] S h ib o
,
S e h
o o
l
o
f L i f
e S e ie n e e
,
Z h
o n g s h
a n I J n iv e r s i t y
,
G u a n g z h
o 一1
` ’ 华南濒危动物研究所 二 , , 云南昆明医学院化学教研室
. _连实波 _男 , 教授 1博十 导师 , 药学 系主任 , 药理研究室主任 , 《中国海洋药物 》 、 《热带海洋 》 、 《中药材 》杂志编委 。 长期从事心血管实验药理学的教 学及 科研工作 , 研究方向 : 天然产物生理活性及药学的研究 。 于 1 9 9 2 年享受政府专家特殊津贴待遇 , 同年被评为中山大学优秀研究生导师 , 1 9 93 年获广东省南粤教书育人优秀教师奖然 产物生理活性研究论 文专辑 》
·
4 1 0
·
。 发表学术论文 45 篇 , 专著论文集《夭册 。 获国家级 、 省级科技成果奖 8 项 , 中国专利局受理发明专利 2 项 。
表 2 M cT 对鸡蛋清致大鼠足趾肿胀的保护作用 n ( ~ 8,牙士 s )
剂量
(m g / k g )
足趾肿胀度 ( rnl )组别
N S
L 0
.
3 74
H 0
.
9 78
C o r 1 0
3O m
一n 6 0 m lr l 9 0 m ln
0
.
6 1士 0 . 1 0 . 5士 0 . 1 ( ). 4 8士 0 . 1 3
0
,
6 2士 0 . 12 0 . 2 2 士 0 . 0 2 爹 衡 0 . 2 5士 0 . 1 1 田
0
.
5 6士 0 1 1 0 . 13 士 0 . 0 4 “ 谈 普 0 . 1 9士 0 . 0 4 势 井
0
.
5 3士 0 . 飞9 0 . 2 6 士 0 . 0 6 百 苍 0 . 2 8士 0 . 0 4 件
1 5 0 m in
0
.
3 6士 0 . 0 8
0
.
2 2士 0 . 0 7
0
.
2士 0 . 12 份
0
,
2 5士 0 , 0 4
与对 照组 比较 尸> 。 . 05 ` 尸< 0 . ()5 ’ ` p < 。 . 01 ` “ ` p < 0 . 。。(l 「表同 )
2
.
3 M c T 对大鼠棉球肉芽肿的影响 : 选取
4 。 只体重 1 10 士 25 9 的雄性大鼠 , 随机分 为
4 组 , 每组 10 只 , 于 实验前 24 h 用硫化钡
(B a S )糊剂脱毛 , ip 戊 巴比妥钠 40 m g k/ g 麻
醉动物 , 在无菌操作下切开背部皮肤皮下植
入一个 10 m g 的棉球 (棉球用扭力天平精确
称重 , 高压灭菌后滴入青霉素 , 60 ℃烘千 ) 。术
后动物肌注 8 万 u / k g 的青霉素和 10 万 tl/
k g 的链霉素 ,预 防感染 。 当 日按下表剂量 币
给药 , 连续 7 d , 第 8 天处死动物 , 剥离 肉芽棉
球于 80 ℃烘干 4 h , 冷却后称重 , 减去棉球重
量 , 得净肉芽肿重 〔` 〕 。 结果 见表 3 , M C T 能显
著抑制大鼠肉芽肿重量 。
表 3 M c T 对大鼠棉球肉芽肿的影响
鼠腹部 2 ~ 3 次 , 然后打开腹腔 , 收集 3 m L
腹腔液 , 加入 N a O H 0 . 1 nr o l /L 0 . 1 m L 放置
3 0 m i n 后 , 用 7 2 1A 型分光光度计比色 (波长
5 9 0 n m ) 〔3
’ ` 〕 , 结果见表 4 。 M C T 能显著抑制
醋酸介导的毛细血管通透性且具有量效关
系 。
表 4 M C T 对腹腔毛细血管
透通性的影响 n( 一 10 , 牙士 )s
组别 剂量 (/ k g ) 伊文思蓝 O D 值 抑制率 ( % )
C o n N S 1 0 m l 0
.
8 9 8士 0 . 0 6 0 一
r l 0
.
9 7 9 m g 0
.
2 8 6士 0 . 0 2 2 杏 ` 赞 68 · 1 5
1 0
.
1 6 3 m g 0
.
5 8续士 0 . 1 0 7 黄 否 , 34 . 97
(
、 o r l ( ) m g 0
.
4 6 0士 0 . 0 4 6 资 份 倪 4 8 . 78
组别 剂量 ( / k g ) 肉芽重 ( m g ) 抑制率 (% )
C o n N S 1 m l 8 6
.
5 0士 7 . 6 8
H O
·
9 7 8 m g 4 8
.
1 6士 6 . 4 3 签 一 44 . 3 2
I
,
0
.
1 6 3 m g 5 8
.
1 6士 1 1 . 0 1 买 . 3 2 . 7 6
C o r 1 0 m g 5 4
.
0 0士 6 . 7 5 冬 试 ’ 3 7 . 5 7
.2 4 M C T 对腹腔毛细血管通透性的影响 :
选取 40 只小鼠 , 体重 2() 士 2 9 , 雌雄各半 , 随
机分为 4 组 , 按表 4 所示剂量 p o 给药 3 0 m in
后 , 尾静脉注射 .0 5%伊文 思蓝 5 m L k/ g , 5
m in 后 ip o · 7%乙酸 1 0 m L / k g , 3 0 m in 后脱
2
,
5 M C T 对大 鼠胸膜炎渗液量及白细胞
总、数的影响 : 选取大鼠 4() 只 ,体重 1 80 士 2 9 ,
雌雄均用 , 随机分为 5 组 , 每组 8 只 。 按药理
实验方法学 〔 5〕 , 参照文献〔 6〕制备大鼠胸膜炎
模型 。 >il 给药 3 0 m ni 后 , 乙醚浅麻醉 , 自胸腔
注入 2 % 乙酸 0 . 2 m I J 致炎 , 3 h 后放血处死
动物 , 打开胸腔 , 吸取胸腔 内全部渗液 , 用 5
m l
_ 0
.
2% E D T A H na k
S 液冲洗胸腔 , 收集
计量 , 并作 白细胞计数 。 结果 见表 5 , M C T 对
大鼠急性胸膜炎溶液有显著的抑制作用 , 且
抑制白细胞 的游走 。
颈椎处死小 鼠 . 腹腔注入 5 m l才 N S , 轻揉小
表 5 M c T 对大鼠急性胸膜炎渗液量和白细胞计数影响 n( 一 8 , 牙士 s )
组别 剂量 (/ k g ) 渗出量 ( m 工 ) 抑制率 ( % ) 白细胞总数 抑制率 (% )
C o n N S 1 m l
,
2
.
0 3 鱿0 . 4 1 一 8 0 . 6 0士 1 7 . 3 0
H 0
.
9 7 8 m g 0
.
8 1士 0 . 1 4 苦 香 城 6 0 . 1 0 4 3 . 1 1士 1 4 . 2 4 “ 侧 祝 4 6 . 5 1
M O
·
3 7 4 m g 1
.
0 1生一 0 . 14 哥 各 禅 5 0 · 2 5 60 . 3 1士 1 7 · 4 1 爹 2 5 · 1 7
1 0
.
1 6 3 m g 1
.
3士 0 . 2 6 爷 债 3 5 . 9 6 68 . 2 4士 13 . 0 7 书 1 5 . 3 8
C o r 1 0 r n g 0
.
7 6工 0 . 1 6 书 菩 马 6 2 . 5 6 3 7 . 2 2士 1 0 . 5 0 “ 价 苍 5 3 . 8 2
2
.
6 M C T 对红细胞 ( R B( 》 膜脆性 的影响 :
按 G el n n 法 〔, 〕 , 将大鼠血液用肝素抗凝 , 离心
弃血浆 , 将 R B C 0 . 1 5 m o l / L , p IJ 7 . 4 磷酸缓
冲液洗涤数次 , 然后配成 5% R B C 悬液 。按表
《中草药 》 1 9 9 7 年第 28 卷第 7 期 · 4 1 1 ·
6 剂量给药 。 每试管中分别加不同剂量 MC T
或 C o ro . 3mL , 再加上述 R B C 悬混液 4 . 7
m L
, 充分混匀 , 在 53 ℃水溶加热 20 m ni , 取
出后迅速用冰水冷却 ,离心沉淀 ,取上清液用
72 型分光光度计在 5 40 n m 下测吸光度 。 结
果见表 6 , M C T 对 R B C 膜有明显稳定作用 。
表 ` M c T 对 R B C 膜脆性的影响 n( 一 7 , 王士 s )
M c T o
.
n 抑制率 c o ` ( ) . D 抑制率
(m g / L ) (% ) ( m g / L ) (% )
。 ’ `繁` E - 。 。 ’ `繁` E -
。 · 6 2 5 。 ’撰 { E S · 8 5。 。 · 1 2 2士。 · 2 · 4
1
·
2 5 。 ’撰 : E 1 6 · 8 1 5。 。 ` {;:扮E g · 6
犷 {严 2。 · 0 3 。。 。 `撰 { E ` 5 · 2
5
· 。。 。 .黑 : E 2 6 · 4 5 。。 。 `撰 : E 1 6 · 8
2
.
7 M C T 对大鼠足趾 炎症组织释放 PG E
量的影响〔吕· ’ 〕 : 雄性大鼠 30 只 , 体重 1 50 士 20
g
, 均分 为 3 组 , 分 别 i p 生 理盐 水 , M C T
0
.
3 7 4 m g / k g
,
C o r 1 0 m g / k g ( n = s )
。 给药后
3 0 m ni
, 每鼠足趾皮下注射 27 %鸡蛋清 0 . 1
m L
, 致炎 Z h 后脱颈椎处死 , 将致炎足 自躁
关节上 1 c m 处剪下 , 称重 , 剥皮后放入 5 m L
生理盐水浸 泡 l h , 离心浸 泡液 , 取上 清液
0
.
3 m L 加入 K O H O . 5 m o l / L 溶液 2 m L , 在
5 0℃水溶液中异构化 2 0 m i n , 加 甲醇溶液 5
m L
。 用上海产 7 5 2 0 紫外分光光度计于 27 8
n m 波长 测 定 P G E : 含量 ( 以 O . D 值来表
示 ) 。 生理盐水组大鼠炎性组织浸泡液 O . D
值为 0 . 2 5 8士 0 . 0 3 7 , M C T 组为 0 . 1 32 士 0 . 0 3
( P < 0
.
0 0 1 )
,
C o r 组 为 0 . 1 6 4 士 0 . 0 3 ( P <
0
.
01 )
。 结果显示 , M c T 能显著降低 炎性组
织中 P G E 的含量 。
3 讨论
M C T 能 明显抑 制二 甲苯 致小 鼠耳肿
胀 , 对鸡蛋清引起的大鼠足肿胀 , 对醋酸介导
的毛细血管通透性 , 对大鼠急性胸膜炎及棉
球诱导的大鼠肉芽肿等炎症均有显著的抑制
作用 。 说明该化合物对各种急性炎症及慢性
增生性炎症均显示 良好的抗炎作用 。 能稳定
R B C 膜 , 提示其有稳定溶酶体膜 , 抑制溶酶
体的释放及其致炎作用 ;其显著降低炎性组
织 P G E 的含量 , 说明能够抑制 P G 的合成释
放及其致炎活性 ; M C T 能减少脂质过氧化
物 M D A 含量 (文章待发表 ) , 显示其有一定
的清除自由基的作用 。 实验显示的该化合物
的显著的抗炎作用 , 可能与上述的因素有关 。
作者报道的 M C T 是一个新结构的海洋
化合物 , 其结构不 同于天然的糖皮质激素街
体抗炎药 。 和醋酸可的松相比 , 较小用量的
M C T 就显示 出较好的抗炎作用 , 说明了从
海洋中寻找高效药物的前景 。
参 考 文 献
l 林志共 , 等 , 中国药理学与毒理学杂志 , 1 987 , 1 ( 2) : 93
2 徐叔云主编 . 药理实验方法学 . 北京 : 人 民卫生出版社 ,
第二版 , 1 9 9 1 . 7 1 3
3 祝兰卿 , 等 . 中国药理学报 , 29 5 9 , 2 0 ( 1 ) : 5 2
4 曲叔岩 , 等 . 药学学报 , 1 9 82 ( 7 ) : 一2
5 徐叔云主编 . 药理实验方法学 . 北京 : 人民卫生出版社 ,
第二版 , 19 9 1 . 7 1 9
6 M ik a m i T
, e t a l
.
E u r J P h a rm a e o l
,
19 8 3
, 9 5 ( 1 1 )
:
8 9 7
7 津 田恭介 , 等编集 . 药效刃评价 ( )l 药理试验法 (上 ) . 东
京 : 地人书馆 , 2 9 7 1 . 2 5 8
8 吉林医科大学化学教研室新药组 . 吉林医科大学学报 ,
1 9 7 6 ( 2 )
:
2 4
9 Z h o u C C
, e t a l
.
A d a P h a rm s in
, 1 98 5
,
2 0
:
2 5 7
( 1 9 9 6
一 0 2一 1 2 收稿 )
A n t i
一
i n f l a m m a t o r y A e t i o n o f 2 4
一
m e t h y l e n e
一
s a
一 e h o le s t e n 一 3 p
,
7 p
,
1 9一 t r i o l
X
u
S h ib o
,
H
u Q u n
,
Z h a o J in g h u a
, e t a l
S t
e r o
l 2 4
一
m e t h y le n e
一
s a
一 e
h
o
l
e s t e n 一 3p
,
7日, 1 9一 t r io l (M C T ) w a s is o l a t e d f r o m a s o f t e o r a l N e P h t h ea b ar s s ic a
e o ll e e t e d f r o m S o u t h C h in a S e a
.
I t s h
o w e d o b v io u s in h ib i t io n o n m a n y k in d s o f i n fl a m m a t io n s u e h a s s w e ll in g
e a r s o f m ie e in d u e e d b y x y le n e
, s
w
e
ll i
n g h i
n
d p
a
w
s o f r a t s in d u e e d b y e g g w h it e
,
p r o l if e r a t in g g r a n u lo m a in
-
d u e e d b y e o t t o n p e l le t in r a t s a n d i n e r e a s in g e a p il la r y p e rm e a b il it y o f m ie e in d u e e d b y a e e t ie a e id
.
M C T
a
l
s o
一
4 1 2
-
d
e e rea e sd v o l u mo ef p l u ea rl ex ud a t eo n a e et ia e eid in d u e ed a et u eP l eu ri syo f a rt s
.
T h
e e e sx P e rim en t s sho w ed
it s st ro n ga n t i
一
in n a m ma t o ryef f e et s
.
Do
se ra n g eu sed wa s0
.
6 1 3 ~ 0
.
9 8 7m g /k g ip h wi
e
hp
e e s rn t ed
a go o d
d
o e s一 e
f e
et e rla t io n shiP
.
T h e st ud yo n a n t i
一
in f la m ma t io n m e eha n i sm in d ia et ed t ha t MC T
o u ed l in hib it t h e rel ea o e sf in f la m ma t io n
f
a et o ru e s sha sP GE :
,
d
e e r e a s e P r o d
u e t io n o f M D A
a n
d
e n h
a n e e t h
e s t a b i lit y
o
f m e m b r a n e
.
黄杨宁对急性实验性脑缺血的保护作用△
南京中医药大学中药学院药理教研室 ( 2 1。。 29) 方泰惠 来 许惠琴 徐 立 金胜峨
摘 要 药理实验研究表明 , 黄杨宁能明显延长小鼠因结扎带迷走神经的两侧颈总动脉造成急性
脑缺血的存活时间 ; 能减轻大鼠实验性血栓的湿重和干重 。 提示黄杨宁有保护急性脑缺血及抗血
栓形成的作用 。
关键词 黄杨宁 急性脑缺血 抗血栓作用
黄杨宁的有效成分为环维黄杨星 D , 是
从黄杨科植物 中 国黄杨 B u x “ : m ci Por 勺 l al
s ie b
·
e t Z u e e
·
v a r
.
S i n i c a R e h d
.
e t W il
s 中提
取分离而制得的 。其临床及药理研究表明 , 对
冠心病 、 心绞痛 、心律失常等均具有较好的作
用 (黄杨研究成果鉴定资料汇编 . 1 9 8 6 . 1 0 ) 。
近年来临床用于缺血性脑病 (包括脑栓塞 、 脑
动脉硬化症 、基底动脉供血不足等 )亦取得 了
满意的疗效 (全 国 “ 黄杨宁片 ” 学术交流会论
文集 . 1 9 3一 04 一 1 3 ) 。 为此 , 我们进行了实验室
的初步研究 。
1 实验材料
1
.
1 药品 : 黄杨宁为白色粉末 , 由南京空军
小营制药厂供给 , 临用前用蒸馏水溶解 , 用冰
醋酸调至 p H S ;磷酸川芍嗦 , 广 东利民制药
厂 , 批号 8 4 0 6 0 3 ;阿斯匹林 , 南京市医药公 司
分装 。
1
.
2 动物 : IC R 小 鼠 , 体重 2 4一 2 6 9 , 雄性 ;
SD 大鼠 , 体重 2 5 0一 3 0 0 9 , 雄性 , 均由本校实
验动物中心提供 , 苏动 (质 ) 93 0 08 。
2 方法与结果
2
.
1 黄杨宁对小 鼠急性脑缺血的影响 〔, , 2〕 :
取小 鼠 80 只 , 随机分为 4 组 , 每组 20 只 , 即
为黄杨宁小剂量组 : 5 . 28 m g k/ g ; 黄 杨宁大
剂 量 组 : 1 3 . 2 m g / k g ; 磷 酸 川 芍嗦组 : 6 25
m g / k g ; 生理盐水组 : 10 m L k/ g 生理盐水 。 各
组每天灌胃给药 1 次 ,连续给药 s d 。 末次给
药 30 m ni 后 , 将小 鼠仰位固定于手术台上 ,
切开颈部皮肤 , 分离两侧颈总动脉 , 用 4 号手
术线分别结扎带迷走神经的左右颈总动脉 ,
记录小鼠死亡时间 , 结果见表 1 。 黄杨宁两个
剂量组均可明显延长小鼠因结扎两侧带迷走
神经 的颈总动脉造成急性脑缺血 的存活时
间 , 与生理盐水组 比较差异非常显著 (尸 <
0
.
0 1 )
, 提示黄杨宁对小鼠急性脑缺血有明显
的保护作用 。
,
A dd
r e s s : F a n g T a ih
u i
,
De p
t
.
o
f P h
a r m a e o lo g y
,
N a n j in g U
n i v e r s it y o f T r a d it io n a l C h in e s e M
e
d i
e i n e a n d
M
a t e r ia M
e d ie a
,
N
a n
j i
n g
方泰惠 1多年来主要 业于中国药科大学药学专业药药理学及毒理学研究 。 近几
、 教研室主任 、 硕士生导师 , 江苏省药品审评委员会委员 。分课题负责人 , 担任过 国家级课题 3 项 , 省级 6 项 , 均 已通过各级鉴定 , 国家中 医药管理局课题 “ 清化寮毒 、调养肝脾辨证治疗慢性乙型病毒性肝炎研究 ” , 获 95 年国家中医药管理局科技进步一等奖 ; “ 康香定喘膏的临床与实验研究” 1 9 9 5 年获江苏省中医药科技进步二等奖 ; 一与成都中医药大学协编《药理实验方法学 》 , 任主编 。 并在国家级杂志上发表论文 10 余篇 。
△ 本课题已获国家科委颁发的 1 9 9 3 年科技发明三等奖
《中草药 》 1 9 9 7 年第 2 8 卷第 7 期 · 4 1 3 ·