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Composition and content analysis of amino acid in authentic Angelica dahurica of Hunan

湖南道地白芷氨基酸含量与组成分析



全 文 :广 西 植 物 Guihaia Aug.2015,35(4):569-573           http://journal.gxzw.gxib.cn 
DOI:10.11931/guihaia.gxzw201402011
陈宏伟,钱玮,刁刻,等.湖南道地白芷氨基酸含量与组成分析[J].广西植物,2015,35(4):569-573
ChenHW,QianW,DiaoK,etal.CompositionandcontentanalysisofaminoacidinauthenticAngelicadahuricaofHunan[J].Guihaia,2015,35(4):
569-573
湖南道地白芷氨基酸含量与组成分析
陈宏伟1,2,钱 玮1,刁 刻1,饶力群2,邱业先1,2∗
(1.苏州科技学院 化学生物与材料工程学院,江苏 苏州215009;2.湖南农业大学 生物科学技术学院,长沙410128)
摘 要:白芷是我国常用中药材的一种,关于白芷镇痛的有效成分,主要认为是异欧前胡素、欧前胡素等香豆
素类具有解痉、镇痛等作用的挥发油类化学成分,但白芷镇痛的成分及其机理尚不十分清楚,是否有其他物质
也具有一定的药理作用也不得而知,比如说某些药效性氨基酸.该研究采用自动氨基酸分析仪测定了湖南道
地茶陵白芷的蛋白质类氨基酸和游离氨基酸的含量,并分析其氨基酸组成.结果表明:总氨基酸检出除Asn
以外的其他16种蛋白质氨基酸,含量最高的 Arg占总氨基酸的31.21%,接近1/3;必需氨基酸总量达
27.01%,其中含量最高的是Leu,占总必需氨基酸的24.14%;药效氨基酸比例较高,在酸水解产物总氨基酸和
游离氨基酸中分别达到73.89%和85.78%,其中Arg的含量最高,达1.383g􀅰100gG1,占比为42.24%,游离氨
基酸中γG氨基丁酸、鸟氨酸含量也较高.此外,还含有少量的高半胱氨酸和鹅肌肽等游离非蛋白质氨基酸和
短肽;必需氨基酸的组成接近 WHO/FAO的建议摄入值,但 Met+Cys的RC值最小,为第一限制性氨基酸.
这些药效性氨基酸和游离氨基酸可能是茶陵白芷具有良好药效的一个因素,而且茶陵白芷的氨基酸组成和配
比较合理、符合人体需要,在强化含硫氨基酸的基础上具有开发成为新型药食同源保健性食品的潜力.研究
结果可为进一步研究白芷的药理作用提供依据.
关键词:白芷;氨基酸组成;游离氨基酸
中图分类号:Q946.8,R917  文献标识码:A  文章编号:1000G3142(2015)04G0569G05
Compositionandcontentanalysisofaminoacid
inauthenticAngelicadahuricaofHunan
CHENHongGWei1,2,QIANWei1,DIAOKe1,RAOLiGQun2,QIUYeGXian1,2∗
(1.SchoolofChemistryBiologyandMaterialEngneering,SuzhouUniversityofScienceandTechnology,Suzhou215009,
China;2.CollegeofBioscienceandTechnology,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128,China)
Abstract:AngelicadahuricaisakindofChineseherbalmedicine.TheefectivecomponentsofA.dahurica,comG
monlyknownascoumarin,havedrawnattentionbecauseoftheirwidespectrumofbiologicalefectsthatmightbe
mainlyrelatedtosomechemicalcomponentswithantispasmodicandanalgesicactivitieslikesomevolatileoilssuchas
isoimperatorin,imperatorinandsoon.ButitisunclearwhatthecomponentsandmechanismofanalgesiainA.
dahuricaare,andwhetherthereareothersubstancesjustlikesomedrugGeffectiveaminoacidshavealsosomepharG
macologicalefectscanmakenothingofit.Inthisstudy,thecontentsandcompositionofproteinaminoacidsandfree
aminoacidsinChalingA.dahuricaofHunanweredeterminedbyaminoacidanalyzer,andanalysisedofitsamino
acidcomposition.Amongtotalaminoacids,16kindsofaminoacidsexceptforAsnweredetected,andthecontentof
Argwasthehighestandaccountedfor31.21%closeto1/3attheratioofthetotalaminoacids.Thecontentofthe
收稿日期:2014G09G26  修回日期:2014G12G09
基金项目:江西省新世纪学术与技术带头人项目(20030304);苏州市科技计划项目(SYN201410);江苏高校优势学科建设工程项目.
作者简介:陈宏伟(1978G),男,湖南茶陵人,博士研究生,讲师,主要从事生物化学与分子生物学研究,(EGmail)hwchen2000@163.com.
∗通讯作者:邱业先,博士,教授,博士生导师,研究方向为生物化学与分子生物学,(EGmail)qyx542@mail.usts.edu.cn.
essentialaminoacidreached27.01%,andthecontentofLeuisthehighest,andaccountedfortheratioofthetotalaG
minoacidsupto24.14%.Ahigherproportionofessentialaminoacidarerespectively73.89%and85.78%intotalaG
minoacidsbytheacidGcatalysedhydrolysingandfreeaminoacids,inwhichthecontentofArgwasthehighestas
1.383g􀅰100gG1,andaccountedfor42.24%.Thecontentofgammaaminobutyricacidandornithineinfreeamino
acidwasalsotoahighcontent.Andinaddition,asmalamountofhomocysteineandanserinefreenonproteinamino
acidsandpeptidesweredetected.Theessentialaminoacidcompositionwasclosetotherecommendationsofthe
WHO/FAOuptakevalue.ButMet+CyshadminimumRCvalue,andwasthefirstlimitingaminoacid.Theresults
showedthatthesedrugGefectiveandfreeaminoacidsmightbeonecausethatChalingA.dahuricahasgoodphysioG
logicalfunction.Futhermore,theaminoacidcompositionandratioofChalingA.dahuricae wererelatively
reasonableandaccordingwiththehumanbodyneeds.BasedonstrengtheningthesulfurGcontainingaminoacid,ChalG
ingA.dahuricahaspotentialtodevelopeasanewtypeofhealthfoodofedibleandpharmaceutical.Inaddition,the
studywilalsobeatheorybasisforfurtherstudyonthepharmacologicaleffectsofA.dahuricae.
Keywords:Angelicadahurica;aminoacidcomposition;freeaminoacid
  白芷为常用中药,具有驱风散寒、燥湿排脓、消
肿止痛等功效,临床应用广泛.«中国药典»2010版
收录白芷为伞形科当归属植物白芷(Angelica
dahurica)或杭白芷(A.dahuricavar.formosana)
的干燥根,在临床上广泛用于头痛、风湿痹痛、三叉
神经痛等多种疼痛的治疗(中华人民共和国国家药
典委员会,2010).关于白芷镇痛的有效成分研究
主要是白芷中有关异欧前胡素、欧前胡素等香豆素
类具有解痉、镇痛等作用的挥发油化学成分,但对其
镇痛机理尚不十分清楚(王梦月等,2002,2005).
有关白芷中氨基酸的组成与含量尚未见有报道,本
研究对湖南道地茶陵白芷的氨基酸成分和含量进行
分析,为进一步研究与开发白芷提供依据.
1 材料与方法
1.1材料、试剂与仪器
所用白芷产自湖南省白芷主产地茶陵县,经我
系植物学教研室王金虎副教授鉴定为杭白芷(AnG
gelicadahuricavar.formosana).氨基酸标准品
购自德国曼默博尔公司(membraPure),其他试剂均
为国产试剂分析纯.A300型自动氨基酸分析仪购
自德国曼默博尔公司.
1.2方法
1.2.1白芷的预处理 将干燥白芷块根用粉碎仪粉
碎,过60目筛,置于干燥器中保存备用.
1.2.2样品制备 白芷总氨基酸:称取适量白芷干
粉,加6NHCl密封于安瓿瓶中,于110℃水解22
h,用LiOH 调pH 为2.2,加稀释液稀释至合适浓
度,0.22μm滤膜过滤,上样至A300自动氨基酸分
析仪测定.白芷游离氨基酸:称取适量白芷干粉,按
料液比1∶20加入5mmol􀅰LG1HCl(pH2.2)浸提
过夜,于12000r􀅰minG1离心5min去渣,取400μL
上清液,加100μL10%磺基水杨酸,置4℃静置60
min,于14500r􀅰minG1离心15min,上清再次于
14500r􀅰minG1离心15min,取上清,用稀释液稀释
至合适倍数,0.22μm滤膜过滤,上样至A300自动
氨基酸分析仪测定.
2 结果与分析
2.1氨基酸含量测定
标准氨基酸色谱采用氨基酸标准品,其中包括
磷酸丝氨酸(pGSer),牛磺酸(Tau),磷乙醇胺(Pea),
尿素,天冬氨酸(Asp),苏氨酸(Thr),丝氨酸(Ser),
天冬酰胺(Asn),谷氨酸(Glu),肌氨酸(Sar),氨基
肥酸(aGAAA),甘氨酸(Gly),丙氨酸(Ala),瓜氨酸
(Cit),αG氨基正丁酸(aGABA),缬氨酸(Val),半胱
氨酸(Cys),胱硫醚(Cystha),蛋氨酸(Met),异亮氨
酸(Ile),亮氨酸(Leu),正亮氨酸(Nle),酪氨酸
(Tyr),苯丙氨酸(Phe),高半胱氨酸(HGCys),γG氨
基丁酸(gGABA),组氨酸(His),3G甲基组氨酸(3G
Mehis)色氨酸(Trp),肌肽(Car),鹅肌肽(Ans),羟
基赖氨酸(Hylys),鸟氨酸(Orn),赖氨酸(Lys),乙
醇胺 (EONH2),精 氨 酸 (Arg),羟 基 脯 氨 酸
(Hypro)和脯氨酸(Pro)等共计42种标准氨基酸.
进样20μL氨基酸标准品,采用双梯度(浓度梯度和
温度梯度)分离模式分离,570nm/440nm光源检测,
075 广 西 植 物                  35卷
图1 标准氨基酸色谱分离图
Fig.1 Standardchromatographyisolationofaminoacids
图2 白芷总氨基酸色谱分离图
Fig.2 ChronmtographyisolationoftotalaminoacidsinAngelicadahurica
图3 白芷游离氨基酸色谱分离图
Fig.3 ChronmtographyisolationoftotalaminoacidsinAngelicadahurica
其色谱图见图1.由图1可知,42种标准游离氨基
酸在110min内得到较好的分离.
2.2样品氨基酸含量分析
根据图1标准氨基酸色谱图及其标准氨基酸含
量分别判断和计算出白芷总氨基酸(图2)和游离氨
基酸(图3)的氨基酸种类及含量,如表1所示.
由表1氨基酸含量测定结果可知,总氨基酸检
出除Asn外的其他16种蛋白质氨基酸,含量最高
的Arg占总氨基酸的比值达31.21%.必需氨基酸
总量达到27.01%,其中含量最高的是Leu,占总必
1754期          陈宏伟等:湖南道地白芷氨基酸含量与组成分析
表1 白芷氨基酸含量 (g􀅰100gG1)
Table1 ContentofaminoacidsinAngelicadahurica
氨基酸
Aminoacid
总氨基酸
Totalaminoacid
游离氨基酸
Freeaminoacid
Aspc 0.237 0.038
Thra 0.155 0.033
Ser 0.130 0.031
Asn - 0.014
Gluc 0.458 0.102
Glyc 0.183 0.030
Alac 0.198 0.032
Vala 0.194 0.028
(Cys)2c 0.040 0.044
Metac 0.017 -
Ilea 0.151 0.037
Leuac 0.289 0.038
Tyrc 0.078 0.035
Pheac 0.152 0.042
HGCys 0.005 0.009
gGABA 0.122 0.122
His 0.124 0.012
Ans 0.110 -
Orn 0.035 0.029
Lysac 0.239 0.066
Argc 1.383 1.672
Pro 0.131 0.033
TAA 4.431 2.447
EAA 1.197 0.244
EAA/TAA (%) 27.01 9.97
EAA/NEAA(%) 37.01 11.08
药效氨基酸
DrugGefectiveaminoacid
3.274 2.099
药效氨基酸
DrugGefectiveaminoacid/TAA
73.89 85.78
 注:a.必需氨基酸;c.药效氨基酸;TAA.总氨基酸;EAA.必需氨基酸;
NEAA.非必需氨基酸.
 Note:a:Essentialaminoacid;c:DrugGeffectiveaminoacid;TAA:Totalamino
acids;EAA:Essentialaminoacid;NEAA:NonGessentialaminoacid.
表2 各种必需氨基酸与WHO/FAO推荐氨基酸模式谱比较
Table2 Comparisonofessentialaminoacidcomposition
inrice,milk,egg,soybean,beefandWHO/FAO
recommendedpattern(mg􀅰gG1protein)
种类 Type Thr Val Met+Cys Ile Leu
Phe+
Tyr Lys
WHO/FAO
建议标准模式
WHO/FAO
recommended
pattern
40 50 35 40 70 60 55
大米 Rice 25 38 28 40 63 72 23
牛奶 Milk 44 64 33 47 95 102 78
鸡蛋Egg 47 66 57 54 86 93 70
大豆Soybean 28 32 12 43 57 32 49
牛肉Beef 46 50 40 48 81 80 89
茶陵白芷
Angelicadahurica
ofHunan
37 47 14 36 69 55 58
需氨基酸的24.14%.
药效氨基酸比例较高,在酸水解产物总氨基酸
和游离氨基酸分别达73.89%和85.78%,其中Arg
的含量最高,达1.383g􀅰100gG1,占比为42.24%.
2.3非蛋白质氨基酸分析
白芷中存在含量较高的非蛋白质氨基酸,游离
氨基酸的测定结果也证实存在gGABA、Orn和 HG
Cys,并且与白芷蛋白水解产物的含量相当,说明这
些氨基酸主要是以游离形式存在;而鹅肌肽在游离
氨基酸中未检出,可能是白芷蛋白的水解产物,其中
γG氨基丁酸(γGaminobutyricacid,gGABA)和鸟氨酸
(ornithine,Orn)的含量很高,尤其是白芷中γG氨基
丁酸达1.22mg􀅰gG1,是稻芽、麦芽、红粬、炒稻芽、
炒麦芽等中药材0.2~0.6mg􀅰gG1含量的2~6倍
(陈体强等,2005),占总氨基酸的2.75%和2.48%,
高半胱氨酸(Homocysteine,HGCys)也有少量存在,
此外还检出了鹅肌肽(anserine,Ans).
2.4白芷氨基酸的组成评价
与 WHO标准模式氨基酸谱比较可知,白芷中
除了 Met+Cys外,其他必需氨基酸均接近于模式
谱标准(FAO,1973),这表明白芷的氨基酸配比较
合理,符合人体摄入的需要,是一种优质蛋白.与各
类食品氨基酸模式相比,白芷贮藏蛋白氨基酸模式
和大米相比各有高低,但明显优于大豆;在含硫氨基
酸 Met+Cys方面则不如牛奶、牛肉和鸡蛋,但与大
豆相当.
由表3必需氨基酸的氨基酸比值及比值系数可
知,Met+Cys的RC值(朱圣陶等,1988)最小,即
为第一限制性氨基酸,这与多数双子叶植物缺乏含
硫氨基酸相同.
表3 白芷中各种必需氨基酸的RAA和RC
Table3 RAAandRCofessentialamino
acidsinAngelicadahurica
Thr Val Met+Cys Ile Leu Phe+Tyr Lys
RAA 0.93 0.93 0.39 0.91 0.99 0.92 1.05
RC 1.22 1.22 0.51 1.19 1.29 1.20 1.37
 注:RAA.氨基酸比值;RC.氨基酸比值系数.
 Note:RAA.Ratioofaminoacid;RC:Ratiocoefficientofaminoacid.
3 讨论与结论
白芷在中药材中主要作为镇痛来使用,常常认
为是其含有的香豆素类物质的作用;而本研究发现
湖南道地的茶陵白芷中存在丰富的如gGABA、Orn、
鸟氨酸和鹅肌肽等药效性非蛋白质氨基酸和小肽,
275 广 西 植 物                  35卷
可能与其具有抑制神经传递和缓解疼痛作用存在一
定的相关性,其确切的药效作用和机理值得深入探
索;对于不同产地的白芷是否也具有类似的氨基酸
组成还需要进一步的研究.
白芷氨基酸含量测定表明,药效氨基酸含量较
高,在酸水解产物中和游离氨基酸中分别为73.89%
和85.78%,这可能与茶陵白芷具有良好的药理功能
相关,其中含量最高的为精氨酸,占总氨基酸的
31.21%,接近1/3;而庄岩等(1999)的研究表明精氨
酸经消化道补充达到一定水平后能显著调节免疫细
胞功能的作用.
本研究还发现,白芷除了含有丰富的蛋白质氨
基酸外,还含有较丰富的非蛋白质氨基酸,如gG
ABA含量为1.22mg􀅰gG1,是稻芽、麦芽、红粬、炒
稻芽、炒麦芽等中药材0.2~0.6mg􀅰gG1含量的2~
6倍,分别占总氨基酸的2.75%和2.48%,HGCys和
Ans也有少量存在(陈体强等,2005).这些游离氨
基酸可能具有某些生理功能,如gGABA是传递神经
冲动、对人的大脑中枢神经系统具有抑制作用、能减
缓疲劳的神经递质(杨帆等,2011).gGABA作为食
品经口摄入,具有镇静、改善睡眠、降血压等功能(堀
江典子等,2010);鸟氨酸可刺激脑垂体分泌成长激
素,促进基础代谢,同时也可提高肠道免疫功能(胡
学智等,2006),经肠道吸收后,鸟氨酸可能转化为具
有解除痉挛、缓解疼痛作用的生物碱如莨菪碱(阿托
品)、水苏碱等(匡海学等,2004).Ans具有抗氧化、
降血压、抗肿瘤、抗疲劳的功能,是一种天然的神经
调节剂(Marchisetal.,2000;何雄等,2007;唐道邦
等,2008).
茶陵白芷的氨基酸的含量及其组成也表明,茶
陵白芷的氨基酸组成接近 WHO的建议氨基酸摄
入值,其氨基酸配比较合理,且符合人体需要,在强
化含硫氨基酸的基础上具有开发成为新型药食同源
保健性食品的潜力.
参考文献:
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