全 文 ：广 西 植 物 Ｇｕｉｈａｉａ　Ｊａｎ．２０１３，３３（１）：３０－３４　　　　　　　　　　 ｈｔｔｐ：／／ｊｏｕｒｎａｌ．ｇｘｚｗ．ｇｘｉｂ．ｃｎ　
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－３１４２．２０１３．０１．００４
汪琼，姚青菊，徐增莱，等．基于ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ标记的４个夏蜡梅种群的遗传多样性研究［Ｊ］．广西植物，２０１３，３３（１）：３０－３４
Ｗａｎｇ　Ｑ，Ｙａｏ　ＱＪ，Ｘｕ　ＺＬ，ｅｔ　ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＳＳＲ　ａｎｄ　ＲＡＰＤ　ｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｇｕｉｈａｉａ，２０１３，３３
（１）：３０－３４
基于ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ标记的四个夏蜡梅
种群的遗传多样性研究
汪　琼１，姚青菊１，徐增莱１＊，胡建国２，杨传书２
（１．江苏省中国科学院 植物研究所（南京中山植物园），南京２１００１４；２．连云港市新浦区国营南云台林场，连云港２２２０６２）
摘　要：利用ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ技术对４个夏蜡梅种群２５个单株的遗传多样性进行研究。从６０条简单重复序
列引物中筛选出了１０条引物在２５个个体中共检测到６２个可重复的位点，其中多态位点为４１个，总的多态
位点百分率为６５．６０％；从６０条寡居核苷酸引物中筛选出了１０条引物共扩增出５２个位点，其中多态性位点
３１个，多态性位点的百分率为５７．５０％。Ｓｈａｎｎｏｎ指数估算的夏蜡梅群体总遗传多样性为０．３７３７，各群体平
均遗传多样性为０．１６４５。Ｎｅｉ’ｓ指数估算的夏蜡梅群体总遗传多样性为０．２５２８，各群体平均遗传多样性为
０．１１１７；物种水平的有效等位基因数为１．４４７３，平均值为１．１９７２。４个自然群体的基因分化系数Ｇｓｔ＝
０．５２９７，即总的变异中有５２．９７％的变异存在于群体间，而群体内的遗传变异占总变异的４７．０３％，群体间遗
传距离平均值０．２１８７。也表明了夏蜡梅４个群体间出现了遗传分化。夏蜡梅群体间的基因流较低，Ｎｍ＝
０．４４５０。聚类分析将４个种群聚为２支，且聚类结果表现出明显的地域性特征。作为狭域分布种，夏蜡梅各
群体间存在遗传分化和多样性程度不高，对夏蜡梅种群多样性的就地和迁地保护势在必行。
关键词：夏蜡梅；ＩＳＳＲ；ＲＡＰＤ；遗传多样性
中图分类号：Ｑ９４９．６７　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－３１４２（２０１３）０１－００３０－０５
＊ Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ　ｆｏｕｒ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＳＳＲ　ａｎｄ　ＲＡＰＤ　ｍａｒｋｅｒｓ
ＷＡＮＧ　Ｑｉｏｎｇ１，ＹＡＯ　Ｑｉｎｇ－Ｊｕ１，ＸＵ　Ｚｅｎｇ－Ｌａｉ　１＊，
ＨＵ　Ｊｉａｎ－Ｇｕｏ２，ＹＡＮＧ　Ｃｈｕａｎｇ－Ｓｈｕ２
（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ，Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　＆Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｂｏｔａｎｉｃａｌ　Ｇａｒｄｅｎ　Ｍｅｍ．Ｓｕｎ
Ｙａｔ－ｓｅｎ，Ｎａｎｊｉｎｇ　２１００１４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓａｔ－ｏｗｎｅｄ　Ｓｏｕｔｈ　Ｙｕｎｔａｉｓｈａｎ　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｆａｒｍ，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ　２２２０６２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ　ｏｆ　４ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　２５ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｏｆ　Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ＩＳＳＲ　ａｎｄ　ＲＡＰＤ
ｍａｒｋｅｒ．６２ｌｏｃｉ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｗｉｔｈ　１０ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｆｒｏｍ　６０ｐｒｉｍｅｒｓ，ｏｕｔ　ｏｆ　ｗｈｉｃｈ　４１ｌｏｃｉ
ｗｅｒｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｂａｎｄｓ　ｗａｓ　６５．６０％；５２ｌｏｃｉ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｗｉｔｈ　１０ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｐｒｉｍｅｒｓ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｆｒｏｍ　６０ｐｒｉｍｅｒｓ，ｏｕｔ　ｏｆ　ｗｈｉｃｈ　３１ｌｏｃｉ　ｗｅｒｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｂａｎｄｓ　ｗａｓ
５７．５０％．Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ　ｉｎｄｉｃｅｓ　ｏｆ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｉ）ｗｅｒｅ　０．３７３７ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｌｅｖｅｌ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｏｆ　０．１６４５ａｍｏｎｇ　ｐｏｐ－
ｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｎｅｉ’ｓ　ｇｅｎｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ（ｈ）ｗａｓ　０．２５２８ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｏｆ　０．１１１７ａｍｏｎｇ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ；ａｎｄ　ｔｈｅ
ｅｆｅｃｔｉｖｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ａｌｅｌｅｓ（ｎｅ）ｗａｓ　１．４４７３ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｏｆ　１．１９７２ａｍｏｎｇ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｇｅｎｅｔｉｃ
＊ 收稿日期：２０１２－０５－２８　　修回日期：２０１２－０８－０９
基金项目：江苏省科技支撑计划项目（ＢＥ２００８３３８）；连云港市科技计划项目（ＣＮ０７１２）
作者简介：汪琼（１９７１－），女，安徽桐城人，硕士，研究方向为植物资源学，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｗｑｊａｎ２００２＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ。
＊通讯作者：徐增莱，博士，研究员，从事药用植物资源研究，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｘｕｚｌ５１９４＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ。
ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ（Ｇｓｔ）ｗａｓ　０．５２９７ａｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｌｅｖｅｌ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ｆｌｏｗ（Ｎｍ）
ｗａｓ　０．４４５０．Ｃｌｕｓｔｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　４ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　２ｇｒｏｕｐｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅｉｒ　ｇｅｏ－
ｇｒａｐｈｉｃａｌ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．Ａｓ　ａ　ｈｉｇｈｌｙ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ　ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ，ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　Ｃ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
ｗａｓ　ｎｏｔ　ｈｉｇｈ．Ｉｔ　ｉｓ　ｎｅｃｅｓｓａｒｙ　ｔｏ　ｔａｋｅ　ｍｅａｓｕｒｅｓ　ｔｏ　ｐｒｏｔｅｃｔ　ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｏｒ　ｅｘ　ｓｉｔｕ　ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ；ＩＳＳＲ；ＲＡＰＤ；ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
　　夏蜡梅（Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）是蜡梅科（Ｃａ－
ｌｙｃａｎｔｈａｃｅａｅ）夏蜡梅属（Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ）多年生落叶
直立灌木，夏蜡梅属在我国为唯一分布种（蒋英和李
秉滔，１９７９）。为第三纪孑遗物种，我国二级保护的
珍稀濒危植物，仅分布于浙江省临安市和天台县的
狭小范围内，野生资源十分有限（章绍尧等，１９９５）。
夏蜡梅２０世纪６０年代初在我国浙江省首次被发
现，由我国植物学家郑万钧等（１９６３）作为新种发表。
当时将其置于美国蜡梅属下，命名为Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｗ．Ｃ．Ｃｈｅｎｇ　ｅｔ　Ｓ．Ｙ．Ｃｈａｎｇ。后来基于花
部特征与美国蜡梅属存在显著差异，郑万钧先生主
张将成立夏蜡梅属（Ｓｉｎｏｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　Ｗ．Ｃ．Ｃｈｅｎｇ
ｅｔ　Ｓ．Ｙ．Ｃｈａｎｇ），并将其定名为Ｓｉｎｏｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｃｈｅｎｇ　ｅｔ　Ｓ．Ｙ．Ｃｈａｎｇ）Ｗ．Ｃ．Ｃｈｅｎｇ　ｅｔ　Ｓ．
Ｙ．Ｃｈａｎｇ。蒋英等（１９７６）则认为将夏蜡梅置于美国
蜡梅属是合理，应仍沿用最初的种名Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｃｈｅｎｇ　ｅｔ　Ｓ．Ｙ．Ｃｈａｎｇ。２００８年出版的
Ｆｌｏｒａ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ对夏蜡梅的种名进行了修订，正式
命名为Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｗ．Ｃ．Ｃｈｅｎｇ　＆Ｓ．
Ｙ．Ｃｈａｎｇ）Ｗ．Ｃ．Ｃｈｅｎｇ　＆Ｓ．Ｙ．Ｃｈａｎｇ　ｅｘ　Ｐ．Ｔ．Ｌｉ
（Ｌｉ　＆Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅｗ，２００８）。
半个多世纪以来，一些学者就夏蜡梅的细胞学
和孢粉学（李林初，１９８６，１９８９）、生态学（徐耀良等，
１９９７；张宏伟等，１９９７）、遗传多样性（Ｆａｎｇ　ｅｔ　ａｌ．，
２００８；Ｌｉ　ｅｔ　ａｌ．，２００６）及保护生物学（张文标等，
２００７）进行了研究。近年来，由于人类对自然资源不
合理利用日益加剧和环境变化，夏蜡梅对逆境的抗
性也引起了人们的关注（刘文莉等，２００７，２００８；柯世
省等，２００７）。作为狭域分布种，夏蜡梅种群数量小，
野生植株的天然蕴藏量十分有限，其遗传多样性评
价是就地保护和迁地保护的基础，夏腊梅种群的遗
传多样性和遗传分化一直是其研究的核心内容。Ｌｉ
等（２００６）采用ＲＡＰＤ标记研究了夏腊梅种群的遗
传分化，１２个引物共扩增出１６５个位点，种水平和
种群水平的多态位点百分率、Ｎｅｉ’ｓ基因多样性指
数、Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数分别为６８．８４％、０．２４２１、
０．３６１５和１４．８９％、０．０５７８、０．０８４３，遗传分化系数
和基因流分别０．７６１３和０．１５６８。Ｆａｎ　ｅｔ　ａｌ．（２００８）
也采用ＲＡＰＤ标记研究了夏腊梅种群的遗传结构
和保护策略。２２条引物共扩增出２５７个位点，种水
平和种群水平的多态位点百分率、Ｎｅｉ’ｓ基因多样
性和 Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数分别为４０．９％、０．１６４１、
０．２３８６ 和 ５９．１％、０．２０９７、０．３１２３，基 因 流 为
０．８９４４。以上结果表明夏腊梅种群的遗传多样性较
低。等位酶分析结果也表明夏腊梅种群内的遗传多
样性极低。本研究以大明山等４个夏蜡梅种群为材
料，采用ＩＳＳＲ标记和ＲＡＰＤ标记对夏蜡梅种群的
遗传多样性进行研究，为夏蜡梅资源的保护提供分
子生物学证据。
１　材料与方法
１．１实验材料
在夏蜡梅分布区浙江天台、大明山、双石和西天
目山采集４个夏蜡梅种群（表１），采摘其健康幼嫩
叶片，用变色硅胶迅速干燥，带回实验室，常温保存
备用。
表１　用于ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ标记夏蜡梅种群概况
Ｔａｂｌｅ　１　Ｓｔａｔｕｓ　ｏｆ　４ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ＩＳＳＲ　ａｎｄ　ＲＡＰＤ　ｍａｋｅｒ
编号
Ｎｏ．
采集地
Ｌｏｃａｌｉｔｙ
样株数
Ｎｏ．ｏｆ
ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ
ＴＴ 浙江天台 Ｔｉａｎｔａｉ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　 １２
ＤＭ 浙江大明山 Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｄａｍｉｎｇ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　 ８
ＳＳ 浙江双石Ｓｈｕａｎｇｓｈｉ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　 ３
ＸＴＭ 浙江西天目山 Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｘｉｔｉａｎｍｕ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　 ２
１．２实验方法
１．２．１总ＤＮＡ的提取　采用北京百泰克生物技术
有限公司出品的新型快速植物基因组ＤＮＡ提取试
剂盒（离心柱型）提取 ＤＮＡ，并溶解于灭菌双蒸水
中，低温（－２０℃）贮藏，备用。
１．２．２ＰＣＲ扩增与检测
１．２．２．１ＩＳＳＲ的ＰＣＲ扩增与检测　ＰＥ－９７００ＰＣＲ
仪上进行ＰＣＲ，反应条件参照金则新等（２００７）的方
法加以改进，２０μＬ的反应体系包括１×Ｔａｇ　ＤＮＡ
酶缓冲液（１０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＣｌ，
１３１期　　　　　　汪琼等：基于ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ标记的４个夏蜡梅种群的遗传多样性研究
０．１％Ｔｒｉｏｎ　ｘ－１００，ｐＨ　８．４），２．５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＭｇＣｌ２，１Ｕ
Ｔａｇ酶，５０ｎｇ模板，０．４μｍｏｌ／Ｌ引物，各０．４ｍｍｏｌ／Ｌ
的ｄＡＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＣＴＰ和ｄＴＴＰ。ＰＣＲ程序：首先９５
℃预变性３ｍｉｎ，９５℃变性３０ｓ，然后５８℃退火４０ｓ，
７２℃延伸１ｍｉｎ，３５个循环，最后７２℃保温７ｍｉｎ，４
℃保存。ＰＣＲ产物在１．２％的琼脂糖胶中电泳１ｈ，
溴化乙锭（ＥＢ）染色，凝胶成像系统拍照。
１．２．２．２ＲＡＰＤ 的 ＰＣＲ 扩增与检测　ＰＥ－９７００
ＰＣＲ仪上进行ＰＣＲ，反应条件参照改进的张文标等
（２００７）方法，２０μＬ的反应体系包括１×Ｔａｇ　ＤＮＡ
酶缓冲液（１０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＣｌ，
０．１％ Ｔｒｉｏｎ　ｘ－１００，ｐＨ８．４），２．５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＭｇＣｌ２，１
ＵＴａｇ酶，５０ｎｇ模板，０．４μｍｏｌ／Ｌ 引物，各０．４
ｍｍｏｌ／Ｌ的ｄＡＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＣＴＰ和ｄＴＴＰ。ＰＣＲ程
序：９５℃预变性３ｍｉｎ，９５℃变性３０ｓ，３８℃退火４０
ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ，３５个循环，７２℃保温７ｍｉｎ，４
℃保存。ＰＣＲ产物在０．８％的琼脂糖胶中电泳１ｈ，
溴化乙锭（ＥＢ）染色，凝胶成像系统拍照。
１．２．３引物筛选　筛选上海生物工程技术有限公司
设计生产的ＩＳＳＲ引物和ＲＡＰＤ引物各６０个，选取
其中扩增条带丰富、信号强的１０个引物简单重复序
列引物和１０个寡聚核苷酸引物进行ＲＡＰＤ扩增。
１．３数据分析
根据电泳图谱中ＤＮＡ条带的有无，将ＩＳＳＲ和
ＲＡＰＤ扩增结果转化为二元数据（有带的量化为１，
无带的量化为０），计算多态性。应用ＰＯＰＧＥＮＥ软
件采用ＵＰＧＭＡ法计算品种的遗传相似系数，并对
种群间的亲缘关系进行聚类分析。
２　结果与分析
２．１ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增结果
１０条ＩＳＳＲ引物共扩增出６２个位点，平均每条
引物扩增出６．２个位点，其中多态性位点４１个，多
态位点百分率（Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｓｉｔｅｓ，
ＰＰＳ）为６５．６０％（表２）。扩增条带大小集中在１　５００
～５００ｂｐ之间，其中引物ＩＳＳＲ－３５扩增出的位点和多
态性位点均最多，分别为８个和６个；ＩＳＳＲ－３５扩增出
的多态性位点百分率最高，达８０．００％。ＩＳＳＲ６２和
ＵＢＣ－８１５扩增出多态性位点的百分率最低，仅
５０．００％。图１显示了引物ＩＳＳＲ－６２的扩增结果。
２．２ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增结果
１０条ＩＳＳＲ引物共扩增出５２个位点，平均每条
图１　ＩＳＳＲ－６２（上）和ＲＡＰＤ－４１（下）的夏蜡梅种群扩
增结果　１－１２．天台种群；１３－２０．大明山种群；２１－２３．双石种
群；２４－２５．西天目山种群。种群编号下同。
Ｆｉｇ．１　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｂｙ　ＩＳＳＲ－６２ （ｕｐ）ａｎｄ
ＲＡＰＤ－４１（ｄｏｗｎ）　１－１２．Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｏｆ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｉａｎ－
ｔａｉ；１３－２０．Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｏｆ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｄａｍｉｎｇ；２１－
２３．Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｏｆ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｈｕａｎｇｓｈｉ；２３－２４．Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｏｆ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｘｉｔｉａｎｍｕ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
表２　ＩＳＳＲ的引物序列及扩增结果
Ｔａｂｌｅ　２　ＩＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ
引物
Ｐｒｉｍｅｒ
序列
（５′－３′）
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
（５′－３′）
总位点数
Ｔｏｔａｌ
ｓｉｔｅｓ
多态性
位点数
Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｓｉｔｅｓ
多态位点
百分率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
ｏｆ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｓｉｔｅｓ（％）
ＩＳＳＲ－１ （ＡＣ）８Ｔ ７　 ５　 ７１．４３
ＩＳＳＲ－２６ （ＡＣ）８ＣＣ　 ８　 ６　 ７５．００
ＩＳＳＲ－３５ （ＡＧ）８ＴＡ　 ５　 ４　 ８０．００
ＩＳＳＲ－４２ （ＡＣ）８ＣＧ　 ５　 ３　 ６０．００
ＩＳＳＲ－４５ （ＡＣ）８ＧＣ　 ６　 ４　 ６６．６７
ＩＳＳＲ－４７ （ＡＣ）８ＧＴ　 ５　 ３　 ６０．００
ＩＳＳＲ－６２ （ＡＧ）８ＣＡ　 ６　 ３　 ５０．００
ＵＢＣ－８０７ （ＡＣ）８Ｔ ７　 ５　 ７１．４３
ＵＢＣ－８１０ （ＧＡ）８Ｔ ７　 ５　 ７１．４３
ＵＢＣ－８１５ （ＣＴ）８Ｇ ６　 ３　 ５０．００
　　　　平均Ａｖｅｒａｇｅ　 ６．２　 ４．１　 ６５．６０
引物扩增出５．２个位点，其中多态性位点３１个，多
态百分率为５７．５０％（表３）。扩增条带大小集中在
２　０００～５００ｂｐ之间。其中引物ＲＡＰＤ－３９扩增出的
位点和多态性位点均最多，分别为８个和６个；多态
性位点的百分率也最高，达７５．００％。ＲＡＰＤ－４１扩
增出多态性位点的百分率最低，仅４０．００％。图１
显示了引物ＲＡＰＤ－４１的扩增结果。
２．３夏蜡梅种群遗传多样性分析
　　基于ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ标记的夏蜡梅各种群的遗
传多样性和分化指数见表４。根据ＰＰＢ值，各种群
遗传多样性高低排列为：西天目山＜双石＜天台＜
２３ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３３卷
大明山。而根据Ｓｈａｎｎｏｎ多样性指数（Ｉ）值各种群
遗传多样性高低排列与按ＰＰＢ 值的排序相同。４
个夏蜡梅种群 Ｓｈａｎｎｏｎ多样性指数变化范围为
０．０７３６～０．２９８９，物种水平多样性为０．３７３７；Ｎｅｉ’ｓ
基因多样性为 ０．０５０４～０．２０１２，物种水平为
０．１１１７；有效等位基因数的变异范围为１．０８６１～
１．３５３６，物种水平的有效等位基因数为１．４４７３；观
察等位基因数为１．１２１７～１．５６５２，种水平为１．７０４３。
表３　ＲＡＰＤ的引物序列及扩增结果
Ｔａｂｌｅ　３　ＲＡＰＤ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ
引物
Ｐｒｉｍｅｒ
序列 （５′－３′）
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ（５′－３′）
总位点数
Ｔｏｔａｌ　ｓｉｔｅｓ
多态性位点数
Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｓｉｔｅｓ
多态位点百分率 （％）
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｓｉｔｅｓ
ＲＡＰＤ－３５ ＡＧＧＴＧＡＣＣＧＴ　 ４　 ２　 ５０．００
ＲＡＰＤ－３６ ＣＣＡＣＡＧＣＡＧＴ　 ４　 ２　 ５０．００
ＲＡＰＤ－３９ ＧＴＴＧＣＧＡＴＣＣ　 ８　 ６　 ７５．００
ＲＡＰＤ－４１ ＡＣＣＧＣＧＡＡＧＧ　 ５　 ２　 ４０．００
ＲＡＰＤ－４２ ＡＣＣＧＣＧＡＡＧＧ　 ６　 ４　 ６６．６７
ＲＡＰＤ－４３ ＧＴＧＡＧＧＣＧＴＣ　 ４　 ２　 ５０．００
ＲＡＰＤ－４６ ＧＴＣＧＣＣＧＴＣＡ　 ５　 ３　 ６０．００
ＲＡＰＤ－４８ ＴＣＴＧＧＴＧＡＧＧ　 ４　 ２　 ５０．００
ＲＡＰＤ－４９ ＧＡＴＧＡＣＣＧＣＣ　 ６　 ４　 ６６．６７
ＲＡＰＤ－５０ ＴＧＡＧＣＧＧＡＣＡ　 ６　 ４　 ６６．６７
平均Ａｖｅｒａｇｅ　 ５．２　 ３．１　 ５７．５０
表４　基于ＩＳＳＲ标记和ＲＡＰＤ标记的夏蜡梅种群的遗传多样性
Ｔａｂｌｅ　４　Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎ　Ｃ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＳＳＲ　ａｎｄ　ＲＡＰＤ　ｍａｒｋｅｒ
种群编号
Ｎｏ．
多态位点数
ＰＰＬ
多态位点百分数
ＰＰＳ（％）
观察等位基因数
Ｎａ
有效等位基因数
Ｎｅ
Ｎｅｉ’ｓ基因多样性
Ｈ
Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数
Ｉ
ＴＴ　 ３８　 ３３．０４　 １．３３０４　 １．２０６９　 ０．１１７４　 ０．１７３５
ＤＭ　 ６５　 ５６．０２　 １．５６５２　 １．３５３６　 ０．２０１２　 ０．２９８９
ＳＳ　 ２１　 １８．２６　 １．１８２６　 １．１４２１　 ０．０７７７　 ０．１１１９
ＸＴＭ　 １４　 １２．１７　 １．１２１７　 １．０８６１　 ０．０５０４　 ０．０７３６
平均值Ａｖｅｒａｇｅ　ｖａｌｕｅ　 ３４．５　 ２９．８７　 １．３０００　 １．１９７２　 ０．１１１７　 ０．１６４５
物种水平Ｓｐｅｃｉｅｓ　ｌｅｖｅｌ　 ８１　 ７０．４３　 １．７０４３　 １．４４７３　 ０．２５２８　 ０．３７３７
表５　四个夏蜡梅种群的遗传相似系数和遗传距离
Ｔａｂｌｅ　５　Ｎｅｉ’ｓ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ　ａｎｄ　ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　４ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｃ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
ＴＴ　 ＤＭ　 ＳＳ　 ＸＴＭ
ＴＴ ＊＊＊＊ ０．８０４０　 ０．６７９２　 ０．６８２５
ＤＭ　 ０．２１８１ ＊＊＊＊ ０．９２２９　 ０．８８６２
ＳＳ　 ０．３８６８　 ０．０８０２ ＊＊＊＊ ０．９０７７
ＸＴＭ　 ０．３８２０　 ０．１２０８　 ０．０９６８ ＊＊＊＊
　＊＊＊＊号上方为遗传相似系数，下方为遗传距离。
　Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　１－４ａｒｅ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　Ｔａｂｌｅ　１；Ｎｅｉ’ｓ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｉ－
ｄｅｎｔｉｔｙ（ａｂｏｖｅ　ｄｉａｇｏｎａｌ）ａｎｄ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ（ｂｅｌｏｗ　ｄｉａｇｏｎａｌ）．
２．４夏蜡梅种群的聚类分析
基于ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ标记的４个夏蜡梅种群遗
传距离和遗传相似系数见表４。大明山种群和双石
种群的遗传距离最近，仅为０．０８０２；天台种群和双
石种群的遗传距离最远，为０．３８６８；遗传距离平均
值为０．２１４１。
基于遗传相似系数和遗传距离，ＵＰＧＭＡ法聚
类分析，得到了４个夏蜡梅种群的聚类图（图２）。
大明山种群和双石种群首先聚为一支，然后与西天
目山种群聚到一起；天台种群与其他种群的亲缘关
系较远，单独聚为一支。
２．５夏蜡梅种群的基因分化
　　用ＰＯＰＧＥＮＥ软件在假设遗传平衡条件下对４
个夏蜡梅种群进行分析，计算出种水平基因多样性
（Ｈｔ，ｇｅｎｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｍｏｎｇ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ）和种群内基
因多样性（Ｈｓ，ｇｅｎｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｗｉｔｈｉｎ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ）分别
为０．２３７１和０．１１１７。种群间基因分化系数（Ｇｓｔ）为
０．５２９１，即在总的遗传变异中有５２．９１％存在于群体
间，而４７．０９％的变异都存在于种群的内部。基因流
（Ｎｍ）为０．４４５０，说明种群间的遗传交换较少。
３　讨论
３．１夏蜡梅种群的遗传多样性
遗传多样性分析显示４个夏蜡梅种群ＩＳＳＲ和
ＲＡＰＤ标记多态性条带百分率为７０．４３．％，但各种
３３１期　　　　　　汪琼等：基于ＩＳＳＲ和ＲＡＰＤ标记的４个夏蜡梅种群的遗传多样性研究
图２　４个夏蜡梅种群基于遗传相似系数的聚类图
Ｆｉｇ．２　Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ　ｏｆ　４ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｃ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
群内多态性条带百分率的平均值仅为２９．８７％，其
中西天目山种群内ＰＰＢ值仅１２．１７％，大明山种群
的ＰＰＢ值最高，也仅为５６．０２％；Ｎｅｉ’ｓ基因多样性
（Ｈ）和Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数（Ｉ）仅０．１１１７和０．１６４５，
这表明夏蜡梅的遗传变异主要存在于种群间。其种
群内部基因分化系数仅为０．５２９１，也表明了这一
点。４个种群遗传距离的平均值仅为０．２１４１；天台
种群和双石种群的遗传距离最远，为０．３８６８，大明
山种群和双石种群的遗传距离最近，仅为０．０８０２。
与Ｆａｎ　ｅｔ　ａｌ．（２００８）的ＲＡＰＤ研究结果（种群水平
ＰＰＢ、Ｈ、Ｉ分别为４０．９％、０．１６４４和０．２３８６）基本
一致，但Ｌｉ　ｅｔ　ａｌ．（２００６）的ＲＡＰＤ实验结果高（种群
水平 ＰＰＢ、Ｈ、Ｉ 分 别 为 １４．４９％、０．０５７８ 和
０．０８４３）；也比周世良等（２００２）通过１４个等位酶检
测到的种群水平多态位点百分率为０～１３％。作为
一种狭域分布的树种，夏蜡梅种群基因水平的遗传
多样性不高已是公认的事实。但陈香波等（２０１０）通
过对夏蜡梅自然分布区８个群体花部、叶部、果部和
种子的２２个性状系统调查与分析发现，夏蜡梅天然
群体存在丰富的表型变异，２０个表型性状在群体间
与群体内差异均达到极显著水平。可能是因为形态
变异更多的是环境饰变而非遗传物质的改变。
４个夏蜡梅种群的基因流为０．４４５０。比Ｆａｎ
（２００８）的研究结果（Ｎｍ＝０．８８９８）低。种群间基因
分化系数（Ｇｓｔ）为０．５２９１，表明种群间和种群内遗
传变异相近。夏蜡梅是以异交为主、自交亲合、混合
交配自然繁育系统。异交主要依赖昆虫传粉，这种
传粉方式不利于花粉的长距离传播和远距离种群的
基因交流，并有可能导致种群对局部生态环境的适
应，进而促使种群间的遗传隔离（李均敏等，２００４），
从而使分布地域狭窄、生境片段化的夏蜡梅种群的
濒危程度加剧。
３．２夏蜡梅种群的保护策略
本研究及众多研究结果均表明夏蜡梅种群的遗
传多样性不高。作为第三纪孑遗植物，狭域分布的
珍稀濒危物种，对夏蜡梅种质资源的保护势在必行。
张文标等（２００７）的研究发现不同生境的夏蜡梅具有
不同的遗传多样性，且在各生境间发生了明显的遗
传分化。因此，选择种群密度大，生境丰富的地区建
立保护区是夏蜡梅种群保护的有效方式。同时，迁
地保护也不能忽视，对于一个基因流比较小，Ｇｓｔ值
为０．６０的物种，至少要取样６个种群才能保存其
９５％的遗传多样性；而对Ｇｓｔ值为０．２０的物种，要
达到同样的效果只需要取样２个种群就足够（Ｈａｍ－
ｒｉｋ　ｅｔ　ａｌ．，１９９１）。根据夏蜡梅的Ｇｓｔ值，我们认为
必须保存所有分布地的种群才可以保存其种质的多
样性。此外，夏蜡梅叶大而色翠，晚春初夏开花，花
大，花被片螺旋状着生于杯状或坛状的花托上，外花
被片白色，倒卵形或倒卵状匙型，边缘紫红色，有脉
纹；内层花被片中部以上淡黄色，中部以下白色。且
其果很像一只精美的花瓶，春夏可赏花，秋天能观
果，观赏价值高（蒋英等，１９７９）。因此，加快夏蜡梅
作为园林观赏植物的推广引用和种质创新进程，对
于夏蜡梅资源的保护同样具有重要而深远的意义。
参考文献：
张文标．２００７．濒危植物夏蜡梅繁殖生态与遗传分化研究［Ｄ］．
重庆：西南大学
章绍尧，毛宗国．１９９２．夏蜡梅［Ｍ］／／傅立国，金鉴明．中国保
护植物红皮书．北京：科学出版社：１９６－１９７
蒋英，李秉滔．１９７９．中国植物志（第３０卷第２分册）［Ｍ］．北
京：科学出版社：３－５
Ｃｈｅｎ　ＸＢ（陈香波），Ｙｅ　ＷＧ（叶文国），Ｔｉａｎ　Ｑ（田旗），ｅｔ　ａｌ．２０１０．
Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｐａｔｔｅｒｎ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｏｐｕｌａ－
ｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｓｉｎｏｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（夏蜡梅天然群体表型变异及
分布特征）［Ｊ］．Ｊ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｆｏｒ　Ｕｎｉｖｅｒ（北京林业大学学报），３２
（２）：１３３－１４０
Ｆａｎ　ＣＣ，Ｐｅｃｃｈｉｏｎｉ　Ｎ，Ｃｈｅｎ　ＬＱ．２００８．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｐｒｏ－
ｐｏｓｅｄ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｓｔｒａｔｅｇｙ　ｆｏｒ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｃａｌｙｃａｎｔｈａｃｅａｅ）［Ｊ］．Ｃａｎ　Ｊ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉ，８８：１７９－１８６
Ｈａｍｒｉｋ　ＪＬ，Ｇｏｄｔ　ＭＪＷ，Ｍｕｒａｗａｋｉ　ＳＡ，ｅｔ　ａｌ．１９９１．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ
ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｔｒａｉｔｓ，ａｌｏｚｙｍｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｃｏｎｓｅｒ－
ｖａｔｉｏｎ　ｂｉｏｌｏｇｙ［Ａ］／／Ｆａｌｋ　ＤＡ，Ｈｏｌｓｉｎｇｅｒ　ＤＥ（ｅｄｓ）．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，
Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒａｒｅ　Ｐｌａｎｔｓ［ＶＩ］．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ｏｘｆｏｒｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｐｒｅｓｓ：７５－８６
Ｊｉｎ　ＺＸ（金则新），Ｌｉ　ＪＭ（李均敏）．２００７．ＩＳＳＲ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｒｅｌｉｃ　ｓｈｒｕｂ　Ｓｉｎｏｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（珍
稀濒危植物夏蜡梅遗传多样性的ＩＳＳＲ分析）［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ａｐ－
ｐｌ　Ｅｃｏｌ（应用生态学报），１８（２）：２４７－２５３
Ｋｅ　ＳＳ（柯世省），Ｊｉｎ　ＺＸ（金则新）．２００７．Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｒｏｕｇｈｔ　ｓｔｒｅｓｓ　ｏｎ
ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｎ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（干旱胁迫对夏蜡梅叶片脂质过氧化及抗氧化系统的
（下转第１４２页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｏｎ　ｐａｇｅ　１４２）
４３ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３３卷
Ｌｉ　Ｌ，Ｈｅ　ＫＸ．２００６．Ｔｈｅ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｓｔａｔｕｓ　ｏｆ　ｓｗｅｅｔ　ｔｅａ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔｓ［Ｊ］．Ｍｏｄ　Ｍｅｄ　Ｈｅａｌｔｈ，２２（２）：１９９－２０１
Ｌｉａｎｇ　Ｊ，Ｚｈａｏ　Ｐ，Ｌｉ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．２００３．Ａｃｕｔｅ　ａｎｄ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ
Ｒｕｂｕｓ　ｓｕａｖｉｓｓｉｍｕ［Ｊ］．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｍｅｄ　Ｊ，２５（１２）：２　３９４－２　３９７
Ｌｉａｎｇ　ＸＱ，Ｓｈｉ　Ｔ，Ｘｉｅ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．２００８．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｕｂｕｓｏｓｉｄｅ　ｏｎ　ｈｙ－
ｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃ　ｒａｔｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ａｌｏｘａｎ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｆｏｒｅｉｇｎ　Ｍｅｄ
Ｔｒｅａｔ，３５：７－８
Ｌｉａｏ　ＭＹ，Ｑｉｎ　ＧＺ．１９８１．Ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｗｅｅｔ　ｔｅａ［Ｊ］．
Ｇｕｉｈａｉａ，１（４）：２０
Ｌｉｕ　Ｄ，Ｇａｏ　ＺＧ，Ｚｈａｎｇ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．２００５．Ｂｉｏａｓｓａｙ　ｇｕｉｄｅｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｒｕｂｕｓ　ｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓ　ｌｅａｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ　ＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉ－
ｔｉｅｓ　ａｎｄ　ａ　ｓｅｐａｒａｂｌｅ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍ　Ｂｉｏｌ，４３（８）：７１３－７１７
Ｌｉｕ　ＨＹ，Ｈｅ　ＫＸ，Ｌｉ　Ｌ．２００９．Ｒｕｂｕｓ　ｓｕａｒｉｓｓｉｍｕｓ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ
ａｄｈｅｒｉｎｇ　ｏｆ　ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｍｕｔａｎｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｓｔｏｍａｔｏｌ，２５（２）：
６７－６８
Ｌｉｕ　ＺＪ，Ｓｃｈｗｉｍｅｒ，Ｌｉｕ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．２００６．Ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｓ　ｐａｒｔｉａｌｙ　ｒｅ－
ｓｐｏｎｓｉｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｒｕｂｕｓ　ｌｅａｆ　ｅｘｔｒａｃｔ
［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ　Ｒｅｓ，２０：８０６－８１３
Ｌｕｏ　ＤＷ．２０１０．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｒｕｂｕｓｏｓｉｄｅ　ｓｕａ－
ｖｉｓｓｉｍｕｓ　ｆｒｕｉｔ［Ｄ］．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｎｏｒ　Ｕｎｉｖ
ＬüＨＣ，Ｗａｎｇ　ＪＸ．２００７．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ
ｏｆ　Ｒｕｂｕｓ　ｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓ（Ⅱ）［Ｊ］．Ｊ　Ｇｕａｎｇ　Ｄｏｎｇ　Ｃｏｌｌ　Ｐｈａｒｍ，２３
（５）：４８９－４９１
Ｎａｋａｈａｒａ　Ｋ．１９９８．Ａｎｔｉａｌｅｇｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｅｎｃｈａ　ａｎｄ　ｏｏｌｏｎｇ　ｔｅａ
ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｓｔｙｌｅ，２１（２）：４５－４９
Ｏｈｔａｎｉ　Ｋ，ｉｋａｗａ　Ｙ，Ｋａｓａｉ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．１９９２．Ｍｉｎｏｒ　ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ　ｇｌｙｃｏ－
ｓｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　ｓｗｅｅｔ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｒｕｂｕｓ　ｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓ－
ｔｒｙ，３１（５）：１　５５３－１　５５９
Ｐａｔｅｌ　ＡＶ，Ｒｏｊａｓ－Ｖｅｒａ　Ｊ，Ｄａｃｋｅ　ＣＧ．２００４．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｃｏｎｓｔｉｔ－
ｕｅｎｔｓ　ａｎｄ　ａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｒｕｂｕｓ　ｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ，１１：
１　５０１－１　５１２
Ｓｕｇｉｍｏｔｏ　Ｎ，Ｋｉｋｕｃｈｉ　Ｈ，Ｙａｍａｚａｋｉ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．２００１．Ｐｏｌｙｐｈｅｎｌｉｃ
ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｒｕｂｕｓ　ｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓ［Ｊ］．Ｎａｔ
Ｍｅｄ，５５（４）：２１９
Ｔａｎ　ＤＭ．２００８．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｉｎ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｒｕ－
ｂｕｓｏｓｉｄｅ　ｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓ［Ｄ］．Ｇｕｉｌｉｎ：Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｎｏｒｍ　Ｕｎｉｖ
Ｔｅｎｇ　ＪＷ，Ｈｕａｎｇ　Ｌ，Ｙｉ　ＸＸ，ｅｔ　ａｌ．２００８．Ａｎｔｉ－ａｌｅｒｇｉｃ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｇｕａｎｇｘｉ　ｓｗｅｅｔ　ｔｅａ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｍａｃｈ，２４（５）：４８－５１
Ｔｉａｎ　ＣＰ，Ｑｕ　ＷＪ，Ｚｈａｎｇ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．２００１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｕｂｕｓｏｓｉｄｅ　ｏｎ
ｍｉｃｅ　ｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｌｉｐｉｄ［Ｊ］．Ｇｕａｎ－
ｇｘｉ　Ｊ　Ｔｒａｄ　Ｃｈｉｎ　Ｍｅｄ，２４：５９－６１
Ｔｉａｎ　ＣＰ，Ｑｕ　ＷＪ，Ｓｕｎ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．２００３．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｕｂｕｓｏｓｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ
ｏｎ　ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃ　ｒａｔｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ［Ｊ］．Ａｃｔ　Ｎｕｔｒ
Ｓｉｎ，２５（１）：２９－３２
Ｕｋａｉ　Ｋ．１９９７．Ａｎｔｉａｌｅｇｙ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｕｂｕｓ　ｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓ［Ｊ］．Ｓｈｏｋｕ－
ｈｉｎ　Ｋｏｇｙｏ，４０：５２－５９
Ｗａｎｇ　Ｃ，Ｙｉｎ　ＸＰ，Ｃｈｅｎ　ＢＴ，ｅｔ　ａｌ．２０１０．Ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｒｕｂｕｓ　ｓｃｕａｉｖｉｓｓｉｍｕｓ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ｉｎ　Ｇｕａｎｇｘｉ［Ｊ］．
Ｃｈｉｎ　Ｐｈａｒｍ，２１（３１）：２　８９１－２　８９３
Ｗａｎｇ　ＬＢ，Ｂｉ　ＣＨ．２００７．Ｌａｔｅｓｔ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｂｉｏａｃｔｉｖｅ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ｓｗｅｅｔ　ｔｅａ［Ｊ］．Ｃｅｒｅａｌｓ　Ｏｉｌｓ，２：４７－４９
Ｗａｎｇ　ＪＸ，ＬüＨＣ．２００７．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ
Ｒｕｂｕｓ　ｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｈｉｎ　Ｍｅｄ　Ｍａｔ，３０（７）：８００－８０２
Ｗａｎｇ　ＪＸ，ＬüＨＣ．２００８．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　ｏｆ　Ｒｕｂｕｓ　ｓｕａ－
ｖｉｓｓｉｍｕｓ［Ｊ］．Ｌｉ　Ｓｈｉｚｈｅｎ　Ｍｅｄ　Ｍａｔ　Ｒｅｓ，１９（３）：６６４－６６５
Ｗｅｉ　ＢＹ，Ｇａｏ　ＣＨ，Ｔｅｎｇ　ＪＷ．２００６．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ａｌｅｒｇｉｃ　ｃｏｍｐｏ－
ｎｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｇｕａｎｇｘｉ　ｓｗｅｅｔ　ｔｅａ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉ　Ｔｅｃｈｎｏｌ，５：１３９－１４２
Ｗｕ　ＹＣ，Ｗｕ　Ｄ，Ｘｉｅ　ＪＸ，ｅｔ　ａｌ．２０１０．Ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｏｆ
ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅ　ｆｒｏｍ　Ｒｕｂｒｕｓ　ｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｅｘｐ　Ｔｒａｄ
Ｍｅｄ　Ｆｏｒｍ，１６（７）：１６５－１６７
Ｚｈａｎｇ　ＱＹ．２００６．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｒｕｂｕｓｏｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕ－
ｅｎｔｓ　ｉｎ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｒｕｂｕｓｏｓｉｄｅ　ｓｕａｖｓｉｓｉｍｕｓ［Ｄ］．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｎｏｒ　Ｕｎｉｖ
Ｚｈａｏ　ＬＰ，Ｌｕ　ＸＹ，Ｃｈｅｎ　ＱＹ，ｅｔ　ａｌ．２０１０．Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｆ　ｓｗｅｅｔ　ｔｅａ　ｅｘｔｒａｃｔａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ
ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｃｏｎｔｅｍｐ　Ｍｅｄ，２１５（２４）：１－２
Ｚｈｏｎｇ　ＺＸ，Ｚｈｏｕ　ＧＦ，Ｃｈｅｎ　ＸＦ，ｅｔ　ａｌ．２０００．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｔｕｄ－
ｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｒｕｂｕｓ　ｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓ　ｆｒｏｍ　Ｇｕａｎｇｘｉ［Ｊ］．Ｌｉ
Ｓｈｉｚｈｅｎ　Ｍｅｄ　Ｍａｔ　Ｒｅｓ，１１（１０）：
檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴
８６７－８６８
（上接第３４页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｆｒｏｍ　ｐａｇｅ　３４）
　影响）［Ｊ］．Ｓｃｉ　Ｓｉｌｖａｅ　Ｓｉｎ（林业科学），４３（１０）：２８－３３
Ｌｉ　ＢＴ，Ｂｒｕｃｅ　Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅｗ．２００８．Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　Ｌ．Ｆｌｏｒａ　ｏｆ　Ｃｈｉ－
ｎａ／／Ｗｕ　Ｚ，Ｒａｖｅｎ　ＰＨ（ｅｄｓ）．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｒｅｓｓ；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ：
Ｍｉｓｓｏｕｒｉ　Ｂｏｔａｎｉｃａｌ　Ｇａｒｄｅｎ　Ｐｒｅｓｓ，７：９４－９５
Ｌｉ　ＪＭ，Ｊｉｎ　ＺＸ．２００６．Ｈｉｇｈ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ　ＲＡＰＤ
ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｎａｒｒｏｗｌｙ　ｅｎｄｅｍｉｃ　Ｓｉｎｏｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ，ａｎ　ｅｎｄａｎ－
ｇｅｒｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｓｙｓｔ　Ｅｃｏｌ，３４：７２５－７３５
Ｌｉ　ＬＣ（李林初）．１９８６．Ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎ－
ｓｉｓ（Ｃａｌｙｃａｎｔｈａｃｅａｅ）（夏蜡梅核型的研究）［Ｊ］．Ｇｕｉｈａｉａ（广西
植物），６（３）：２２１－２２４
Ｌｉ　ＬＣ（李林初）．１９８９．Ｃｙｏｇｅｏｇｒａｐｈｉａｃａｌ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ
Ｌｉｎｎｅｕｓ（夏蜡梅属的细胞地理学研究）［Ｊ］．Ｇｕｉｈａｉａ（广西植
物），９（４）：３１１－３１６
Ｌｉｕ　ＷＬ（刘文莉），Ｊｉｎ　ＺＸ（金则新），Ｋｅ　ＳＳ（柯世省）．２００７．Ｔｈｅ
ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｏｐｐｅｒ　ｏｎ　ｅｍｅｒｇｉｎｇ　ｍｅｔａｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｉｎｏｃａｙｃａｎｔｈｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（铜对夏蜡梅种子萌发代谢的影响）［Ｊ］．Ｊ　Ｙｕｎｎａｎ
Ａｇｒｉｃ　Ｕｎｉｖ（云南农业大学学报），２２（１）：１３２－１３７
Ｌｉｕ　ＷＬ（刘文莉），Ｊｉｎ　ＺＸ（金则新），Ｋｅ　ＳＳ（柯世省）．２００８．
Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｏｐｐｅｒ　ｏｎ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｌｄａｎｔ　ｅｎｚｙｍｅｓ　ｏｆ
Ｓｉｎｏｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（铜对夏蜡梅种子萌发及抗氧化酶活
性的影响）［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｃｈｅｍ（环境化学），３７（１）：４４－４８
Ｘｕ　ＹＬ（徐耀良），Ｚｈａｎｇ　ＲＨ（张若蕙），Ｚｈｏｕ　Ｃ（周骋）．１９９７．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｃｏｍｍ　ｕｎ　ｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｃａｙｃａｎｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（夏蜡梅的群落
学研究）［Ｊ］．Ｊ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｆｏｒｅ　Ｃｏｌｌ（浙江林学院学报），１４（４）：
３５５－３６２
Ｙｅｈ，ＦＣ，Ｙａｎｇ　ＲＣ．Ｐｏｐｇｅｎｅ　ｖ　１．３１，ｄｏｗｎｌｏａｄ　ｆｒｏｍ　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．
ｕａｌｂｅｒｔａ．ｃａ／－ｆｙｅｈ／
Ｚｈａｎｇ　ＨＷ（张宏伟），Ｗｅｎｇ　ＤＭ（翁东明），Ｘｕ　ＲＺ（徐荣章）．
１９９７．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｓｉｎｏｃａｌｙｃａｎ－
ｔｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（夏蜡梅生态生物学特征的研究）［Ｊ］．Ｊ　Ｚｈｅｊｉｎｇ
Ｆｏｒ　Ｓｃｉ　＆Ｔｅｃｈ（浙江林业科技），１７（１）：１５－１７
Ｚｈｅｎｇ　ＷＪ（郑万钧），Ｚｈａｎｇ　ＳＲ（章绍尧）．１９６３．Ａ　ｎｅｗ　ｇｅｎｅｒａ　ｏｆ
Ｃａｌｙｃａｍｔａｃｅａｅ———Ｓｉｎｏｃａｌｙｃａｎｔｈｕｓ（蜡梅科的新属———夏蜡梅
属）［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｐｈｙｔｏｔａｘ　Ｓｉｎ（植物分类学报），９（２）：１３５－１３９
２４１ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３３卷