全 文 ：广 西 植 物 Guihaia　Mar．２０１４,３４(２):２３５－２４１　　　　　　　　　　 http://journal．gxzw．gxib．cn　
DOI:１０．３９６９/j．issn．１０００Ｇ３１４２．２０１４．０２．０１９
张志平,仇键,杨文凤,等．巴西橡胶树鲨烯合酶基因的克隆与序列分析[J]．广西植物,２０１４,３４(２):２３５－２４１
ZhangZP,QiuJ,YangWF,etal．Cloningandbioinformaticsanalysisofsqualenesynthasegene(SQS)fromHeveabrasiliensis[J]．Guihaia,２０１４,
３４(２):２３５－２４１
巴西橡胶树鲨烯合酶基因的克隆与序列分析
张志平１,２,仇　键２,杨文凤２,魏　芳２,校现周２∗
(１．海南大学 园艺园林学院,海南 儋州５７１７３７;２．中国热带农业科学院 橡胶研究所,海南 儋州５７１７３７)
摘　要:鲨烯合酶(SQS)是植物甾醇和三萜化合物生物合成途径中的关键酶.以巴西橡胶树为试验材料,提取
胶乳总RNA,利用RTＧPCR以及RACE的方法克隆橡胶树鲨烯合酶cDNA编码区片段,并进行序列分析.结果
表明:橡胶树鲨烯合酶cDNA编码区为１２３９bp,编码４１３个氨基酸,命名为HbSQS.荧光定量分析表明鲨烯合
酶基因在不同组织里表达水平存在明显差异,且受乙烯调控.
关键词:橡胶树;鲨烯合酶;序列分析
中图分类号:Q７８１　　文献标识码:A　　文章编号:１０００Ｇ３１４２(２０１４)０２Ｇ０２３５Ｇ０７
Cloningandbioinformaticsanalysisofsqualene
synthasegene(SQS)fromHeveabrasiliensis
ZHANGZhiＧPing１,２,QiuJian２,YANGWenＧFeng２,
WEIFang２,XIAOXianＧZhou２∗
(１．CollegeofHorticultureandLandscapeArchitecture,HainanUniversity,Danzhou５７１７３７,China;
２．RubberResearchInstitute,ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences,Danzhou５７１７３７,China)
Abstract:Squalenesynthase(SQS)isakeyenzymeinplantterpenoidbiosyntheticpathway．ThetotalRNAwere
extractedfromHeveabrasiliensisrelax,andthecDNAofsqualenesynthasewasclonedusingRTＧPCRandRACE
strategy．TheresultsshowedthatthecDNA(namedasHbSQS)containeda１２３９bpopenreadingframeandencoded
apredictedproteinof４１３aminoacids．SYBRGreenIRealTimeRTＧPCRanalysisindicatedthattheHbSQSwas
morehighlyexpressedinbarkthaninleaf．ThetranscriptionofHbSQSinlatexwasinducedbyethylene．
Keywords:Heveabrasiliensis;squalenesynthase;sequenceanalysis
　　巴西橡胶树(Heveabrasiliensis)作为天然橡胶
的主要来源,在世界经济发展中一直占有重要地位,
是一种非常重要的热带经济及能源作物.核磁共振
分析表明法尼基焦磷酸 (farnesyldiphosphate,
FPP)是天然橡胶合成的起始物,同时它也是植物倍
半萜、三萜的前体,在植物类萜代谢途径中占据非常
重要的位置.鲨烯合酶(squalenesynthase,SQS)
是三萜合成代谢关键酶,定位于内质网膜上,它能催
化两分子的法尼基焦磷酸缩合生成甾醇、胆固醇和
三萜等萜烯类化合物的第１个前体—鲨烯(Pandit
etal．,２０００;李季伦等,１９９３).正向调节刺五加,人
参,甘草,猫掌树鲨烯合酶的活性,其体内甾醇及萜
烯类物质含量上升(Seoetal．,２００５;Leeetal．
２００４;Luetal．,２００９;Floresetal．,２００２).而反向
调节鲨烯合酶的活性时,可抑制法尼基焦磷酸向鲨
烯转化,促进植物中倍半萜如青蒿素,二萜如赤霉素
收稿日期:２０１３Ｇ０６Ｇ１４　　修回日期:２０１３Ｇ０９Ｇ２１
基金项目:中国热带农业科学院橡胶研究所基本业务费专项(１６３００２２０１１０２１)
作者简介:张志平(１９８７),男,湖北黄冈人,在读硕士,植物学专业,(EＧmail)zzp１９５２１２２５＠１６３．com.
∗通讯作者:校现周,研究员,研究方向为植物生理学,(EＧmail)xz_xiao＠２１cn．com.
及类萜如类胡萝卜素的积累(Woerdenbagetal．,
１９９３;HUetal．,２００４;Buchananetal．,２００４).鉴
于此酶在萜烯生物合成以及相关的橡胶合成代谢中
的重要作用,本研究首次克隆到了巴西橡胶树的
SQS的完整编码序列,并进行了序列生物信息学和
表达模式分析,为进一步研究其对天然橡胶生物合
成的影响以及巴西橡胶树萜烯代谢奠定基础.
１　材料和方法
１．１材料和试剂
橡胶树胶乳和幼叶均采自种植于中国热带农业
科学院试验农场巴西橡胶树无性系热研７Ｇ３３Ｇ９７.
选取１８棵树形及生长状态相近的巴西橡胶树,采用
１/２割线,每株涂抹质量分数为０．５％乙烯利糊剂,
每株２g,处理时间为６、１２、２４、４８、７２h.每个处理
时间及对照均有３个重复,剩余３棵不做任何处理,
作为其处理对照(CK),每个处理组重复１次.收集
不同处理时间的橡胶树胶乳,冰盒带回实验室提取
RNA.同时选取３棵长势及生理状态相近的巴西
橡胶树,分别采集每棵树上古铜期、淡绿期、成熟期
叶片及树皮,重复采集１次,液氮处理后带回实验室
提取RNA.
感受态细胞E．coli(DH５α)来自上海 TIANＧ
GEN公司.RevertAidTMcDNA第一链合成试剂
盒、Taq酶、DNaseⅠ、pMD１８ＧT载体和DNA凝胶
回收试剂盒均购自大连宝生物工程有限公司
(TaKaRa);引物合成和测序工作均由上海英骏生
物技术有限公司完成;其它生化试剂为进口或国产
分析纯试剂.
１．２方法
１．２．１橡胶树总RNA的提取与cDNA第一链合成
橡胶树胶乳总RNA的提取采用CTABＧLiCl沉淀
法(唐朝荣等,２００７).橡胶树树叶、树皮总RNA提
取用CTAB法进行(邓柳红等,２００５).利用DNase
Ⅰ酶去除RNA中残留的微量DNA,cDNA第一链
的合成按照试剂盒说明进行.
１．２．２巴西橡胶树SQS基因部分片段的获取　根据
报道的其他物种的SQS 基因序列,发现SQS 基因
５′高度保守,用Primer５．０软件设计引物,SSＧF２５′Ｇ
AGGCCTGTCCAAACTTTTCCＧ３′;和 SSＧB:５′Ｇ１
GGCTGATGGCTCATAAATGCＧ３′,以巴西橡胶
树胶乳cDNA为模板,进行PCR扩增,产物切胶回
收后连接到pMD１８ＧT载体上,连接产物转化大肠
杆菌DH５α感受态细胞,送上海英骏生物技术有限
公司测序.利用BLAST工具对所测序列进行同源
性比对,确认该基因片段.
１．２．３３′RACE扩增和全长编码序列克隆　根据
SQS基因片段测序结果设计３′RACE的基因特异
引物SSＧF１:５′ＧATAATGGGAAGTTTGGGAGGＧ
３′;SSＧF３:５′ＧGAGTCCATAGGCATGGAGTACAＧ
３′;oligodTＧM１３:５′ＧGTTTTCCCAGTCACGACTＧ
３′进行RACE扩增,将扩增的条带经切胶回收后连
接到pMD１８ＧT载体上,转化大肠杆菌后测序.
１．２．４荧光定量　分别提取橡胶树古铜期、淡绿期、
成熟期叶片,树皮总 RNA.分别采集乙烯利处理
６、１２、２４、４８、７２h后的胶乳并提取其总RNA.取
２μLRNA用DEPC水稀释至０．５mL用紫外分光
光度计检测,OD２６０/OD２８０比值.调整 RNA 浓度,
逆转录成cDNA.设计荧光引物,SA１:５′ＧGATTTＧ
GGCACCAGATGTCCTＧ３′;SB１:５′ＧGCCAAAAＧ
CATGCGTGACTTAＧ３′;以１８S为内参基因(１８sＧ
F５′ＧGGTCGCAAGGCTGAAACTＧ３′;１８sＧR ５′Ｇ
ACGGGCGGTGTGTACAAAＧ３′),运用 LightCyＧ
cler４．０５软件对橡胶树的古铜期、淡绿期、成熟叶片
及树皮进行SQS基因的组织表达分析,以及乙烯利
诱导SQS基因表达分析.
１．２．５生物信息学分析　利用在线软件BESTORF
(http://www．softberry．com/al．htm)进行编码序
列(Codingsequence,CDS)和开放阅读框(Open
readingframe,ORF)预测;利用在线 TMHMM２．０
工具对SQS 进行跨膜螺旋区域预测;通过 Prosite
数据库分析SQS蛋白质结合位点;利用 mega５．０
软件对橡胶树的SQS 基因进行同源性比对及系统
进化树的构建.
２　结果与分析
２．１橡胶树SQS基因编码区序列的克隆与序列分析
CTABＧLiCl沉淀法提取橡胶树胶乳 RNA,甲
醛凝胶电泳显示,２８SrRNA 与１８SrRNA条带清
晰明显,说明所提取的总RNA的完整性良好,没有
降解.以保守区特异引物 SSＧF２ 和 SSＧB 进行
PCR,从橡胶树胶乳的cDNA中扩增出约６００bp的
片段(图１).所得片段经测序和BLAST同源比对,
确定为橡胶树SQS 基因保守区片段.根据测序结
６３２ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷
果,设计３′RACE上游特异引物SSＧF３,以SSＧF２、
SSＧF３与接头引物oligodTＧM１３进行两轮PCR扩
增,获得了约为１２００bp的片段(图１),经测序和序
列分析表明该片段为橡胶树SQS基因,包含了完整
的３′编码区.不同植物SQS 基因的５′端编码区较
保守,因此根据对其他物种SQS 进行比较,设计含
有起始密码子特异引物SSＧF１,与SSＧB扩增获得了
包含了完整５′端编码区的橡胶树SQS基因.
图１　SQS保守区片段扩增和３′RACE扩增
M．DL２０００;１．保守区PCR产物;２．３′RACE扩增产物.
Fig．１　PCRamplificationofconservedregionsand
３′regions　M．Maker２０００;１．conservedregions;２．３′regions．
　　拼接上述基因片段,获得含有完整编码区的橡胶
树SQS 基因cDNA 序列,全长１４６４bp.包含
１２３９bp的编码区序列,编码４１３个氨基酸,命名为
HbSQS(图２).预测其蛋白质分子量为４６９６７．５４,理
论等电点为７．９５,分子式为C２１１４H３３２３N５６１O５９８S２５.
２．２橡胶树SQS蛋白亲水性及疏水性分析
通过ProtScale工具计算橡胶树SQS蛋白的疏
水性图谱(图３),整体而言,疏水氨基酸(Score为正
值)的数量小于亲水氨基酸(Score为负值)的数目,
推断SQS编码的蛋白质为亲水性蛋白质.氨基酸
残基构成方面,橡胶树SQS蛋白的２０种氨基酸含
量依次为L占９．９％、I占７．５％、A和K各占７．０％、
D和V各占６．８％、S占６．３％、R占５．１％、E和F各
占４．８％、G占４．６％、T和Y各占４．１％、N和P各
占３．９％、M 占３．４％、Q 占３．１％、C 和 H 各占
２．９％、W占１．０％.
２．３橡胶树SQS基因的跨膜区预测
利用在线TMHMM２．０工具对SQS 进行跨膜
螺旋区域预测(图４),结果表明SQS氨基酸中存在
两个跨膜螺旋结构,分别位于I２８７和 V３０５、Y３８７
和Y４０５之间,说明该蛋白具有跨膜转运信号.
２．４橡胶树SQS结构分析
SQS的氨基酸序列中,有６个区域是比较保守
的(Robinsonetal．,１９９３).其中有３个(III、IV、V)
高度保守,它们在氨基酸序列上分别位于第１６８~
１８６、２０２~２１７和２８５~２９８位,这些结构域中氨基
酸是该酶催化反应所必需;区域II虽然保守性较
低,但在此区域中含有两个高度保守的天冬氨酸残
基,被认为是 Mg２＋结合的位点;区域 VI保守性也
较低,但含有一个高度疏水序列(又称疏水区域),被
认为与酶和内质网膜的结合有关;区域I的保守性
则较低.用在线软件EXPASY分析了橡胶树SQS
基因结构域,发现该基因编码氨基酸序列含有
Trans_IPPS_HH 的保守区域,且该蛋白的１６８~
１８３和２０１~２２９位氨基酸为鲨烯合酶和八氢番茄
红素合成酶特异性识别区域(图５).利用predict
protein在线软件对SQS蛋白的二级结构进行了预
测.结果表明:SQS蛋白由６９．２％的αＧ螺旋、１．９％
的延伸主链及２８．９％的随机卷曲组成.整体分析
SQS蛋白的结构,αＧ螺旋和随机卷曲是SQS蛋白最
大量的结构元件,而βＧ转角和延伸链分散于整个蛋
白质中.
２．５不同物种的SQS基因同源性分析
利用DNAMAN软件对橡胶树的SQS 基因的
氨基 酸 序 列 与 蓖 麻 Ricinuscommunis(XP_
００２５１２９８２．１)、毛 果 杨 Buxushebecarpa(XP_
００２３０５４５５．１)、拟南芥Arabidopsisthaliana(NP_
１９５１９０．１)、水稻Oryzasativa(NP_００１０５１６２５．１)、
烟草Nicotianatabacum(AAB０８５７８．１)相比,它们
的同源性在６９％~９７％之间(图５),反映了植物
SQS基因在进化上的多样性.其中,单子叶植物水
稻SQS氨基酸序列与橡胶树同源性明显低于其他
双子叶植物,同为大戟科的蓖麻与橡胶树同源性则
达到了９６．３７％,与传统分类结果保持一致.
２．６SQS系统进化分析
采用mega５．０软件,构建SQS系统进化树(图
６).选择玉米(Zeamays,NP_００１１０４８３９．１)、水稻
(Oryzasativa,NP_００１０５１６２５．１)、马铃薯(Solanum
tuberosum,BAA８２０９３．１)、西红柿(SolanumlycoperＧ
sicum,NP_００１２３４７１６．１)、烟草(Nicotianatabacum,
AAB０８５７８．１)、蓖 麻 (Ricinus communis, XP_
００２５１２９８２．１)、柿(Diospyroskaki,ACN６９０８２．１)、大
豆(Glycinemax,XP_００３５３７８４２．１)、毛果杨(Buxus
hebecarpa,XP_００２３０５４５５．１)、人参(Panaxginseng,
７３２２期　　　　　　　　　 张志平等:巴西橡胶树鲨烯合酶基因的克隆与序列分析
图２　鲨烯合酶cDNA基因序列及推导的氨基酸序列
Fig．２　cDNAsequenceanddeducedaminoacidssequenceofHbSQS
ACV８８７１８．１)、西 洋 参 (Panax quinquefolius,
CAJ５８４１８．１)、葡萄(Vitisvinifera,XP_００２２６６１５０．１)、
黄芪(Leguminosae,ADW２７４２７．１)和拟南芥(ArabiＧ
dopsisthaliana,NP_１９５１９０．１)的SQS氨基酸序列进
行进化分析.系统进化分析发现:巴西橡胶树与同为
大戟科的蓖麻亲缘关系最近,而与玉米,水稻单子叶
植物亲缘关系较远,这也符合植物自然进化规律.
２．７橡胶树SQS表达模式分析
实验结果表明:在叶片中,随着叶片成熟度的增
加,SQS表达量逐步上升,树皮中表达量远大于在
叶片中的表达量,说明树皮作为天然橡胶合成及贮
存的场所,是橡胶生物合成代谢的中心,故SQS 在
树皮中表达量远高于叶片(图７).乙烯刺激对SQS
表达影响显示:刺激６h,SQS 表达量迅速上升,在
６h时达到高峰,此后显著下降,在１２h时达到最
小,然后又呈现出随着刺激时间的增加表达量增加
的态势,SAS分析表明在乙烯利处理６、１２、２４、４８、
７２h后的胶乳中的SQS 表达均与ck差异显著,说
明SQS基因的表达受到乙烯利的调控(图８).
３　结论与讨论
本试验成功克隆了巴西橡胶树萜类代谢途径中
的关键酶鲨烯合酶基因,并进行生物信息学分析.
同源性分析发现该基因与蓖麻、葡萄等植物的鲨烯
合酶基因具有高度同源性,他们均属于三萜类和植
物甾醇类化合物合成代谢的重要调控酶———鲨烯合
成酶家族.跟其他植物、动物、真菌的鲨烯合酶基因
相比,具有三个高度保守的区域,这些保守区域中的
氨基酸与鲨烯合酶的催化活性紧密相关(Robinson
８３２ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷
图３　SQS基因编码蛋白亲水性及疏水性预测
Fig．３　Predictedhydrophobicityanddrophilicityof
thededucedaminoacidsequenceofSQS
图４　巴西橡胶树SQS基因跨膜区预测
Fig．４　PredictedtransmembracehelixofHbSQSprotein
etal．,１９９３;Kimetal．,２０１１).其中第V个保守结
构域上有个别碱基与其他来源的SQS 存在差异.
龙月红等(２０１２)推测了的刺五加和人参在该区域个
别位点氨基酸不一致,可能导致催化活性的差异.
巴西橡胶树SQS氨基酸序列虽然跟蓖麻的一致性
最高,但巴西橡胶树SQS第２８９位点氨基酸为缬氨
酸,但蓖麻的却是异亮氨酸.这些保守位点上存在
的差异与其催化活性之间的关系有待进一步研究.
不同物种的植物鲨烯合酶基因在表达的组织特
性存在较大差异,如三七SQS基因在根中表达水平
远高于茎及芦头(吴耀生等,２００７),蛇足石杉SQS
基因在根中表达量是在叶片中表达量的６倍(殷秀
梅等,２０１２),西洋参SQS基因在根、叶柄、种皮种仁
等１４个组织中表达量存在明显差异,根结构及叶结
构中的表达量显著高于在叶柄及果肉中表达量(蒋
世翠等,２０１１).这些可能与不同物种SQS 基因拷
贝数不同有关(Uchidaetal．,２００９).本试验结果
显示,巴西橡胶树叶片在不同生长时期表达量存在
明显差异,这些可能与鲨烯合酶位于内质网膜上
(Kathleenetal．,１９９２),随着叶片逐渐生长发育,细
胞器功能的逐步完善,使得其表达量增加.
在橡胶合成代谢过程中,乙烯能够通过促进蔗糖
代谢,从而导致橡胶合成代谢所必需的碳源如乙酰辅
酶A含量增加,从而加速橡胶合成(段翠芳等,２００４).
Northem杂交及RTＧPCR分析证明,许多与蔗糖代谢
及橡胶生物合成相关的基因受到乙烯利的诱导,如蔗
糖转运蛋白(DusotoitＧCoucaudetal．,２００９)、３Ｇ羟基Ｇ３Ｇ
甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(Chyeetal．,１９９２)及
３Ｇ羟基Ｇ３Ｇ甲基戊二酸单酰辅酶 A合成酶(SuwanＧ
maneeetal．,２００４).乙烯调控响应机制复杂,目前尚
无外源乙烯对橡胶萜类物质代谢影响的文献报导,推
测乙烯刺激促进蔗糖代谢,导致碳源的含量增加必将
提高FPP的含量,从而为鲨烯合成代谢提供了充足
的原料,间接加速鲨烯的合成.
以往橡胶树类萜代谢研究多集中于胶乳中天然
橡胶生物合成方面,对萜烯类次生代谢物研究较少.
萜烯类物质作为一种具有极大应用价值和开发潜力
的天然化合物越来越受到人们的青睐,成为天然产
物的研究热点.近年来,人们先后分离提纯出一系
列的具有重要生理功能和药用价值的萜烯类物质,
比如鲨烯,人参皂苷、北柴胡皂苷、甘草皂苷等等.
此外,梅志刚等(２０１１)也采用GCＧMS分析了胶乳
中各种萜类代谢物的种类及含量,发现胶乳中含有
丰富的萜类物质,如鲨烯、TＧ杜松醇、βＧ豆甾醇、γＧ谷
甾醇、２４Ｇ亚甲基环木菠萝醇等,其中鲨烯含量最高,
可见鲨烯合酶在胶乳萜类代谢中发挥了重要作用.
因此,本研究成功克隆鲨烯合酶基因,将为进一步了
解橡胶树萜类代谢,综合利用胶乳奠定基础.
参考文献:
BuchananB,Gruissem W,JonesR．２００４．PlantBiochemistryand
MolecularBiology:ChineseVersion(植物生物化学与分子生物
学􀅰中文版)[M]．Beijing(北京):SciencePress(科技出版社):
１０２６－１０２６
ChyeML,TanCT,ChuaNH．１９９２．Threegenesencode３ＧhyＧ
droxyＧ３ＧmethylglutarylＧcoenzymeAreductaseinHeveabraＧ
siliensis:hmg１andhmg３aredifferentialyexpressed[J]．
PlantMolrBiol,１９:４７３－４８４
DengLH(邓柳红),XiaoSS(肖苏生),LuoMW(罗明武),etal．
２００５．CloningandidentificationofacDNAencodingputative
microtubuleＧassociatedproteinsfromHeveabrasiliensis(巴西橡
胶树微管相关蛋白全长cDNA克隆及表达分析)[J]．JTrop
SubtropBot(热带亚热带植物学报),１３(６):４８１－４８１
９３２２期　　　　　　　　　 张志平等:巴西橡胶树鲨烯合酶基因的克隆与序列分析
图５　SQS蛋白氨基酸序列比较　黑框区域为 Mg２＋结合位点
Fig．５　ComparisonofdeducedaminoacidsequenceofSQSamongH．brasiliensis
andotherspecies　BlackboxareaisMg２＋ bindingsite
DuanCF(段翠芳),CengRZ(曾日中),LiY(黎瑜)．２００４．RegulaＧ
tionofplanthormonesonbiosynthesisofnaturalrubberin
Heveabrasiliensis(激素对巴西橡胶树橡胶生物合成的调
控)[J]．ChinJTropAgric(热带农业科学),２４:６１－６８
DusotoitＧCoucaud A,BrunelN,KongsawadworakulP,etal．
２００９．SucroseimportationintolaticifersofHeveabrasilienＧ
sis,inrelationtoethylenestimulationoflatexproduction[J]．
AnnBot,１０４:６３５－６４７
FloresＧSánchezI,OrtegaＧLópezJ,MontesＧHorcasitasM,etal．
２００２．BiosynthesisofsterolsandtriterpenesincelsuspenＧ
sioncultureofUncariatomentosa[J]．PlantCellPhysiol,
４３(１２):１５０２－１５０９
HuXY(胡襄阳),NeilSJ(史蒂芬J奥尼尔),FangJY(方建
英),CaiWM(蔡委鸣),etal．２００４．MitogenＧactivatedprotein
kinasesmediatetheoxidativeburstandsaponinsynthesisinＧ
ducedbychitosanincelculturesofPananxginseng(丝裂原
活化蛋白激酶介导的氧化突发和几丁聚糖在细胞培养中的
人参皂甙合成中的作用)[J]．SciChinLifeSci(中国科学:
生命科学),４７(４):３０３－３１２
JiangSC(蒋世翠),Liu WC(刘伟灿),WangY(王义),etal．
２０１１．Correlation between ginsenoside accumulation and
SQSandSQEgeneexpressionindifferentorgansofPanax
quinquefolius(西洋参不同器官皂苷量与鲨烯合成酶和鲨烯
环氧化酶基因表达的相关性)[J]．ChinTrad& HerbDrug
(中草药),４２(３):５７９－５８４
KathleenH,JosephC．１９９２．Solubilization,partialpurification,and
immunedetectionofsqualenesynthatasefromtobaccocelsusＧ
pensioncultures[J]．PlantPhysiol,９８:２１５－２２０
０４２ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷
图６　不同物种SQS分子系统发生树
Fig．６　PhylogenetictreeofSQSfromvariousspecies
图７　橡胶树SQS基因的组织荧光定量表达分析
Fig．７　QuantitativeanalysisofSQSexpressionfrom
H．brasiliensistissue
图８　橡胶树SQS基因不同乙烯刺激时间荧光定量表达分析
Fig．８　QuantitativeanalysisofHbSQSgeneexpression
inlatexunderethylenestimulation
KimYS,HanJY,HuhGHetal．２０１１．Expressionandfunctional
characterizationofthreesqualenesynthasegenesassociatedwith
saponinbiosynthesisinPanaxginseng[J]．PlantCellPhysiol,
５２(１):１２５－１３７
LeeMH,JedlgJH,SeoJW,etal．２００４．Enhancedtriterpeneand
phytosterolbiosynthesisinPonaxginsengoverexpressingsquaＧ
lenesynthasegene[J]．PlantCellPhysiol,４５(８):９７６－９８４
LiJL(李季伦),ZhangWX(张伟心),YangQR(杨启瑞),etal．
MicrobialPhysiology(微生物生理学)[M]．Beijing(北京):
BeijingAgricutralUniversityPress(北京农业大学出版社):
２２７－２３１
LuHY(卢虹玉),LiuJM(刘敬梅),ZhangHC(张海超),etal．
２００９．CultureoftransgenicGlycyrrhizauralensishairyrootwith
licoricesqualenesynthase(SQS)gene(乌拉尔甘草转鲨烯合成
酶基因毛状根系研究)[J]．ChinJChinMatMed(中国中药杂
志),４(１５):１８９０－１８９３
MeiZG(梅志刚),LiuSZ(刘实忠),XiaoXZ(校现周),etal．２０１１．
AnalysisofchemicalcomponentsofthelatexfromHeveabraＧ
siliensisbyGCＧMS(巴西橡胶树胶乳化学成分的GCＧMS分析)
[J]．ChinJTropCrops(热带作物学报),３２(２):３１５－３１９
PanditJ,DanleyDE,SchulteGK,etal．２０００．Crystalstructureof
humansqualenesynthase,akeyenzymeincholesterolbiosyntheＧ
sis[J]．JBiolChem,２７５(３９):３０６１０－３０６１７
RobinsonGW,TsayYH,KienzleBK,etal．１９９３．ConservationbeＧ
tweenhumanandfungalsqualenesynthetases:similaritiesin
structure,functionandregulation[J]．MolCellBiol,１３(５):
２７０６－２７１７
SeoJW,JeongJH,ShinCG,etal．２００５．Overexpressionof
squalenesynthasein eleutherococcussenticosusincreases
phytosteroandtriterpeneaccumulation[J]．Phytochemistry,
６６(８):８６９－８７７
SuwanmaneeP,SirinupongN,SuvachittanontW．２００４．Regulationof
theexpressionof３ＧhydroxyＧ３ＧmethylglutarylＧCoAsynthasegene
inHeveabrasiliensis[J]．MullArgPlantSci,１６６:５３１－５３７
TangCR(唐朝荣),QiJY(戚继艳),LiHP(李和平),etal．２００７．
AconvenientandefficientprotocolforisolatinghighqualityRNA
fromlatexofHeveabrasiliensis(pararubbertree)(一种方便快
捷的从巴西橡胶树胶乳中提取高品质RNA方法的研究)[J]．
JBiochemBiophysMethods(生物化学和生物物理方法),７０
(５):７４９－７５４
UchidaH,YamashitaH,KajikawaM,etal．２００９．CloningandcharＧ
acterizationofasqualenesynthasegenefromapetroleumplant,
Euphorbiatirucalli[J]．Planta,２２９(６):１２４３－１２５２
WoerdenbagHJ,LüersJF,UdenW,etal．１９９３．Productionofthe
newantimalarialdrugartemisinininshootculturesofArtemisia
annua[J]．PlantCellTissOrganCult,３２(２):２４７－２５７
WuYS(吴耀生),ZhuH(朱华),LiK(李珅),etal．２００７．TranＧ
scriptionexpressionofsqualenesynthasegeneinroot,stemand
rootstockofPanaxnotoginsengandsynthesisoftriterpenoids(三
七鲨烯合酶基因在三七根、茎、芦头中的转录表达与三萜皂苷
合成)[J]．ChinJBiochemMolBiol(中国生物化学与分子生
物学报),２３(１２):１０００－１００５
YinXM(殷秀梅),BaiZC(白志川),NiuYY(牛云云),etal．２０１２．
Cloningandanalysisofsqualenesynthase(HsSQS１)genein
Huperziaserrata(蛇足石杉鲨烯合酶基因SQS的克隆和序列
分析)[J]．ActaPharmSin(药学学报),４７(８):１０７９－１０８４
１４２２期　　　　　　　　　 张志平等:巴西橡胶树鲨烯合酶基因的克隆与序列分析