全 文 ：植物病理学报
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA 45(4):410-417(2015)
收稿日期:2014-03-06;修回日期:2015-03-14
基金项目:国家科技支撑计划(2012BAK11B02) ;浙江检验检疫局科研项目(ZK201425)
通讯作者:易建平，研究员，研究方向为检疫性细菌有害生物的检测;Tel:021-38620575，Fax:021-68546481，E-mail:yijp@ shciq． gov． cn
第一作者:叶露飞，男，湖北人，硕士，研究方向为细菌有害生物的检测;E-mail:ylf@ zs． ziq． gov． cn。
doi:10． 13926 / j． cnki． apps． 2015． 04． 010
进境油菜籽中十字花科黑斑病菌的检测
叶露飞1，周国梁2，印丽萍2，白章红2，李孝军1，杨赛军1，易建平2*
(1舟山出入境检验检疫局，浙江 316000;2上海出入境检验检疫局，上海 200135)
摘要:利用 MT 选择性培养基从加拿大进境油菜籽样品中分离到 2 株细菌分离物 2305-1 和 5309-1，对分离物进行致病性测
定、LOPAT 测试、Biolog 测试、hrpZ 和 cfl基因序列分析，以及多位点序列分析。结果表明:2 株分离物人工接种油菜、花椰菜
和番茄幼苗都能引起典型黑斑症状;LOPAT 测试和 Biolog 测试结果与丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)的各项生理指标
一致;hrpZ 基因序列与十字花科黑斑病菌(P． syringae pv． maculicola)和番茄细菌性叶斑病菌(P． syringae pv． tomato)的序列
相似性均为 99． 18% ～100%;cfl基因序列分析表明分离物 2305-1 和 5309-1 基因组中存在冠毒素合成基因;选择gyrB、ropD、
gltA、gap1、acnB和 pgi 6个看家基因进行多位点序列分析，系统发育树显示分离物 2305-1和 5309-1均与P． syringae pv． ma-
culicola聚在一起。根据试验结果将分离物 2305-1和 5309-1鉴定为十字花科黑斑病菌 P． syringae pv． maculicola。
关键词:油菜籽;十字花科黑斑病菌;多位点序列分析;看家基因;检测
Detection of Pseudomonas syringae pv． maculicola from imported rape seeds YE
Lu-fei1，ZHOU Guo-liang2，YIN Li-ping2，BAI Zhang-hong2，LI Xiao-jun1，YANG Sai-jun1，YI Jian-ping2
(1 Zhoushan Export and Import Inspection and Quarantine Bureau，Zhejiang 316000，China;2 Shanghai Export and Import Inspec-
tion and Quarantine Bureau，Shanghai 200135，China )
Abstract:Two bacterial isolates 2305-1 and 5309-1 were obtained in rape (Brassica napus)seeds samples
imported from Canada with semi-selective MT medium，and detected by pathogenicity test，LOPAT test，
Biolog，hrpZ，cfl gene sequencing and multilocus sequence analysis (MLSA)． LOPAT tests and carbon source
oxidation using Biolog GNⅡMicroPlates were used to classify the isolates 2305-1 and 5309-1 as Pseudomonas
syringae． The hrpZ gene sequences of isolates 2305-1 and 5309-1 shared 99． 18%-100% identity with P． syrin-
gae pv ． maculicola and P． syringae pv ． tomato ． The cfl gene sequences indicated that coronatine biosynthesis
genes present in the genome of isolates 2305-1 and 5309-1． MLSA was done by using six housekeeping gene
gyrB，ropD，gltA，gap1，acnB and pgi，and the phylogenetic tree of the concatenated sequences showed isolates
2305-1 and 5309-1 clustered with P． syringae pv ． maculicola． Based these results above，isolate 2305-1 and
5309-1 were identified as P． syringae pv． maculicola．
Key words: rape seeds;Pseudomonas syringae pv ． maculicola;multilocus sequence analysis(MLSA) ;
housekeeping gene;detection
中图分类号:S435． 121 文献标识码:A 文章编号:0412-0914(2015)04-0410-08
由丁香假单胞菌斑生致病变种(Pseudomonas
syringae pv． maculicola，Pma)侵染引起的细菌性
黑斑病是世界范围内十字花科蔬菜上的重要细菌
病害之一，1911 年 McCulloch 在花椰菜上报道了
该病菌，随后在萝卜、甘蓝、芥菜、芜菁、油菜等超过
25 种十字花科植物上陆续发现了该病菌的危
4 期 叶露飞，等:进境油菜籽中十字花科黑斑病菌的检测
害［1］。病菌可由带菌种子及病残体传播，田间以
风雨和昆虫传播为主。病菌广泛分布于世界各地，
如美国、英国、法国、澳大利亚和阿根廷等国［1 ～ 4］。
2002 年，该病菌引起的萝卜细菌性黑斑病在我国
湖北省长阳县高山蔬菜基地爆发流行，产量损失最
高超过 50%［5］。2007 年该病菌被列为我国检疫性
有害生物。目前，国内对该病菌的研究较少，分布
和危害情况尚未有正式文献记载。近年来，我国每
年大量进口商用油菜籽和十字花科植物种子，仅油
菜籽年进口量已超过 300 万 t，病菌随带菌种子传
入定殖和扩散的风险极大。
2012年 3月，从加拿大进境油菜籽样品中分离到
2株疑似 Pma的分离物，利用致病性测定、LOPAT 测
试、Biolog 鉴定、hrpZ 和 cfl基因序列分析以及MLSA
等技术手段，对细菌分离物进行了鉴定。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 供试油菜籽 供试油菜籽样品为 2012 年
3 月从加拿大进口的油菜籽，进境口岸为福州和深
圳，样品编号分别为 2305 和 5309。
1． 1． 2 供试菌株 P． syringae pv． maculicola
(Pma)菌株 ATCC51320 由中国检验检疫科学研究
院赵文军博士提供。
1． 1． 3 供试培养基 MT 选择性培养基、KB 培养
基(King’s medium B)、NA 平板(含 5%蔗糖)参
考 Goszczynska 等的方法进行配置［6，7］;BUG 培养
基，即 1 000 mL 水中加入 57 g BUG 琼脂。
1． 1． 4 供试引物 引物 MM5F /5Ｒ来源于 P． sy-
ringae pv． tomato 及相关种的 hrpZ 基因序列［8］，
引物 cfl F /Ｒ 源于 P． syringae 冠毒素合成相关基
因序列［9］，其余引物均由本室根据 P． syringae pv．
tomato 菌株 DC3000 全基因组(AE016853)序列及
相关序列设计(表 1)。引物委托上海生工生物技
术服务有限公司合成。
1． 2 细菌分离
将 50 g 油菜籽样品加入 100 mL PBS 缓冲液
中，4℃浸泡过夜;纱布过滤，滤液 10 000 r /min 离
心 20 min;1 mL PBS 悬浮沉淀并转入 EP管 12 000
r /min 离心 5 min，沉淀用 PBS 悬浮后 10 倍梯度稀
释至 10 －4，分别取 10 －2 ～ 10 －4稀释液 100 μL 涂布
MT培养基平板，每个稀释度10个重复。26℃培
Table 1 Primers used in the study
Primers Nucleotide sequence(5-3) Gene name Amplicon /bp
MM5F gaacgagctgaaggaagaca
MM5Ｒ cagcctggttagtctggtta
type III helper protein hrpZ，hrpZ 532
cfl F ggcgctccctcgcactt
cfl Ｒ ggtattggcgggggtgc
coronafacate ligase，cfl 670
gyF1 tcctacaaagtatccggcgg
gyＲ1 gtcgatcatcttgccgacga DNA gyrase subunit B，gyrB 807
gyF2 gcagtggaacgacagcttca
gyＲ2 cgattagctccggcaactga
DNA gyrase subunit B，gyrB 800
rp1 cgttgaacttctgacccgt
rp4 caagttggcttcaaccatct
ＲNA polymerase sigma factor，rpoD 894
gltA-F tacagtgggtccggacgtga
gltA-Ｒ gttcttgtagacccggtgac
citrate synthase，gltA 865
gap1-F ccgtatcgcaatcaacggt
gap1-Ｒ agcgggttgtgattgaagtcgt
glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase，
gap1
861
acnB-F ccgaacaactcaagcacact
acnB-Ｒ cgccttgccgaccatcttct
aconitate hydratase 2，acnB 832
pgi-F caatagccgaccacagcga
pgi-Ｒ cgtactaccgcaatccttc
glucose-6-phosphate isomerase，pgi 840
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植物病理学报 45 卷
养 3 ～ 4 d后挑取单菌落至 KB 平板进行纯化。保
存方法参考文献［10］。
1． 3 致病性测定
分离物在 KB 平板上 28℃培养 24 h 后，用无
菌水配成 108 CFU /mL 的菌悬液，无菌棉签蘸取菌
悬液均匀涂布接种四周龄健康油菜幼苗、花椰菜幼
苗和番茄幼苗嫩叶，以无菌水作为对照，幼苗接种
后保湿 24 h，之后转入 20℃光照培养箱内培养，
10 d 后记录油菜、花椰菜和番茄发病情况。对接
种发病幼苗叶片进行病原菌的再分离、纯化，并与
最初的接种物进行比较。
1． 4 LOPAT测试
LOPAT 测试包括果聚糖产生、氧化酶和精氨
酸双水解酶实验、马铃薯软腐和烟草过敏反应，具
体实验步骤见 Goszczynska等［7］的方法。
1． 5 Biolog 鉴定
利用 GNⅡ微孔板进行 Biolog 鉴定，具体步骤
参照 Biolog 使用说明。
1． 6 hrpZ和 cfl 基因序列分析
参照植物基因组 DNA 提取试剂盒方法
(TIANGEN DP305)提取分离物 2305-1 和 5309-1
的 DNA。利用引物 MM5F /5Ｒ 和 cfl F /Ｒ 进行
PCＲ 扩增，PCＲ 反应体系及程序分别参考 Zac-
cardelli 等［8］和 Bereswill ［9］等的报道。用 1． 5%琼
脂糖凝胶 1 × TAE 缓冲液电泳检测目的条带。扩
增产物送上海生工生物技术服务有限公司进行测
序拼接后，在 GenBank中进行序列比对分析。
1． 7 多位点序列分析
用表 1 中所述引物分别扩增分离物 2305-1 和
5309-1 基因组中的看家基因，包括 gyrB、rpoD、gl-
tA、gap1、acnB和 pgi。PCＲ反应体系及程序、电泳
及成像分析、PCＲ扩增产物测序及分析，均同 1． 6。
将核实拼接后的序列在 GenBank、PAMDB(The
Plant-Associated Microbes Database，www ． pamdb．
org)数据库中进行同源性比对分析。利用 Clus-
terX1． 83、MEGA5． 0 等软件构建分离物与 Pma、
Pto 及相关种的系统发育树［11］。
2 结果与分析
2． 1 分离物培养性状
油菜种子提取液在 MT 培养基上培养 3 d 后
可见 Pma典型菌落，菌落米白色，圆形至椭圆形，
革兰氏阴性，并产生蓝绿色荧光，周围无透明水解
圈。培养 4 ～ 7 d 后，菌落周围出现小而模糊的吐
温 80 水解圈，与大而透明的酪蛋白水解圈差异明
显。分离物 2305-1 的菌落白色，表面光滑湿润;分
离物 5309-1 菌落为米白色，表面略干扁。
2． 2 分离物致病性
分离物 2305-1 和 5309-1 接种油菜后，油菜叶
片初期产生针尖大小斑点，后变为褐色坏死状病
斑，病斑周围伴随着大量黄绿色晕圈，后期病斑融
合成不规则的大坏死斑;分离物接种花椰菜叶片 7
d后，叶片产生针尖大小的黑褐色小斑点，斑点周
围伴随黄绿色晕圈;分离物接种番茄叶片 7 d 后叶
片产生黑褐色斑点，但斑点直径较大，症状较油菜
和花椰菜明显，斑点周围也伴随黄绿色晕圈(图
1) ;2 株分离物在油菜、花椰菜和番茄上均可引起
黄绿色晕圈，这也与冠毒素引起的症状相符合。分
离物在花椰菜和番茄上均可引起黑褐色病斑，与文
献中描述的由 Pma 引起的典型症状一致，而油菜
叶片则多为黄绿色坏死状病斑。2 株分离物对油
菜、花椰菜和番茄均具有致病性，但症状略有差异。
Pma菌株 ATCC51320 可能由于致病力减弱，症状
已不明显，但与 2 株分离物引起的病斑症状一致。
从接种发病油菜、花椰菜和番茄叶片重新分离病
菌，均可得到与接种物同样的分离物。
2． 3 LOPAT测试
LOPAT 测试结果表明分离物 2305-1 和 5309-1
与 Lelliott等［12］描述的 P． syringae 组群特征一致。
其中，分离物 2305-1和 5309-1氧化酶和精氨酸双水
解酶反应均为阴性;分离物在 NA 平板(含 5%蔗
糖) ，28℃黑暗培养 5 d后均形成凸起的白色粘稠菌
落，表明均可利用蔗糖产生果聚糖;针刺法接种马铃
薯切片，28℃黑暗培养 24 h 后没有出现软腐症状;
采用组织渗透法接种普通烟叶背面，28℃光照培养
24 h后观察均引起过敏性坏死反应(图 2)。
2． 4 Biolog 鉴定
Biolog GNⅡ微孔板将分离物 2305-1 鉴定为
P． syringae pv． tomato，PＲOB 为 86%，SIM 为0． 582;
分离物 5309-1 鉴定为 P． syringae pv． apii，PＲOB
为66%，SIM为0． 567;将Pma菌株ATCC51320鉴定
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4 期 叶露飞，等:进境油菜籽中十字花科黑斑病菌的检测
Fig． 1 Pathogenicity test of isolates 2305-1 and 5309-1 on rape，cauliflower and tomato
A，E，I:Water control;B，F，J:Symptom produced on rape，cauliflower，tomato by strain ATCC51320;
C，G，K:Symptom produced on rape，cauliflower，tomato by isolates 5309-1;
D，H，L:Symptom produced on rape，cauliflower，tomato by isolates 2305-1．
Fig． 2 LOPAT test of isolates 2305-1 and 5309-1
A，B:Levan production by isolates 2305-1 and 5309-1;
C，D，E:Symptom produced on potato slice by inoculation with water，2305-1 and 5309-1;
F，G，H:Hypersensitivity reaction on tobacco by infiltration with water，2305-1 and 5309-1．
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植物病理学报 45 卷
为 Pseudomonas。Biolog 数据库中无 Pma 菌株，其
判定结果仅供参考。95 种不同碳源反应中，分离
物 2305-1 有 81 种碳源反应结果与 Pma 菌株
ATCC51320 一致，而分离物 5309-1 有 78 种，表明
分离物 2305-1 和分离物 5309-1 在碳源利用方面与
ATCC51320 非常相似，且三者均与 P． syringae 的
各项指标相符合，其差异为 D-山梨醇分离物 2305-
1 和 ATCC51320 为阳性，分离物 5309-1 阴性;
D-葡萄糖胺酸 ATCC51320 为阴性，分离物 2305-1
和 5309-1 为阳性;甘氨酰-L-谷氨酸分离物 2305-1
和 ATCC51320 为阳性，分离物 5309-1 为阴性。
2． 5 hrpZ及 cfl 基因序列分析
分离物 2305-1 和 5309-1 的 hrpZ 基因片段均
为 487 bp(KJ543472、KJ543473)，与 GenBank 中
Pma 菌 株 M2 (AY325899)和 菌 株 PMC8301
(AB112566)序列相似性为 100%，与 Pma 对照菌
株 ATCC51320(KJ543474)序列相似性为 100%。
与 31 株 Pto 菌株序列相似性为 99． 18% ～ 100%，
序列差异为 0 ～ 4 bp。而与其它 P． syringae 致病
变种的菌株差异较大，序列相似性仅为 68% ～
94%。
分离物 2305-1 和 5309-1 的 cfl 基因片段均为
621 bp(KJ543475、KJ543476)，与 GenBank 中 Pto
菌株 DC3000(AE016853)序列相似性为 100%，与
Pma菌株 ES4326(AEAK01000467)序列相似性为
99． 84%，序列差异1bp，与对照菌株ATCC51320
(KJ543477)序列相似性为 100%。
2． 6 多位点序列分析
看家基因引物分别扩增分离物 2305-1、分离物
5309-1和 Pma菌株 ATCC51320的 DNA，PCＲ产物双
向测序后均得到 1 204 bp 的 gyrB 基因序列
(KJ634655-57)、800 bp 的 rpoD 基因序列(KJ634658-
60 )、825 bp 的 gltA 基因序列(KJ634661-63)、806 bp
的 gap1基因序列(KJ641614-16)、790 bp的 acnB基因
序列(KJ634664-66)和 802 bp 的 pgi 基因序列
(KJ634667-69);分 离 物 2305-1 与 对 照 菌 株
ATCC51320的 6 段看家基因序列完全一致，与分离
物 5309-1 在 gyrB、acnB、pgi基因序列分别有 16、7
和 4 bp的差异;PAMDB 数据库中比对分析，结果
表 明 分 离 物 2305-1、 分 离 物 5309-1、
PmaATCC51320 6 段看家基因序列与 Pma、Pto 相
应的看家基因序列均高度相似，相似性均达 98%
～ 100%，这也与 GenBank 中 BLAST 结果一致。
将 分 离 物 2305-1、 分 离 物 5309-1 和
PmaATCC51320 的看家基因序列与数据库中相关
菌株的对应看家基因序列用 ClusterX1． 83 软件比
对分析后截齐，6 段基因并齐后获得 3 555 bp 的序
列。
根据 PAMDB 数据库中对不同菌株间各位点
等位基因的分类，将 49 株菌株分为 15 种序列类型
(sequence type)(表2)。其中 Pma菌株分为8种
Table 2 Strains belonging to the STs in the phylogenetic tree
Strain No． Straina
1 Pan126
2 PanICMP4303
3
PtoT1，PtoMax1，PtoMax13，PtoPST6，PtoPT13，PtoPT14，PtoPT18，PtoPT2，
PtoPT21，PtoPT26，PtoPT32，PtoNCPPB1108，PtoB181，PtoKS127
4 PtoMax14
5 PtoJL1065，PtoJL1031，PtoPT28，PtoPT29，PtoPT30，PtoPST26L，PtoKS112
6 PmaF1，PmaF7
7 Pap1089，PapCFBP1726
8 PmaF15
9 PmaM3
10 PmaM6，PmaM1，PmaM2，PmaM8，PmaNCPPB1766，Pmamac1
11 PmaICMP4981
12 PmaICMP795
13 PmaICMP2744
14 PtoDC3000
15 PmaF9，PmaF6，PmaF10A，PmaF16，PmaF17，PmaF18，PmaF19，Pma84-59
a :Ｒepresentative strain showed in Fig． 3 are bold．
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4 期 叶露飞，等:进境油菜籽中十字花科黑斑病菌的检测
Fig． 3 Phylogenetic tree of the concatenated sequences based on six housekeeping genes
Outgroup:PsyB728A．
ST，Pto 菌株分为 4 种 ST，相同 ST 的菌株 6 段看
家基因的序列相似性均为 100%，每种 ST 选择一
株代表性菌株，MEGA5． 0 软件中采取最大似然法
构建分离物与 Pma、Pto 及相关种的系统发育树，
MEGA5． 0 计算最佳碱基替代模型为 Tamura-Nei
+ G + I，结果表明除 PtoDC3000 外，所有 22 株 Pto
菌株均位于亚组 I 内，22 株 Pma 菌株分别位于亚
组 II和亚组 III内(图 3)。分离物 5309-1 与 13 株
Pma菌株位于同一亚组 II 内，且与 Pma 菌株 F1、
F7 的遗传关系最近;分离物 2305-1 和对照菌株
ATCC51320 位于同一亚组 III 内，与亚组 II 不同，
亚组 III 内包含 8 株 Pma 菌株及 1 株 Pto 菌株
DC3000。系统发育树显示分离物 2305-1、分离物
5309-1 和 PmaATCC51320 均可与 Pma 聚在一起，
而与 DC3000 之外的 Pto 菌株差异明显，它们与
Pma的遗传关系更为接近。
根据致病性测定、LOPAT 测试、Biolog 鉴定、
hrpZ 和 cfl基因序列分析及多位点序列分析的结
果，将分离物 2305-1 和 5309-1 均鉴定为十字花科
黑斑病菌 P． syringae pv． maculicola。
3 讨论
丁香假单胞杆菌 P． syringae 的寄主范围非常
广泛，根据其寄主范围及引发症状，将其划分为 50
多个致病变种［12］，其致病变种鉴定是植物病原细
菌鉴定中的难点。Gardan 等根据 DNA-DNA 杂交
和核糖体分型将 48 个 P． syringae 致病变种及相
关假单胞杆菌划分为 9 类基因型［13］，位于基因型
3 中的 Pma 与同组的 P． syringae pv． tomato
(Pto)、P． syringae pv． antirrhini(Pan)、P． syrin-
gae pv． apii(Pap)遗传关系均非常接近，尤其与
Pto 在生理生化、遗传学水平方面非常相似，且部
分菌株存在寄主交叉，难以区分［11］。
Pma和 Pto 都是我国的检疫性有害生物，准确
514
植物病理学报 45 卷
有效区分 2 种病菌具有十分重要的意义。常规检
测方法包括 LOPAT 测试、Biolog、脂肪酸分析等，
可将病原物鉴定到 P． syringae，但 Biolog 和脂肪
酸分析对致病变种的鉴定常缺乏足够的准确
度［1，12］，难以区分 Pma和 Pto。致病性测试可作为
区分二者的辅助手段，Wiebe 等分析了 25 株 Pma
和 4 株 Pto 的致病性，发现 25 株 Pma 对十字花科
植物和番茄均具有致病性，而 4 株 Pto 仅对番茄有
致病性［14］。Yan等根据寄主范围，将 Pto 分为 2 种
类型，两类菌株间具有显著差异［11］，一种对十字花
科植物无致病性，绝大多数菌株属于这一类型;另
外一种以 DC3000 为代表，对番茄和十字花科植物
均有致病性，在致病性方面这些菌株与 Pma 更为
相似。Gironde等对 69 株 Pma和 18 株 Pto 菌株进
行分子系统发育分析及致病性测定，认为 Pto 中
DC3000 以及同类的菌株应该归为 Pma［2］。本试
验结果表明分离物在致病性方面与 Pma一致。
分子生物学检测中冠毒素基因常作为鉴定
Pma的指标［1］，cfl基因位于冠毒素合成基因簇内，
其序列在 P． syringae 种内较为保守，其编码产物
冠毒素连接酶是冠毒素生物合成所必需的，分离物
的 cfl基因序列分析表明，在其基因组中存在冠毒
素合成基因。Zaccardelli等根据 Pto 及近似菌株的
hrpZ 基因设计了检测 Pto 的特异性引物 MM5F /
5Ｒ［8］，试验结果表明该引物也可扩增 Pma，其 hrpZ
基因序列与其他 P． syringae 致病变种的菌株差异
较大，通过分析 hrpZ 基因可将 Pma、Pto 与其他 P．
syringae 致病变种区分开。但 Pma 与 Pto 的 hrpZ
基因序列无明显差异，故不能有效鉴定 2 种病菌。
近年来，MLST /MLSA(Multilocus sequence
typing /analysis，多位点序列分型 /多位点序列分
析)越来越多地应用于植物病原细菌的进化与群
体遗传学研究中，如 P． syringae、Xanthomonas
spp．、Ｒ． solanacearum、Xylella spp． 和 Acidovorax
citrulli［13］，Yan 等［11］和 Cai 等［15］通过 MLST /ML-
SA 方法区分 Pma、Pto 及其近似种，Almeida 等构
建了 PAMDB 数据库用于 P． syring 的 MLST 研
究［16］。Yan等根据 MLST 及寄主范围测试，认为
PtoDC3000 不是典型的 Pto 菌株，因为它与 Pma 菌
株聚在一起，对十字花科植物具有致病性;而其他
2 种序列型(T1 和 JL1065)的 Pto 菌株聚在同一亚
组内，这些 Pto 菌株对十字花科植物均无致病性，
且它们对番茄的致病性比 DC3000 更强［11］。Cai
等收集了 1942 年-2009 年世界范围内分离的 112
株 Pto 菌株，通过 MLST 将它们分为 3 种序列型
T1、JL1065 和 DC3000，其中 89 株菌株属于 T1，21
株菌株属于 JL1065，仅有 2 株菌株属于 DC3000，
1961 年之后发现的 Pto 菌株均属于 T1 或 JL1065，
T1 这类菌株出现的频率快速增长，1999 年之后所
有欧洲和北美收集的 Pto 菌株都属于 T1［17］。
对分离物 6 个看家基因进行多位点序列分析，
结果表明分离物 2305-1、对照菌株 ATCC51320，以
及 8 株 Pma菌株与 PtoDC3000 均位于同一亚组 III
内;分离物 5309-1 与 13 株 Pma 菌株位于亚组 II
内，而其他 Pto 菌株均位于亚组 I 内，这与 Yan 等
的研究结果相符合。分离物 2305-1 和 5309-1 均可
与 Pma聚在一起，而与 DC3000 之外的 Pto 菌株差
异明显，这也与致病性测定的结果相符合。由于
DC3000 这类 Pto 菌株目前很难发现［17］，可以认为
DC3000 对 Pma和 Pto 的鉴定并不会造成影响，通
过 MLST /MLSA 和寄主范围测试，可以将 Pma 和
典型的 Pto 菌株如 T1 和 JL1065 区分开来。
致谢:美国弗吉尼亚理工大学 Boris A Vinatzer 教
授在病原物鉴定方面给予了宝贵建议和帮
助;福建出入境检验检疫局陈艳博士提供油
菜籽样品;中国检验检疫科学研究院赵文军
博士提供 Pma阳性菌株。
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责任编辑:于金枝
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