全 文 ：　 Ｇｕｉｈａｉａ　 Ａｕｇ. ２０１６ꎬ ３６(８):９２３－９２９
ｈｔｔｐ: / / ｊｏｕｒｎａｌ.ｇｘｚｗ.ｇｘｉｂ.ｃｎ
ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｇｕｉｈａｉａ－ｊｏｕｒｎａｌ.ｃｏｍ
ＤＯＩ: １０.１１９３１ / ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０１５０１０２３
魏琴ꎬ 谭韵雅ꎬ 李群ꎬ 等. 内生真菌对油樟悬浮细胞培养的影响[Ｊ]. 广西植物ꎬ ２０１６ꎬ ３６(８):９２３－９２９
ＷＥＩ Ｑꎬ ＴＡＮ ＹＹꎬ ＬＩ Ｑꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｕｎｇａｌ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ｏｎ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ[Ｊ]. Ｇｕｉｈａｉａꎬ ２０１６ꎬ ３６(８):９２３－９２９
内生真菌对油樟悬浮细胞培养的影响
魏　 琴１ꎬ 谭韵雅２ꎬ 李　 群２∗ꎬ 游　 玲１ꎬ 汪　 超２ꎬ 王　 玉１ꎬ 廖　 淋１
( １. 宜宾学院 香料植物资源开发与利用四川省高校重点实验室ꎬ 四川 宜宾 ６４４０００ꎻ
２. 四川师范大学 生命科学学院ꎬ 成都 ６１０１０１ )
摘　 要: 该文研究了内生真菌 ＹＧ４２、ＹＧ７１、ＹＹ１１和 ＹＹ２６发酵液ꎬ对油樟悬浮细胞的生长量及挥发性代谢产
物积累量的影响ꎮ 结果表明:４种内生真菌对油樟悬浮细胞的生长均有抑制作用ꎬ抑制强度随发酵液添加量
的增加而加强ꎮ ４种内生真菌对油樟悬浮细胞挥发性代谢产物积累总量及 １ꎬ８￣桉叶油素、γ￣叶松油烯和 α￣油
松油醇 ３种油樟油组分物质积累量的影响多表现为低浓度促进高浓度抑制的趋势ꎮ 其中ꎬ１％添加量的 ＹＧ４２
和 ＹＹ２６及 ０.２５％添加量的 ＹＹ１１对悬浮细胞总挥发性代谢产物积累的促进作用相当且最强ꎬ其积累量分别
是空白组的 ２.００、１.９５、２.０１倍ꎻ０.２５％添加量的 ＹＧ７１对 １ꎬ８￣桉叶油素积累的促进作用最强ꎬ其积累量为空白
组的 １１.０３倍ꎻ０.２５％添加量的 ＹＧ７１和 ＹＹ２６对 α￣松油醇积累的促进作用相当且最强ꎬ其积累量分别为空白
组的 １.７２和 １.８１倍ꎻ对于 γ￣松油烯的积累ꎬ在空白组中未检测到其峰值ꎬ４ 种真菌诱导子对 γ￣松油烯的产生
有诱导作用ꎬ诱导的最大峰面积为 ０.１９ꎬ诱导菌是 ０.２５％添加量的 ＹＧ７１ꎮ 该研究结果为充实内生菌影响香料
植物挥发性代谢产物合成理论奠定了基础ꎬ也为生产上内生真菌提高油樟油中有用物质组分含量措施的采用
提供了依据ꎮ
关键词: 内生真菌ꎬ 挥发性代谢产物ꎬ 悬浮培养ꎬ １ꎬ８￣桉叶油素ꎬ γ￣松油烯ꎬ α￣松油醇
中图分类号: Ｑ９４３.１　 　 文献标识码: Ａ　 　 文章编号: １０００￣３１４２(２０１６)０８￣０９２３￣０７
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｕｎｇａｌ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ｏｎ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ
ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ
ＷＥＩ Ｑｉｎ１ꎬ ＴＡＮ Ｙｕｎ￣Ｙａ２ꎬ ＬＩ Ｑｕｎ２∗ꎬ ＹＯＵ Ｌｉｎｇ１ꎬ ＷＡＮＧ Ｃｈａｏ２ꎬ ＷＡＮＧ Ｙｕ１ꎬ ＬＩＡＯ Ｌｉｎ１
( １. Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ａｒｏｍａｔｉｃ Ｐｌａｎｔ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｈｉｇｈｅｒ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎꎬ Ｙｉｂｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ
Ｙｉｂｉｎ ６４４０００ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１０１０１ꎬ Ｃｈｉｎａ )
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｗｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｕｎｇａｌ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ＹＧ４２ꎬ ＹＧ７２ꎬ ＹＹ１１ ａｎｄ ＹＹ２６ ｏｎ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｆ
ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ
ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｆｕｎｇａｌ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ｈａｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｃ. ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｎｓｅｒ ｔｈｅ ｆｅｒ￣
ｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｌｕｉｄ ｗａｓꎬ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｔｈｅｙ ｈａｄ. Ｔｈｅ ｔｒｅｎｄ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ
ｆｕｎｇｉ ｈａｄ ｏｎ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃ. ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｏｉｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ １ꎬ８￣ｃｉｎｅｏｌｅ
γ￣ｔｅｒｐｉｎｅｎｅ ａｎｄ α ￣ｔｅｒｐｉｎｅｏｌ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｃ. ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｗａｓ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ａｔ ａ ｌｏｗ ｃｏｎｃｅｎ￣
ｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｔ ａ ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ. Ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ １％ ＹＧ４２ꎬ ＹＹ２６ ａｎｄ ０.２５％ ＹＹ１１ ｏｎ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ
收稿日期: ２０１５￣０１￣１９　 　 修回日期: ２０１５￣０３￣０３
基金项目: 四川省教育厅项目(０８ＺＡ００２)ꎻ四川省科技计划项目(２０１０ＪＹ００９３)ꎻ宜宾市科技局项目(２０１１ＺＳＦ００８)ꎻ四川省高校重点实验室项目
(２０１２ＫＦＺ００１)[Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｏｆｆｉｃｅ(０８ＺＡ００２)ꎻ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｌａｎｎｉｎｇ Ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ(２０１０ＪＹ００９３)ꎻ
Ｙｉｂｉｎ Ｃｉｔｙ Ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｂｕｒｅａｕ(２０１１ＺＳＦ００８)ꎻ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅｓ ａｎｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ(２０１２ＫＦＺ００１)]ꎮ
作者简介: 魏琴(１９６７￣)ꎬ女ꎬ四川屏山人ꎬ博士ꎬ教授ꎬ主要从事资源植物学研究ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｗｅｉｑｉｎ２００１－６７＠ １６３.ｃｏｍꎮ
∗通讯作者: 李群ꎬ 博士ꎬ副教授ꎬ主要从事植物组织培养研究ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｌｉｑｕｎ０１２３４＠ １６３.ｃｏｍꎮ
ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔꎬ ａｎｄ ｔｈｅｙ ｈａｄ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ
ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎꎬ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ２.００ꎬ １.９５ ａｎｄ ２.０１ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ
０.２５％ ＹＧ７１ ｈａｄ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ １ꎬ８￣ｃｉｎｅｏｌｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎꎬ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ １１. ０３ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｔｈｅ
ｃｏｎｔｒｏｌ. Ｔｈｅ ０.２５％ ＹＧ７１ ａｎｄ ＹＹ２６ ｈａｄ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ａ￣ｔｅｒｐｉｎｅｏｌ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎꎬ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ
１.７２ ａｎｄ １.８１ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. γ￣ｔｅｒｐｉｎｅｎｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ. Ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎ￣
ｇｉ ｃｏｕｌｄ ｉｎｄｕｃｅ γ￣ｔｅｒｐｉｎｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎꎬ ｔｈｅ ｂｉｇｇｅｓｔ ｐｅａｋ ａｒｅａｓ ｗｅｒｅ ０. １９ꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｗａｓ ０. ２５％
ＹＧ７１. Ｔｈｉｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｗｉｌｌ ｅｎｒｉｃｈ ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｙ ｔｈａｔ ｆｕｎｇａｌ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ａｆｆｅｃｔ ｔｈｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｉｎ ａｒｏｍａｔｉｃ
ｐｌａｎｔꎬ ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｕｓｅｆｕｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｉｎ
Ｃ. ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｏｉｌ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｆｕｎｇａｌ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓꎬ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓꎬ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅꎬ １ꎬ８￣ｃｉｎｅｏｌｅꎬ γ￣ｔｅｒｐｉｎｅｎｅꎬ
α￣ｔｅｒｐｉｎｅｏｌ
　 　 植物内生菌群落和宿主在长期协同进化过程
中ꎬ内生真菌能产生某些物质以快速、专一、选择性
地诱导植物代谢过程中某些基因的表达ꎬ进而调节
植物中代谢物质的积累(谭燕等ꎬ２０１３)ꎮ 由于内生
真菌与宿主植物之间存在基因水平转移ꎬ使内生菌
与宿主植物有相似的代谢途径ꎬ从而可能形成相同
或相似的代谢产物或者宿主植物代谢产物的前体物
质ꎬ导致内生菌对宿主细胞代谢产物产量有较大影
响(朱国胜等ꎬ２００５ꎻＰｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌꎬ １９９８ꎻ Ｖｉｊａｙ ｅｔ ａｌꎬ
２０１４ꎻ Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌꎬ ２０１４)ꎮ 某些真菌具有萜类生物
转化能力(Ｍｏｌｉｎａ ｅｔ ａｌꎬ ２０１３ꎻ Ｍｉｃｈａｅｌ ｅｔ ａｌꎬ ２００９)ꎮ
因此ꎬ以单萜、倍半萜、二萜等多种萜类物质为主要
成分的香料植物的芳香油的形成可能与内生真菌有
相关性ꎮ
油樟 ( Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ) 为樟科
(Ｌａｕｒａｃｅａｅ)樟属(Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ)常绿乔木ꎬ是重要
的经济作物ꎬ其根、茎、叶、种子均可提取芳香油ꎮ 油
樟叶中提取的芳香油主要成分是萜类物质ꎬ占芳香
油在 ８５％以上(胡文杰等ꎬ２０１２)ꎮ 其中ꎬ已报道有
重要经济价值的成分有 １ꎬ８￣桉叶油素ꎬγ￣松油烯ꎬα￣
松油醇等(Ｌｉ ｅｔ ａｌꎬ ２０１４)ꎮ 游玲等(２００９)研究表
明ꎬ油樟内生真菌代谢产物中存在大量油樟油组分
中的单萜组分、其类似物或前体物质ꎬ并推测油樟内
生真菌参与了油樟油的形成过程ꎮ 关于油樟油中有
重要经济价值的 １ꎬ８￣桉叶油素ꎬγ￣松油烯ꎬα￣松油醇
等的形成是否与内生真菌有密切关系尚未见有研究
报道ꎮ 基于此ꎬ本研究以悬浮培养系为对象ꎬ以分离
到的内生真菌为诱导子ꎬ通过研究内生真菌对悬浮
细胞挥发性物质积累及相关萜类物质积累的影响情
况ꎬ以期探讨内生真菌与 １ꎬ８￣桉叶油素ꎬγ￣松油烯ꎬ
α￣松油醇等萜类物质积累的相关性ꎮ 这对充实内生
菌影响香料植物萜类物质等挥发性代谢产物合成理
论有积极意义ꎬ也对生产上内生真菌提高油樟油中
有用物质组分含量措施的采用提供依据ꎮ
１　 材料与方法
１.１ 材料与仪器
内生真菌 ＹＧ４２(从油樟根中分离的真菌ꎬ编号
为 ４２ꎬ初步鉴定为初步鉴定为稀丝头孢霉属 Ｈａｐ￣
ｌｏｔｒｉｃｈｕｍ)、ＹＧ７１(从油樟根中分离的真菌ꎬ编号为
７１ꎬ肿节暗孢霉属 Ｏｅｄｅｍｉｕｍ)、ＹＹ１１(从油樟叶中分
离的真菌ꎬ编号为 １１ꎬ有待鉴定)和 ＹＹ２６(从油樟叶
中分离的真菌ꎬ编号为 ２６ꎬ初步鉴定为拟内孢霉属
Ｅｎｄｏｍｙｃｏｐｓｉｓ)由宜宾学院香料植物资源开发与利用
四川省高校重点实验室提供ꎻ１ꎬ８￣桉叶油素 (０. ５
ｍＬ􀅰支￣１ꎬＨＰＬＣ≥９９％)、α￣松油醇 (０. １ ｇ􀅰支￣１ꎬ
９８％)和 γ￣松油烯(１ ｇ􀅰支￣１ꎬＧＣ ９５％)三种标品在
北京世纪奥科生物技术有限公司购回ꎮ
采用气相色谱仪[Ａｇｉｌｅｎｔ７８９０Ａ、火焰离子化检
测器(ＦＩＤ)]ꎮ
１.２ 方法
１.２.１ 油樟悬浮细胞系建立　 参照魏琴等(２００８)的
配方进行愈伤组织培养ꎮ 培养基配方是 Ｂ５ ＋ ＮＡＡ
０.５ ｍｇ􀅰Ｌ￣１ ＋ ６￣ＢＡ ２. ０ ｍｇ􀅰Ｌ￣１ ＋ 蔗糖 ３％ ＋琼脂
０.７％ꎬｐＨ ５.８ꎮ 将愈伤组织(约 ２ ｇ 鲜重)接种到 ４０
ｍＬ液体培养基中悬浮培养ꎬ培养温度 ２５ ℃ꎬ摇床转
速 １１０ ｒ􀅰ｍｉｎ￣１ꎮ 每 ２０ ｄ继代 １ 次ꎬ连续继代 ３ 次ꎬ
直至愈伤组织较为疏松后用于建立悬浮培养体系ꎮ
１.２. ２ 内生真菌发酵液制备 　 将内生真菌 ＹＧ４２、
ＹＧ７１、ＹＹ１１ 和 ＹＹ２６ 接种于 ＰＤＡ 培养基上ꎬ２８ ℃
恒温培养 ４ ｄꎬ 无菌水洗脱孢子ꎬ 制成浓度为 １０７个
４２９ 广　 西　 植　 物　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ３６卷
图 １　 混合标样 ＧＣ图　 ａ. １ꎬ８￣桉叶油素ꎬ出峰时间为 ２.８４０ ｍｉｎꎻ ｂ. γ￣松油烯ꎬ出峰时间为 ３.１６７ ｍｉｎꎻ ｃ. α￣松油醇ꎬ出峰时间为 ５.３２５ ｍｉｎꎮ
Ｆｉｇ. １　 Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｆｏｒ ｍｉｘ ｓｔａｎｄａｒｄ　 Ｔｈｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ １ꎬ８￣ｃｉｎｅｏｌｅ (ａ)ꎬγ￣Ｔｅｒｐｉｎｅｎｅ (ｂ) ａｎｄ
α￣Ｔｅｒｐｉｎｅｏｌ (ｃ) ｉｓ ２.８４０ꎬ ３.１６７ ａｎｄ ５.３２５ ｍｉｎꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
孢子􀅰ｍＬ￣１的孢子悬液ꎬ接种 １ ｍＬ于含 ４０ ｍＬ液体
培养基(麦芽浸膏 ２０ ｇꎬ葡萄糖 ２０ ｇꎬ蛋白胨 １ ｇꎬｐＨ
５)的三角瓶中ꎬ摇床转速为 １５０ ｒ􀅰ｍｉｎ￣１ꎬ２８ ℃培养
８ ｄꎮ 超声波破碎ꎬ备用ꎮ
１.２.３ １ꎬ８￣桉叶油素、γ￣松油烯和 α￣松油醇 ３ 种物质
混和标样的制备与检测　 称取 ０.５ ｇ １ꎬ８￣桉叶油素、
γ￣松油烯和 α￣松油醇标品ꎬ分别置于 ５０ ｍＬ 容量瓶
中用乙醇定容ꎬ制成 １０ ｇ􀅰Ｌ￣１的标准溶液ꎮ 取配好
的 １０ ｇ􀅰Ｌ￣１的 ３种标准溶液ꎬ用超纯水稀释配制成
浓度为 ０.００１ ｇ􀅰Ｌ￣１的混和标样ꎮ 取 １０ ｍＬ 培养物
顶空进样ꎬ气相色谱检测ꎮ
１.２.４ 内生真菌对悬浮细胞生长和挥发性物质积累
的影响　 试验分三轮进行ꎮ 第一轮:在液体培养基
中分别添加浓度为 １％(１００ ｍＬ 悬浮细胞培养基中
添加 １ ｍＬ内生真菌发酵液ꎬ以下同)、４％、７％、１０％
的 ４种内生真菌发酵液ꎬ以不加内生真菌发酵液的
悬浮培养系作为空白组ꎬ１２１ ℃高压灭菌 １８ ｍｉｎꎮ
待冷却后ꎬ将愈伤组织(２ ｇ 鲜重)接种到含不同浓
度发酵液的 ４０ ｍＬ液体培养基中悬浮培养ꎮ 每组重
复 ３瓶ꎬ摇床转速 １１０ ｒ􀅰ｍｉｎ￣１ꎬ２５ ℃条件下培养 ２０
ｄ后ꎬ进行生物量的测定ꎻ取 １０ ｍＬ 培养物顶空进
样ꎬ气相色谱检测ꎮ 在此试验结果基础上ꎬ进行第二
轮试验:在液体培养基中分别添加浓度为 ０. １％、
０.２５％、０.５％、０.７５％、１％的 ４ 种内生真菌发酵液ꎬ以
不加内生真菌发酵液的悬浮培养系作为空白组ꎬ接
种、灭菌、培养、检测等方法同上ꎮ 根据试验结果ꎬ进
行第三轮试验:选择上两轮试验中的关键性浓度
０.１％、０.２５％、１％、４％、１０％的 ４ 种内生真菌添加量
重复以上试验以验证试验结果ꎮ 方法同上ꎮ
１.２.４.１ 生物量的测定　 将悬浮细胞培养物抽滤ꎬ取
细胞ꎬ置于烘箱中 ４５ ℃干燥至恒重ꎬ称其质量为细
胞干重ꎮ 每组重复 ３次ꎮ
１.２.４.２ 气相色谱检测条件　 ＨＰ￣５(３０ ｍ × ３２０ μｍ
× ０.２５ μｍ)毛细管柱ꎬ平衡温度 ９５ ℃ꎬ平衡时间 ２０
ｍｉｎꎮ 载气为氮气ꎬ氢气流速 ３０ ｍＬ􀅰ｍｉｎ￣１ꎬ空气流
速 ４００ ｍＬ􀅰ｍｉｎ￣１ꎬ氮气尾吹气 ２５ ｍＬ􀅰ｍｉｎ￣１ꎬ顶空
进样ꎬ分流比 ３.０ꎮ 柱箱程序: 先 ９０ ℃保持 ４ ｍｉｎꎬ
再 ２０ ℃􀅰ｍｉｎ￣１到 １３０ ℃保持 ５ ｍｉｎꎬ然后 ２０ ℃􀅰
ｍｉｎ￣１到 １９０ ℃保持 １ ｍｉｎꎬ最后 ２０ ℃􀅰ｍｉｎ￣１到 ２４０
℃保持１ ｍｉｎꎮ 每组重复 ３次ꎮ
１.２.５ 数据处理　 以峰面积表示各物质的产量ꎬ其中
总挥发性次生代谢产物以总峰面积表示ꎮ 所有数据
均用 ＳＰＳＳ １７.０软件进行统计学处理ꎮ 数据以平均
值 ± 标准误即(ｘ ± ｓ)表示ꎮ
２　 结果与分析
２.１ 混合标样 ＧＣ分析
由混合标品的气相色谱检测结果(图 １)可知ꎬ
１ꎬ８￣桉叶油素、ｒ￣松油烯和 ａ￣松油醇的出峰时间分
别为 ２.８４０、３.１６７和 ５.３２５ ｍｉｎꎮ 图 １ 中相同的出峰
时间被认为是标品相同的物质ꎮ
２.２ ４种内生真菌对悬浮细胞生长的影响
４种内生真菌对悬浮细胞的生长的影响见表 １ꎮ
５２９８期　 　 　 　 　 　 　 　 　 魏琴等: 内生真菌对油樟悬浮细胞培养的影响
表 １　 内生真菌处理后悬浮细胞的生物量
Ｔａｂｌｅ １　 Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌ ｂｉｏｍａｓｓ ａｆｔｅｒ ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ ｂｙ ｆｕｎｇａｌ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ (ｇ􀅰Ｌ￣１)
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
０ (空白)
０ (Ｃｏｎｔｒｏｌ) ０.１％ ０.２５％ １％ ４％ １０％
ＹＧ４２ １２.１５ ± １.１０ａ １２.０９ ± ０.９２ａ １０.８８ ± ０.３２ｂ １０.３０ ± ０.３０ｂ ７.２８ ± ０.１５ｃ ６.１５ ± ０.０７ｄ
ＹＧ７１ １２.１５ ± １.１０ａ １１.９９ ± １.２２ａ １０.９１ ± ０.２８ｂ １０.６２ ± ０.１７ｂ ７.５５ ± ０.１９ｃ ５.７６ ± ０.１５ｄ
ＹＹ１１ １２.１５ ± １.１０ａ １２.１１ ± ０.９９ａ １０.７６ ± ０.１２ｂ １０.６６ ± ０.１６ｂ ５.８０ ± ０.１５ｄ ３.７１ ± ０.１１ｆ
ＹＹ２６ １２.１５ ± １.１０ａ １２.０４ ± １.０２ａ １０.８２ ± ０.１５ｂ １０.４５ ± ０.４４ｂ ６.０４ ± ０.１５ｄ ５.２６ ± ０.０８ｅ
　 注: 数据均为“平均值 ± 标准误”ꎬ标准误后面所带字母表示其对比因素下的差异性ꎬ字母相同表示无差异ꎬ字母不同表示具有显著差异ꎬ字母顺序按所对比数
据从大到小排列ꎻ 数据用 ＳＰＳＳ １７.０处理分析ꎬ数据显著性检测在 Ｐ≤０.０５下多范围 Ｄｕｎｃａｎ检测下获得ꎮ 下同ꎮ
　 Ｎｏｔｅ: Ｄａｔａ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｍｅａｎ ± ＳＥ”ꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｍｅａｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ. Ｓａｍｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｍｅａｎ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅꎬ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｍｅａｎ ｃｏｎｔｒａｒｙ ｒｅｓｕｌｔｓ. Ｄａｔａ
ａｒｅ ｔｅｓｔｅｄ (Ｐ≤０.０５) ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ Ｄｕｎｃａｎ’ｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔ (ＤＭＲＴ) ｗｉｔｈ ＳＰＳＳ １７.０. Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
方差分析表明ꎬ除浓度为 ０.１％的试验组外ꎬ其余所
有试验组中的细胞干重与对照组相比都有显著性差
异ꎮ ４种内生真菌对悬浮细胞的生长均有一定的抑
制作用ꎬ且抑制作用强度随着真菌发酵液浓度的增
加而增强ꎮ 经 Ｄｕｎｃａｎ 检测得知ꎬ在试验范围内ꎬ
１０％添加量的 ＹＹ１１ 真菌诱导子对悬浮细胞生长的
抑制作用最强ꎮ
２.３ ４种内生真菌对悬浮细胞总挥发性代谢产物积
累量的影响
４种内生真菌对悬浮细胞总挥发性代谢产物积
累量的影响见表 ２ꎮ 表 ２ 显示ꎬ经 ４ 种内生真菌诱
导后悬浮细胞总挥发性代谢产物积累的量与空白相
比ꎬ有显著性差异ꎮ 总体趋势是低浓度促进高浓度
抑制ꎬ但不同内生真菌起促进作用的浓度是不一样
的ꎮ 对于 ＹＧ４２和 ＹＹ２６在真菌浓度为 １％时ꎬ其总
峰面积最大ꎬ分别是空白的 ２.００和 １.９５倍ꎻＹＹ１１在
真菌浓度为 ０. ２５％时其总峰面积最大ꎬ为空白的
２.０１倍ꎻＹＧ７１ 在所设实验浓度范围内未出现促进
作用ꎬ而是呈接近空白(低浓度时)或抑制作用(高
浓度时)ꎬ抑制强度随着浓度的增加而增强ꎮ 经
Ｄｕｎｃａｎ检测得知ꎬ １％添加量的 ＹＧ４２ 和 ＹＹ２６ 及
０.２５％添加量的 ＹＹ１１ 对总峰面积的影响无显著性
差异ꎬ其对悬浮细胞总挥发性代谢产物积累量的促
进作用相当且最强ꎮ
２.４ ４种内生真菌对 ３ 种萜类物质及其它物质积累
的影响
４种内生真菌对悬浮细胞 ３ 种萜类物质及其它
物质积累的影响见表 ３及图 ２ꎮ 经 ４ 种内生真菌诱
导后 ３种萜类物质积累的量与空白组相比ꎬ大部分
有显著性差异ꎮ 总体影响与总挥发性物质积累量相
似ꎬ 同一内生真菌对 ３种物质表现为在低浓度条件
下呈促进作用或与空白接近ꎬ在高浓度条件下呈抑
制作用ꎮ 不同内生真菌在同一浓度下ꎬ对 ３ 种萜类
的作用效果不同ꎻ同一浓度下ꎬ不同内生真菌对不同
萜类物质诱导效果有差异ꎻ对每一种萜类的诱导ꎬ要
求的最佳内生真菌的浓度是不一样的ꎮ
对于 １ꎬ８￣桉叶油素的积累ꎬＹＧ４２ 和 ＹＧ２６ 对其
均呈抑制作用ꎬＹＧ７１和 ＹＹ１１对其均表现为低浓度
促进高浓度抑制的现象ꎬ且均是在浓度为 ０.２５％促
进作用最强ꎬ此时 １ꎬ８￣桉叶油素的产量分别为空白
组的 １１.０３和 １.５９倍ꎮ 经 Ｄｕｎｃａｎ检测得知ꎬ其中促
进作用最强的是浓度为 ０.２５％的 ＹＧ７１(图 ２ꎬ表 ３)ꎮ
对于 γ￣松油烯的积累ꎬ在空白对照组中未检测
到其峰值ꎮ 在 ０.２５％添加量的 ４种真菌诱导子作用
下ꎬ检测到 γ￣松油烯有不同的峰值ꎬ其中峰面积最
大的是 ０.１９ꎬ其诱导菌是 ０.２５％添加量的 ＹＧ７１ꎮ 说
明 ４种真菌诱导子对 γ￣松油烯的产生有诱导作用
(表 ３)ꎮ
对于 α￣松油醇的积累ꎬ ４种真菌诱导子对松油
醇积累均表现为低浓度促进高浓度抑制的现象ꎬ且
均是在浓度为 ０.２５％时其促进作用最强ꎬ此时 α￣松
油醇的产量分别为空白组的 １.５７、１.７２、１.４３ 和 １.８１
倍ꎮ 经 Ｄｕｎｃａｎ检测得知ꎬ浓度为 ０.２５％的 ＹＧ７１ 和
ＹＹ２６对悬浮细胞 α￣松油醇的积累影响无显著性差
异ꎬ其促进作用相当且最强(表 ３)ꎮ
从图 ２可见ꎬ０.２５％ＹＧ７１ 试验组色谱图中ꎬ在
２~３ ｍｉｎ 及 ８ ~ １４ ｍｉｎ 范围内所出面积和峰数量与
对照组相比有明显的增加ꎬ出现了一些空白组中没
有的峰ꎬ证明诱导子除诱导增加了所测的 １ꎬ８￣桉
叶油素、α￣松油醇和γ￣松油烯产量外ꎬ还诱导了其他
６２９ 广　 西　 植　 物　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ３６卷
表 ２　 内生真菌处理后悬浮细胞中总挥发性代谢产物积累量 (总峰面积 / ｐＡｓ)
Ｔａｂｌｅ ２　 Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｉｎ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ ｂｙ ｆｕｎｇａｌ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ (Ｔｏｔａｌ ｐｅａｋ ａｒｅａ / ｐＡｓ)
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
０(空白)
０ (Ｃｏｎｔｒｏｌ) ０.１％ ０.２５％ １％ ４％ １０％
ＹＧ４２ ６５８.０２ ± ２５.９０ｂ ６５０.４５ ± ２９.０９ｂ ６６１.７４ ± ３５.４９ｂ １３１８.９７ ± ８９.５３ａ ３３２.９９ ± １１.７７ｄ ￣５６７.４８ ± ２４.８４ｈ
ＹＧ７１ ６５８.０２ ± ２５.９０ｂ ６６２.５７ ± ３３.１８ｂ ６７３.６８ ± ２８.８０ｂ ６６２.３８ ± ３２.５１ｂ ５２.５６ ± ２.９１ｅ ￣５７９.７９ ± １９.８８ｈ
ＹＹ１１ ６５８.０２ ± ２５.９０ｂ ６７１.６８ ± ３０.５６ｂ １３２１.４０ ± ７５.９７ａ ５３２.８８ ± １５.７４ｃ ３２２.９２ ± ５.３０ｄ ６７.５９ ± ５.５６ｅ
ＹＹ２６ ６５８.０２ ± ２５.９０ｂ ６５７.０２ ± ２５.７８ｂ ６５３.０１ ± ２６.９０ｂ １２８４.７０ ± ６５.０７ａ １６.００ ± １.６６ｆ ￣５３０.８７ ± １７.２６ｇ
　 注: 总峰面积＝样品总峰面积－空白总峰面积ꎮ 下表同ꎮ
　 Ｎｏｔｅ: Ｔｏｔａｌ ｐｅａｋ ａｒｅａ ＝ Ｓａｍｐｌｅ ｔｏｔａｌ ｐｅａｋ ａｒｅａ－ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｏｔａｌ ｐｅａｋ ａｒｅａ. Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
图 ２　 ０.２５％ＹＧ７１处理悬浮细胞后挥发性物质积累的色谱图　 Ａ. 样品ꎻ Ｂ. 空白ꎮ
Ｆｉｇ. ２　 Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｉｎ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ
ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ ｂｙ ０.２５％ ＹＧ７１　 Ａ. Ｓａｍｐｌｅꎻ Ｂ. Ｃｏｎｔｒｏｌ.
代谢产物的增加与新的代谢产物的产生ꎮ
３　 讨论与结论
本研究中ꎬ从油樟根和叶中分离得到的 ４ 种内
生真菌加入悬浮细胞后ꎬ细胞生物量普遍受到抑制ꎬ
而对总挥发性代谢产物及 ３种萜类物质积累影响的
总体趋势是在低浓度下有促进作用ꎮ 这与细胞生长
分裂能力下降时ꎬ次生代谢物产量高ꎬ及细胞生长分
裂能力旺盛时ꎬ次生代谢物产量低的普遍规律(李
浚明和朱登云ꎬ２００５)吻合ꎮ 虽然内生真菌对悬浮
细胞生长有一定的抑制作用ꎬ但可尝试通过改变添
加真菌发酵液的时间等因素来克服这一问题(游玲
等ꎬ２００９)ꎬ有待进一步研究ꎮ 本研究中ꎬ４ 种内生真
菌对油樟悬浮细胞生长的抑制作用随着浓度的增加
其抑制作用越强ꎮ 这表明真菌代谢物中可能含有某
些会影响细胞生长的有毒物质ꎬ或者是诱导过程中
细胞本身产生了一些对自身有毒的物质(Ｌａｎ ｅｔ ａｌꎬ
２００３)ꎮ 具体的作用机制还需进一步深入研究ꎮ
本研究中ꎬ４种内生真菌中ꎬ无论是来自油樟叶
７２９８期　 　 　 　 　 　 　 　 　 魏琴等: 内生真菌对油樟悬浮细胞培养的影响
表 ３　 内生真菌处理后悬浮细胞中 ３种萜类化合物积累量 (峰面积 / ｐＡｓ)
Ｔａｂｌｅ ３　 Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ ｉｎ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｐｒｏｃｅｓｅｄ ｂｙ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ (Ｐｅａｋ ａｒｅａｓ / ｐＡｓ)
油樟油组分物质
Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ
ｏｉｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
(％)
内生真菌号
Ｃｏｄｅ ｏｆ ｆｕｎｇｅｌ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ
ＹＧ４２ ＹＧ７１ ＹＹ１１ ＹＹ２６
１ꎬ８￣桉叶油素积累量
１ꎬ８￣ｃｉｎｅｏｌｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ
０ (空白)(Ｃｏｎｔｒｏｌ) ０.７６ ± ０.０３ｅ ０.７６ ± ０.０３ｅ ０.７６ ± ０.０３ｅ ０.７６ ± ０.０３ｅ
０.１０ ０.７２ ± ０.０４ｅ ２ꎬ.１８ ± ０.０９ｃ ０.７７ ± ０.０３ｅ ０ꎬ７３ ± ０.０４ｅ
０.２５ ０.７９ ± ０.０３ｅ ８.３８ ± ０.２２ａ １.２１ ± ０.０６ｄ ０.５５ ± ０.０２ｅ
１ ０.１２ ± ０.０１ｆ ３.６７ ± ０.１２ｂ －０.８７ ± ０.０５ｇ －０.７６ ± ０.０５ｇ
４ －４.１４ ± ０.１８ｉ －４.６１ ± ０.１８ｊ －２.３２ ± ０.１０ｈ －３.６８ ± ０.１２ｉ
１０ －１０.９８ ± ０.３６ｌ －１１.０８ ± ０.４５ｌ －１０.３５ ± ０.２９ｋ －１０.５６ ± .０４２ｋ
γ￣松油烯积累量
γ￣Ｔｅｒｐｉｎｅｎｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ
０ (空白)(Ｃｏｎｔｒｏｌ) ０.００ ± ０.００ａ ０.００ ± ０.００ａ ０.００ ± ０.００ａ ０.００ ± ０.００ａ
０.１０ ０.００ ± ０.００ａ ０.００ ± ０.００ａ ０.００ ± ０.００ａ ０.００ ± ０.００ａ
０.２５ ０.０９ ± ０.０１ａ ０.１９ ± ０.０１ａ ０.１１ ± ０.０１ａ ０.１１ ± ０.０１ａ
１ －０.９２ ± ０.０２ａ －０.５２ ± ０.０２ｂ ０.１７ ± ０.０１ａ －０.４０ ± ０.０２ａ
４ －４.５２ ± ０.１３ｅ －１.５９ ± ０.１９ｃ －０.０４ ± ０.００ａ －２.２８ ± ０.１４ｄ
１０ －１３.２１ ± ０.６４ｈ －５.２１ ± ０.１５ｆ －０.１７ ± ０.０１ａ －６.５１ ± ０.２８ｇ
α松油醇积累量
α￣Ｔｅｒｐｉｎｅｏｌ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ
０ (空白)(Ｃｏｎｔｒｏｌ) ０.６８ ± ０.０１ｆ ０.６８ ± ０.０１ｆ ０.６８ ± ０.０１ｆ ０.６８ ± ０.０１ｆ
０.１０ ０.７０ ± ０.０２ｆ ０.６７ ± ０.０３ｆ ０.７１ ± ０.０３ｆ ０.６９ ± ０.０４ｆ
０.２５ １.０７ ± ０.１２ｃ １.１７ ± ０.０５ａ ０.９７ ± ０.０４ｄ １.２３ ± ０.０４ａ
１ ０.８７ ± .００１ｅ １.１２ ± ０.０３ｂ ０.７３ ± ０.０３ｆ ０.５６ ± ０.０６ｇ
４ ０.６５ ± ０.０２ｆ ０.４０ ± ０.０２ｈ ０.３８ ± ０.０１ｈ ０.０１ ± ０.００ｉ
１０ －０.２５ ± ０.０２ｊ －０.８３ ± ０.０２ｍ －０.６１ ± ０.０４ｌ －０.４３ ± ０.０２ｋ
的内生真菌 ＹＹ１１和 ＹＹ２６ 还是来自油樟根的内生
真菌 ＹＧ７１和 ＹＧ４２都在不同程度上促进了挥发性
代谢产物的积累ꎮ 诱导作用最强的真生真菌 ＹＧ７１
是来自于根的ꎬ而诱导的对象 １ꎬ８￣桉叶油素主要存
在于叶(５５.５８％)中ꎮ 说明内生真菌影响宿主细胞
挥发性代谢产物ꎬ特别是萜类物质的积累ꎬ无器官特
异性或无明显的器官关联性ꎮ 这可能与内生真菌在
宿主体内的定殖与扩散有关ꎮ
本研究中ꎬ内生真菌对 ３ 种挥发性萜类积累的
促进作用最大的产物是油樟油主成分 １ꎬ８￣桉叶油
素ꎬ高于空白 １０ 倍ꎮ 这在一定程度上解释了游玲
(２００９)等推测的宜宾产油樟油 １ꎬ８￣桉叶油素的含
量高于江西等地产的原因是与宜宾独特的生态环境
导致的特殊内生菌微环境有关系ꎬ但 ＹＧ７１ 是否是
宜宾油樟特有的内生真菌还有待于进一步研究ꎮ
Ｅｘｐóｓｉｔｏ ｅｔ ａｌ(２００９)研究表明外源紫杉醇诱导
子对紫杉醇相关基因的表达存在调控作用ꎮ 本研究
所用内生真菌中可能含有与所测物质相同或类似物
的外源物质(游玲等ꎬ２００９)ꎬ这些物质在对油樟细
胞的诱导过程中起到一定的作用ꎬ但是怎样影响相
关基因的表达ꎬ还有待进一步针对内生菌作用下这
些代谢产物的 ｍＲＮＡ 水平和蛋白质水平分子响应
情况及基因组和蛋白质组解释研究ꎮ
本研究因为受标品限制ꎬ仅检测了目前开发利
用价值较高的、有标品的 ３ 种萜类物质ꎮ 内生真菌
ＹＧ７１还可以诱导其它代谢产物的增加或新的代谢
产物的产生ꎮ 这些物质有待于进一步的鉴定ꎮ 这说
明内生真菌对宿主细胞代谢影响是通过多代谢途径
实现的ꎬ并影响多种物质的生物合成ꎮ
由于本研究中所加发酵液含有与所测产物相同
或相似的挥发性物质ꎬ在表示产物的积累时减去了
诱导子原本含有的部分ꎬ因此部分产物积累量为负
８２９ 广　 西　 植　 物　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ３６卷
值ꎮ 负值意味着悬浮细胞挥发性物质积累量少于添
加的真菌发酵液中所含挥发性物质ꎮ 负值主要是在
高浓度(１０％)真菌发酵液条件下出现的ꎮ 这说明
高浓度的内生真菌发酵液抑制了悬浮细胞挥发性物
质的产生ꎮ 这可能与内生菌和宿主细胞之间有共代
谢途径ꎬ内生真菌参与了油樟油的形成过程并有共
同代谢产物有关(游玲等ꎬ２００９)ꎮ 这样的结果可能
导致悬浮体系中添加的多量诱导子促进了悬浮细胞
生成物增加ꎬ使悬浮细胞代谢反应向减少生成物质
方向进行ꎬ也许生成了其它不挥发性或者挥发性差
的物质ꎬ擅长检测挥发性物质的 ＧＣ￣ＭＳ 未能检测
到ꎮ 这还有待于进一步研究ꎮ
内生真菌在体外进行培养时ꎬ菌的生长代谢状
况会与其在体内有较大差异ꎬ再加上挥发性物质产
生后在培养、破碎、灭菌等过程中有不少的挥发损
失ꎮ 因此ꎬ真正加入到培养基中起作用的挥发性代
谢产物的种类和数量会少于在内环境中实际的代谢
产物ꎬ所以ꎬ此结果只能在一定程度上反映内生真菌
对宿主细胞生长和代谢产物积累的作用ꎮ 但本研究
结果对于世界需求量很大的油樟来源的左旋 １ꎬ８￣
桉叶油素(其它植物源 １ꎬ８￣桉叶油素是右旋)生产
有指导意义ꎬ如通过强化接种、浇灌菌种发酵液等形
式进行提高代谢产物措施的菌种选择有指导意义ꎬ
对充实内生菌影响香料植物萜类物质等挥发性代谢
产物合成理论有积极意义ꎮ
参考文献:
ＥＸＰÓＳＩＴＯ Ｏꎬ ＢＯＮＦＩＬＬ Ｍꎬ ＯＮＲＵＢＩＡ Ｍꎬ ｅｔ ａｌꎬ ２００９. Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ
ｔａｘｏｌ ｆｅｅｄｉｎｇ ｏｎ ｔａｘｏｌ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｔａｘａｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎ Ｔａｘｕｓ
ｂａｃｃａｔａ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅｓ [ Ｊ ] . Ｎｅｗ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌꎬ ２５
(４): ２５２－２５９.
ＨＵ ＷＪꎬ ＧＡＯ ＨＤꎬ ＪＡＮＧ ＸＭꎬ ｅｔ ａｌꎬ ２０１２. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｎ
ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｉｎ ｌｅａｆ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ ｆｒｏｍ ｔｈｒｅｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｃｉｎｎａｍｕｍ ｃａｍｐｈｏｒａ [Ｊ]. Ｊ Ｃｅｎｔ Ｓ Ｕｎｉｖ Ｆｏｒ Ｔｅｃｈｎｏｌꎬ
３２(１１): １８６－１９４. [胡文杰ꎬ 高捍东ꎬ 江香梅ꎬ 等ꎬ ２０１２. 脑
樟和异樟化学型的叶精油成分及含量分析 [Ｊ]. 中南林业科
技大学学报ꎬ ３２(１１): １８６－１９４.]
ＬＡＮ ＷＺꎬ ＹＵ ＬＪꎬ ＬＩＭ Ｙꎬｅｔ ａｌꎬ ２００３. Ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｕｎｌｉｋｅｌｙ ｃｏｎｒｉｂｕｔｅｓ
ｔｏ ｔａｘｏｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｆｕｎｇａｌｅｌｉｃｉｔｏｒ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ
ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｔａｘｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ [Ｊ]. Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｌｅｔｔꎬ ２５(１): ４７－４９.
ＬＩ ＪＭꎬ ＺＨＵ ＤＹꎬ ２００５. Ｐｌａｎｔ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｕｒｓｅ [Ｍ]. Ｂｅｉｊｉｎｇ:
Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ. [李 浚 明ꎬ 朱 登 云ꎬ
２００５. 植物组织培养教程 [Ｍ]. 北京:中国农业大学出版社.]
ＬＩ Ｌꎬ ＬＩ ＺＷꎬ ＹＩＮ ＺＱꎬｅｔ ａｌꎬ ２０１４. Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｌｅａｆ
ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ ａｎｄ ｉｔｓｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｆｒｏｍ Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕ￣
ｌａｔｕｍ [Ｊ] . Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｍｅｄꎬ ７(７): １ ７２１－１ ７２７.
ＬＩ ＹＣꎬ ＴＡＯ ＷＹꎬ ＬＯＮＧꎬ ｅｔ ａｌꎬ ２００９. Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ
ｃｏ￣ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｔａｘｕｓ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ￣ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｅｎ￣
ｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｎ ａ ｃｏ￣ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ [ Ｊ ]. Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌꎬ ８３:２３３－２３９.
ＭＩＣＨＡＥＬ ＰＥＳＣＨＥＣＫꎬ ＭＡＲＣＯ ＡＮＴＯＮＩＯ ＭＩＲＡＴＡꎬ ＢＩＡＮＣＡ
ＢＲＡＵＥＲꎬ ｅｔ ａｌꎬ ２００９. Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｏｎｏｔｅｒｐｅｎｅ ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ
ｗｉｔｈ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ. ｂｙ ｕｓｅ ｏｆ ａ ｃｌｏｓｅｄ ｇａｓ ｌｏｏｐ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ [Ｊ]. Ｊ
Ｉｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔꎬ ３６(６): ８２７－８３６.
ＭＯＨＡＮＡ ＫＵＭＡＲＡ Ｐꎬ ＳＨＷＥＴＡ Ｓꎬ ＶＡＳＡＮＴＨＡＫＵＭＡＲＩ ＭＭꎬ
ｅｔ ａｌꎬ ２０１４. Ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ: ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ [Ｊ]. Ａｄｖ Ｅｎ￣
ｄｏｐｈｙｔｉｃ Ｒｅｓ: １７７－１９０.
ＭＯＬＩＮＡ Ｇꎬ ＰＩＮＨＥＩＲＯ ＤＭꎬ ＰＩＭＥＮＴＥＬ ＭＲꎬ ｅｔ ａｌꎬ ２０１３.
Ｍｏｎｏｔｅｒｐｅｎｅ ｂｉｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｒｏｍａ
ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｂｙ ｆｕｎｇｉ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｂｒａｚｉｌｉａｎ ｆｒｕｉｔｓ [Ｊ]. Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌꎬ ２２(４): ９９９－１ ００６.
ＰＥＴＥＲＳ Ｓꎬ ＡＵＳＴ ＨＪꎬ ＤＲＡＥＧＥＲ Ｓꎬ ｅｔ ａｌꎬ １９９８. Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ
ｄｕａｌ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｗｉｔｈ ｈｏｓｔ ａｎｄ ｎｏｎｈｏｓｔ ｐｌａｎｔ
ｃａｌｌｉ [Ｊ]. Ｍｙｃｏｌｏｇｉａꎬ ９０(３): ３６０－３６７.
ＳＯＮＧ Ｘꎬ ＹＩＮ ＺＱꎬ ＷＥＩ Ｑꎬ ｅｔ ａｌꎬ ２０１４. Ａｎｔｉ￣ｈｅｐａｔｏｍａ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ
ｓａｆｒｏｌｅ ｆｒｏｍ Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｌｅａｆ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ ｉｎ
ｖｉｔｒｏ [Ｊ]. Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌꎬ ７(５):２ ２６５－２ ２７２.
ＴＡＮ ＷＹꎬ ＪＡ Ｒꎬ ＴＡＯ ＪＨꎬ ｅｔ ａｌꎬ ２０１３. Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｎ
ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔｓ ｂｙ ｅｎｄｏ￣
ｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇａｌ ｅｌｉｃｉｔｏｒ [ Ｊ] . Ｃｈｉｎ Ｔｒａｄ Ｈｅｒｂ Ｄｒｕｇｓꎬ ４４(１４):
２ ００４－２ ００８. [谭燕ꎬ 贾茹ꎬ 陶金华ꎬ 等ꎬ ２０１３. 内生真菌诱
导子调控药用植物活性成分的生物合成 [ Ｊ] . 中草药ꎬ ４４
(１４): ２ ００４－２ ００８.]
ＶＩＪＡＹ ＣＨＡＮＤＲＡ ＶＥＲＭＡꎬ ＳＡＴＹＡ ＰＲＡＫＡＳＨꎬ ＲＡＮＡ ＧＯＰＡＬ
ＳＩＮＧＨꎬ ｅｔ ａｌꎬ ２０１４. Ｈｏｓｔ￣ｍｉｍｅｔｉｃ ｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ ｏｆ
ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ: ｌｏｏｋｉｎｇ ｂａｃｋ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ [Ｊ] . Ａｄｖ Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ
Ｒｅｓꎬ ２０３－２１８.
ＷＥＩ Ｑꎬ ＷＡＮＧ ＬꎬＦＵ ＴＨꎬ ｅｔ ａｌꎬ ２００８. Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ
ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ Ｃｉｎ￣
ｎａｍｏｍｕｍ ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ [ Ｊ]. Ｃｈｉｎ Ｂｕｌｌ Ｂｏｔꎬ ５: ５９１ －
５９６. [魏琴ꎬ 王丽ꎬ傅体华ꎬ 等ꎬ ２００８. 油樟悬浮培养及次生
代谢产物的诱导 [Ｊ]. 植物学通报ꎬ ５: ５９１－５９６.]
ＹＡＮＧ Ｑꎬ ＹＡＮ Ｍꎬ ＨＵＳ Ｂꎬ ２０１４. Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ
ｓｏｙｂｅａｎ ｆｏｒ ｌｉｐｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ [ Ｊ ] . Ｂｉｏｌ Ｅｎｅｒｇ Ｒｅｓꎬ ７
(１): ３５３－３６１.
ＹＯＵ Ｌꎬ ＷＡＮＧ Ｔꎬ ＬＩ Ｌꎬｅｔ ａｌꎬ ２００９. Ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｎ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｒｇａｎｉｃ
ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｏｆ ７８ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ
ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ Ｎ [Ｊ] . Ｊ ＮＷ Ａ ＆ Ｆ Ｕｎｉｖ: Ｎａｔ Ｓｃｉ Ｅｄꎬ ３７
(９): １９３－１９８.[游玲ꎬ 王涛ꎬ 李兰ꎬ等ꎬ ２００９. ７８ 株油樟内
生真菌发酵产物的挥发性组分分析 [ Ｊ] . 西北农林科技大
学学报􀅰自然科学版ꎬ ３７(９): １９３－１９８.]
ＺＨＵ ＧＳꎬ ＧＵＩ Ｙꎬ ＨＵＡＮＧ ＹＨꎬ ｅｔ ａｌꎬ ２００５. Ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ
ｆｕｎｇｕｓ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ ｓｐｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｅ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ
ｃｏｅｖｏｌｕｔｉｏｎ [Ｊ] . Ｊ Ｆｕｎｇ Ｒｅｓꎬ ３(２): ６－１３. [朱国胜ꎬ桂阳ꎬ
黄永会ꎬ 等ꎬ ２００５. 中国种子植物内生真菌资源及菌植协同
进化 [Ｊ] . 菌物研究ꎬ ３(２): ６－１３.]
９２９８期　 　 　 　 　 　 　 　 　 魏琴等: 内生真菌对油樟悬浮细胞培养的影响