全 文 ：广 西 植 物 Guihaia　Dec．２０１５,３５(６):８９９－９０４　　　　　　　　　　 http://journal．gxzw．gxib．cn　
DOI:１０．１１９３１/guihaia．gxzw２０１４０５０４２
刁松锋,邵文豪,姜景民,等．多用途树种无患子ISSRＧPCR体系建立与检测[J]．广西植物,２０１５,３５(６):８９９－９０４
DiaoSF,ShaoWH,JiangJM,etal．DetectionandestablishmentofISSRＧPCRsystemformultipurposetreespeciesSapindusmukorossi[J]．Guihaia,
２０１５,３５(６):８９９－９０４
多用途树种无患子ISSRＧPCR体系建立与检测
刁松锋１,２,邵文豪１,姜景民１∗,栾启福１
(１．中国林业科学研究院 亚热带林业研究所,浙江 富阳３１１４００;２．中国林业科学研究院 经济林研究中心,郑州４５０００３)
摘　要:无患子(Sapindusmukorossi)是我国长江以南地区传统的重要绿化树种,其果皮富含皂苷,种仁富含
油脂,为新型木本油料树种之一.为了获得基于KODFX高保真DNA聚合酶试剂盒的无患子ISSRＧPCR的
最佳反应体系,该文采用正交优化设计相结合的方法,研究了引物浓度、dNTPs浓度、KODFX酶、模板DNA
浓度和 Mg２＋浓度对无患子ISSRＧPCR反应体系的影响,并在此基础上对退火温度进一步优化,最终确立了适
合无患子的ISSRＧPCR反应的最佳体系和程序,即２０μLPCR反应体系中,引物０．５μmol􀅰LＧ１、dNTPs０．０５
mmol􀅰LＧ１、KODFX酶０．０６U􀅰μLＧ１、模板DNA浓度１．０ng􀅰μLＧ１和Mg２＋１．０mmol􀅰LＧ１.当以UBC８４１为
引物时,PCR扩增程序为９４℃预变性２min,９８℃变性１０s,４８．６℃退火３０s,６８℃延伸９０s,３５个循环,
６８℃延伸７min,４℃保存.这一优化的ISSRＧPCR反应体系的建立,为无患子种质资源的遗传多样性、亲缘
关系及遗传结构研究、种质创新与分子辅助育种等奠定了良好的基础.
关键词:无患子;ISSR;PCR反应体系;正交设计
中图分类号:S７１８．４６,Q９４３　　文献标识码:A　　文章编号:１０００Ｇ３１４２(２０１５)０６Ｇ０８９９Ｇ０６
DetectionandestablishmentofISSRＧPCRsystemfor
multipurposetreespeciesSapindusmukorossi
DIAOSongＧFeng１,２,SHAOWenＧHao１,JIANGJingＧMin１∗,LUANQiＧFu１
(１．ResearchInstituteofSubtropicalForestry,ChineseAcademyofForestry,Fuyang３１１４００,China;２．NoＧtimber
ForestryResearchandDevelopmentCenter,ChineseAcademyofForestry,Zhengzhou４５０００３,China)
Abstract:SapindusmukorossiisatraditionalandimportantvirescencetreespeciesinthesouthpartofChinawith
richsaponinsinpeelandrichoilinseed．ThistreespeciesisoneofthenewlyＧdevelopedwoodyoilspeciesthatwere
approvedbytheStateForestryAdministrationofChina．ForoptimizingISSRＧPCRreactionsystemofS．mukorossi,
basedonKODFXHighＧfidelityDNAPolymeraseKit,orthogonaldesignexperimentswereconducted．ThemainfacＧ
torsafectingISSRＧPCRamplification,suchassuitableconcentrationofprimer,dNTPs,KODFXDNApolymerＧ
ase,DNAtemplateand２×PCRbufferforKODFXwerestudied．Furthermore,theannealingtemperaturewasopＧ
timizedonthebaseoftheabovetests．AnidealyISSRＧPCRreactionsystemwasestablished,namely２５μLreaction
systemcontainingprimer０．５μmol􀅰LＧ１,dNTPs０．０５mmol􀅰LＧ１,KODFXDNApolymerase０．０６U􀅰μLＧ１、DNAtemＧ
plate１．０ng􀅰μLＧ１andMg２＋１．０mmol􀅰LＧ１．TheoptimalPCRamplificationprogramwas:TheprofileofISSRＧPCR
wasaninitialdenaturationstepfor２min９４℃,folowedby３５cyclesof３０sat９８℃fordenaturation,３０sat
４８．６℃forannealing,９０sat６８℃forextension,finalyextensionat６８℃for７minandholdingthesamplesat４
℃．ThisoptimizedISSRＧPCRreactionsystemwouldprovidethebasisfortheanalysisofgeneticdiversity,genetic
收稿日期:２０１４Ｇ０７Ｇ２１　　修回日期:２０１４Ｇ１０Ｇ１１
基金项目:国家林业公益性科研专项(２０１４０４１０４,２００８０４０３２);浙江省重大科技专项重点农业项目(２０１１C１２０１５).
作者简介:刁松锋(１９８９Ｇ),男,安徽亳州人,硕士,主要从事林木遗传育种研究,(EＧmail)stanfordiao＠yeah．net.
∗通讯作者:姜景民,博士,研究员,从事林木遗传育种和种质资源研究,(EＧmail)zzzyjiang＠yeah．net.
structure,germplasminnovationandmolecularassistedselectioninS．mukorossi．
Keywords:Sapindusmukorossi;ISSR;PCRreactionsystem;orthogonaldesignexperiments
　　无患子(Sapindusmukorossi)也称为肥皂树、
菩提树,是无患子科(Sapindaceae)无患子属(SapＧ
indus)落叶乔木,广泛分布在亚洲、中南美洲、北美
洲南部、太平洋岛屿的暖温带和热带低山丘陵及石
灰岩地区,中国分布于秦岭—淮河以南低山丘陵地
区,欧洲也有分布 (中国植物志编委会,１９９８;
Chhetrietal．,２００８).无患子皂苷在果皮中含量
可达１１．５％(Pandey,２００８),易降解,无有害物质
残留,对环境无污染,是一种优良的天然表面活性
剂,具有良好的起泡性和去污能力,是天然的环境友
好型洗涤剂(Ghagietal．,２０１１).无患子皂苷具有
抗病毒、降血压等药理作用(Ibrahimetal．,２００８;
Vermaetal．,２０１２).无患子种仁含油率达４２．７％
(黄素梅等,２００９),不饱和脂肪酸含量达８６．６３％,为
重要的生物质能源树种(Sunetal．,２０１２).目前,
国内外学者对无患子的多在苗木繁育与优树选择
(林文荣,２００７;刁松锋等,２０１４a)、表型及经济性状
变异(邵文豪等,２０１２,２０１３;刁松锋等,２０１４b,c)、光
合生理(孟德悦等,２０１３;刁松锋等,２０１４d)、医药病
理(Ibrahimetal．,２００８;Vermaetal．,２０１２)和化
学成分及其提取工艺(黄素梅等,２００９;魏凤玉等,
２０１０)等领域,对于一些天然分布的无患子群体,人
们对其遗传背景知之甚少.目前有彭珠清等(２０１４)
对无患子SARPＧPCR反应体系进行研究;洪莉等
(２０１３)采用SARP技术对无患子种质资源多样性
及亲缘关系进行分析;刘宝等(２０１４)也采用SARP
技术对不同地理种源无患子的分子多态性进行分
析,但对无患子ISSRＧPCR反应体系的研究尚未见
有报道.总体来看,目前对我国无患子种质资源和
天然群体遗传多样性的系统研究还很匮乏,这严重
限制了它的推广应用.因此,如何提高无患子的资
源利用率,挖掘有价值的种质资源材料已成为无患
子产业发展亟待解决的重要问题.
１９９４年,加拿大蒙特利尔大学Zietkiewicz教授
建立了ISSR(interＧsimplesequencerepeats)分子标
记技术,与RFLP和RAPD技术相比有更高的重复
性和稳定性(Zietkiewiczetal．,１９９４).另一方面,
ISSR分子标技术具有操作简单快捷DNA用量少
技术要求低成本低等特点,引物设计无需知道基因
组序列,只要目标区域的长度在可扩增范围内,就能
扩增出微卫星重复间的DNA片段.因此,当前ISＧ
SR分子标记技术广泛用于遗传多样性分析(沈庆庆
等,２０１３)、遗传作图(Bornetetal．,２００１)、亲缘关
系(梅洛银等,２０１３)和种质资源研究(陈虎等,２０１２)
等领域,但是ISSR技术也存在缺陷,稳定性易受到
引物浓度、dNTPs、模板DNA量、酶以及引物退火
温度等条件的影响,扩增出来的条带随机性较大.
因此,在利用ISSR技术进行遗传性分析时,为保证
结果的清晰可靠和准确,必须对反应体系进行优化.
因此,本研究采用正交试验设计对以上几个因素进
行筛选,初步建立了一套适用于无患子的ISSRＧ
PCR反应体系,为研究无患子遗传多样性、种质创
新与分子辅助育种奠定良好的基础.
１　材料与方法
１．１材料
所用材料来自无患子天然分布区的１１个省区
的１８个自然保护区的野生资源,采样时选择包含５
株以上成年个体的种群进行采样,单株之间的距离
在５０m以上,共采集２７２株个体的当年生嫩叶.采
集的叶片放入盛有硅胶的密封袋中带回实验室,放
入Ｇ７０℃冰箱中保存.
１．２主要试剂与仪器
所用试剂为 BufferA(１００mmol􀅰LＧ１ TrisＧ
HClpH９．５、１mmol􀅰LＧ１ KCl和１０mmol􀅰LＧ１
EDTA)、琼脂糖、DNA marker(天根 D２０００)、６×
DNALoadingBuffer(天根)、UniRedNucleicAcid
Stain(天根)、１× TBE(pH８．３)和KODFX高保真
DNA聚合酶试剂盒(由天根生化科技杭州有限公司
提供),该试剂盒包含２×PCRbufferforKODFX
(含２．０mmol􀅰LＧ１ Mg２＋,以下简称 Mg２＋)、２．０
mmol􀅰LＧ１dNTPs和１．０U􀅰μLＧ１KODFX酶(以
下简称KODFX).
主要仪器:琼脂糖凝胶电泳仪(TakaraＧTPＧ
６００)、台式高速冷冻离心机(Neofuge１５R)、NanoＧ
Drop２０００紫外分光光度计(ThermoFisher公司生
产)、TakapaPCR ThermalCyclerDicePCR 仪
(TP６００)、FRＧ９８０A全自动紫外与可见光凝胶成像
系统装置(复日科技公司).
００９ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３５卷
１．３基因组总DNA提取与检测
DNA提取按照新型KODFX试剂盒的说明进
行,即取无患子叶片约３mm 小块,添加BufferA
１００μL,充分振荡后放入９５℃水浴１０min,离心机
１２０００r􀅰minＧ１离心４min,取上清液置于Ｇ２０℃冰
箱备用.利用紫外分光光度计检测DNA完整性、
浓度及纯度和１．５％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA
质量,１２０V电泳３０min后,通过FRＧ９８０A生物电
泳图像分析系统观察拍照.
１．４PCR正交试验设计
采用正交设计L１６(４５),针对本实验中ISSRＧ
PCR反应体系的５个因素(引物、dNTPs、KOD
FX、模板 DNA 和 Mg２＋)分别进行４个水平筛选
(表１),２５μL无患子ISSRＧPCR各个反应体系的成
分组成及正交试验设计见表２.本实验采用加拿大
英属哥伦比亚大学报道的 UBC８４１号(GAGAGA
GAGAGAGAGAYC)引物,该引物是本课题组通
过大量预实验从１００条引物中筛选出的３６条可以
扩增出较亮条带的引物之一.正交表中的每个处理
分别重复３次.
表１　正交试验因素表
Table１　Orthogonalfactorsandlevels
因素Factor
水平Level
１ ２ ３ ４
引物Primer(μmol􀅰LＧ１) ０．３ ０．４ ０．５ ０．６
dNTPs(mmol􀅰LＧ１) ０．２ ０．３ ０．４ ０．５
KODFX(U􀅰μLＧ１) ０．０２ ０．０４ ０．０６ ０．０８
模板DNATemplateDNA(ng􀅰μLＧ１) １．０ ２．０ ３．０ ４．０
Mg２＋(mmol􀅰LＧ１) ０．４ ０．６ ０．８０ １．０
１．５PCR扩增、电泳以及凝胶成像
按照KODFX试剂盒说明书要求,PCR预扩增
的反应条件为９４℃预变性２min,９８℃变性１０s,
５１．２℃退火３０s,６８℃延伸１．５min,４０个循环,于
４℃保存.将PCR扩增产物用１× TBE配制的
１．５％的琼脂糖凝胶电泳分离,１２０V的恒流电压电
泳３０min.电泳结束把凝胶放入FRＧ９８０A生物电
泳图像分析系统观察拍照并统计条带.
１．６退火温度的优化
在筛选出的最优反应体系的基础上进行退火温
度的梯度优化筛选试验.温度梯度设置为４６．０℃、
４７．０℃、４８．０℃、４９．０℃、５０．０℃、５１．０℃和５２．０
℃.每个温度梯度进行３次重复,其他条件不变.
数据处理利用Excel２０１０软件和SAS８．２软件
完成,利用Sigmaplot１０．０软件作图.
表２　ISSRＧPCR反应正交设计L１６(４５)
Table２　L１６(４５)orthogonaldesignforthefactors
andlevelsofISSRＧPCRreaction
处理
Processing
引物
Primer
(μmol􀅰
LＧ１)
dNTPs
(mmol􀅰
LＧ１)
KODFX
(U􀅰
μLＧ１)
模板 DNA
Template
DNA
(ng􀅰μLＧ１)
Mg２＋
(mmol􀅰
LＧ１)
１ ０．３ ０．２ ０．０２ １．０ ０．４
２ ０．３ ０．３ ０．０４ ２．０ ０．６
３ ０．３ ０．４ ０．０６ ３．０ ０．８
４ ０．３ ０．５ ０．０８ ４．０ １．０
５ ０．４ ０．２ ０．０４ ３．０ １．０
６ ０．４ ０．３ ０．０２ ４．０ ０．８
７ ０．４ ０．４ ０．０８ １．０ ０．６
８ ０．４ ０．５ ０．０６ ２．０ ０．４
９ ０．５ ０．２ ０．０６ ４．０ ０．６
１０ ０．５ ０．３ ０．０８ ３．０ ０．４
１１ ０．５ ０．４ ０．０２ ２．０ １．０
１２ ０．５ ０．５ ０．０４ １．０ ０．８
１３ ０．６ ０．２ ０．０８ ２．０ ０．８
１４ ０．６ ０．３ ０．０６ １．０ １．０
１５ ０．６ ０．４ ０．０４ ４．０ ０．４
１６ ０．６ ０．５ ０．０２ ３．０ ０．６
２　结果与分析
２．１ISSRＧPCR反应体系正交试验的直观分析
对１６个处理３次重复的４８个样品的条带依据
凝胶条带的强弱和杂带多少进行打分,其中条带数
量多、清晰度高满分为１０分,依次后推,最低分值为
１分.根据打分情况求出每个因素同一水平下的试
验值之和Ki,以及每一因素水平下的数据ki,并求
同一因素不同水平间平均值的极差R(表３).R 反
映了各因素对反应体系的影响,极差越大表明其对
反应体系的影响就越大.由表３可以看出,引物对
无患子PCR反应体系影响最大,KODFX次之;
Mg２＋最小,模板DNA则较小.Ki反映了每个因
素不同水平对反应体系的影响程度,ki值越大则说
明这个水平在该因素中表现最好.因此,根据表３可
知,引物、KODFX和 Mg２＋在第３水平最优,dNTPs
和模板DNA分别在第４水平和第１水平最优.
２．２PCR正交试验的方差分析
对５个因素进行方差分析,结果如表４.由表４
可以发现,引物、KODFX和dNTPs对PCR反应体
系的影响达到极显著水平(P＜０．０１),模板DNA对
反应体系的影响则为显著水平(P＜０．０５),而 Mg２＋
１０９６期　　　　　　　　　刁松锋等:多用途树种无患子ISSRＧPCR体系建立与检测
对体系的影响不显著.这与正交试验的直观分析结
果是一致的.
表３　１６组正交设计直观分析
Table３　１６setsoforthogonaldesignintuitiveanalysis
处理
Processing
引物
Primer
(μmol􀅰
LＧ１)
dNTPs
(mmol􀅰
LＧ１)
KODFX
(U􀅰
μLＧ１)
模板DNA
Template
DNA
(ng􀅰
μLＧ１)
Mg２＋
(mmol􀅰
LＧ１)
K１ １９．３ ２２．１ ２８．３ ３３．６ １６．２
K２ ２８．６ ２６．８ ３０．９ ２９．７ ２２．８
K３ ３５．４ ３２．７ ３７．４ ２６．３ ２７．４
K４ ３１．２ ３６．５ ３４．２ ２１．６ ２３．５
k１ ２．４ ２．７ ４．７ ８．９ ２．１
k２ ２．９ ３．３ ７．３ ７．５ ２．５
k３ １３．２ ５．５ １０．８ ６．８ ４．７
k４ ３．７ ８．５ ９．２ ４．４ ３．２
R １０．８ ５．８ ６．１ ４．５ ２．６
表４　正交设计方差分析
Table４　Varianceanalysisoforthogonaldesign
变异来源
Variationsource
平方和
(SS)
Square
sum
自由度
(DF)
Degreeof
freedom
均方
(MS)
Mean
square
F 值
Fvalue
引物Primer ８９．６２ ３ ２９．８７ １１．８５∗∗
dNTPs ３８．０９ ３ １２．７０ ５．０４∗∗
KODFX ５１．７６ ３ １７．２５ ６．８５∗∗
模板DNATemplateDNA ２０．８４ ３ ６．９５ ２．７６∗
Mg２＋ ９．５７ ３ ３．１９ １．２７
误差Error ７．５５ ３ ２．５２
总计Total ２１７．４３ １５
　注:∗ 表示在０．０５水平差异显著;∗∗ 表示在０．０１水平差异显著.
　Note:∗and∗∗ Differencesaresignificantatthe０．０５and０．０１．
２．３几个不同水平的因素对PCR反应体系的影响
从图１可以看出,５个不同因素在Ⅰ~Ⅳ水平下
对PCR扩增的影响不同,其中引物浓度、KODFX、
Mg２＋的PCR扩增DNA条带数呈现单峰曲线变化,
并且都在第Ⅲ水平下,即分别为０．５μmol􀅰LＧ１、
０．０６U􀅰μLＧ１和１．０mmol􀅰LＧ１时,扩增出的DNA
条带数最多;PCR扩增DNA条带数随着dNTPs浓
度在Ⅰ~Ⅳ水平增加时而呈上升趋势,且在第Ⅳ水
平(０．０５mmol􀅰LＧ１)扩增条带数达到最多;而模板
DNA浓度(DNA)处于下时PCR扩增出的DNA条
带数则随着模板DNA浓度的增加而减少.
对退火温度梯度进行优化筛选时发现,在４８℃
和４９℃时,PCR扩增的DNA的条带较多,而且具
有比较清晰的背景.继续以４８．２ ℃、４８．４ ℃、
４８．６℃和４８．８℃为温度梯度进行优化,结果表明
PCR扩增的DNA条带在４８．６℃表现最优.采用
优化好的体系,即２５μL体系中各组分的含量分别
为０．５μmol􀅰LＧ１primer、０．５mmol􀅰LＧ１dNTPs、
０．０６U􀅰μLＧ１KODFX、１．０ng􀅰μLＧ１模板DNA浓
度和１．０mmol􀅰LＧ１Mg２＋.
图１　不同因素水平对ISSRＧPCR的影响
Fig．１　InfluenceofdiferentfactorlevelsofISSRＧPCR
２．４无患子的ISSRＧPCR扩增检测
采用已优化的ISSRＧPCR体系,从中筛选出２４
条引物均能用于对无患子扩增反应,其中UBC８０８、
UBC８１８、UBC８２４、UBC８３０、UBC８３６、UBC８４０、
UBC８４１、UBC８４８、UBC８５５、UBC８６０、UBC８８０、
UBC８８１和 UBC８９１具有较好的效果.随机选出
UBC８１８和UBC８４１用于不同种源的无患子样本试
验,结果如图２,表明该体系具有良好的效果,可以
用于无患子遗传多样性、亲缘关系及遗传改良研究.
３　讨论与结论
ISSRＧPCR反应体系优化常用的试验设计方法
可分为单因素试验和正交试验.
胡翠萍等(２０１０)对唐古特大黄(RheumtanguＧ
ticum)ISSR反应体系中各影响因素分别设置单因
素梯度试验,建立了适合唐古特大黄的ISSRＧPCR
最佳反应体系;罗成等(２０１０)通过单因素试验,确立
华中五味子(Schisandrachinensis)ISSR最佳反应
条件.而正交试验设计具有高效、经济布点均衡、试
验次数少、结果直观等优点(王彦华等,２００４).目前
该方法也已在枇杷(Eriobotryaspp．)(梅洛银等,
２０１２)、龙眼(Dimocarpuslongan)(陈虎等,２０１２)
和荔枝 (Broussonetiapapyriferaz)(沈庆庆等,
２０１３)等经济林树种的ISSR体系优化中采用.
由于ISSRＧPCR反应体系受许多因素的影响,
２０９ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３５卷
图２　引物UBC８１８对江西上犹(上)和引物UBC８４１对浙江富阳(下)部分个体的扩增图
Fig．２　AmplificationofprimerUBC８１８inShangyou(above)andUBC８４１inFuyang(below)population
为了获得重复性和可靠性较高的ISSR谱带,提高
分析的准确性,有必要对各种影响因子,诸如引物、
dNTPs、模板DNA、反应聚合酶(本实验采用 KOD
FX高效反应酶)及退火温度等进行优化筛选,获得
最适宜的ISSR反应体系和程序.本研究结果表明
无患子ISSRＧPCR最优体系是在２５μL体系中各组
分的含量分别为引物０．５μmol􀅰LＧ１、dNTPs０．５
mmol􀅰LＧ１、KODFX０．０６U􀅰μLＧ１、模板DNA浓
度１．０ng􀅰μLＧ１和 Mg２＋１．０mmol􀅰LＧ１.与彭珠清
等(２０１４)优化的无患子SRAPＧPCR反应体系所需
５０ng模板DNA和洪莉等(２０１３)采用的ISSRＧPCR
反应体系所需６０ng模板DNA相比,本反应体系仅
需较少的模板DNA,说明KODFX高保真DNA聚
合酶具有明显的高效性.在前人的研究报道中,体
系中各组分的不同含量对PCR的影响程度不同.
周凌瑜等(２００８)研究认为引物浓度会对PCR的条
带数、带行产生明显的影响,浓度太高产生新的位
点,且易形成引物二聚体的几率大增.孙清信等
(２０１２)对紫云英(Astragalussinicus)的研究表明
模板DNA浓度对ISSRＧPCR反应体系影响不大,
而廖声熙等(２０１３)对构树的研究认为模板DNA浓
度对反应体系的影响具有显著性,这与本研究具有
相似的研究结论.前人的研究表明Taq酶对PCR
体系的影响具有极显著性(廖声熙等,２０１３),本研究
采用新型的KODFX酶在实验中对PCR体系的影
响也具有极显著作用.本研究是基于 UBC８４１这
一条引物对体系进行优化的,在后续的实验中会增
加引物的筛选范围,进而增加以 KODFX高保真
DNA聚合酶试剂盒为基础的无患子ISSRＧPCR反
应体系的通用性.
参考文献:
BornetB,BranchardM．２００１．Nonanchoredintersimplesequence
repeat(ISSR)markers:reproducibleandspecifictoolsforgeＧ
nomefingerprinting[J]．PlantMolBiolRep,１９(３):２０９－２１５
ChenH(陈虎),HeXH(何新华),HuangGX(黄桂香),etal．
２０１２．ComparisonandanalysisofSCoTandISSRmarkersforgeＧ
neticdiversityoflongan(不同龙眼资源遗传多样性的SCoT和
ISSR比较分析)[J]．Guihaia(广西植物),３２(４):５３６－５４１
ChhetriAB,TangoMS,BudgeSM,etal．２００８．NonＧedibleplant
oilsasnewsourcesforbiodieselproduction[J]．InternJMol
Sci,９(２):１６９－１８０
DiaoSF(刁松锋),ShaoWH(邵文豪),DongRX(董汝湘),et
al．２０１４d．Diurnalvariationofphotosynthesisandrelationship
withtheecoＧphysiologicalfactorsofSapindusmukorossi(无患
子光合生理日变化及其与生理生态因子的关系)[J]．Acta
BotBorealＧOccidentSin(西北植物学报),３４(４):８２８－８３４
DiaoSF(刁松锋),ShaoWH(邵文豪),JiangJM(姜景民),et
al．２０１４b．PhenotypicdiversityinnaturalpopulationsofSapＧ
３０９６期　　　　　　　　　刁松锋等:多用途树种无患子ISSRＧPCR体系建立与检测
indusmukorossibasedonfruitandseedtraits(基于种实性状
的无患子天然群体表型多样性研究)[J]．ActaEcolSin (生
态学报),３４(６):１４５１－１４６０
DiaoSF(刁松锋),ShaoWH(邵文豪),JiangJM(姜景民),etal．
２０１４c．Studyonvariationinphenotypictraitsoffruitandseedof
Sapindusmukorossiinseedlingplantation(无患子实生群体种实
表型性状变异研究)[J]．JNorthwestA&FUniv:NatSciEd
(西北农林科技大学学报􀅰自然科学版),４２(５):７５－８３
DiaoSF(刁松锋),ShaoWH(邵文豪),JiangJM(姜景民),et
al．２０１４a．SuperiorindividualselectionofSapindusmukorossi
basedonfruitandseedtraits(基于种实性状的无患子优良单
株选择)[J]．JNortheastForUniv(东北林业大学学报),４２
(４):６－１０
FloraofChinaEditorial(«中国植物志»编辑委员会)．１９９８．Flora
ofChina(中国植物志第４７卷第１分册)[M]．Beijing(北京):
SciencePress(科学出版社),４７:１４－１５
GhagiR,SatputeSK,ChopadeBA,etal．２０１１．StudyoffuncＧ
tionalpropertiesofSapindusmukorossiasapotentialbioＧsurＧ
factant[J]．IndJSciTechnol,４(５):５３０－５３３
HongL(洪莉),BaiME(柏明娥),ZhangJZ(张加正),etal．
２０１３．Geneticdiversityandgeneticrelationshipofgermplasm
resourcesofSapindusmukorossibyZSSRandSPARP(无患子
种质资源多样性与亲缘关系的ISSR和SRAP分析)[J]．
ZhejiangAgricSci(浙江农业科学),(５):５６６－５６８
HuYP(胡延萍),XieXL(谢小龙),WanL(王莉),etal．２０１０．
EstablishmentandoptimizationofISSRＧPCRreactioncondiＧ
tionsforRheumtanguticum(唐古特大黄ISSRＧPCR反应条件
的优化)[J]．Guihaia(广西植物),３０(１):１１２－１１２
HuangSM(黄素梅),WangJW(王敬文),JiangJM(姜景民),
etal．２００９．FattyacidcompositionanalysisofSapindus
mukorossiGaertn．seedoil(无患子籽油脂肪酸成分分析)[J]．
ChinOilsFats(中国油脂),３４(１２):７４－７６
IbrahimM,KhajaMN,AaraA,etal．２００８．HepatoprotectiveacＧ
tivityofSapindusmukorossiandRheumemodiextracts:in
vitroandinvivostudies[J]．WorldJGastroenterol,１４(１６):
２５６６－２５６１
LiaoSX(廖声熙),CuiK(崔凯),ZhangP(张鹏),etal．２０１３．EsＧ
tablishmentandoptimizationofISSRreactionsystemofBrousＧ
sonetiapapyriferaz(构树ISSR反应体系的优化与建立)[J]．
ForRes(林业科学研究),２６(１):０７６－０８０
LinWR(林文荣)．２００７．StudyoncuttingpropagationtestofSapＧ
indusmukorossi(无患子扦插繁殖试验研究)[J]．ModHortic
(现代园艺),(７):９－１０
LiuB(刘宝),FanHH(范辉华),PengZQ(彭珠清),etal．
２０１４．MolecularpolymorphicanalysiswithgeographicproveＧ
nancesofSapindusmukorossi(不同地理种源无患子的分子
多态性分析)[J]．JZhejiangA&FUniv(浙江农林大学学
报),３１(１):１５１－１５５
LuoC(罗成),XiongYT(熊宇婷),GuW(顾蔚),etal．２０１０．
OptimizationofISSRＧPCRreactionsystemandprimersscreenＧ
inginSchisandrasphenanthera(华中五味子ISSRＧPCR反应
体系优化及引物筛选)[J]．BullBotRes(植物研究),(５):
５８８－５９３
MeiLY(梅洛银),LiaoMA(廖明安),RenYJ(任雅君),etal．
２０１３．RelationshipidentificationofaloquatvariantbasedonInＧ
terＧSimpleSequenceRepeat(ISSR)(基于ISSR分子标记的枇杷
材料亲缘关系分析)[J]．Guihaia(广西植物),３３(６):７４０－７４４
MengDY(孟德悦),WuHY(吴海勇),LiuGB(刘光斌),etal．
２０１３．VarianceanalysisonnetphotosyntheticrateandtranspiＧ
rationrateofSpindusmukorossifromdifferentprovenances(不
同种源无患子光合与蒸腾速率差异分析)[J]．NonＧwoodFor
Res(经济林研究),３１(２):４８－５３
PandeyG．１９９８．DravyagunaVijanna,VI．Varanasi[M]．India:
KrishnadasAcademy:１９１－１９６
PengZQ(彭珠清),FanHH(范辉华),LiuB(刘宝),etal．
２０１４．OptimizationofSARPＧPCRinSapindusmukorossi(无
患子SRAPＧPCR反应体系的优化)[J]．JZhejiangA &F
Univ(浙江农林大学学报),３１(２):３２２－３２８
ShaoWH(邵文豪),DiaoSF(刁松锋),JiangJM(姜景民),et
al．２０１２．GeographicvariationofsaponinscontentsinSapinＧ
dusmukorossipeelsfromdifferenthabitats(不同产地无患子
果皮皂苷含量的地理变异研究)[J]．BullBotRes(植物研
究),３２(５):６２７－６３１
ShaoWH(邵文豪),DiaoSF(刁松锋),JiangJM(姜景民),et
al．２０１３．StudyongeographicvariationofmorphologyandecoＧ
nomiccharacteroffruitandseedofSapindusmukorossi(无患
子种实形态及经济性状的地理变异)[J]．ForRes(林业科学
研究),２６(５):６０３－６０８
ShenQQ(沈庆庆),ZhuJH(朱建华),PengHX(彭宏祥),etal．
２０１３．GeneticdiversityofearlyＧmaturingseedlinglitchireＧ
sourcesinsouthwestGuangxibyISSR(桂西南早熟荔枝实生
资源遗传多样性的ISSR分析)[J]．Guihaia(广西植物),３３
(２):２２５－２２８
SunQX(孙清信),ChenJ(陈坚),ZhangH(张辉),etal．２０１２．
OptimizationofISSR’sprimerandPCRreactionsystemfor
AstragalussinicusL．(紫云英ISSR引物的筛选及PCR反应
体系的优化)[J]．JPlantGenRes(植物遗传资源学报),１３
(５):８７０－８７８
SunSD,KeX,CuiL,etal．２０１１．EnzymaticepoxidationofSapinＧ
dusmukorossiseedoilbyperstearicacidoptimizedusingresponse
surfacemethodology[J]．IndCropsProd,３３(３):６７６－６８２
VermaN,AmreshG,SahuPK,etal．２０１２．Antihyperglycemic
activity,antihyperlipedemicactivity,haematologicaleffectsand
histopathologicalanalysisofSapindusmukorossiGaertenfruits
instreptozotocininduceddiabeticrats[J]．AsianPaciJTrop
Med,５(７):５１８－５２２
WangYH(王彦华),HouXL(侯喜林),XuMY(徐明宇)．２００４．
StudyonoptimizationforISSRreactionsysteminBrassica
campestrisssp．chinensisusingorthogonaldesign(正交设计优化
不结球白菜ISSR反应体系研究)[J]．ActaBotBorealＧOccident
Sin(西北植物学报),２４(５):８９９－９０２
WeiFY(魏凤玉),FangC(方春)．２０１０．EnzymeＧassistedaqueous
extractionofSapindussaponins(酶法提取无患子皂苷的工艺研
究)[J]．ApplChemInd(应用化工),３９(８):１１４９－１１５１
ZhouLY(周凌瑜),WuCW(吴晨炜),TangDQ(唐东芹),etal．
２００８．OptimizationforISSRＧPCRsystemofFreesiarefracta
Klattthroughorthogonaldesign(利用正交设计优化小苍兰
ISSRＧPCR反应体系)[J]．BullBotRes(植物研究),２８(４):
４０２－４０７
ZietkiewiczE,RafalskiA,LabudaD．１９９４．GenomefingerprintＧ
ingbysimplesequencerepeat(SSR)anchoredpolymerasechain
reactionamplification[J]．Genomics,２０(２):１７６－１８３
４０９ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３５卷