全 文 ：文章编号:1000-2375(2006)03-0306-03
葫芦科植物绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)
灭螺初步研究
侯金华 ,王万贤 ,倪　红 ,杨　毅 ,张　勇 ,张佳磊 ,舒丽慧 ,程志德
(湖北大学 生命科学学院 , 湖北 武汉 430062)
摘　要:采用绞股蓝地上部分的水提液处理钉螺 ,并用清水作对照 , 结果表明绞股蓝对钉螺具有一定的毒
杀作用 ,随浓度的增加 , 钉螺的死亡率呈上升趋势 , 250 、500、1 000 mg/ L的溶液具有 40 %～ 100 %的灭杀效果.
即使是 125 mg/L低浓度的绞股蓝的水提液 ,处理时间达到 5 d后 , 钉螺的死亡率也可以达到 50 %以上.
关键词:绞股蓝水煮液;钉螺;毒杀作用
中图分类号:Q949.9;R184.38　　文献标志码:A
收稿日期:2006-01-13
基金项目:国家自然科学基金(30471506);湖北省中药生物技术重点实验室基金(4300620103)
作者简介:侯金华(1980-　),男 ,硕士生
钉螺(Oncomelania hupensis)是日本血吸虫(Schistosomiasis japanicum)唯一的中间宿主 ,消灭钉螺
是控制血吸虫病传播的关键[ 1] .目前 ,国内外所采用的物理灭螺方法工程浩大且难以彻底 ,必须进行反
复查灭才能巩固效果 ,而化学药物灭螺有效期短 ,且污染环境.目前 ,利用生活植物灭螺已成为热点 ,并
取得显著效果[ 1～ 4] .并有实验证明植物的皂甙成分是一种有效的灭螺药物.本实验所采用的绞股蓝
[ Gynostemma pentaphyllum (Thunb.)Makino] 系葫芦科植物 ,又名甘茶蔓 、七叶胆.具有消炎解毒 、止咳
祛痰的作用 ,主要成分是绞股蓝皂甙 ,此外还含有芦丁 、商陆素等黄酮类成分[ 5] .本文将绞股蓝用于杀灭
钉螺的初步结果报道如下:
1　材料与方法
1.1　实验材料　实验用钉螺采自湖南省洞庭湖区 ,22 ℃温室饲养 ,选用能正常活动的阴性螺作为实验
材料.实验用绞股蓝采自湖南省张家界.
1.2　植物材料的处理　将采到的绞股蓝地上部分在 100 ℃烘箱中烘干后 ,称取 10 g研磨粉碎 ,用 500mL
清水煮沸 ,过滤 ,重提 3次 ,合并滤液 ,浓缩到 500 mL ,定为母液(浓度为 20 g/L),备用 ,然后分别配成浓
度为 62.5 、125 、250 、500 、1 000mg/L 5个浓度于小塑料桶中 ,随即投放活钉螺进行处理.
1.3　浸杀灭螺试验　选取健康成螺 ,每 10只为一小组 ,用尼龙袋装好 ,保持良好透气性并可以防治钉
螺逃逸.每 5小组为一大组 ,每一大组投入一个装有绞股蓝水提液的容器中 ,另设清水对照 ,并重复 3
次 ,分别处理24 、48 、72 、96 、120 h后 ,将处理液中的钉螺随即取出一小组 ,用无氯清水冲洗后 ,将其从网
袋里转移至盛有清水的培养皿中 ,套上尼龙网使其无法爬离 ,静养 24 h后 ,根据其活动情况判断其死
活 ,以能爬动或翻转者为存活钉螺计 ,并将不能活动者压碎以证实死亡 ,统计钉螺死亡率.直线回归分析
求得剂量-效应方程 ,并算出其半数致死剂量(LD50).
1.4　电泳样品制备　按 LD50浓度处理钉螺 1 、2 、3 、4 、5 d后分别取出 ,并用无氯清水洗净 、擦干 、去壳 ,
取出肝脏 ,加磷酸缓冲液 0.25mL/螺 ,冰浴匀浆.匀浆液于 0 ～ 4 ℃、10 000 r/min离心 20min , -20 ℃冰箱
保存.
1.5　电泳　参照张龙翔等的方法[ 6] ,采用聚丙烯酰胺垂直板电泳.每槽点样 15μL 、20 mA恒流 ,0 ～ 4 ℃
条件下电泳 ,染色液采用 40mg 的醋酸-α-萘酯与40mg 的固兰 RR盐混合 ,并用10mL 的丙酮与1mL
第 28 卷第 3期
2006 年9 月
湖北大学学报(自然科学版)
Journal of Hubei University(Natural Science)
　Vol.28　No.3　
Sep., 2006
的0.2mol/L的MgCl2 溶液溶解 ,再用 pH7.4的 Tris-HCl缓冲液定容至 100mL ,染色 20 min.酶带显示
后 ,流水冲洗 30min ,7 %醋酸固定 ,拍照.
2　结果及分析
表 1　绞股蓝水煮液灭螺效果
浓度/(mg·L-1) 1 d 2 d 3 d 4 d 5 d
62.5 0.00 0.00 0.00 13.33 23.33
125 0.00 13.33 20.00 26.67 53.33
250 0.00 40.00 43.33 73.33 96.67
500 0.00 46.67 80.00 86.67 100.00
1 000 13.33 56.67 96.67 100.00 100.00
图 1　绞股蓝灭螺对数剂量-效应关系
图 2　绞股蓝灭螺时间-效应关系
图 3　钉螺 EST同工酶电泳图谱及模式图
图中 A、B 、C 、D 、E区带依次表示清水对照 、浸杀
1 d、2 d 、3d 、4d后的酶带图.第 5d可能时间过
长,无法取得钉螺的肝脏 ,故没有电泳图谱　　
2.1　浸杀结果　从表 1 中可以看出 ,用不同浓度
的绞股蓝水煮液处理钉螺 ,随浓度的增加 ,钉螺的
死亡率呈上升趋势 ,250 、500和 1 000mg/L的溶液
具有 40 %～ 100 %的灭杀效果.即使是低浓度
(125 mg/L)的绞股蓝的水煮液 ,处理时间达到 5 d
后 ,钉螺的死亡率也可以达到 50 %以上.
2.2　剂量-效应关系　以 3 d 后钉螺的死亡率为
纵坐标 ,相应的对数剂量为横坐标作散点图(图
1).直线回归法求出其剂量效应关系为 y =
84.166x -153.83 ,相关系数为 r =0.987.式中 x
为对数剂量 , y 为使用剂量 3 d后钉螺死亡率的估
计值.可见随剂量增大灭螺效果增强.
2.3　时间-效应关系　以不同时间后钉螺的死
亡率为纵坐标 , 250 mg/L 为横坐标作散点图(图
2).用直线回归法求出 0.25 g/L 的时效关系为 y
=22.667x -17.335 ,相关系数为 r =0.957 7.式
中 x 为使用时间 , y 为相应钉螺死亡率的估计值.
可见随时间的延长灭螺效果增强.
2.4　不同浓度绞股蓝水煮液处理前后钉螺 EST
酶活的变化　由图 3 可见 , 在钉螺中毒早期(1
d),区带染色较对照样品稍深 ,表明在钉螺中毒早
期EST 活性增强;在钉螺中毒中期(2 d 、3 d),经处
理样品的区带染色较对照组浅 ,表明中毒后的钉
螺EST 活性下降;而在钉螺中毒后期(4 d),经处
理样品染色不明显 ,表明此时钉螺的 EST 活性基
本消失 ,钉螺表现为近死亡状态.可见 ,随绞股蓝
样品浓度的增加 ,钉螺死亡率在上升.
3　讨论
通过绞股蓝水提液的浸杀灭螺实验以及量
效 、时效关系分析表明 ,绞股蓝对钉螺具有一定的
毒杀作用 ,根据枫杨 、夹竹桃 、商陆等灭螺植物的
成分分析[ 3 ,7] , 绞股蓝能毒杀钉螺可能与其体内
含有的商陆苷 、三萜皂甙有关 ,其结果还有待进一
步实验证明[ 8] .
酯酶是催化酯类化合物水解的酶系 ,目前已发现的酯酶有 20多种 ,这些酶在代谢中可能有转酯作
用 ,能水解大量非生理存在的酯类化合物 ,包括药物 ,故认为它在动物体内有去毒的作用[ 9 ～ 12] .酯酶是
钉螺体内对外界环境变化反应最强烈的同工酶系之一 ,从本实验 EST 电泳结果可见 ,绞股蓝提取物处
理钉螺 24 h后 ,其体内酯酶仍保持高活性 ,48 h后才逐渐降低 ,这可能是绞股蓝毒物进入钉螺体内刺激
了钉螺酯酶的活性 ,以利于钉螺解毒 ,随着时间的延长 ,钉螺体内绞股蓝毒性增大 ,抑制了酯酶活性 ,钉
307第 3期 侯金华等:葫芦科植物绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum )灭螺初步研究
螺则趋向死亡.
绞股蓝具有消炎解毒 、止咳祛痰的作用 ,对多种癌细胞和艾滋病有显著的抑制作用;还具有降血脂 、
降血压 、镇静 、催眠 、抗紧张 、抗溃疡 、抗疲劳 、抗衰老 、延长细胞寿命等等功效[ 11] .以绞股蓝杀灭钉螺 ,少
见报道 ,若能在此方面取得进展 ,绞股蓝将会给人类带来更多的经济效益.
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Molluscicidal activity of soaking liquids of
Gynostemma pentaphyllum on Oncomelania hupensis
HOU Jin-hua ,WANG Wan-xian ,YANG Yi ,NI Hong ,ZHANG Yong ,ZHANG Jia-lei ,SHU Li-hui ,CHENG Zhi-de
(School of Life Science ,Hubei University ,Wuhan 430062 , China)
Abstract:with pure water as a control , the soaking liquids of up ground of Gynostemma pentaphyllum were
used to examine its effect on Oncomelania hupensis .The result shows that the soaking liquids of Gynostemma
pentaphyllum have evident killing effect on Oncomelania hupensis after treat for established time.The mortality
keep rising as the concentration increase.The soaking liquids of 250 ,500 and 1 000 mg/L have a killing result of
40 %～ 100 %.Even if in low concentration , the mortality of Oncomelania hupensis still canreach up to 50 %by
treating with the soaking liquids of Gynostemma pentaphyllum after five days.
Key words:Gynostemma pentaphyllum;Oncomelania hupensis ;molluscicidal activity
(责任编辑　游　俊)
308 湖北大学学报(自然科学版) 第 28 卷