全 文 ： Ｇｕｉｈａｉａ Ａｐｒ. ２０１６ꎬ ３６(４):４２５－４２９
ｈｔｔｐ: / / ｊｏｕｒｎａｌ.ｇｘｚｗ.ｇｘｉｂ.ｃｎ
ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｇｕｉｈａｉａ－ｊｏｕｒｎａｌ.ｃｏｍ
ＤＯＩ: １０.１１９３１ / ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚ２０１４０５０１６
冯汉青ꎬ王玉佩ꎬ王婉ꎬ等. ＮａＣｌ胁迫下交替呼吸途径对烟草悬浮细胞死亡调节作用的研究[Ｊ]. 广西植物ꎬ ２０１６ꎬ ３６(４):４２５－４２９
ＦＥＮＧ ＨＱꎬＷＡＮＧ ＹＰꎬＷＡＮＧ Ｗꎬｅｔ ａｌ. Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｔｏｂａｃｃｏ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ
ｃｅｌｌｓ [Ｊ]. Ｇｕｉｈａｉａꎬ ２０１６ꎬ ３６(４):４２５－４２９
ＮａＣｌ胁迫下交替呼吸途径对烟草悬浮
细胞死亡调节作用的研究
冯汉青１∗ꎬ 王玉佩２ꎬ３ꎬ 王 婉１ꎬ 管冬冬１ꎬ 贾凌云１
( １. 西北师范大学 生命科学学院ꎬ 兰州 ７３００７０ꎻ ２. 中国科学院近代物理研究所ꎬ 兰州 ７３００００ꎻ ３. 中国科学院大学ꎬ 北京 １０００４９ )
摘 要: 盐分胁迫是植物在自然环境中经常遭遇的环境胁迫因素之一ꎬ会引起植物代谢紊乱乃至细胞死亡ꎬ
这严重限制了植物的生长、繁育和生存ꎮ 交替呼吸途径是植物较之动物独特的线粒体呼吸途径ꎮ 该研究在烟
草悬浮细胞中调查了交替呼吸途径对 ＮａＣｌ胁迫引起的植物细胞死亡过程的调节作用及相应的内在机制ꎬ以
及在 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ处理的烟草悬浮细胞中研究了交替呼吸途径和细胞死亡发生及 Ｈ２Ｏ２之间的关系ꎮ
结果表明:(１)随着 ＮａＣｌ处理浓度的增加ꎬ烟草悬浮细胞死亡水平逐渐增加ꎬ而交替呼吸途径的容量也逐渐上
升ꎮ (２)与 ＮａＣｌ处理相似ꎬ外源 Ｈ２Ｏ２的处理也能导致烟草悬浮细胞死亡水平的增加ꎮ ２００ ｍｍｏｌＬ
￣１ ＮａＣｌ的
胁迫导致明显的细胞死亡发生和 Ｈ２Ｏ２产量的显著性增加ꎻ 而较之 ２００ ｍｍｏｌＬ
￣１ ＮａＣｌ胁迫下的细胞ꎬ用水杨
基氧肟酸(交替呼吸途径的抑制剂)预处理后的细胞再置于 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ 的胁迫下导致更高水平的细
胞死亡和 Ｈ２Ｏ２的产生ꎮ 综上表明ꎬ高盐胁迫诱导了烟草悬浮细胞的交替呼吸途径的增加ꎬ而交替呼吸途径则
可能通过抑制活性氧的产生而起到缓解细胞死亡发生的作用ꎮ
关键词: 交替呼吸途径ꎬ 烟草悬浮细胞ꎬ Ｈ２Ｏ２ꎬ 细胞死亡
中图分类号: Ｑ９４５.３ 文献标识码: Ａ 文章编号: １０００￣３１４２(２０１６)０４￣０４２５￣０５
Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ
ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＮａＣｌ
ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｔｏｂａｃｃｏ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ
ＦＥＮＧ Ｈａｎ￣Ｑｉｎｇ１∗ꎬ ＷＡＮＧ Ｙｕ￣Ｐｅｉ２ꎬ３ꎬ ＷＡＮＧ Ｗａｎ１ꎬ ＧＵＡＮ Ｄｏｎｇ￣Ｄｏｎｇ１ꎬ ＪＩＡ Ｌｉｎｇ￣Ｙｕｎ１
( １. Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００７０ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｐｈｙｓｉｃｓꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ
ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００７０ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ３.Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎａ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４９ꎬ Ｃｈｉｎａ )
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｓｏｉｌ ｓａｌｉｎｉｔｙ ｓｔｒｅｓｓ ｉｓ ｔｈｅ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｓｔｒｅｓｓｅｓ ｔｈａｔ ｇｒｏｗｉｎｇ ｐｌａｎｔｓ ｈａｖｅ ｔｏ ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ
ｆａｃｅ. Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓａｌｉｎｉｔｙ ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｐｌａｎｔｓ ａｒｅ ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ. Ｉｎ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒꎬ ｈｉｇｈ
ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｓａｌｔ ｓｔｒｅｓｓ ｃａｎ ｃａｕｓｅ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ. Ｔｈｉｓ ｓｅｒｉｏｕｓｌｙ ｌｉｍｉｔｓ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬ ｇｒｏｗｔｈꎬ ｓｕｒｖｉｖａｌꎬ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ
ｐｌａｎｔｓ. Ｔｈｅ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ ｉｓ ａ ｐｌａｎｔ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙꎬ ｗｈｉｃｈ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｅｘｉｓｔ ｉｎ ａｎｉｍａｌｓ. Ｂｙ ｕｓｉｎｇ
ｔｏｂａｃｃｏ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓꎬ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｗｏｒｋ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｗｈｅｔｈｅｒ ｔｈｅ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ ｃｏｕｌｄ ｐｌａｙ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｍｅ￣
收稿日期: ２０１４￣１０￣０７ 修回日期: ２０１５￣０３￣０２
基金项目: 国家自然科学基金(３１２６００５９ꎻ３０９００１０５)ꎻ教育部科学技术研究重点项目(２１１１９０)ꎻ甘肃省财政厅高校科研基本业务费[Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ
ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ(３１２６００５９ꎻ３０９００１０５)ꎻ Ｋｅｙ Ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｆｒｏｍ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ
(２１１１９０)ꎻ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃｏｌｌｅｇｅｓ ａｎｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｇａｎｓｕ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｆｉｎａｎｃｅ]ꎮ
作者简介: 冯汉青(１９７８￣)ꎬ河北保定市人ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ主要从事植物生理学研究ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｆｅｎｇｈａｎｑ＠ ｎｗｒｕ.ｅｄｕ.ｃｎꎮ
∗通讯作者
ｄｉａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｈｉｇｈ￣ｓａｌｔ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｅａｔｈ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌｓ. Ａｎｄꎬ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｔｈｉｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ
ｐａｔｈｗａｙ ｗａｓ ａｌｓｏ ｓｔｕｄｉｅｄ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＮａＣｌꎬ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｏｆ
ｔｏｂａｃｃｏ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｗｅｒｅ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ
ｔｈｅ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ. Ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ＮａＣｌꎬ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ
(Ｈ２Ｏ２) ａｌｓｏ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ. Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙꎬ ｃｅｌｌ
ｄｅａｔｈꎬ ａｎｄ Ｈ２Ｏ２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｏｂａｃｃｏ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ２００ ｍｍｏｌＬ
￣１ ＮａＣｌ. Ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｗｉｔｈ ２００ ｍｍｏｌ Ｌ￣１ ＮａＣｌ ｃａｕｓｅｄ ａｎ ｏｂｖｉｏｕｓ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ａｎｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｈ２ Ｏ２
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ. Ｔｈｅ ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ￣ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｃｅｌｌｓ ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓａｌｉｃｙｌｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ ａｃｉｄꎬ ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｔｅｒ￣
ｎａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙꎬ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｈｉｇｈｅｒ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｈ２Ｏ２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｔｏｂａｃｃｏ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ｓｕｂ￣
ｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ ａｌｏｎｅ. Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈａｔ ｈｉｇｈ ｓａｌｔ ｓｔｒｅｓｓ ｃａｎ ｉｎｄｕｃｅ ａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｔｅｒｎａ￣
ｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙꎬ ｗｈｉｃｈ ｐｌａｙｓ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｕｎｄｅｒ ｈｉｇｈ ｓａｌｔ ｓｔｒｅｓｓ. Ａｎｄꎬ ｔｈｉｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｔｅｒｎａ￣
ｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ ｍａｙ ｒｅｌａｔｅ ｔｏ ｉｔｓ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｌｉｍｉｔ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈ２Ｏ２.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙꎬ ｔｏｂａｃｃｏ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓꎬ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅꎬ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ
盐分胁迫是植物在自然环境中所面临的主要环
境胁迫因素之一(Ｍｕｎｎｓ ＆ Ｔｅｓｔｅｒꎬ ２００８)ꎮ 盐分胁
迫会导致植物离子含量的不平衡、渗透压增加、水分
缺失、氧化压力、生长繁殖水平下降乃至细胞死亡
(Ｈａｍａｄａ ｅｔ ａｌꎬ ２００１ꎻＭｕｎｎｓ ＆ Ｔｅｓｔｅｒꎬ ２００８)ꎮ ＮａＣｌ
水平过高是造成盐分胁迫的主要原因(潘瑞炽等ꎬ
２００８)ꎮ 线粒体作为呼吸作用主要场所为细胞的生
存发育及相关的代谢活动提供了能量ꎮ 在高等植物
的线粒体呼吸途径中ꎬ除了细胞色素呼吸途径外ꎬ还
存在着交替呼吸途径ꎮ 该途径的运行使得电子绕过
了线粒体电子传递链中的复合物Ⅲ和复合物Ⅳ两个
ＡＴＰ 形成位点ꎬ而使得电子从 ＵＱ 库直接传递到氧
分子(Ｍｉｌｌｅｎａａｒ ＆ Ｌａｍｂｅｒｓꎬ ２００３)ꎮ
低温、病原菌侵染、水分缺失等环境胁迫因素均
可导致植物交替呼吸途径水平的上升ꎬ且该交替呼
吸途径的增加有助于植物抵抗上述的环境胁迫
(Ｆｅｎｇ ｅｔ ａｌꎬ ２００８ꎻＢａｒｔｏｌｉ ｅｔ ａｌꎬ ２００５ꎻＳｉｍｏｎｓ ｅｔ ａｌꎬ
１９９９)ꎮ Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ(２００９)和 Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ(２０１０)研究
发现ꎬ盐胁迫会导致拟南芥幼苗或愈伤组织中交替
呼吸途径的增加ꎬ且盐胁迫下交替呼吸途径的增加
能在一定程度上缓解盐胁迫所导致的电子渗漏和生
长速率的下降ꎮ 而目前对于交替呼吸途径在植物抵
抗盐胁迫中的生理学作用的认识较为有限ꎮ 如盐胁
迫特别在较高的水平下ꎬ能导致植物细胞的死亡ꎬ而
交替呼吸途径是否在盐胁迫下也能影响植物细胞死
亡的发生则报道较少ꎮ 基于此ꎬ本文在烟草悬浮细
胞中研究了 ＮａＣｌ 胁迫下交替呼吸途径对植物细胞
死亡的调节作用ꎬ有助于进一步认识交替呼吸途径
在逆境下的生理学作用以及植物在盐胁迫下细胞死
亡发生及调控的机理ꎮ
１ 材料与方法
１.１ 烟草 ＢＹ￣２悬浮细胞培养
烟草悬浮细胞 ( Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ｃｖ. Ｂｒｉｇｈｔ
Ｙｅｌｌｏｗ￣２)由香港大学姜里文教授提供ꎮ 悬浮细胞
在 ＭＳ(Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ ＆ Ｓｋｏｏｇꎬ１９６２)液体培养基(ｐＨ值
５.８) ( Ｓｉｇｍａ￣Ａｌｄｒｉｃｈ 公司)中生长ꎬ并在其中补充
３％(ｗ / ｖ)蔗糖和 ０.４ ｍｇＬ￣１的 ２ꎬ４￣二氯苯氧乙酸ꎮ
培养物于 ２５ ℃、１３０ ｒｍｉｎ￣１的黑暗条件下振荡培
养(Ｎａｇａｔａ ｅｔ ａｌꎬ １９８１)ꎮ 在 ７ ｄ 生长周期的时间间
隔下ꎬ吸取 １０ ｍＬ 细胞培养物ꎬ加入到 １００ ｍＬ 的新
鲜液体培养基中完成传代培养ꎮ 实验所用细胞为转
入到新鲜培养基中 ４~ ５ ｄ 后的细胞ꎬ所有步骤均在
无菌条件下完成ꎮ
１.２ 细胞处理
吸取一定体积的细胞悬液ꎬ以 １ ∶ ５( ｖ / ｖ)用去
离子水稀释并摇匀ꎬ取 ５ ｍＬ 均匀的稀释悬液过滤ꎬ
再用去离子水洗涤过滤待用ꎮ 在第一组试验中ꎬ将
细胞分别置于 ５０、１００、２００和 ４００ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＮａＣｌ
下处理 ５ ｈꎬ以用去离子水处理的细胞作为对照ꎮ 在
第二组试验中ꎬ将细胞用 １ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＳＨＡＭ (水
杨基氧肟酸ꎬ交替呼吸途径的抑制剂)预处理 ５ ｈ
后ꎬ分别置于 ０ 或 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ 下处理 ５ ｈꎬ
或以 １ ｍｍｏｌＬ￣１ ＳＨＡＭ 的溶剂预处理细胞 ５ ｈ 后
再置于 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ下处理 ５ ｈꎬ以 １ ｍｍｏｌ
Ｌ￣１ ＳＨＡＭ 的溶剂预处理细胞 ５ ｈ 后再置于 ０
ｍｍｏｌＬ￣１的 ＮａＣｌ下的细胞作为对照ꎮ 在第三组试
验中ꎬ分别用 ０、５０、１００、２００、４００ ｍｍｏｌＬ￣１的 Ｈ２Ｏ２
处理细胞 ５ ｈꎮ
６２４ 广 西 植 物 ３６卷
１.３ 细胞死亡测定
细胞死亡采用伊文思蓝染色法进行测定ꎮ (１)
将处理后的细胞悬液摇匀ꎬ取 １ ｍＬ细胞悬液于加入
１００ μＬ ０.０２５％(ｗ / ｖ)伊文思蓝染液中染色 ８ ｍｉｎꎬ
之后先在 １ ０００ ｒｍｉｎ￣１下离心 １ ｍｉｎꎬ去上清ꎬ再用
磷酸缓冲液冲洗沉淀ꎮ (２)加入 １ ｍＬ 裂解液 [含
１％(ｗ / ｖ)的十二烷基磺酸钠(ＳＤＳ)和 ５０％(ｗ / ｖ)的
甲醇] 在 ５０ ℃下水浴 ０.５ ｈ 以裂解细胞ꎮ (３)在
８ ０００ ｒｍｉｎ￣１下离心 １０ ｍｉｎꎬ取上清在 ５９５ ｎｍ处检
测吸光值ꎬ吸光值可反应细胞的死亡程度(Ｙａｎｇ ｅｔ
ａｌꎬ ２００４)ꎮ
１.４ 呼吸速率测定
将处理后的细胞悬液立即置于测量杯中ꎬ利用
Ｃｌａｒｋ氧电极(中国科学院上海植物生理生态研究所
制)测量在氰化钾存在下细胞的耗氧速率ꎬ所得值
即为交替呼吸的容量值ꎬ具体操作参照 Ｂｉｎｇｈａｍ ＆
Ｆａｒｒａｒ(１９８９)ꎮ
１.５ Ｈ２Ｏ２含量检测
取处理后的细胞用 ５％(ｗ / ｖ)三氯乙酸(ＴＣＡ)
磨样ꎬ接着在 １２ ０００ × ｇ条件下离心 １０ ｍｉｎꎮ 取０.９
ｍＬ上清液与 ０.１ ｍＬ ０.１％ (ｗ / ｖ)硫酸钛形成的 Ｔｉ￣
Ｈ２Ｏ２的复合物用 ２０％ (ｖ / ｖ) Ｈ２ＳＯ４溶解混匀ꎬ测定
光吸收值(ＯＤ４０５)ꎬ以 Ｈ２Ｏ２标准曲线确定样品 Ｈ２Ｏ２
含量(Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌꎬ １９８４)ꎮ
１.６ 数据分析
利用 ＳＰＳＳ 软件对数据采用单因素方差分析ꎬ
再用最小显著差数(ＬＳＤ)法进行两两比较和显著性
差异水平分析(Ｐ<０.０５)ꎮ
２ 结果与分析
２.１ ＮａＣｌ胁迫对烟草细胞死亡的影响
悬浮细胞经 ５０、１００、２００、４００ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＮａＣｌ
处理后细胞死亡水平显著性增加ꎬ且细胞死亡程度
随 ＮａＣｌ处理浓度增大而增大(图 １)ꎮ
２.２ ＮａＣｌ胁迫下烟草细胞交替呼吸途径的变化
与细胞死亡的变化相似ꎬ细胞交替呼吸的容量
也随着 ＮａＣｌ胁迫浓度增大而不断增大(图 ２)ꎮ 与
对照相比ꎬ在 ５０ 和 １００ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＮａＣｌ处理后交
替呼吸的容量分别增加了 １.１８和 １.６８倍ꎬ但增加不
显著ꎮ 而 ２００和 ４００ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＮａＣｌ 处理后交替
呼吸的容量分别是对照的 １.６８ 倍、２.０６ 倍和 ２.２０
倍ꎬ且均达到了显著性差异(图 ２)ꎮ
图 １ ＮａＣｌ胁迫对细胞死亡的诱导 细胞死亡水平的测
量使用伊文思蓝染色法ꎬ即通过测量在 ５９５ ｎｍ下所提染液的吸
光值来反映ꎮ 数值为至少 ３ 次独立处理重复试验的平均值±标
准差ꎮ 不同字母表示数值间在 Ｐ<０.０５水平有显著性差异ꎮ
Ｆｉｇ. １ ＮａＣｌ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ
ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｕｓｉｎｇ Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ａｓｓａｙ ｂｙ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ
ｔｈｅ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｄｙｅ ａｔ ５９５ ｎｍ. Ｅａｃｈ ｖａｌｕｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｔｈｅ
ｍｅａｎ ± ＳＤ ｏｆ ａｔ ｌｅａｓｔ ｔｈｒｅｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ. Ｔｈｅ ｍｅａｎｓ ｄｅｎｏｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｄｉｆ￣
ｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｔ Ｐ< ０.０５.
图 ２ ＮａＣｌ胁迫对细胞交替呼吸途径的影响 数值为
至少 ３次独立处理重复试验的平均值±标准差ꎮ 不同字母表示
数值之间在 Ｐ<０.０５水平上具有显著性差异ꎮ
Ｆｉｇ. ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ａｌ￣
ｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙｓ Ｅａｃｈ ｖａｌｕｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｔｈｅ ｍｅａｎ
± ＳＤ ｏｆ ａｔ ｌｅａｓｔ ｔｈｒｅｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ. Ｔｈｅ ｍｅａｎｓ ｄｅｎｏｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｌｅｔｔｅｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｔ Ｐ<０.０５.
２.３ 细胞死亡的发生和过氧化氢水平的上升有关
由于 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ导致了细胞死亡和交
替呼吸途径的显著性上升ꎬ因此检测 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１
ＮａＣｌ胁迫下细胞体内 Ｈ２Ｏ２水平的变化以及交替呼
吸途径的抑制剂对其的影响ꎮ 结果表明ꎬ ２００
ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ 胁迫导致细胞 Ｈ２Ｏ２水平的显著性
上升(图 ３)ꎬ提示盐胁迫所导致细胞死亡的发生可
能是 Ｈ２Ｏ２在体内的积累或上升所致ꎮ
ＳＨＡＭ(水杨基氧肟酸)为交替呼吸途径的抑制
７２４４期 冯汉青等: ＮａＣｌ胁迫下交替呼吸途径对烟草悬浮细胞死亡调节作用的研究
剂ꎮ 与对照相比ꎬ１ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＳＨＡＭ 的单独处理
并未对细胞 Ｈ２Ｏ２水平发生显著性影响ꎮ 而细胞先
经 １ ｍｍｏｌＬ￣１ ＳＨＡＭ 处理后再置于 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１
ＮａＣｌ下则使得 Ｈ２Ｏ２水平显著性高于对照ꎬ也显著
高于 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ胁迫下的细胞ꎬ表明 ＳＨＡＭ
对盐胁迫下 Ｈ２Ｏ２的产生有促进作用ꎮ
进一步用不同浓度外源 Ｈ２Ｏ２对细胞进行处理ꎬ
处理浓度依次为 ５０、１００、２００、４００ ｍｍｏｌＬ￣１ꎮ 结果
表明ꎬＨ２Ｏ２的处理导致了细胞死亡的发生ꎬ且细胞
死亡程度随 Ｈ２Ｏ２浓度的增大而逐渐增大ꎬ分别为对
照组的 １.３４、１.６、２.５ 和 ４.０７ 倍(图 ４)ꎬ表明了细胞
死亡能够被 Ｈ２Ｏ２所诱导ꎮ
图 ３ 不同处理对烟草 ＢＹ￣２悬浮细胞 Ｈ２Ｏ２水平的影
响 将细胞分别置于 １ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＳＨＡＭ ( ＳＨＡＭ)或 ２００
ｍｍｏｌＬ￣１的 ＮａＣｌ (ＮａＣｌ)下ꎻ或先经 １ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＳＨＡＭ 处理后
再置于 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ 下(ＳＨＡＭ＋ＮａＣｌ)ꎮ 以 １ ｍｍｏｌＬ￣１
ＳＨＡＭ的溶剂处理后的细胞置于 ０ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＮａＣｌ下的细胞作
为对照(Ｃｏｎｔｒｏｌ)ꎮ 数值为 ６次独立处理重复试验的平均值±标准
差ꎮ 不同字母表示数值之间在 Ｐ<０.０５水平上具有显著性差异ꎮ
Ｆｉｇ. ３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｈｙ￣
ｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ (Ｈ２Ｏ２) ｏｆ ｔａｂａｃｏｏ ＢＹ￣２ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ
Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ: ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ
ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ １ ｍｍｏｌＬ￣１ ＳＨＡＭ ( ＳＨＡＭ)ꎬ ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ
(ＮａＣｌ). Ｏｒꎬ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ １ ｍｍｏｌＬ￣１ ＳＨＡＭ ａｎｄ
ｔｈｅｎ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ (ＳＨＡＭ＋ＮａＣｌ). Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｐｒｅ￣
ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ｏｆ １ ｍｍｏｌＬ￣１ ＳＨＡＭ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ０
ｍｍｏｌ Ｌ￣１ ＮａＣｌ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ( Ｃｏｎｔｒｏｌ ). Ｅａｃｈ ｖａｌｕｅ
ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｔｈｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ ｏｆ ｓｉｘ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ. Ｔｈｅ ｍｅａｎｓ ｄｅｎｏｔｅｄ ｂｙ
ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｔ Ｐ<０.０５.
２.４ 交替呼吸途径对 ＮａＣｌ 胁迫下细胞死亡发生的
调节作用
１ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＳＨＡＭ 处理并未对细胞 Ｈ２Ｏ２的
水平发生显著性影响 (图 ３)ꎻ而 １ ｍｍｏｌＬ￣１的
ＳＨＡＭ对盐胁迫下 Ｈ２Ｏ２的产生具有促进作用(图
３)ꎮ 相似地ꎬ对细胞单独用 １ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＳＨＡＭ处
图 ４ 过氧化氢(Ｈ２Ｏ２)对烟草 ＢＹ￣２悬浮细胞细胞死
亡的诱导 细胞的死亡水平的测量使用伊文思蓝染色法ꎬ即
通过测量在 ５９５ ｎｍ下所提染液的吸光值来反映ꎮ 数值为至少 ３
次独立处理重复试验的平均值±标准差ꎮ 不同字母表示数值之
间在 Ｐ<０.０５水平上具有显著性差异ꎮ
Ｆｉｇ. ４ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ (Ｈ２Ｏ２)￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｅｘ￣
ａｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ ｔａｂａｃｏｏ Ｂｙ￣２ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃｅｌｌ
ｄｅａｔｈ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｕｓｉｎｇ Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ａｓｓａｙ ｂｙ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｔｈｅ
ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｄｙｅ ａｔ ５９５ ｎｍ. Ｅａｃｈ ｖａｌｕｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｔｈｅ
ｍｅａｎ ± ＳＤ ｏｆ ａｔ ｌｅａｓｔ ｔｈｒｅｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ. Ｔｈｅ ｍｅａｎｓ ｄｅｎｏｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｔ Ｐ< ０.０５.
理并未对细胞的死亡水平发生显著性影响(图 ５)ꎬ
表明在未受到 ＮａＣｌ胁迫的条件下ꎬ交替呼吸途径的
抑制不会对 Ｈ２Ｏ２和细胞活力的水平产生影响ꎮ 而
较之 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＮａＣｌ的单独处理ꎬ细胞先经 １
ｍｍｏｌＬ￣１的 ＳＨＡＭ 处理后再置于 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１
ＮａＣｌ下则导致了细胞死亡程度的进一步上升(图
５)ꎮ 这些结果说明了在盐胁迫下ꎬ抑制交替呼吸的
活性ꎬ可以产生更多的过氧化氢并加剧细胞死亡
程度ꎮ
３ 讨论与结论
本研究发现ꎬＮａＣｌ的处理导致了植物细胞死亡
的发生ꎮ 通常来讲ꎬ细胞死亡水平的增加会导致细
胞代谢水平的下降ꎻ然而ꎬ细胞交替呼吸途径的水平
却随着细胞死亡水平的增加而不断上升ꎬ这提示交
替呼吸途径可能是细胞抵御外界盐胁迫的一种生理
学反应ꎮ
盐胁迫会导致植物活性氧水平的上升(Ｈｅｓｓｉｎｉ
ｅｔ ａｌꎬ ２００９ꎻＳｋｏｐｅｌｉｔｉｓ ｅｔ ａｌꎬ ２００６)ꎮ 在细胞产生的
活性氧当中ꎬＨ２Ｏ２具有最长的半衰期ꎻ同时ꎬ由于
Ｈ２Ｏ２的弱极性ꎬ其还具有穿膜的功能 (Ｄａｔ ｅｔ ａｌꎬ
２０００)ꎮ 本研究测量了 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＮａＣｌ 胁迫
８２４ 广 西 植 物 ３６卷
图 ５ 不同处理对烟草 ＢＹ￣２悬浮细胞细胞死亡水平
的影响 将细胞分别置于 １ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＳＨＡＭ (ＳＨＡＭ)或
２００ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＮａＣｌ(ＮａＣｌ)下ꎻ或先经 １ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＳＨＡＭ 处
理后再置于 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ下(ＳＨＡＭ＋ＮａＣｌ)ꎮ 以 １ ｍｍｏｌ
Ｌ￣１ ＳＨＡＭ的溶剂处理后的细胞置于 ０ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＮａＣｌ下的细
胞作为对照(Ｃｏｎｔｒｏｌ)并以对照值设为 １.０ꎮ 数值为至少 ３ 次独
立处理重复试验的平均值±标准差ꎮ 不同字母表示数值之间在
Ｐ<０.０５水平上具有显著性差异ꎮ
Ｆｉｇ. ５ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅａｔｈ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ
ｔａｂａｃｃｏ ＢＹ￣２ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ａｓ ｆｏｌ￣
ｌｏｗｓ: ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ １ ｍｍｏｌ Ｌ￣１ ＳＨＡＭ
(ＳＨＡＭ)ꎬ ２００ ｍｍｏｌ Ｌ￣１ ＮａＣｌ ( ＮａＣｌ ). Ｏｒꎬ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ
ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ １ ｍｍｏｌＬ￣１ ＳＨＡＭ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ２００ ｍｍｏｌ
Ｌ￣１ ＮａＣｌ (ＳＨＡＭ＋ＮａＣｌ). Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ｏｆ １
ｍｍｏｌＬ￣１ ＳＨＡＭ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ０ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ
ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ (Ｃｏｎｔｒｏｌ) ａｎｄ ｔｈｅ ｖａｌｕｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｗｅｒｅ ｓｅｔ ｔｏ １.０.
Ｅａｃｈ ｖａｌｕｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｔｈｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ ｏｆ ａｔ ｌｅａｓｔ ｔｈｒｅｅ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ. Ｔｈｅ ｍｅａｎｓ ｄｅｎｏｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｉｇ￣
ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｔ Ｐ<０.０５.
下细胞的 Ｈ２Ｏ２水平的变化ꎬ发现该水平的 ＮａＣｌ 胁
迫诱导了细胞明显的 Ｈ２Ｏ２的产生ꎮ Ｍａｘｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ
(１９９９)发现ꎬ在非光合组织或器官当中ꎬ植物活性
氧产生的主要位点是线粒体ꎮ 由于本实验采用的
Ｂｒｉｇｈｔ Ｙｅｌｌｏｗ￣２烟草悬浮细胞也是无法进行光合作
用的细胞ꎬ故推测 ＮａＣｌ 胁迫下产生的Ｈ２Ｏ２也主要
来自于线粒体ꎮ 本研究进一步调查了细胞Ｈ２Ｏ２水
平的增加是否能够引起细胞死亡ꎬ结果表明ꎬＨ２Ｏ２
可以以剂量依赖的方式诱导细胞死亡的发生ꎮ 同
时ꎬ已有报道 Ｈ２Ｏ２等活性氧水平的增加会对蛋白质
等生物分子造成的损伤ꎬ同时又可以以信号分子的
方式引发程序化细胞死亡相关基因的表达(Ｄａｔ ｅｔ ａｌꎬ
２０００ꎻＲｈｏａｄｓ ｅｔ ａｌꎬ２００６)ꎮ 因此ꎬ我们认为 Ｈ２Ｏ２的产
生可能是 ＮａＣｌ胁迫下细胞死亡发生的重要原因ꎮ
本研究表明ꎬ１ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＳＨＡＭ 单独处理细
胞并不会影响细胞的生存活力ꎻ相比于 ２００ ｍｍｏｌ
Ｌ￣１ ＮａＣｌ单独处理ꎬ细胞先经 １ ｍｍｏｌＬ￣１的 ＳＨＡＭ
处理后再置于 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ下则导致了更高
水平的细胞死亡ꎬ说明在 ＮａＣｌ的胁迫下交替呼吸途
径的增加能够缓解细胞死亡的发生ꎻ与细胞死亡的
变化相似的是 ＳＨＡＭ 也导致了 ２００ ｍｍｏｌＬ￣１ ＮａＣｌ
的胁迫下 Ｈ２Ｏ２水平的进一步上升ꎬ说明 ＮａＣｌ 的胁
迫下交替呼吸途径的增加能够降低 Ｈ２Ｏ２的产生ꎮ
交替呼吸途径是线粒体中的一条电子传递途径ꎬ该
途径的运行可以通过降低线粒体电子传递链的过度
还原而限制线粒体活性氧的产生 (Ｍａｘｗｅｌｌ ｅｔ ａｌꎬ
１９９９)ꎮ 线粒体活性氧既是 ＮａＣｌ 胁迫下细胞 Ｈ２Ｏ２
产生的主要位点ꎬ又是 ＮａＣｌ胁迫下细胞死亡发生的
重要原因ꎮ 因而ꎬ本研究认为在 ＮａＣｌ 的胁迫下ꎬ植
物细胞交替呼吸途径的抑制会导致更多活性氧的产
生ꎬ从而加剧了细胞死亡的发生ꎮ 故而交替呼吸途
径可能是植物在 ＮａＣｌ 胁迫下维持细胞活力的生理
学机制之一ꎮ
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ｖｅｒｓｅ￣ｐｈａｓｅ ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ ｖｅｓｉｃｌｅｓ (ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ) [Ｊ]. Ｍｏｌ Ｇｅｎ Ｇｅ￣
(下转第 ５０２页 Ｃｏｎｔｉｎｕｅ ｏｎ ｐａｇｅ ５０２ )
９２４４期 冯汉青等: ＮａＣｌ胁迫下交替呼吸途径对烟草悬浮细胞死亡调节作用的研究