全 文 ：广西植物Guihaia29(1)：44—47 2009年1月
简便有效的叶表皮离析方法——过氧化氢一醋酸法
孙同兴1，江幸山2
(1．盐城师范学院生命科学与技术学院，江苏盐城224002；2．华南农业大学生命科学学院，广州510642)
摘要：在长期叶表皮制片过程中发现，过氧化氢一醋酸离析法简便实用，对蕨类植物小型叶和大型叶、裸子
植物鳞形叶、钻形叶、针形叶、条形或带形叶及被子植物宽大的叶片均能适用。尤其重要的是，过氧化氢一醋
酸离析法不会破坏叶表皮细胞的结构，有利于精确观察叶表皮形态特征，是一种比较理想的叶表皮离析方法．
关键词：叶表皮；离析方法；过氧化氢一醋酸
中图分类号：Q944．5文献标识码：A 文章编号：1000—3142(2009)01—0044—04
H202一CH2COOHmaceration——asimple
andperfectmethodf rleafepidermis
SUNTong—Xin91，JIANGXing-Shan2
(1．SchoolofLifeScienceandTechnology，YanchengTeachersCollege，Yancheng224002，Chim；
2．CollegeofLi丘Science，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China)
Abstract：ThecharacteristicsofH202一CHzCOOHmacerationforthepreparationofleafepidermiswasreviewed．
ThemacerationinequaIvolumesofacetica idand30％hydrogenperoxidedidn’tdestroythestructuresofepidermal
cellsandwassuitablefortheleafepidermisofpteridophyte，gymnospermsanda giosperms．
Keywords：learepidermis；maceration；hydrogenperoxideandacetica id
叶片结构在植物系统分类中的作用已受到越来
越多的重视(常朝阳等，1997；吴钿等，2000；李强等，
2007)。而植物叶表皮制片在光学显微镜下可以形
象、直观而又清晰地显示植物叶表皮的细微结构，包
括表皮细胞的大小、排列方式、气孔器的类型、表皮
毛的结构以及表皮表面角质层纹饰等。这些性状表
现了稳定的种或属的结构特性，已被证明具有重要
的系统分类学意义(Olowokudejo，1990)。另外，植
物表皮制片操作简单，观察方便，因此，表皮构造在
植物的分类鉴定和系统演化研究中已经为许多学者
所重视和利用(Olowokudejo，1990；马清温等，
2005)。植物表皮制片一般采用叶片离析法，主要原
理是用化学试剂把表皮细胞与叶肉细胞间的中层物
质溶解掉，使表皮与叶肉分离。得到的表皮可以用
作临时观察，也可制成永久制片。取得植物叶表皮
的离析方法有许多种，如次氯酸钠法、过氧化氢一醋
酸法、铬酸一硝酸法、碳酸钠法、水煮法、氢氧化纳
法、段续川法等。目前，制得植物叶表皮普遍采用次
氯酸钠法(温洁，1995；洪亚平等，2002)和铬酸一硝
酸法。过氧化氢一醋酸离析法又称Franklin法，经
常用来离析木材材料，在叶片离析研究中仅见少数
学者利用(Setten25LKoek—Noorman，1986；马清温
等，2003，2005)。而我们通过长期的植物叶表皮实
验研究认为，过氧化氢一醋酸离析法制得叶表皮既
方便又理想，对研究的多种植物类型都取得了比较
满意的效果。现把这种离析方法的优点总结如下。
1 材料和方法
1．1材料
商朝殷墟古墓出土未鉴定的植物叶片，新鲜材
料蕨类石松(Lycopodiumjaponicum)、番荔枝科囊
收稿日期：2007—02—05修回日期：2008-06—27
基金项目：江苏省高校自然科学基础研究项目(06KJDl80201)[SupportedbyFoundationforBasicResearchofNaturalScienceofHigherEducation，
JiangsuProvinee(0fKJDl80201)]
作者简介：孙同兴(1962．)，男，山东青岛市人．博士，副教授．从事结构植物学和演化植物学研究．
万方数据
1期 孙同兴等：简便有效的叶表皮离析方法——过氧化氢一醋酸法 45
瓣木(Saccopetalumpro ific“研)和版纳野独活
(Miliusabannaensis)，腊叶标本罗汉松科肉托竹柏
(Nageiawallichiana，38991，E))、南洋杉科贝壳杉
属(Agathisrobusta)(孙洪范2022，PE)和A．alba
(孙洪范67，PE)、苏铁类托叶铁科(Boweniaspecta-
bilis)(孙洪范19，PE)、番荔枝科藤春(Alphonsea
monogyna)(邢福武5276，IBSC)。
1．2方法
商朝殷墟古墓出土植物叶片直接放人等量
10％过氧化氢一醋酸溶液中，石松小型叶切成2
mm小段，阔叶材料在中部切成1am×1crn的小
块，浸泡在等量的30％过氧化氢一醋酸溶液中，在
60℃烘箱内放置12～24h，待叶肉组织和表皮细胞
分离后，把离析材料取出，用毛笔轻轻扫除叶肉细
胞，漂洗干净，1％番红染色5～10rain，制作临时装
片或采用洪亚平等(2002)方法制成永久制片，在
LEICADMLB显微镜下观察和照相。
2 结果和讨论
上述植物叶表皮制片结果见图版I：卜9。
从实验结果看出，过氧化氢一醋酸离析法的应
用与植物叶片大小、生活习性(木本或草本)、质地
(革质和纸质)关系不大，各种材料经离析后都能得
到清晰完整的叶表皮制片。另外，利用此法对于新
鲜材料和腊叶标本效果相同，腊叶标本不需要提前
水煮，直接把材料放在离析液中。过氧化氢一醋酸
离析法对浓度和离析时间要求不严，普遍采用等量
30％过氧化氢一醋酸溶液，放在60℃烘箱内12～
24h，时间稍长也不受影响，一般离析完全后表皮会
自动脱离。而对一些特殊材料只需根据叶片性质对
过氧化氢浓度或离析时间略作改变，如我们对取自
商朝古都殷墟古墓穴内的植物叶片干标本，采用等
量lo％过氧化氢和醋酸离析12h就能够得到理想
的叶表皮制片(图版I：5)。结合前人曾利用此法对
蕨类植物阴地蕨科(Botrychiaceae)3个属(焦瑜等，
2000)、裸子植物杉科红杉属(Sequoia)、水杉属
(Metasequoia)、落羽杉属(Taxodium)、水松属
(Glyptostrobus)和台湾杉属(Taiwania)(Ma＆Li，
2002；Ma等，2004；马清温等，2003，2005)、银杏
(Ginkgobiloba)(李正理等，1989)、被子植物杨属山
杨(Populusdavidiana)(Sun等，2004)、番荔枝科
(Setten&Koek-Noorman，1986)、百合科七筋姑属
(Clintonia)(常朝阳等，1997)以及我们曾对蕨类植
物石松属(Lycopodium)5种(Sun等，2005)、胡桃科
青钱柳(Cyclocaryap liurus)(孙同兴等，2006)等
植物叶片采用过氧化氢一醋酸离析方法取得的效果
认为，过氧化氢一醋酸离析法对蕨类植物小型叶和
大型叶、裸子植物鳞形叶、钻形叶、针形叶、条形或带
形叶及被子植物宽大的叶片均能适用。
另外，在实验过程中发现，过氧化氢一醋酸法离
析作用比较温和，离析时间和温度易于控制，更为重
要的是离析过程不会破坏所要观察的表皮结构。过
氧化氢离析机理可能是在醋酸环境下氧化能力较为
温和，仅破坏细胞壁之间的中层结构，使叶肉细胞和
表皮细胞分离，能够得到带有完整表皮细胞的表皮
制片，真实地显示出植物叶的表皮特征。如图版I：
1，2，3反映了番荔枝科植物叶片表皮细胞内普遍含
有各种晶体，Setten&Koek-Noorman(1986)利用
过氧化氢一醋酸离析法对番荔枝科177种植物的叶
表皮结构研究结果同Patel(1971)采用直接撕片法
得到的结果一致，都能清楚地观察到表皮细胞具有
晶体分布。我们以前曾采用等量30％过氧化氢一
醋酸离析法研究了番荔枝科蚁花属和澄广花属植物
的叶片，也清楚地发现两个属植物叶片表皮细胞内
具有晶体存在(孙同兴等，2002)。而采用其它方法
如铬酸一硝酸离析法等能破坏表皮细胞的基本结
构，使表皮结构的许多信息无法观察到，铬酸和硝酸
等强酸不仅能够把细胞间的中层物质分解掉而且还
会把表皮细胞一同分解掉，仅留下难以分解的角质
层结构。如Olowokudejo(1990)利用lo％铬酸与硝
酸离析液研究番荔枝科番荔枝属(Annona)叶时没
有发现任何表皮细胞具有晶体，陈健辉等(1995)利
用10％铬酸与硝酸离析液研究番荔枝科囊瓣木族
野独活属、囊瓣木属、蚁花属(Mezzettiopsis)和澄广
花属(Orophea)植物叶表皮时也没有得到含有任何
晶体的表皮制片。利用铬酸与硝酸离析法制得的叶
表皮制片在光学显微镜下观察，看到的仅仅是印在
角质层内壁上的表皮结构，并不能反映植物叶表皮
的真实特征。铬酸一硝酸离析法是目前利用扫描电
镜观察角质层内表面结构的常用制备方法(Stockey
等，1978，1992)，原理就是把表皮细胞分解掉，得到
印有表皮细胞结构、气孔器结构以及其它表皮附属
印痕的角质层，然后在扫描电镜下观察角质层内
表面，这些角质层内壁的结构能以负像的形式反映
出表皮的特征。所以要利用光学显微镜精确观察叶
万方数据
46 广西植物 29卷
图I{反I 1．番荔枝科藤春叶近轴面，示细胞内晶体(X100)；2．if}荔枝科版纳野独活叶近轴面。示细胞内晶体(×100)，3．番荔枝科囊瓣木叶近
轴面，示细胞内晶体(x100)i4．南洋杉科叶远轴面‘×】00)I5．商朝殷墟古簋出土的未知植物叶远轴』五i(X240)；6．石松科石松叶表皮(×65)I
7，南洋杉科叶远轴面(×100)I8．罗汉松科肉托竹柏叶远轴面(x125)I9．托叶铁科叶远轴面(×100)．
PlateI 1．AdaxialepidermisofAl坤On#ca^wnogyna(AnnonaceAe)．showingcry班．．alsin pidermalcel 3(×100)，置Ad盅)dalepidermisofMiliusa
bannaensis(Annonaceae)．showingcrystalsinepidermalcel s(X100)l3．Adaxialepidermis0f‘Jaccopetalumprolififllm(Annortaceae)，showingCry8-
t县lsinepidenzal∞U3(x100)l4．Aba，da】e口jdermisofAgathisrobaJta(Araucarisceae)(xJ00)I5．Aba撕丑jepiderrmsofaspeaesofunidemifiedlear
unearthedfroman8n6ellttombinYinxu．thecapitalottheShangI研∞cy(X240)I6．koepidernusofLycopodiumjaponic∞m(Lyeopodiaeeae)(×
65)；7。Abaxialep dermisofAgatkism地(Araueatjacme)(x100)#8．AhaxJa]epidermisofNagciawalli‘=hiana(Pcdoe,arpacene)(x125)l9．Abaxial
epidermis0fBott¨iaspectabilij(Stangeriaceae)(×100)．
万方数据
1期 孙同兴等：简便有效的叶表皮离析方法——过氧化氢一醋酸法 47
表皮特征尤其是表皮细胞内的结构，采用过氧化氢一
醋酸离析液比较适宜。
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万方数据
简便有效的叶表皮离析方法——过氧化氢-醋酸法
作者： 孙同兴， 江幸山， SUN Tong-Xing， JIANG Xing-Shan
作者单位： 孙同兴,SUN Tong-Xing(盐城师范学院,生命科学与技术学院,江苏,盐城,224002)， 江幸山
,JIANG Xing-Shan(华南农业大学,生命科学学院,广州,510642)
刊名： 广西植物
英文刊名： GUIHAIA
年，卷(期)： 2009,29(1)
被引用次数： 11次

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引用本文格式：孙同兴.江幸山.SUN Tong-Xing.JIANG Xing-Shan 简便有效的叶表皮离析方法——过氧化氢-醋酸
法[期刊论文]-广西植物 2009(1)