全 文 ：广西植物Guihaia28(1)：95—99 2008年1月
巴戟天种质离体保存研究
李 锋，付传明，黄宁珍，赵志国，唐凤鸾
(；焉芦嚣譬姜广西植物研究所，广西桂林541006)
摘要：以巴戟天试管菌为材料，研究不同浓度的无机盐、蔗糖和四种植物生长调节剂(CCC、PPsss、ABA、
MH)对巴戟天试管苗保存的影响。结果表明：巴戟天试管苗在无生长调节剂的MS、1／2MS、1／4MS三种无机
盐浓度培养基上均能保存培养360d，存活率达90％，蔗糖浓度为20～40g／L时，植株生长健壮，能延长保存
时间；四种生长调节剂均能诱导试管苗侧芽的生成，抑制顶芽和叶片的生长。其中以PP．3ss促进壮苗效果最
好，能提高试管苗素质，在I／2MS+PPsssO．5～1．0mg／L+蔗糖30g／L培养基上，试管苗能保存480d，存活
率达100％．
关键词；巴戟天；离体保存；生长调节剂fCCC，PPsss，ABA；MH。，
中图分类号：Q943．1文献标识码：A 文章编号；1000-3142(2008)01—0095—05
～j
’ ‘
Stu’preservation。访troofMorinda0厂icinalisbtuay on in ?wmalt：W 0t ，
LIFeng，FUChuan-Ming，HUANGNing-Zhen，
ZHAOZhi-Guo．TANGFeng-Luan
(GuangxiInstituteofBotany，CmangxiZhuangAutonomousRegionandtkChineseAcademyD，＆栅，Guilin541006，China)
Abstract：Effectso themineralnutrition，sucroseandplantr gulator(CCC，PPaaa，ABA，MH)indifferentco -
centrationsonpreservationinvitroofMorinda0fficinaliswereexamined．Theresultsshowedthattubepla—
ntletsofMorindaofficinalisc nbepreservedfor360donMS，1／2MSand1／4MSmedium，withsurvivalrate
of90％．Whentheconcentrationofsucroseinthemediumwas20,--,40g／L，theplantletagrownwellandcould
stillbelonglypreserved．Theirlateralbudswereinducedwhilethegrowthoftopbudsandleaveswereinhibi—
tedbytheser gulators．MediumwithPPasaw sgoodforproducingintactvigorousplantlets．OnPPaaa0．5～
1．0mg／L+1／2MS，thetubeplantletscouldbeconservedfor480dwith100％survivalrate．
Keywords：Morindaofficinalisf preservationinvitro；plantregulator；CCC；PPssa；ABA；MH
巴戟天(Morindaofficinalis)别名鸡肠风、鸡
眼藤、三角藤，为茜草科多年生藤本植物，主要化学
成分为糖类、蒽醌类和氨基酸类，是传统的补肾壮
阳、补中益气、强筋骨、祛风湿、安五脏的良药，目前
已成为我国出口创汇的主要中药品种之一。由于近
年来市场需求量大，巴戟天的栽培规模也不断扩大，
但是巴戟天田间易感染病虫害，常导致品种的严重
退化，种质资源不易保存(贺红等，2004)。因此，本
研究采用离体保存材料的方法，首先调整培养基中
无机盐和蔗糖浓度，探讨不同营养水平和渗透强度
对保存的影响。接着使用几种常见而有效的植物生
长调节剂(CCC(chloroch linechloride)，PP333(pa—
clobutraz01)，ABA(abscisicacid)，MH(maleichy—
drazide))，通过比较保存过程中植株的芽、叶和根等
的生长情况以及存活率，选择出适宜保存的生长调
节剂种类及浓度，并与不同无机盐浓度的培养基配
比，以便找出最适合巴戟天试管苗保存的培养基配
方，为巴戟天种质资源的长期保存提供技术和方法。
收稿日期：2006-11-08修回日期：2007-04-20
基金项目：广西科技攻关项目(0322024-3B)[SupportedbyKeyTechnologyResearchandDevelopmemProgramofGuang：d(0322024-3B)
作者简介；李锋(1953一)，男，广西全州人，研究员，从事药用植物研究工作．
万方数据
96 广西植物 28卷
1 材料与方法
1．1材料及处理
巴戟天野生品采自广西宁明县中越边境地区及
广西药用植物园，种植于广西植物研究所药材资源
保存圃。以茎段为外植体进行组织培养，选取生长
基本一致的巴戟天继代苗(2am左右)剪成单株作
离体保存实验。
1．2离体保存方法
1．2．1不同无机盐浓度的保存实验分别以MS、1／
2MS、1／4MS为培养基，附加30g／L蔗糖和6g／L
琼脂，每个处理10瓶，每瓶接种3～4株(pH=5．8)。
1．2．2不同蔗糖浓度的保存实验采用MS为培养
基，分别附加0、20、40、60g／L的蔗糖，每个处理10
瓶，每瓶接种3---4株(琼脂为6g／L，pH----5．8)。
1．2．3不同植物生长调节荆的保存实验以MS为
基本培养基，分别添加不同浓度的CCC(O．4、0．8、
1．2、1．6、2．0、3．0、4．0mg／L)、PP333(O．2、0．5、1．0、
2．0、4．0、8．0rag／L)、ABA(O．2、0．5、1．0、2．0、4．0、
8．0rag／L)和MH(O．2、0．5、1．0、2．0、4．0、8．0rag／
L)，每个处理10瓶，每瓶接种3---4株(调节剂为化
学纯，各培养基均附加309／L蔗糖和69／L琼脂，
pH=5．8)。
1．2．4无机盐浓度与调节剂的配比实验采用1／
2MS、1／4MS+蔗糖30g／L+琼脂6g／L为培养基，
附加不同浓度的PP。。。，每个处理lO瓶，每瓶接种3
,--4株(与上面MS培养基附加不同浓度的PP。。。相
裹1 无机盐浓度对保存的影响
Table1 Effectsofdifferentm diumonthesurvivalrateofMorindaofficinalisinvitroc nservation
对照)。
1．3保存条件及观察记录
保存条件：培养室温度15～20℃，光照强度为
2000t比mol／(m2·s)，光照12h／d。
保存后，每90d观察记录一次，观测指标包括：
植株的高矮、侧芽的多少、叶片的大小、色泽、生根、
有无愈伤和存活情况。
1．4恢复生长实验
将保存360d后存活的材料转接到继代增殖和
生根培养基上，观察恢复生长的情况。
2 结果与分析
2．1无机盐、蔗糖浓度对巴戟天试管苗保存的影响
2．1．1无机盐浓度对巴戟天试管苗保存的影响经
目测，在不外加植物激素和生长调节剂时，MS、1／
2MS、1／4MS三种无机盐营养水平对巴戟天试管苗
的保存影响差别不明显，360d时，植株都较高大，
色泽绿，生长较好，存活率达到90％，仍可继续保存
(表1)。这可能是因为巴戟天本身的自养能力较
强，实验所用的营养水平均在试管苗适应保存生长
的范围之内。
表2蔗糖浓度对保存的影响
Table2 Effectsofsugarconcentrationonthesurvival
rateofMorindaofficinalisinvitroc nservation
蔗糖浓度 株高 叶大小
Concen-Sizeof Sizeof
trationplantletleaf
0tsugar——一(g／L) 90d 90d
存活率
Survivalrate(％)
O
20
40
60
小 小 50
高 大 100
高 大 100
高 大 100
50 25 25
100 100 90
100 100 90
80 80 70
2．1．2蔗糖浓度对巴戟天试管苗保存的影响当蔗
糖浓度不同时，试管苗的生长状况有了一定的差异
(表2)。在无蔗糖的培养基上，植株矮小瘦弱，生长
缓慢，色泽不绿，死亡较多，360d时存活率仅为
25％，这可能是因为不外加碳源时，只能依靠自身光
合作用合成的少量的碳水化合物来维持生存，长期
处于碳饥饿状态，因此生长差。当蔗糖浓度为20g／
L和40g／L时，植株较高，叶片较大，整体色泽绿，
元死亡，360d时存活率达90％。当蔗糖浓度达60
g／L时，植株能生长的高大，色泽绿，但保存后期出
现部分死亡，360d时存活率为60％。因此，保存培
养基中合适的蔗糖浓度应为20-40g／L。
万方数据
1期 李锋等：巴戟天种质离体保存研究 97
2．2植物生长调节剂对离体保存的影响
为了研究不同调节剂在巴戟天试管苗保存中的
作用，本实验使用了CCC、PP；。。、ABA和MH四种
植物生长调节剂，观测了保存中试管苗的侧芽、株
高、叶片、根、愈伤的生长情况以及存活率(表3)。
2。2．1对试管苗侧芽、株高和叶片的影响根据观
察，当CCC浓度为0．4～2．0mg／L时，试管苗均能
长出1～3个侧芽，植株较高，上端触及培养瓶盖，叶
片大、平展、色泽绿；当CCC浓度达到3．0mg／L
时，株高和叶片开始变小，叶片垂向下方，无侧芽，色
泽不绿。当PP。。。浓度≤1．0mg／L时，植株较高、叶
片大、平展、色泽绿；当PP。。；浓度为2．0mg／L时，株
高和叶片开始变小，随着浓度的升高而形态更小，色
泽更差。PP3。。浓度为0。2～4．0mg／L时，试管苗均
有1～2个侧芽。ABA和MH对试管苗株高和叶片
的抑制较明显，当ABA浓度≥O．5mg／L和MH浓度
≥1．0mg／L时，顶芽明显不向上生长，植株矮小，叶
片变小，色泽不绿。ABA浓度≤1．0mg／L和MH浓
度为0．2mg／L时，试管苗均能长出1--．3个侧芽。
2．2．2对试管苗根和愈伤的影响不同生长调节剂
处理的巴戟天试管苗根的生长差别较大。在CCC
培养基上，巴戟天试管苗均能长出较多的根，根系向
表3调节剂对离体保存的影响
Table3 EffectsofinhibitorsonthesurvivalrateofMorindaofficinalisinvitroc nservation
注：“一”表示未观测记录，下同．
Note：。一”indicatesth statisticsarenotcarriedout，thesameb low．
培养基下生长较深。在PP。。。浓度为0．2--一2．0rag／ 时，CCC各处理上都能生成愈伤，部分愈伤较大，覆
L时，根多而短，向培养基下生长比较浅，大部分位 盖在培养基表面。PP；sa、ABA和MH只有部分处
于培养基表面，部分植株节间有气生状须根。当 理能生成稍小的愈伤。
ABA浓度0．2～1．0mg／L时，根均附在培养基的 2．2。3对试管苗存活率的影响保存90d时，CCC
表面，MH浓度为0．2、0．5mg／L时，根系多且向培 培养基上的巴戟天试管苗生长健壮，无死亡，存活率
养基下生长较深。从愈伤生长的情况来看，270d 达100％。到180d时，已有部分植株开始死亡。
万方数据
98 广西植物 28卷
270d时，死亡增多，表现为培养基表面形成较多的
愈伤，试管苗茎段基部由下而上开始枯萎，最后整株
死亡。360d时，CCC2．0mg／L的存活率最高，为
80％。在PP。3。浓度0．2～1．0mg／L培养基上培养
360d时，试管苗生长健壮，存活率为90％(与对照
相当)，当PP。。。浓度≥2．0mg／L时，并随着浓度的
增大，存活率下降增多。ABA浓度≥o．5mg／L时，
试管苗顶芽变小，短缩，不生长，随着浓度的升高抑
制越强，表现出明显的剂量效应，从而导致植株死
亡，培养270d时，ABA浓度为0．2mg／L的存活情
况相对最好，为70％。在MH培养基上，当MH浓
度为0．2、0．5mg／L时，对试管苗顶芽的抑制作用
较小，植株相对高大，270d时，存活情况最好，存活
率为85％。
综合上述四种生长调节剂对巴戟天离体保存的
效果，只有PP。。。(≤1．0rag／L)和对照(MS)培养基
上的材料在保存360d后还有90％的存活率，植株
形态正常，其他处理的存活率均相对较低。因此，在
表4不同无机盐与调节剂配比对保存的影响
Table4 Effectsofinhibitorsandsaltconcentration0nsurvivalrateofMorindaofflcinalisinvitroc nservation
所试的几种生长调节剂中，只有低浓度的PP3。。(≤
1．0mg／L)适用于巴戟天离体保存。
2．3PP，∞与不同浓度的无机盐培养基配比对巴戟天
试管苗保存的影响
由表4可见，1／2MS、1／4MS附加PP。。。培养基
较MS附加PP。。。培养基对试管苗的保存效果好。
360d时，培养基1／2MS附加PP3。30．5、1．0mg／L
和I／4MS附加PP3；。o．2～o．8mg／L上的植株高
大，色泽绿，生长健壮，元死亡。其中1／2MS附加
PP3330．5、1．0mg／L培养基上的植株在培养480d
时，存活率达到100％，生活力较强，仍可继续保存。
综合比较以上设计的各种保存培养基，以培养
基I／2MS+PP。。。0．5～1．0mg／L对巴戟天试管苗
的保存最好，保存480d时，植株生长健壮，无异常
现象，存活率达到i00％。
2．4试管苗保存后恢复生长情况
将在PP。；。培养基上无继代连续离体保存360d
后存活下来的植株，去掉根系和老叶，转接到继代增
殖培养基MS十6一BA0．5mg／L+NAAo．05mg／L
上，能很快诱导丛生芽，60d可增殖3---5倍，植株生
长旺盛，形态正常。转接到生根培养基上，同样能很
好的生根，形成完整植株，与未经保存的正常试管苗
无明显差异。
3结论与讨论
在离体保存过程中，糖类物质是培养物生存和
生长的主要碳源。在不外加蔗糖保存材料时，咖啡
(Kartha，1981；Bertrand-Desbnutais，1992)、铁皮石
斛(史永忠等，1999)等能够长时间成活，但试管苗素
质差，不利于下一代的繁殖；添加一定浓度蔗糖后，
能明显改善试管苗素质，大大提高成活率。本实验
中，不加蔗糖时，巴戟天试管苗生长和成活都较差，
不利于保存，蔗糖浓度为20---40g／L时，试管苗生
长健壮，360d时存活率高，保存效果好，这与上面
在咖啡和铁皮石斛的研究结果相似。另外，在培养
过程中，蔗糖除了提供试管苗所需的碳水化合物外，
万方数据
1期 ? 李锋等：巴戟天种质离体保存研究 99
还能改变培养基环境的渗透压(潘瑞炽等，1995)。
本实验中，当蔗糖浓度达到60g／L时，存活率开始
下降，可能是因为高浓度的蔗糖改变培养基的渗透
强度过大，致使试管苗吸水困难，对保存效果不利。
离体保存成功的试验表明，在培养基中添加适
当的生长调节剂，能延长培养物的保存时间，提高试
管苗素质和促进试管苗转接后恢复(潘瑞炽等，
2006)。在本实验中，不添加生长调节剂，单独使用
MS、1／2MS、1／4MS时，试管苗的保存效果一般，差
别不明显。在MS培养基上附加四种生长调节剂
时，以PP333浓度0．2～1．0mg／L对促进巴戟天试
管苗的健壮生长效果最好，保存360d时存活率相
对最高，转接后能较快恢复生长，可以用于保存培
养。但是，在实际保存时发现，PP。。。附加在1／2MS、
1／4MS培养基上较附加在MS培养基上对保存更
加有利，试管苗保存时间更长，存活率更高。可见，
生长调节剂与不同浓度的无机营养配比时，对保存
能够产生不同的效果。另外，CCC、ABA和MH对
巴戟天试管苗生长的抑制作用明显，但植株不够健
壮，存活率下降，相对而言，低浓度较高浓度的效果
好，因此，适当调整三种调节剂浓度或改变培养基无
机盐浓度，可能会取得好的效果，有待进一步实验。
在本实验观测过程中发现，试管苗死亡的主要
因素除了调节剂浓度过高，抑制强度过大，导致顶芽
退化而死亡外，根系上形成大量的愈伤，覆盖在培养
基表面，使植株无法吸收营养，由茎段基部最先开始
枯萎，逐渐向上，最后导致整株枯萎死亡．因此，在
巴戟天试管苗的保存过程中，调控根和愈伤的生长，
可以取得更好的效果。
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万方数据
巴戟天种质离体保存研究
作者： 李锋， 付传明， 黄宁珍， 赵志国， 唐凤鸾， LI Feng， FU Chuan-Ming， HUANG Ning-
Zhen， ZHAO Zhi-Guo， TANG Feng-Luan
作者单位： 广西壮族自治区中国科学院　广西植物研究所,广西,桂林,541006
刊名： 广西植物
英文刊名： GUIHAIA
年，卷(期)： 2008,28(1)
被引用次数： 8次

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引用本文格式：李锋.付传明.黄宁珍.赵志国.唐凤鸾.LI Feng.FU Chuan-Ming.HUANG Ning-Zhen.ZHAO Zhi-Guo.
TANG Feng-Luan 巴戟天种质离体保存研究[期刊论文]-广西植物 2008(1)