全 文 ：(互)卵一6；
广 _瓯 植 物 Guihah 20(1)：59—63 2000年 2月
文 章 编 号 ：1 000 31,12(2000)1}]-0059—05
萝 I、贮藏期过氧化物酶活性及同工酶谱
宅金亭，王林嵩 马剑敏，王 琳，徐存拴 ●_-●-
一 ● - - _ _ I 一
甫 师挂 大学 生钎 系 ．啊 南新 多 453002)
研 究
． f口 ；
&
摘 要 ：为了研究 茸 b贮藏期过氧化物酶的活性 变化哥口作用 ，利用禽创木酚法和聚丙 烯酰胺麓艘 电
淋方佳检测在贮藏期萝 b过氧化物酶的活性及同工酶谱 ．实验结果表明：不 屙品种的萝 卜在不同贮
藏时期其过 氧化物酶活性及丽工酶谱存在差异。贮藏时问越长过氧化物酶括 世高．同工酶谱奠带
增多 萝 色索 含量越高 ．POD恬性 越高，因此 ．在萝 贮藏期有可能过氧化物酶在清除细奠 内
H： 方 而 起 主要 作用
关键词：过墨些塑 ；
中囤分类号 ；$631．i 09．3
；嗣工 酶谱
识 码 ：A
The study of peroxidase activity and
isoenzyme of radish in storage
LI Jin ring．WANG Lin—song，MA Jian—min．
W ANG Lin，XU Ctin—shuan
(， pcJ~tmem _J，Bio[ogvt ⋯ ， Ⅳ ￡，⋯ 一rsil7．Xinxiang 453002．Chim )
Abstract：By PAGE and guaiaeol methods the change of POD of radish in storage was oN~ ,ed．The
expe rimental resuhs showed that there differences in POD activity and PAGE POD isoenzyme for
different breeds in radish storage．The longer the storese time lasted．the higlm the enzyme activity
—lIltl【1 nlor~the isoenzynle band w ．The activity of POD was raised with the increase of pigment
l_Ol~tents．These saggest that POD takes iI role in decreasing H 02 during radi,~ stored．
Key words：Peroxidase；radi．sh；~tored stage；Isoenzyme
过氧化物酶(Peroxidase，EC1 11．1．7；POD)是植物中普遗存在的一种氧化还原酶 ，参与
植 物的许 多生理 过 程。如植物 对低温“ 及病虫害 的抵抗 ，植物 细胞壁木 质素 台 成及细胞 内
自由基的清除“ 等等．有些植物如苹果、马铃薯、萝 b等 ，其果实、块茎、内质直根等要经历贮藏
期 ．以供食用或来年作种用等。但这些植物在贮藏期植物体内酶活性及 同工酶谱变化研究甚
l窿 日 ：1098⋯2 07
作 者 筒 介 半 盘 牛 19 62 )．女 ．赏验 师 ．在 lI．fi,实验 壹 从事 生 协科研 工作 。
基 金 项 目 ：州 扁 省利 挂垃 美项 l=l资帅 (编 号 071150i1l1
期-标 藏一献
_ ‘-_f ，．1
I ‘ I I f
维普资讯 http://www.cqvip.com
60 广 西 植 物 20卷
少 ，其机理 尚不清 ，尤其是萝 h贮藏期的 POD活性及同工酶谱变化尚未见报道。为此，我们对
四个品种萝 I-在贮藏期 的 P()r)进行研究 ，以期对贮藏植物体内生理坐化变化作一探讨
1 植料 s杰法
1．1材料 处理
实验 材料 为河南 师范 大学生 物 系生物 园种植 的萝 h．品种 为地 黄英 、丰光 、短 叶青 和 心里
美．种子购 自瓶乡市蔬菜公司，11月份收获后，贮藏于地窖内．每隔 3O d进行采样检测 ，从 1 2
月 到扶 年 d月共检 测 5次 将萝 h用粉 碎机 初步粉碎 ．准确称取 1 0 g．加石 英砂 充分研磨 后 ·
4 C离心 3O rain，d 000 r／rain，取上清澈分别测定 POD活性及同工酶谱。
1．2 POD活性检 测
参照张龙翔等方法⋯，将样品稀释至蛋白浓度为 1 mg／mI”加样 l0 ．470 rim姓检测光
吸收值变化 ，以△0．001 OD／m[n表示 1 U 酶活单位，反应体积为 3ml ，害 pH 7．o，0．01 M
PBS，o 13 mM H () ，1 mM 愈创木酚
1．3 POD同工酶谱检 测
用垂直板聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳 ，浓缩胶浓度为 3 ．分离胶浓度为 7 ，样品缓冲液
为 pH 7．0的甘油磷 酸缓 冲液 ，加人 样 品后使 甘 油终浓 度为 10 ，样 品蛋 白加 样量 为 7 g，电
泳凝 胺缓 冲 系统 为 Trts—HC[缓 冲 系境 ．浓缩腔 pH 6．7，分 离胺 为 pH 8．9，电报 缓冲穰 为 Tris一
甘氨酸 pH 8．3，恒压电泳至溴酚蓝指示剂达凝胶前沿 1 cm处 ，电泳完毕参照胡能书。 等方法
进行联苯胺 POD染色，照像后凝胶进行 470 rim 薄层扫描。
1．4试 剂与 仪器 ，
722型 分 光光 度 计上 海 第 三分 析 仪 器 厂产 ．300／
600电泳 仪 B[o—R (}公 司产 ，CS一930二维 波长 色谱扫
描仪 shimadzu公 产 ，高速 离心机 日立公 司产 。
所 用 试剂 愈创 木酚 为化 学纯 ．Tris、甘 氨 酸为生 化
试剂 ，其 它均 为分析 纯。
结 果
2．1贮 藏期 POD 活性变 化
不 同 品种 间 P()D活性 有较大差 异 ，地黄英 酶活最
低 2．7 U／ pro，心里美酶活性最高 6．4 u／ g pro．同
一 品种在不同贮藏时期 POD活性也有差异。呈现一个
逐 渐升 高 达峰值 趋势 (图 】)。
2．2 POD 同工酶谱 变化
从 电泳 同工 酶谱 上 可 以清 楚 地 看到 ，在 萝 h贮藏
过程 中 ，不 同萝 h品种 及 同一 萝 品种 不 同贮藏 时期
同工 酶谱 带 明显差异 ，贯 穿 整个 贮 藏期 的 C和 D 带是
m i n
圈 l 萝 卜贮藏期 POD活性变化
Fig．1 Change of PoD activity of rndidh
dudng winter~tored stage
所 有品种 共 有 ，B带在 不 同品种 阃有一个 从 弱到强 ，或 消失的特 征性变 化 ，A 带 仅在 个别 品种 ，
个别 时期 出现 ，薄层 扫描 也显示 在萝 卜贮藏 过程 中 POD 同工酶谱 有明显 差异 (详 见 图 2、3、4、
5)。
喜 3 l^l言 篙 }N￡ 垦 一旱f嚣
维普资讯 http://www.cqvip.com
1期 李金亭 等 ：萝 1、贮藏期过 氧化物 酶活性及 同工酶谱 研 究 61
D—
C—
B一
^一
月／,~nth
D—
C一
8一
^一
月h~nth
圉 2 地黄英萝 贮藏期 POD同工酶凝腔电诛 图谱及薄层扫描
Fig．2 POD ~mgenzynle PAGE and dt~al wavelength chromato screen of
Dihua~gying radish dvrlng winter stored stage
讨 论
周 3 丰 光 萝 贮 藏 期 POD 同工醣 凝 胶电 泳 图谱 及薄 层 扫 描
Fig．3 POD tsoenzyme PAGE and du．1 wave length chron~to n of
Fengguang radi~ during winter stored stage
植物进入贮藏期后，其与环境之 间的物质交换过程减弱．尤其是营养物质的获得 几乎停
止。而植物在贮藏过程 中，细胞内仍进行着一系列生化反应 ，其中进行最剧烈地应一氧化还原
反应 ，低温贮藏条件下，马铃薯“’块茎 和苹果” 、善术瓜“ 等植物的果实 中POD括性增加 ，在
与成熟有关的软化过程的中点里峰值 ，并且有 POD同工酶带的消失与新生。POD的活性变化
在萝 冬贮期也存在类似现象，所不同的是萝 POD括性是随贮藏时 间延长逐澈增高，高峰
期位于 4月份。正值萝 I-春化作用结束 ．繁殖器官开始形成时期，而不是地温最低时期 1月份。
这表明，不仅低温可导致过氧化物酶活性增加，而春化有可能与PODl栝性有关 ． 在ll’
维普资讯 http://www.cqvip.com
62 广 西 植 物 2O卷
D ——
C —
B —
A ——
3 4
罔 4 短叶青萝 I-贮藏期 PoD同工酶凝胶 电图谱及薄层扫描
Fig 4 POD isoenzvrne PAGE and dual wave]ength ch romato screeno{
Dua1w eqing radish du rulg l-” r store—l stage
月／month 12 3 4
罔 5 心 美萝 贮藏期 POD同工酶 凝胶 电诛图谱及薄层扫描
F 5 POD isoenzyrne PAGE and dual wavelength chromato screeno{
Xinlimei radish du ring winter stored stage
春化作 用过 程中究 竟起什 么作用 尚有 待进一 步研究 。
从贮藏期萝 聚丙烯酰胺凝胶电泳同工酶谱及薄层扫描分析观察 。萝 b过氧化蝣酶同工
酶分 子量 比较接 近 ，电泳谱带 比较集 中地位 于负极 区域 ．可以推 测 ，其 氨基酸 组成 上 以中 性氨
基酸和碱性氨基酸为主，分子量较大两条酶带 C、D两条谱带存在于不同品种萝 b及整个j亡藏
期 ，并且 D谱带含量相对稳定，c带在不同品种 间及贮藏期的不同时间内含量变化较大，此
外 ，尚有新的酶带出现表现在 B带及 A带的差异，POD同工酶谱带多少与酶比活性之闻无相
关性，或许与酶最适 pH不同有关。由于萝 b贮藏期较长且均处于翟度较低时期 ，POD蒲蜂噩
维普资讯 http://www.cqvip.com
l期 李 金亭 等 ：萝 b贮藏 期过氧化 物酶活性 及 同工 酶谱研 究 63
酶谱 变 化可能 与植物 对低温抗性 有 关 。当植 物不再 从外界摄 取营养 ，也不 能利用 光合 作用 自身
产 生营 养成 份 ，只有靠 贮存 能 量的消耗 ，物 质分解结 果会 相伴 产生大 量 H 0 ，POD用于 消除
代谢 中产生 的 H () ，防止过氧化物 对细 胞膜 系统 的伤害 作用 ，保 持细 胞结 构的 完整性 ，提高细
胞 对衰老及不良环境 的抗性。处于生长停顿期的萝 体 内POD活性增加 ，可使 IAA 降解加
速 ，使 植 物个体 激素水平 与代谢 相适应 。当春化 结束 后植 物个 体新 的组织 形 成 ，POD活性 增
加有 利干 术质 素的台成 因此 ，在 整个贮 藏期 POD同工酶谱 变化有 可能与 POD所起 作用 不 同
有关 ，虽 都是分 解过氧 化物 ，但底物 不 同，所产生 效应也不 同 。POD底物 的专一性 相对较低 ，或
许也 使分布 在不 同部位 ，出现在 不 同时期 POD具有其 相对独特 作用
参考文献 ：
C13曾纪晴．刘鸿先．王 柔等．黄瓜幼苗子叶在低温下的光抑制及其恢复[J3．植物生理学报 ．1997．23(1)：l5
～ 20
[2]刘曼西 病原 激发子对番茄 阴离子过氧 化物酶表谜 与反应性氧 进发的诱导 [J]．植 物生理学 报 ．1997．23
(3) 22【卜 一226
C33 Sm~cbo M aria A ．Forche~ti S M ．Pliego F er a1．Peroxkla,*e activity and isoenzymes in the culture mdeium of
NaCI dapted tOrl}I ro suspension cells．Plant ceUEJ3，Tissue and Organ Culture．1996．44：161～167
[4]张龙翔．张庭芳．李令援 生化实验方法和技术(第二版)EM3 高等教育出版杜 ．北京 ：1 997．163
C53胡能书 ．万贤国 同工酢技术 及其 应用[M]．长沙 ：湖南科学出版社 ．1985．74
[6]M izuno M ．Kanwi M ．Tsuehida H． A~orbate peroxldase and Catalmse cooperate for protection against hy—
drogen peroxide generated in[~otato tabers during low·temperature storage[J]．Biochem Mol B／o／I,a．
I 998．44(4) 71 7～ 726
[7]Ingham LM t Parker M I W ald ron KW ．Peroxida~：changes in soluble and bound forms during maturation
and ripening of applesEJ]，Physiot Pla~#．1998，102(1)：93～100
(83 Cano M P，Lobo MG ，and Aneos B．Peroxidase and polyphenol oxidar,e in long·term frozen mm pa·
paya slices Differences among hermaphrodite and femala papaya fruitsEJ]．J scI F。 d Ag c．1998，76
【1) I35～ I 41
[9]崔克明．罗海龙．李举怀等．掬树形成层的恢复活动及其过氧化物尊同工醇的变化EJ]．檀物学报 ．1993，
35： 8(】～ 587
维普资讯 http://www.cqvip.com