全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 29(4)：514— 517 2009年 7月
猕猴桃实生苗再生体系的建立
周玲艳 一，秦华明3，赖幸韵1，陈楚欢 ，梁 红1
(1．仲恺农业工程学院 生命科学学院，广州 510225；2．华南农业大学生命
科学学院，广州 510624；3．暨南大学理工学院，广州 510623)
摘 要 ：以成熟饱满的美味猕猴桃种子发芽获得实生苗 ，分别以实生苗的茎段、叶柄和叶片为材料建立了再
生体系。结果表明：种子以 2．5 mg／L的赤霉素(GA3)处理 8 h较适合；以培养基发芽较为适合 ；茎段 、叶柄和
叶片的愈伤组织的诱导率均为 100 ，且茎段、叶柄 比叶片容易脱分化 ，但叶片的平均出苗率最高。再生苗在
移栽 5d后，开始长出新叶 ，10 d后就能完全适应外界环境 。
关键词 ：猕猴桃；实生苗；外植体；再生体系
中图分类号：Q943．1 文献标识码：A 文章编号 ：1000-3142(2009)04-0514-04
Establishment 0f regeneration
ystem kiwifruit seedlingss Ot lo l
ZHOU Ling-Yanl一，QIN Hua-Ming0，LAI Xing-Yunl，
CHEN Chu_Huan1．LIANG HongI
(1．Colege of Li Science，Zhongkai Agriculture and Enginering University，Guangzhou 510225，China；
2．College of Li Science，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China；
3．Colege of Science and Technology，J inan University，Guangzhou，510632，China)
Abstract：The ful and mature seeds of kiwifruit were germinated to obtain the seedlings，and the regeneration system
was established by using the stems，petioles and leaves as explants．The results showed that：the concentration of
GA3 which was appropriate tO treat the seeds was 2．5 mg／L and the treatment time was 8 h；the medium was more
suitable for seed germination；the stems and petioles was easier tO dedifferentiation than leaves，however，the average
emergence rate of leaves was the highest．
Key words：kiwifruit；seedling；explants；regeneration system
现今，植物组织培养技术 已逐步完善，但木本植
物的组培育苗难度仍较大，常易出现褐化和玻璃苗
等现象，组培苗后期的生根也有困难，至今木本植物
组培育苗的成功率仍明显低于草本植物(阳小成等，
2002)。
系统研究猕猴桃组织培养的方法，具有重要的实
际意义。首先，植株再生体系的建立为使用基因工程
方法改进猕猴桃品质奠定重要基础；其次，组织培养
技术在猕猴桃中的开展，有利于快速繁殖大量的优质
种苗。本文以成熟饱满 的猕猴桃种子萌发所得的实
生苗为材料，对猕猴桃再生体系进行了初步研究。
1 材料与方法
1．1材料
美味猕猴~,(Actinidia deliciosa)的饱满成熟种子。
1．2方法
1．2．1实生苗的获得 将种子用清水洗净后，用2．5
收稿日期 ：2007—09—13 修回日期 ：2008—04—25
基金项目：广东省科技计划项目(2005B60301010)；仲恺农业工程学院校基金(G3051312)[Supported by Science andTechnology Pr~ect ofGuangdong
Pro~nce(2005B60301010)；Fund of Zhongkai Agriculture and Engineering UnjVersity(G3O51312)
作者简介：周玲艳(1972一)，女 ，湖南衡 阳人，博士研究生，副教授，主要从事植物生物技术研究。
。通讯作者(Author for correspondence，E—mail：lhofiee@yahoo．com．cn)
4期 周玲艳等：猕猴桃实生苗再生体系的建立 515
mg／L的赤霉素(纯度为 9O ，配置时以少量 95
乙醇助溶)溶液分别浸泡 5、8、15、20、24 h以打破种
子休眠，然后以 2 的次氯酸钠消毒 15 min，灭菌水
冲洗 3～5次 ，将种子用镊子分别接种于 MS基本培
养基 和带湿润滤纸 的灭菌培养皿 中，并定期加无菌
水以保持滤纸的湿润，统计种子的发芽势和发芽率。
待小苗出现两片绿色子叶时 ，将其转人生根培养基
生根培养。
1．2．2不定芽的诱 导 待小植株 长至大约 8 cm 高
时，切取其叶片 、叶柄和不带腋芽的茎段分别接入不
定芽诱导 培养基 中，叶 片切块 约 为 0．5 cm×0．5
cm，叶柄和茎段 长约 0．5 cm。每瓶 约含 4块外植
体，每种外植体各约 l0瓶。26℃，每天光照 12 h，
定期观察外植体愈伤组织和不定芽诱导情况。
1．2．3生根、驯化与移栽 将不定芽苗丛用解剖刀
一 棵棵分开来，并转移到生根培养基上，每瓶约含 5
棵苗，小苗生根培养约 70 d后，根系发达，此时对广
口瓶内的苗进行炼苗，每天逐渐增加开盖时间，到炼
苗第 7天时 ，洗净小苗根上的培养基 ，种植在细沙盆
中，置于靠窗边的培养架上，每天浇水一次以保持沙
土湿润 。
表 l 赤霉素浸种时间及发芽方式对种子发芽率的影响
Table l Effect of immersion time with GA3 and
the germinating condition on the rate of germination
赤霉素处理时间 发芽率 Germination rate(％)
Treatment time
of GA3(h) 滤纸 Flter paper 培养基 Medium
70．5
91．7
50
49．8
52．3
40．9
71．4
48．6
49
53．9
2 结果与分析
2．1赤霉素浸种时间及发芽方式对种子发芽的影响
表 1和图 l、2的结果表明 ，赤霉素浸泡种子 以
8 h为宜，其 中，滤纸和培养基 的发芽率分别为
91．7 9，6和 71．4 。两种发芽方式的发芽率差异受
赤霉素浸种时间的影响，尽管两者最大发芽率均以
浸种 8 h为宜，但浸种时间小于 8 h时，培养基上的
种子发芽率明显低于滤纸上的，而当浸种时间延长
至 15 h时，两者的发芽率相差不大，均在 5O 左右。
另外，滤纸上的种子萌芽较快，1周左右破芽萌发，
10 d左右露出子叶，而培养基上的种子萌发较慢，
一 般要 10 d以后才破芽萌发，但培养基上的小苗后
期生长较快 ，且培养基发芽不需要定期加水 ，从而减
少了污染 ．所以在种子充足的情况下，选择培养基发
芽方式可减轻工作量。
罔 1 猕猴桃种子培养基上发芽情况
Fig．1 Tim germination of seeds on medium
图 2 猕猴桃实生苗生根情况
Fig．2 The root of seedling
表 2 不同外植体的培养效果
Table 2 Condition of differentnt explants in culture
外植体类型
Explants
type
2．2不同外植体的不定芽诱导
表 2和图 3、4的结果表明 ，茎段的愈伤组织起
始最早，一般接人培养基 1周左右开始从切口处形
成愈伤组织，培养 2周左右茎段基部完全愈伤组织
化，外植体膨大至原来 3～4倍 ，部分位置开始分化
形成绿点，进一步分化形成小苗。而叶柄切段接种
在基本培养基上，经 3 d培养，外植体切口处开始膨
大外凸，l周后叶柄切段在切口处产生少量淡绿色
愈伤组织，出现愈伤组织的时间比茎段稍晚。2周
后，愈伤组织上出现多个白色芽点，进一步形成不定
芽，且叶柄愈伤组织化程度也比较高。叶片接种后
继续伸长增大至大约原来体积的 2倍，lO～15 d左
～
不化肌 诱[翟
一

4期 ‘ 周玲艳等：猕猴桃实生苗再生体系的建立 517
苗生长后期，滤纸上的小苗生长较慢，而培养基上的
幼苗反而生长较快。
本试验发现叶柄 、茎段 比叶片容易脱分化 ，已有
不少研究者(姜长阳等，2003；余小林等，2004；曾建
军等，2006)报道了不同外植体的脱分化和再分化存
在较大差异，这可能与不同外植体中细胞的分化程
度不同以及内源激素水平不同有关。本实验在叶片
的培养中发现，愈伤组织大多数首先在叶脉和叶缘
的切口处产生，Mushtaq等(1997)也报道了类似现
象，认为可能是外植体边缘容易从培养基中吸收有
图 5 再生苗移栽后的情况 (1：幼苗移栽 5 d；2：幼苗移栽 70 d)
Fig． The transplanting of regenerated plants(1：5 d after transplanting；2：70 d after transplanting)
效的营养和激素所 导致；本实验还发现 ，同一叶盘绿
色的小芽点首先出现在中脉形成 的愈伤组织上，这
与Nabila&Mohannad(2000)的报道一致。在猕猴
桃叶柄和茎段培养中，叶柄和茎段切段两端伤口首
先形成愈伤组织，然后由愈伤组织分化形成不定芽。
试管苗的移栽是再生体系建立最后的关键。本
实验中发现再生植株在移栽后 的前几天 ，叶片出现
萎焉和脱落，但几天后重新发出芽来，罗成科等
(2007)在半夏再生苗的移栽中也发生类似情况。丁
士林等(1997)认为闭瓶强光锻炼，使试管苗从以异
养为主逐步过渡到以自养为主，同时认为创造适宜
的移栽条件也是非常重要的，如气 温不过 3O℃，相
对空气湿度在 9O 以上等。汪建亚等(1998)认为
试管苗成活的关键在于移栽后较高的湿度和良好的
通风条件。本试验采用 的沙粒疏水性 比较好，但保
水性较差，根据这一点，每天浇水两到三次，保证基
质湿润，并以保鲜膜搭成小棚 ，棚 内放置 2个装满水
的烧杯，以保持空气的湿度，提高移栽成活率。移栽
前还应将再生苗根部的培养基洗除干净，但同时应
注意保持根的完整性以保证小苗的成活率。
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