全 文 ：北方园艺２０１２（０５）：１３５～１３６ ·生物技术·
第一作者简介：王克凤（１９８５－），女，在读硕士，现主要从事植物组
织培养研究工作。
责任作者：顾德峰（１９５６－），男，教授，现主要从事园林植物组织培
养工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｋｆ－２００９＠１６３．ｃｏｍ。
基金项目：吉林省科学技术厅资助项目（２０１００２５９）。
收稿日期：２０１１－１２－０８
槭叶草离体快繁的研究
王 克 凤，赵 春 莉，陈 立 飞，赵 和 祥，董 　 然，顾 德 峰
（吉林农业大学 园艺学院，吉林 长春１３０１１８）
　　摘　要：以槭叶草实生无菌苗为外植体，ＭＳ培养基为基础，通过添加不同种类和浓度的激
素，筛选出槭叶草组织培养的最适培养基。结果表明：种子较好的灭菌时间为０．１％升汞６ｍｉｎ；
增殖的最适培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ　０．１ｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｇ／Ｌ，其增殖倍数高达５．１，并且苗生长状态
良好；生根最适培养基为１／２ＭＳ。
关键词：槭叶草；实生苗；组织培养
中图分类号：Ｓ　６８１．９０３．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１２）０５－０１３５－０２
　　槭叶草（Ｍｕｋｄｅｎｉａ　ｒｏｓｓｉ（Ｏｌｉｖ．）Ｋｏｉｄｚ）为虎耳草科
槭叶草属多年生草本植物，株高１０～３０ｃｍ，产于东北长
白山一带，多生于海拔３００～９００ｍ的水边沟谷石崖上及
江河边石砾上［１］。其嫩叶是长白山人民广泛食用的特
色野菜；东北通化地区民间有用其根部水煎液口服，据
称心脏病人服用后夜间睡眠良好；同时槭叶草也是长白
山良好的早春地被花卉，是难得的集食用、药用与观赏
为一体的植物资源［２－３］。
虽然槭叶草可以用种子和分株法进行繁殖［４－５］，但
因其有限的分布区域及特殊的生长环境决定其资源的
有限性，加之近年来人们的随意采挖，槭叶草数量急剧
减少。现已被列入１９８４年国务院环境保护委员会公布
的，１９８７年由国家环保局、中科院植物所修订的中国稀
有濒危保护植物名录（ＩＩ）中，此名录系由中科院植物研
究所编制，虽尚未经批准发布，但是依旧能够说明槭叶
草的重要价值。组织培养技术是解决槭叶草快速繁殖
的有效途径之一，可为工厂化育苗提供理论依据，亦可
为其开发利用奠定基础。
１　材料与方法
１．１　试验材料
材料来自吉林农业大学校园实验区，５月下旬收集
槭叶草种子，净种后放入４℃冰箱备用。
１．２　试验方法
１．２．１　无菌苗的获得　槭叶草种子细小，大概为１ｍｍ
左右，因此不能采用常规的外植体灭菌方式。需随机选
取少量的槭叶草种子，用滤纸包裹折成２ｃｍ２大小。在
无菌的条件下用０．１％升汞灭菌，最后用无菌水冲洗
６～８次，打开滤纸包，连同滤纸片一同接种于 ＭＳ＋蔗糖
３０ｇ＋琼脂粉６ｇ培养基上。接种后逐日观察种子的萌
发情况，记录种子萌发后肉眼可见的时间。
１．２．２　不定芽的增殖　无菌植株长到１．５～２．０ｃｍ左
右时，将其从瓶中取出，切掉根后接种到增殖培养基中
进行增殖培养。增殖的基本培养基为 ＭＳ培养基，其中
添加不同种类及浓度的植物生长调节剂。每个处理１０
瓶，每瓶１个外植体，３次重复，于培养室内培养３０ｄ后
统计芽的增殖率。
１．２．３　根的诱导　当槭叶草的增殖苗长至苗高＞２ｃｍ
时，将其分割切下成单株，接种到生根培养中诱导生根。
生根的基本培养基为 ＭＳ、１／２ＭＳ、１／４ＭＳ及在１／２ＭＳ
中添加不同浓度的ＮＡＡ（表３）。试验每个处理１０瓶，
每瓶１个外植体，３次重复，２０ｄ后统计植株的生根率及
平均根长。
１．２．４　练苗移栽　当试管苗的根长至２～３ｃｍ时，便可
出瓶移栽。移栽前，在常温自然光照条件下将瓶塞打
开，练苗３～５ｄ。将槭叶草组培苗从瓶中慢慢取出，洗
去根上附着的琼脂培养基，移植到已经配好的以草炭为
基质的底直径为５ｃｍ的小钵中，上套塑料袋保湿。
２　结果与分析
２．１　不同灭菌时间对槭叶草种子萌发时间的影响
由表１可知，在用０．１％升汞进行不同时间的灭菌
时，不同的灭菌时间对槭叶草种子萌发时间的影响是不
同的。随着灭菌时间的增加，种子萌发的时间也逐渐增
长，在处理６ｍｉｎ时，种子萌发的时间最短为４ｄ，且污染
率为０。但是并不是随着灭菌时间的减少，种子萌发的
　　　表１　不同灭菌时间对槭叶草萌发时间的影响
　　Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｓｅｅｄ
　　　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｕｋｄｅｎｉａ　ｒｏｓｓｉ（Ｏｌｉｖ．）Ｋｏｉｄｚ
灭菌时间
Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
萌发时间
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ／ｄ
污染率
Ｒａｔｅ　ｏｆ　ｐｏｌｕｔｉｏｎ／％
６
７
８
９
４
５
６
６
０
０
０
０
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·生物技术· 北方园艺２０１２（０５）：１３５～１３６
时间也逐渐缩短。当槭叶草种子的灭菌时间＜６ｍｉｎ
时，种子萌发的时间也是４ｄ，且有污染的情况发生。
２．２　不同培养基对槭叶草不定芽增殖的影响
由表２可知，外植体基部开始形成幼芽，３０ｄ后形
成大量的丛生芽，在基本培养基 ＭＳ中添加激素６－ＢＡ
０．１ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ，槭叶草的增殖效果最好，
增殖率高达５．１，随着细胞分裂素与生长素浓度比的增
高，增殖芽的数量也增多，但是新植株的叶片出现细长、
徒长等不健康状态，且丛生苗整体过于细弱，不适于继
续增殖及生根移栽。当细胞分裂素的浓度高于０．１ｍｇ／Ｌ
时，植株的情况与高浓度激素比下生长的植株相似，均有
大量的细弱丛生苗产生，不利于槭叶草的增殖。这说明在
该试验所设计的激素浓度范围内，较高浓度的细胞分裂素
及生长素比都不适合槭叶草的增殖继代培养。
表２　不同培养基对槭叶草不定芽增殖的影响
　　Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
　　　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｏｆ　Ｍｕｋｄｅｎｉａ　ｒｏｓｓｉ（Ｏｌｉｖ．）Ｋｏｉｄｚ
培养基
Ｃｕｌｔｕｒｅ
ｍｅｄｉｕｍ
接种数量
Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
ａｍｏｕｎｔ
增殖个数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
增殖倍数
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｍｕｌｔｉｐｌｅ
诱导情况
Ｓｉｔｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
６－ＢＡ　ＮＡＡ
０．１　０．０５　 １０　 ４０　 ４．０
产生大量丛生苗，但整体过于细弱；整
株有根
０．１　０．１０　 １０　 ５１　 ５．１
少有细弱丛生苗，多数植株健壮；整株
有根
０．５　０．０５　 １０　 １５　 １．５ 丛生苗过于细弱；无根
０．５　０．１０　 １０　 ４６　 ４．６ 产生大量丛生苗，但整体细弱；有根
１．０　０．０５　 １０　 ４８　 ４．８ 多数丛生苗过于细弱；无根
１．０　０．１０　 １０　 ３７　 ３．７ 产生大量细弱丛生苗；有根
２．３　不同培养基对槭叶草生根的影响
由表３可知，以１／２ＭＳ培养基最佳，生根率高达
９７％。而一些报道中介绍的加入 ＮＡＡ利于植物生
根［６］，在槭叶草中并不适合，在以１／２ＭＳ为基本培养基
中无论加入浓度多大的ＮＡＡ，都不利于槭叶草的生根，
生根率皆为０。因此，诱导槭叶草的生根不需要加入
ＮＡＡ，只以空白的１／２ＭＳ培养基最佳。
２．４　试管苗的移栽
选择生长健壮且已生根的槭叶草试管苗（图１－ａ，ｂ）
出瓶移栽。１周后调查统计，其成活率高达９０％，幼苗生
长健壮，叶片明显变大、变绿，并有新叶长出（图１－ｃ）。移
栽过程中发现，在移栽的初期套袋以保持一定的空气湿
　　　
　　表３　不同培养基对槭叶草生根的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｎ　ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ
Ｍｕｋｄｅｎｉａ　ｒｏｓｓｉ（Ｏｌｉｖ．）Ｋｏｉｄｚ
培养基
Ｃｕｌｔｕｒｅ
ｍｅｄｉｕｍ
ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｒａｔｅ／％
平均根长
Ａｖｅｒａｇｅ　ｒｏｏｔ
ｌｅｎｇｔｈ／ｃｍ
生根状况
Ｓｉｔｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｏｏｔｉｎｇ
ＭＳ
１／２ＭＳ
１／４ＭＳ
１／２ＭＳ
１／２ＭＳ
１／２ＭＳ
０
０
０
０．１
０．５
１．０
８５
９７
７０
０
０
０
１
２～３
１
０
０
０
根粗壮、短小
根粗壮，数量多，植株生长良好
根系不发达，多为气生根
无根
无根
无根
图１　槭叶草试管苗（ａ、ｂ）及移栽幼苗（ｃ）
Ｆｉｇ．１　Ｔｅｓｔ　ｔｕｂｅ　ｐｌａｎｔｌｅｔ（ａ，ｂ）ａｎｄ　ｓｅｅｄｉｎｇ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ（ｃ）
ｏｆ　Ｍｕｋｄｅｎｉａ　ｒｏｓｓｉ（Ｏｌｉｖ．）Ｋｏｉｄｚ
度，槭叶草试管苗移栽就较易成活。
３　小结
从槭叶草种子的萌发时间及污染情况来看，最适的
灭菌时间为６ｍｉｎ；槭叶草不定芽增殖的最适培养基为
ＭＳ＋６－ＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ。该条件增殖倍
数达５．１，且苗生长状态良好，能够满足快繁的目的；生
根的适宜培养基为１／２ＭＳ，且不加入ＮＡＡ；当试管的根
长２～３ｃｍ时，常温自然光条件下练苗３～５ｄ，移栽成活
率高达９０％。
参考文献
［１］　王文采．中国长白山植物资源志［Ｍ］．北京：中国林业出版社，２０１０．
［２］　柏广新，崔成万，王永明．中国长白山野生花卉［Ｍ］．北京：中国林业
出版社，２００３．
［３］　黄弘轩，任同庆，韩文志．槭叶草对兔心房肌的正性肌力作用［Ｊ］．吉
林医学院学报，１９８８，２（２）：２１－２３．
［４］　李爱民，李昌禹，路文鹏．槭叶草的繁殖［Ｊ］．特种经济动植物，２００８
（７）：４０．
［５］　宫敬俐．槭叶草驯化栽培技术研究［Ｄ］．北京：中国农业科学研究
院，２００７．
［６］　刘敏．花卉组织培养与工厂化生产［Ｍ］．北京：地质出版社，２００２．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｒａｐｉｄ　Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｏｆ　Ｍｕｋｄｅｎｉａ　ｒｏｓｓｉ（Ｏｌｉｖ．）Ｋｏｉｄｚ
ＷＡＮＧ　Ｋｅ－ｆｅｎｇ，ＺＨＡＯ　Ｃｈｕｎ－ｌｉ，ＣＨＥＮ　Ｌｉ－ｆｅｉ，ＺＨＡＯ　Ｈｅ－ｘｉａｎｇ，ＤＯＮＧ　Ｒａｎ，ＧＵ　Ｄｅ－ｆｅｎｇ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｊｉｌｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ，Ｊｉｌｉｎ　１３０１１８）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＭＳ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉａ　ａｎｄ　Ｍｕｋｄｅｎｉａ　ｒｏｓｓｉ（Ｏｌｉｖ．）Ｋｏｉｄｚ．Ｕｓｅｄ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｆｒｏｍ
ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｓｅｅｄｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ａｎ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｖｉａ　ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ｏｆ　ｃｙｔｏｋｉｎｉｎ　ａｎｄ　ａｕｘｉｎ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｓｅｅｄｓ　Ｍｕｋｄｅｎｉａ　ｒｏｓｓｉ（Ｏｌｉｖ．）Ｋｏｉｄｚ　ｗａｓ　１％ ＨｇＣｌ２６ｍｉｎ．
Ｔｈｅ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　５．１ｔｉｍｅｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ＭＳ＋６－ＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ
ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　１／２ＭＳ．Ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｗａｓ　ｓｈｏｗｎ
ｔｏ　ｂｅ　ｕｐ　ｔｏ　９７％．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍｕｋｄｅｎｉａ　ｒｏｓｓｉ（Ｏｌｉｖ．）Ｋｏｉｄｚ；ｓｅｅｄｌｉｎｇ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ
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