全 文 ： ! ： ： 兰兰
文章编号 ：1 000—3142(2000)04—0367—04
沙田柚花粉低温贮藏的研究， 酝 驴尸
薛妙男，
t广 西 师范大 学生 物系 ．广 西桂 林 541004)
摘 要 ：研 究 了脱 水 时间 ．化冻 方式 和 培养 基 对沙 田柚 (Citrus grandis vat．shatinyu Hort )花 粉
低温贮藏后萌发 率的影响 。结果表明：贮藏 3个月，6十月期间．脱水 50mln的花粉萌发率最高 ；
沙田抽花粉低温贮藏的最适含水量为 13 5 。沙 田柚花粉适合快速化冻法。在 4种培养基中．萌发
率无显著差异 ，但花粉管生长不一致
关键词：芝旦苎；踅塑
中 田分 类号 ：Q945．34
低温 贮 藏
文 献标 识码 A
。幕布。 葡歧
Study on l ow tem perature preservation of
shatinyu’S pollen
XUE Miao—nan，LIU Hua—ying，RAo Gui—rong，YANG Ji—hua
(Depa~mem。，biology—G~ngxiⅣ一 Uniters ，Gu[in 541004一china)
Abstract：The effects of the dried time ，the ways of thaw and culture medium s oil the germination
rate of po llen low temperature preservation ia Citrus grandis vat．shotinyu Hort． were studied．The
results showed that the germ iNation rate of pollens being dried for 50 minutes％vss the highest during a
period of 90 or 180 days’preservation，and that the most suitable moisture for shatinyu’s pollen low
tempe rature preservation was 13．5 ．It was a sultab[e method for the stored polens to be thawed
fast．There is nD obvious diference of the germination rate in the four culture med iums，however．the
po len tubes grew differently．
Key words：Shatinyu；po Len；low temperature preservation
目前，花粉原生质体 ，生殖细胞 ，精细胞的分离已取得了很大进展“’”，而且 自交不亲和
识别中花粉 S基因产物的分离纯化已成为国内外植物生殖生物学研究的一太热点和难点 因
此，给花粉贮藏 中生活力的保存赋予了新的意义。沙田柚为配子体 自交不亲和植物，我们用
沙田柚花柱中提取纯化的糖蛋白进行了柚类花粉的萌发实验。 。沙田柚新鲜花粉萌发率一般
在 55 左右，至于对其花粉进行低温贮藏刚未见报道，本文探讨了沙田柚花粉低温贮藏的方
收稿 日期 ：2000-03—26
作者茸介 ：薛妙男 (1937一)r女 ．教授 ，从事植物生殖生物学研究
基金项 且：国家 自嚣!；科学基金资助项日 (3976007)
维普资讯 http://www.cqvip.com
368 广 西 植 物 20卷
法，从而为进一步研究植物 白交不亲和花粉识别的机理提供实验材料。
1 材料和方法
1．1材 料
沙 田柚花药采 白桂林广西柑桔研究所实验地．为 4～5 a生酸砧树。
1．2方法
1．2．1花粉脱拳处理 收集当天开花的花药于电热吹风干燥箱中，22。c恒温脱水。首先，粗
筛选，将花粉脱水 0．5、1、2、3、3．j h，然后萌发。根据结果，再细划分脱水时间为 30、j0、
7o、90、12O min。脱水后抽气密封，贮藏在一80。c。未脱水的花粉同样条件下贮藏作为对照。
1．2．2化冻方式 一是快速化冻：40。c水浴或室温 (25 c)化冻，然后萌发；二是缓慢复
苏 ：将贮藏花粉置于饱和湿度下，相继在 4 C (1j h)和室温 (25℃ ，4 h)复苏 、再进行萌
发 。
1．2．3培 养基 试验 了 4种 培养基对贮 藏沙 田柚 花粉 活力 的影 响 。培 养基 (一 )：15 蔗糖 +
0．O1 硼 酸 +0．2 明胶 ；培 养基 (二 )：BKS1 5：L5 蔗糖 0．ui 硝酸钾 一0．02 硫酸镁 +
0．0 L 硼酸 +0．03 硝酸钙 +0．2 明胶 ；培养基 (三 )：Dickinson：1 5 蔗糖 +0．01 硝酸
钾 +0．001 硼酸 一0．03％硝 酸钙 +0．2 明胶 ；培养基 (四 )：0．4 mol／I PEG一400+0．01
硼酸+0．2 明胶。萌发时将花粉抖落在载玻片上，加培养基，使花粉分散均匀 ，置湿盒中．
300。C恒温培养。培养基及各种实验用品均经过高温灭菌处理。
1．2．4花将 葑发率测 定 取 萌发 8 h的花粉 ，碱 性品红染 色 ，显微镜 下观 察 ，拍 照 以花粉 管
长度 大于花粉直径计 为萌发 ，用 红血球 计数板随机 五点计数 ，统计 萌发率 。显 微测微 尺测量
花粉管长度。
1．2．5含 水量测定
每个处理样 品为 0．3 g花
药 ，在 105。C下恒温 45min
2 结 果
2．1最 适含水量 的选择 结 果
粗筛选 的结果为脱水 1 h
左右的花粉萌发正常，脱水 2 h
的有少量萌发，其余的不萌发。
据此 ，再细划分脱水时间后的
表 1 不同脱水时间和贮藏时间花粉的萌发宰
Table l Germination rate of polen in diferent
dried and storage time
萌发状况见表 1。显示脱水 5O～120 min的花粉在贮藏 3个月和 6个月时都能萌发，但随着脱
水时间增加 ，萌发率下降 其 中脱水 50 n-tin的花粉 (含水量 13．5 )萌发率最高 ，接近于新
鲜花粉 (萌发率为 55．42 ，含水量 47．5 )，且萌发整齐，花粉管不膨大，不扭曲 (图 I)。
因而，其含水量 I 3．5 为沙田柚花粉低温贮藏的最适含水量 。未经脱水处理的对照花粉不萌
发 。
2．2化冻方式对花粉萌发率的影响
一 80。c储存 30 d，花粉快速化冻后萌发率比缓慢复苏的高 ，而室温快速化冻与水浴化冻
维普资讯 http://www.cqvip.com
4期 薛妙男等 ：沙 田柚花粉低温贮藏的研究 369
问无差异 (P>0．05)，其后的萌发都采用室
温 快速 化冻 方式 。
2．3不同培养基中的萌发情况
如表 3所示 ，一80℃ 贮 藏 30 d，在 4种
培养基 中，花粉的萌发率接近，但花粉管长
度 表现 出 2个特点 ：一是脱 水 50m[n的 花粉
管长度 比脱水 70 min的要长；二是在培养基
(-)中花粉营长得较长 ，而在培养基 (二)、
(三 )中则 长得较整齐 。
订 化
花粉含水量是影响其贮藏的重要 因素
之一 。不 同植物其花粉贮 藏时的最适 含水量
圈 1录脱水 50 min贮藏于-80 C l80 d的萌发花粉 x20o
Fig 1 The g~rrainated polaris being dried for 50 minute~
during a F~ried of 18o days’pre~rvation at一80’C．XZO0
表 2 化蒜方式对花粉萌发率的影响
Tab Le 2 Effects of thaw way 0n germination te of polen
培养 基
Cubure medl⋯
脱水时同 Driedtime
萌发率( ) 花粉管 氏度(／too
Germination Length of t~lten
萌发率( ) 花粉营长度(胂 )
Germlnafion L~ngh pollen
Rate(~ ) tubes(~ ) rate( ) tubesQ~m
平均数士sD{Means~SD (N=50)
差异很大“ 。本文采取先粗筛选后细化分脱水时间的步骤来选择沙田柚花粉低温贮藏的最适
含水量，方法是可行的。我们认为沙田柚花粉低温贮藏的适宜含水量为 l1．2 ～13．5 ，最
适含水量为 13．5 ，且在一定范围内贮 藏时间对其萌发率无显著影响 。
化冻方式是彩响花粉低温贮藏后正常葫发的另一因素。实验表明，沙田柚花粉适宜快速
维普资讯 http://www.cqvip.com
370 广 西 植 物 2O卷
化冻，与一些植物成熟花粉低温贮藏后 的表现是一致的 。
比较 4种培养基 ，在 BKS15和 Dickinson中花粉管生长受到一定延滞，推测花粉低温贮藏
后 ，对一些离子如钾 ，镁离子等有些敏感，自身生理状态的调整需要的时间就稍长些。
沙田柚花粉萌发率低是遗传因素和外界困素共同作用的结果 。通过实验观察，找到 了，沙
田柚花粉低温贮藏的一种简单可行的方法，能较好保存其生活力，可为今后沙田柚花粉的原
生质体分离和 s基因产物分离纯化提供实验材料
参考文献 ：
：1]Tanaka I ，C Kitazuma．M Ito．The isolation and culture。{lily polen protoplasts[J]．Plant＆ 1 987
50 205～ 811
李文钿 自榆生活精细胞分离和保存直。研究 LJ] 植物学报 ，1998，40 (2)：122～125
杨小华 ，薛妙男 沙田柚花柱蛋 白对花粉管生长的影 响 l_J] 广西植物 1 998．18(2)：】60～
常维春 ．魏云洁等．人参 、西洋参花药超低温保存对花粉存活的影响 _IJ]．植物学通报 ．1 993，
58～ 59
韩长根．超低温 (一1 96℃ )贮藏杂交水稻恢复系花粉的研究 l_J] 作物学报，1996，22(1)：72
《广西植物 》1998年的被引半 衰期及其
在全 国各类科技期 刊中的位置
范文 田
(西南交通大学 ，四川成都 610031)
期刊的被引半衰期是指该刊上历年发表的论文在某一年 内被统计源刊所引用的次数中，
较新的一半是在最近多长的一段时间内发表的平均数。一般来说，此值越大 ，表明该刊上发
表的论文时效性较长，即多年前发表的论文仍在被大量引用 ，从而也说明该刊的影响更为深
远。因此 ，被引半衰期是衡量一种期刊老化速度的一种指标，从而也是目前被有关部门用作
衡量和评价科技期刊质量的一项重要指标。
现据中国科技信息研究所 1999年 10月公布的统计数据表明，继续人选为该所中国科技
论文统计源刊的 《广西植物》杂志 ，1998年的被引半衰期为 8．4年，位居该所当年人选的全
国 1286种科技论文统计源刊的第 29名，而在 4O种“生物”类专业的统计源刊中名列第 12位
飞 土 学 ¨ 晋
小 腾 连 ¨ ” 成 ¨ 胡 ～
Ⅲ ⋯
维普资讯 http://www.cqvip.com