全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 19 (3)：255—251 1999年 8月
文章编号：1000-3142(1999)O3—0255—05
短叶省藤种质离体培养保存研究
曾炳 山，许煌灿 刘 英，尹光天
— — — — — ～ — — — — — — 一
(中国林业科学研究院热带林业研究所，广东广州 510520)
6 7
摘 要：本文对短叶省藤种质的离体培养保存进行了探索性研究．结果表明：种质以丛芽形式，采
用 RE0保存培养基，在温度 12．5℃和光照 300lx×12 h／d的保存条件下，可安全保存 埽 个月以
上，保存率>25％，丛芽平均高生长小于 2．2 c／rL,种质保存一年后，转接至增殖或生根培养基，
仍可诱导增殖和生根。结果表明离体保存具一定可行性，其保存模式可预定为：增殖培养 2个月+
离伴保存 18个月的循环模式．
关键 短叶省藤：种质：离休培养保存；保存率：保存模式
中圉分婪号：Q943．1 文献标识玛：A
In vitro conservation of germplasm of Calamus egregt’us
ZENG Bing-shan，XU Huang-can,LIU Ying，YIN Guang--tian
( Researchln~tauteofn叩 d，Fo~try，Guangzhou 510520．China)
Abstract： This paper dca ]s with in vitro conservation of germplasm of Calamus egregius BurreL
Stored On RE0 medium with temperatur~of 12．5± 0．5℃ and ilumination of 300± 50 lx× 12
hours／day,clumps with I～ 3 buds can be preserved safely for 18 months without trans fer and the
surv ival rate >25％ ，the be ight increment<2．2 em．After OUe years co ns ervation． when transfer：
red onto proliferation or rooting med ia
，
the germplasm can stil be induced to multiply or to root．／n
Vitroco ns ervationproc,odur~ofgormplasm ofCalamus egregiusco uld be scheduledas a circulation
of2 months proliferation culture -I-18 months-co ns mvation culture． ，
Key words： Calamus egregius；germplasm；／n~itro conservation；preserved ratio；co ns erv ation pro —
cedure
80年代以来，我国先后在海南、广东和广西等地建立了藤种园和收集圃，共收集 ／引种棕榈藤 3
属 49种 6变种，保存 36种 5变种 (11．然而，迁地和原地保存的种质资源因各种原因而不断丢失。
在广州藤种基因库，60％以上的藤种遭受严重 鼠害，1 m 以下的萌蘖藤株被呲啃致死。 国外迁地保
l 骨一日期：1998--07-13
作者 曾炳山 0969-)，男，顶士，助理研究，主要从事#术组培和蘑类栽培研究。
基叠璜目：本研究为国家基金 棕榈藤萌蘖机理研究 09470597)~中国林业科学研究皖基金‘棕榈藤种质保存方法的研
究 (968611吣的研究 内容之一，
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存的种质则普遍遭受蛀杆害虫和大象的危害而不断丢失 。离体保存可以避免病虫害、气象灾害和
野生动物等导致的种质丢失 - 为此，我们开展了短叶省藤 (Calamus egregius Burret．)种质离体
保存的初步研究，现报道如下
1 材料与方法
1．1保存材料
选取 已增殖培养 7次，具 5～2O个单芽的短叶省藤离体丛芽作为试验材料，将其切分为 1—3芽
组成的芽丛，进行保存试验
1 2保存培养基和保存条件
MS0保存 培养 基为改 良的 MS培养基 ，其 大量元素 KN03，NH4NO3、CaCl2、MgSO4和
KH PO{的 含 量 为 O，5 MS， 有机物 肌 醇、 烟 酸， 盐酸 吡 哆醇 、盐 酸硫 胺 素、 甘 氨酸 的 含量 为 l_0
MS，微 量 元 素 KI、H3BO3、MnSO ZnSO Na2MoO4’ CuSO{、COC12 FeSO4的含 量 为 lJ0
MS，蔗糖为 4％ RE0保存培养基则 由短 叶省藤的增殖培养基改制而成，其大量元素 KN0 、
NH4NO3、CaCI2、MgSO{和 KH PO4的含量分别为 0 75 MS，0．3 MS，0．75 MS，0．75 MS和 l_0
MS，有机物肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇，盐酸硫胺素、甘氨酸的含量分别为 1．5 MS， ln0 MS， l_5
MS，2．0MS和 1．5 MS，微量元素和蔗糖的含量与 MSO保存培养基相同 种质置于 BPII 8l8型生
长箱，在 12．5±0．5℃恒温、300Ix x 12h／d光照的条件下保存。
1．3试验观测
观测指标包括：增殖芽数，芽高 芽体和叶片的形态等 种质萌发的新芽数计为增殖芽数：芽体
失绿变揭，水浸状，视为死亡；芽丛的所有芽死亡，则将芽丛视为死亡：芽高是指芽的活体高度 观
测频率为每 3个月 1次。
2 结果与分析
2 l保存种质的形态变化
种质 自增殖培养基转至保存培养基，在温度低、光照弱的保存条件下，1～2个月内处于适应状
衰 1
Table I Height growth ofi．vftro buds 0n diferent media
怠． ⋯ — 。 一一 ～
态，无明显高生长，无芽增殖，形态和颜色也无明显变化。至3个月时，部分芽体外层的老叶鞘开始
变褐，剪伤或少数极小的芽死亡：高于 1．5 cm 的芽，有一定的高生长，尤其是 已展叶的芽，一旦展
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3期 曾炳 山等： 短叶省藤种质离体培养保存研究 257
出新叶片，高度增加 1～2cm；部分芽丛开始增殖新芽：培养基基本不褐变。
保存 6～9个月，约半数芽的外层老叶鞘变揭死亡，内层叶鞘则呈稳定状态：带叶片的芽，叶尖
开始失绿变自；少数芽丛继续展叶或萌出新芽；部分培养基开始变揭，但无明显失水现象。
保存 l2～15个月，在 RE0培养基上，少数芽丛仍能萌发新芽和展新叶，但长出的新叶片先纵向
卷曲，而后横向外翻，需较长时间才得 伸展，且轻度缺绿，老叶则长出揭色绒毛 培养基因失水而
开始干缩。
保存 18～21个月，培养基的揭变和干缩明显加快，种质死亡加速。无叶的芽体，其外部叶鞘转揭变
黑后，内部叶鞘及芽心也变揭而死。具叶片的芽体，叶片基部或中部先白化或变褐，而后整芽死亡
2．2种质的高生长
保存过程中，具活力的芽，可观测到高生长，也有部分芽因活力逐渐丧失，叶尖或叶鞘顶部变褐死
亡，其活体高度则因顶都的死亡而短缩。伸睦和死缩的测定结果表明：在保存培养基 MS0上，具高生
长的芽迅速减少，保存 12个月后，仅 9．1％的芽体伸长；高生长的变化幅度大，在 n10-0．80 cm之
间，21个月的总高生长为 1 8 era；死缩芽的数量在保存 3和 12个月时出现两个高峰。在 RE0上，具
高生长的芽效递减慢，12个月后，仍有31．2％的芽体伸长：高生长的变化幅度小，在 0．23～0．45 cm之
间，但21个月的总高生长大，为2．17 cm；死缩芽的数量仅在保存 9～12个月时出现一个高峰。
2．3种质的增殖
保存过程中，种质受增殖培养植物生长调节荆的后续影响，部分芽丛会继续萌 1～2个芽。 在
MS0上，保存 3个月，7．7％的芽丛萌芽，至 6个月，仍有 2．4％ 的芽丛萌芽，而后停止萌新芽：在
RE0上，I8个月的保存期内，皆有一定比例的芽丛萌芽，2l十月后才无萌芽现象。
表2 种质增殖情况
Table 2 Proliferationofin vitrogermplasm
保存 12个月后，取出部分种质，转接到增殖培养基进行增殖培养，培养 2～3代 即可恢复原有增
殖系数，再进行生根诱导，生根率可达90％ 以上。
2．4种质的活力与数量变化
2．4．1种质的活力 随着保存时间的延长，种质逐渐丧失活力，保存的芽或芽丛逐渐死亡。在 MS0
上，芽丛的死亡高峰期出现在 6～9个月，累计芽丛死亡率由0％剧增至 41％，调查间隔期内死亡
的芽丛多，分别为 11和 14丛：在 RE0上，芽丛死亡高峰延后，保存 12个月时出现，累计芽丛死亡
率由 14．8％增至 31．1％，阃期内死亡的芽丛为 10丛 因而，以RE0作保存培养基，短叶省藤种质
易保持活力。
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表3 不同培养基 保存芽丛的生活力和数量变化
Table 3 Vitality andquantity changes ofin vitro bud clumpsondiferentmedia
保存
时间
Time
：motl
ths)
保存培养基 Medium MS0 保存培井基 Medium RE0
活芽
丛敛
累计污染车 芽丛保
Accumulative 存率
contam inated preserved
rcentage rcentage
(％) (％ )
累计糟染率 芽丛槔
Accltmllati~ 存率
~ nlaminated Preserved
rcentage rcentage
) (％)
保存3～9个月内死亡的母芽．其平均高 !竺!： 竺竺竺竺
度在l_0 cm以下。因此，高度>1．0 cm 罢 竺)_———————_三—旦— 三
5
或芽
cm 票 耋 A cumu lative percentage ofthedead惭 ⋯ >2． 的芽不易增殖，所以适宜的保存 “⋯⋯⋯⋯⋯⋯
高度为1．0～2．5 cm。 毫d d㈣ 0．65 0．56 om Il47]．68_I2B 3．130
受死亡和污染两个因素
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种质材料、 保存培养
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析
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3lI离体保存的可行性
短叶省藤离体种质，以丛芽形式，采用 RE0保存培养基，在温度 12．5℃和光照 300lx×12h／d
的保存条件下，其生长、增殖、抽叶．代谢皆显著减缓，保存 18个月．保存率 >25％．丛芽平均高
一
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露
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