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Determination of the plumbagin content in the stems of Plumbago zeylanica during different months in Guilin

桂林产白花丹茎不同月份白花丹醌含量测定



全 文 :广 西 植 物 Guihaia 32(3):424-426                                2012 年 5 月
 
DOI:10.3969/j.issn.1000-3142.2012.05.028
桂林产白花丹茎不同月份白花丹醌含量测定
杜泽乡
(桂林医学院,广西 桂林541004)
摘 要:采用高效液相色谱法(HPLC),对桂林产的白花丹茎中不同月份的白花丹醌含量进行了测定。结果
表明:在流动相为甲醇-水(70∶30),检测波长为254nm的条件下,白花丹醌在0.00048~0.0240mg·mL-1之
间线性关系良好;回收率为96.9%~100.0%,白花丹茎中白花丹醌含量10月份最高,这时也是白花丹茎生物
产量的高峰期,说明10月份是白花丹茎的最佳采收期。
关键词:白花丹;白花丹醌;含量;高效液相
中图分类号:Q946  文献标识码:A  文章编号:1000-3142(2012)03-0424-03
* Determination of the plumbagin content in the
stems of Plumbago zeylanica during
different months in Guilin
DU Ze-Xiang
(Guilin Medical College,Guilin 541004,China)
Abstract:The plumbagin content in stems of Plumbago zeylanica was determined during different months in Guilin,
China,using RP-HPLC,methanol and H2O(70∶30)as mobile phase and UV detection at 254nm.Linear range o-
ver 0.00048-0.0240mg·mL-1 of plumbagin was obtained.Recovery rate was within 96.9%-100.0%.The con-
tent in stems of P.zeylanica was the highest in October when the plant was the most thriving and biggest in size.It
was therefore considered that October was the best time for colecting stems.
Key words:Plumbago zeylanica;plumbagin;content;HPLC
  白花丹(Plumbago zeylanica)为蓝雪科(Plum-
baginaceae)植物,主要分布在东南亚和我国的华
南、西南地区,为东南亚及中国多民族药材。白花丹
味辛、苦、性温、微毒,临床上用于治疗风湿性关节
痛、跌打损伤、痛经、癣癞、瘰疬、蛇伤、疟疾等。其
根、茎、叶、花均可作药用。现代药理实验研究表明,
其提取物具有抑菌、抗氧化、抑制葡萄糖酵解、抗肝
损害、抗生育、抗肿瘤等作用(毛绍春等,2007;甘炳
青等,2005;Tilak,2002)。白花丹醌是该药材的主
要活性成分,具有抗生育、抗菌、抗白血病等作用,能
抑制P388淋巴细胞白血病、宫颈癌、肝癌等多种肿
瘤细胞增值、诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期进程(杜
泽乡等,2011;刘圆等,2007;赵艳丽等,2006;秦贻强
等,2001;颜晓燕等,2006)。
植物在不同生长发育阶段,其有效成分积累会
有差异。目前有关白花丹茎中不同月份的白花丹醌
含量变化尚未见相关文献报道。本研究以不同月份
采收的桂林产白花丹的茎为材料,考察其2010年1
~12月份白花丹醌含量变化,找出白花丹茎中白花
丹醌含量高峰期,为确定白花丹茎的最佳采收期提
供科学依据,并为白花丹茎质量标准的制定及其临
床用药量的确定提供参考。
* 收稿日期:2011-12-13  修回日期:2012-04-18
基金项目:广西教育厅科研基金(200626)[Supported by Science Research Fund of Education Department of Guangxi(200626)]
作者简介:杜泽乡(1958-),女,湖北武汉人,副教授,研究方向为天然药物开发利用,(E-mail)zexiangdu@126.com。
1 材料与方法
1.1材料和仪器
药材采于桂林医学院药用植物园,由桂林医学
院植物分类学副教授王育生鉴定为白花丹(Plum-
bago zeylanica);对照品白花丹醌(plumbagin),
Lot:034K0960购自美国Sigma公司;甲醇,分析
纯,天津大茂化学试剂厂,批号:20080528;甲醇,色
谱纯,成都市科龙化工试剂厂,批号:20100302;水为
超纯水。
大连伊利特高效液相色谱仪,依利特 Hypersil
BDS C18色谱柱(250mm×4.6mm);AS5150A超
声器(180W40Hz,天津奥特赛恩斯仪器有限公
司);BT224S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有
限公司);Ak-400A摇摆式中药粉碎机(温岭市奥力
中药机械有限公司)NW-20超纯水系统(上海康雷
分析仪器有限公司)。
1.2方法
1.2.1色谱条件 依利特 Hypersil BDS C18色谱
柱(250mm×4.6mm);流动相为甲醇-水(70∶
30);检测波长为254nm;柱温为26℃;流速为1.0
mL·min-1;进样量:10μL。
1.2.2白花丹枝条的预处理 按罗娅君等(2011)的方
法,将不同月份采收的白花丹枝条去叶,阴干后置塑
料袋中,注明采集时间,封袋口,置冰箱中冷藏,备用。
1.2.3对照品溶液的制备 精密称取白花丹醌对照
品4.8mg,置100mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释
至刻度,充分摇匀,即得对照品储备液,待测。
1.2.4供试品溶液的制备 取阴干的白花丹茎,经
55℃干燥至恒重,粉碎(过3号筛),取粉末5.0g,
置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇溶液50mL,冷浸
24h,再经超声提取40min,过滤,滤液移入50mL
容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,过0.45μm微
孔滤膜后,即得样品测试液。
2 结果与分析
2.1色谱系统适用性试验
白花丹醌对照品溶液及白花丹供试品溶液在上
述色谱条件下进样测定,得色谱图(图1、图2)。从
图1和图2可以看出,白花丹醌峰形对称、尖锐,供
试品中共存成分对白花丹醌测定无干扰。
图1 白花丹醌对照品的色谱图
Fig.1 HPLC chromatogram of plumbagin
reference standard
图2 供试品的色谱图 1:白花丹醌
Fig.2 HPLC chromatogram of plumbagin
sample 1:plumbagin
2.2线性关系考察
精密吸取浓度为0.048mg·mL-1的对照品溶
液0.1、0.5、1.5、3.0、5.0mL将其稀释10倍后,分
别进样10μL,重复测定2次,以白花丹醌浓度(mg
·mL-1)为横坐标,两次进样峰面积平均值为纵坐
标绘制标准曲线并计算回归方程,得白花丹醌对照
品的回归方程为:Y=89952 X-1.3234;相关系数
为:r=0.9999。结果表明白花丹醌在0.00048~0.
0240mg·mL-1范围内与峰面积之间呈良好的线性
关系。
2.3精密度试验
精密吸取白花丹醌对照品溶液稀释液(7.2μg
·mL-1)10μL,按1.2.1所述色谱条件注入高效液
相色谱仪中,平行测定5次,测得峰面积的RSD=
1.1%(n=5)。
2.4稳定性考察
取同一供试品溶液,按1.2.1中色谱条件,分别
在0,3,6,9,12h平行进样分析。结果显示,白花丹
5243期         杜泽乡:桂林产白花丹茎不同月份白花丹醌含量测定
醌峰面积的RSD=0.7%,说明测定溶液配制好后,
放置12h内测定均可。
2.5重现性试验
精密称取白花丹茎粉末5.0g共6份,按1.2.1
所述色谱条件平行测定6次,计算白花丹醌的质量
分数,RSD=1.5%,表明该方法重现性良好。
2.6加样回收试验
精密称取已知含量的白花丹茎粉末2.5g共6
份,按照1.2.4项制备,在1.2.1项色谱条件下测
定。计算回收率,结果见表1。
表1 回收率试验结果
Table 1 The result of recovery experiments
取样量
Sample
(g)
含量
Content
(mg)
测得量
Result
(mg)
回收率
Recovery
rate(%)
平均回收率
Average
recovery
rate(%)
RSD
(%)
2.5125  0.0128  0.0249  96.9
2.5120  0.0247  99.2
2.5126  0.0254  100.0  98.7  1.1
2.5122  0.0248  98.4
2.5127  0.0253  98.4
2.5124  0.0251  99.2
2.7白花丹茎不同月份白花丹醌含量测定
按1.2.4项制备供试品溶液,分别取1~12月
采收的白花丹茎制备的供试品溶液10μL及对照品
溶液10μL注入高效液相色谱仪中,按1.2.1色谱
条件进行白花丹醌的含量测定,结果见表2。表2
结果表明,桂林产白花丹茎中白花丹醌含量10月份
最高,达0.0429%,3月份最低,仅0.0213%。
3 结论与讨论
3.1白花丹茎的最佳采收期
目前国内尚未有统一的白花丹醌含量测定标
准。刘圆等(2006,2007)的研究结果表明,不同产
地、不同药用部位、不同采收期的白花丹药材中白花
丹醌的含量差异较大。本研究所采用的不同月份桂
林产的白花丹茎样品,均是在每个月的下旬采于同
一丛白花丹的不同枝条(去叶),排除了随机取样造
成土壤、水分、肥料、海拔等环境因素的影响,且采集
的间隔时间较一致,实验结果可比性强。本研究结
果表明,桂林产白花丹茎不同月份白花丹醌的含量
从3~10月呈上升趋势,10~12月及次年的1~2
月呈下降趋势,其中10月份的含量最高,这和白花
丹茎的生物产量,春天3月到秋天10月呈上升趋势
是一致的。而10月开花结果后,白花丹茎不再生
长。故10月为最佳采收期。
表2 样品测定结果
Table 2 Sample test result
样品号
No.
药材采收期(年-月)
Gather date
白花丹醌
Plumbagin(%)
1  2010-01  0.0272
2  2010-02  0.0236
3  2010-03  0.0213
4  2010-04  0.0220
5  2010-05  0.0257
6  2010-06  0.0317
7  2010-07  0.0329
8  2010-08  0.0341
9  2010-09  0.0361
10  2010-10  0.0429
11  2010-11  0.0371
12  2010-12  0.0338
3.2白花丹药材的合理利用
白花丹根、茎、叶、花均可药用。广西壮医用其
叶治疗跌打损伤、肝脾肿大;云南傣医用其干根以祛
风除湿、散瘀消肿,治风湿疼痛、肝区疼痛;新疆维吾
尔医用其茎枝主治白癜风、偏瘫、胃腹胀痛及牛皮癣
等症(霍仕霞等,2010),但药用部位不同,白花丹醌
含量差异较大,其中根含白花丹醌达千分之几,而茎
只含万分之几(刘圆等,2006)。因此,用茎入药比用
根入药应适当提高用药量,建议通过药理实验找出
适当的根和茎的用药量,在制定质量标准时,应考虑
根和茎中白花丹醌含量的差别,分别制定。
3.3高效液相色谱法测定药材白花丹中的白花丹醌
含量的优点
  高效液相色谱法测定药材白花丹茎中的白花丹
醌,方法简便、准确,有助于白花丹茎质量标准制定。
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624 广 西 植 物                  32卷
当Pn和Ci变化方向相同,两者都降低,才可认为
光合速率的下降主要由气孔导度引起的;如Pn和
Ci变化方向相反,则Pn下降应归因于叶肉细胞同
化能力的降低。11:30~14:30,100%RI下吴茱萸
Pn与Ci均下降,且此时的Gs也下降,表明此时的
光合午休现象是由气孔部分关闭,气孔导度下降造
成的。各遮荫处理下,吴茱萸的Pn日变化均呈“单
峰型”,并无第二峰的出现,可能与遮荫条件下,16:
00左右光强较弱,环境温度较高,空气相对适度较
低有关。
2008年9月下旬,我们对吴茱萸的幼苗进行了
光合日变化测定,发现吴茱萸的光合日变化也呈“双
峰型”,但导致光合午休现象的主要原因为非气孔限
制因素,因为中午前后环境光强均在1 500μmol·
m-2·s-1以上,最高达1 800μmol·m-
2·s-1(孙世荣
等,2009)。10月下旬,光合有效辐射降低(最高光
强为1 340μmol·m-
2·s-1),空气湿度低,全日光下
虽仍然有光合午休现象发生,但主要原因为气孔限
制因素。10月下旬,100%RI下吴茱萸的Pn最大,
该时间段(10月14日~11月13日)吴茱萸的株高
和地径增长量均达整个生长季较高水平(图2:A,B)。
6~9月,环境光合有效辐射强,100%RI下吴茱萸受
非气孔限制因素影响,其Pn受到抑制,Pn值低于其
它遮荫处理,推测这是至一年生长季末,100%RI下
吴茱萸的株高、地径和冠面积最小的原因。
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