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Chemical components of diterpenoids from Isodon japonica var.galaucocalyx from Gansu Province, China

甘肃产蓝萼香茶菜二萜化学成分研究



全 文 :广 西 植 物 Guihaia 28(2):265—268 2008年 3月
甘肃产蓝萼香茶菜二萜化学成分研究
丁 兰1,王 炜 ,汪 涛2,王 丽 ,汪汉卿3
(1.西北师范大学 生命科学学院 ,兰州 730070l 2.菏泽学院 化学化工系,山东 菏泽
274015;3.中国科学院 兰州化学物理研究所 OSSO国家重点实验室,兰州 730000)
摘 要:对甘肃天水小陇山产蓝萼香茶菜进行二萜化学成分研究。采用硅胶柱色谱法分离纯化,通过薄层色谱
及波谱法进行结构鉴定,SRB法分别对分离化合物进行了体外细胞毒活性测试。共鉴定出5个二萜化合物,它
们分别为:la,6,l1p,15p四乙酰基一6,7-断裂一7,2O一内酯一对映一贝壳杉一16一烯(1a,6,l1p,15p.tetraaceto 6,7-soco-7,
20一olide-ent-kaur-16一en,I),6p,lla--羟基一6,7一断裂一6,20-环氧一1a,7一内酯一对映一贝壳杉一16一烯一15一酮(6p,l1口-di_
hydroxy-6,7-seco-6,20一epoxy-l~,7-olide-ent-kaur-16-en-15-one,Ⅱ),6p,7p,1413-_~羟基一1 乙酰氧基一7a,2O-环氧一对
映一贝壳杉一16烯一15一酮(6t3,7t3,14~trihydroxy-1a-acetoxy-7a,20一epoxy-ent—kaur-16一en-15一one,HI),6口,lla,15a--羟
基一6,7-断裂一6,20一环氧一1a,7一内酯一对映一贝壳杉一16一烯(6p,1la,15a-trihydroxy-6,7-seco-6,2O-epoxy-la,7-olide-ent-
kaur-16一en,IV),1 ,6p,7p,14p四羟基-Ta,20-环氧一对映一贝壳杉一16一烯一15一酮(1a,6p,7p,14 tetrahydroxy-7a-20-ep-
oxy-ent—kaur-16一en-15一one,V)。化合物Ⅲ、Ⅳ、V均为首次从该植物中分离得到,并且以上 5个二萜化合物对人肝
癌细胞株Bel一7402和人卵巢癌细胞株 HO-8910均显示了良好的细胞毒活性。
关键词:蓝萼香茶菜;二萜;结构鉴定;细胞毒活性
中图分类号;Q946 文献标识码:A 文章编号;1000—3142(2008)02—0265—04
lsodon j aponica var.galaucocalyx
from Gansu Province,China
DING Lan1,WANG Wei1,WANG Tao 2,Ⅵ NG Li1,Ⅵ NG Han-Qinga
(1.College of Life Sciences,Northwest Normal University,Lanzhou 730070,ChinaI 2.Department of Chemistry and
Chemical Engineering,Heze University,Heze 274015,China;3.State Key Laboratory for Oxo Synthesis and Selective
Oxidation,Lanzhou Institute of Chemical Physics,The Chinese Academy of Sciences,Lanzhou 730000,China)
A~tmct:Chemi~l constituents of diterpenoids from Isodon japonica var.galaucocalyx were studied.The corn—
pounds were isolated by column Chromatography and the structures of these compounds were elucidated by means of
spectral analysis.The antitumor activity was determined in vitro by the SRB assay.Five compounds were isolated
and identified as Rabdesinate(I),Epinodosin(]),Lasiokaourin(HI),Epinodosinol(1V)and Oridonin(V),respectively.
These compounds have significant cytotoxicity against Bel一7402 and HO-8910.Compounds HI,1V,V of them were
obtained form J.japonica var.galaucocalyx for the first time.
Key words:Isodon japonica var.galaucocalyx;diterpenoids;structural identification cytotoxicity
香茶菜属植物富含的萜类化合物,多具良好的
抗炎、抗癌活性,部分种已开发成为市售药,近年对
其研究 日趋活跃。目前,从香茶菜属植物中已分离
得到近500种对映~贝壳杉烷型二萜类化合物(孙
汉董等,2001),许多这类化合物具极好的抑制肿瘤
细胞生长以及致癌细胞死亡的活性,近年来对这类
化合物的抗癌机理也开始有了较深入研究(Zhang
等,2004;丁兰等,2006)。但不同结构类型的化合物
收稿日期:2007—01—30 修回日期:2007—06—28
基金项目:甘肃省教育厅科研基金(O6O1—27)[Supported by the Research Foundation of Education Departraent of Gansu Province(0601—27)]
作者简介:丁兰(1964一).女,四川德阳人,博士 .教授,研究方向为天然药物化学、细胞工程,(E-mail)dinglan@nwnu.edu.cn。
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其细胞毒活性有很大差异 ,研究表明 ,不同产地的同
种香茶菜属植物的二萜类化合物成分也有较大的差
异 。蓝萼香茶菜 (Isodon japonica var.galaucoca—
lyx)为唇形科香茶菜属植物 ,多年生草本 ,广泛分布
于东北、华北、西北地区,其资源极为丰富 (中国科
学院中国植物志编委会,1977),在民间蓝萼香茶菜
常用于胃炎、肝炎初期、感冒发热、乳腺炎、关节病等
疾病,并且还有良好抗癌活性(严仲铠等,1997)。目
前仅产于我国东北地区和河南辉县的蓝萼香茶菜的
化学成分有一些报道(桂明玉等,1999;金永 日等,
2000;白素平等,2005)。甘肃省也有非常丰富的蓝
萼香茶菜 自然资源 ,为了开发利用其香茶菜资源,寻
找其活性成分,我们对甘肃天水小陇山产蓝萼香茶
菜的化学成分进行了研究,从其嫩枝叶中分离得到
多种结 晶成分,经各 种波谱 技术 (IR,MS, H—
NMR,¨C—NMR,DEPT)并结合标样对照,共鉴定
了5种不同结构类型的对映一贝壳杉烷型二萜化合
物,并分别进行了体外细胞毒活性测试,结果表明,
所分离的化合物对人肝癌细胞株 Bel一7402和人卵
巢癌细胞株 HO一8910均表现了较强的细胞毒活性 ,
表明该植物在细胞毒性抗癌药物的开发方面具有良
好的前景。
1 植物材料
蓝萼香茶菜于2002年 8月采自甘肃省天水小陇
山,凭证标本存放于西北师范大学生命科学院植物标
本室,由西北师范大学生命科学学院孙坤教授鉴定。
2 测试仪器
熔点用 Boetius显微熔点测定仪测定,未经校
正;IR利用 KBr压片法在 IFS一120H型红外光谱仪
(德国)上测试;FABMS在 Autospec3000质谱仪上
测试;核磁共振用 INOVA一400型(Varian公司),
TMS为内标 B10一RAD酶联免疫检测仪 (Model一
550);柱层析硅胶(200—300目),薄层层析硅胶 H均
为青岛海洋化工厂生产;培养基 RPMI一1640和Sul—
forhodamine B(SRB)购 自Sigma公 司;小牛血清购
自杭州四季青公司。
3 提取与分离
蓝萼香茶菜叶和嫩枝干粉 4.5 kg,工业乙醇冷浸
3次,每次 7 d。冷浸液经减压浓缩得浸膏 355 g,将浸
膏分散于适量水中,分别用石油醚和乙酸乙酯进行萃
取 ,乙酸乙酯萃取部分经减压浓缩后得浸膏 115 g,此
浸膏用 100~200目硅胶拌样上柱,用氯仿一丙酮(100
:1—1:1)为洗脱液,进行梯度洗脱。梯度洗脱过程
中用 TLC进行监测,相同组分合并,各部分经反复小
柱分离和重结晶,从中分离出5个二萜化合物。
4 细胞培养
人肝癌细胞 Bel一7402及卵巢癌细胞 HO-8910培
养于RPMI-1640培养基中,外加青霉素 100#g/mL,
链霉素 100#g/mL和 NaHCOa2.3 g/L,含 10~/0灭活
小牛血清,于 5% CO2,37℃饱和湿度下培养。
5 细胞毒活性测试
取对数生 长期 的细胞 ,以 2×10 个/mL的浓
度接种于 96孔板中,每孔加入 100 L的细胞悬液,
贴壁培养 24 h后,向相应孔中分别加入不同稀释度
(3.125,6.25,12.2,25,50/*mol/L)的受试化合物
的新鲜培养液,培养 48 h。取出 96孔板,弃去培养
液,加入 5O 的三氯醋酸 5O L终止反应,置于 O~
4℃冰箱中 1 h后弃去液体,用蒸馏水冲洗 5次,自
然晾干后用 100/*L、0.4 的 SRB染色 10 min,未
与蛋白质结合的 SRB用 1 醋酸洗 5次,自然干燥
后,每孔加入 150 L、pH为 10.0、浓度为 10 mmol/
L的非缓冲 Tris碱液(unbufered Tris—base solu—
tion,即三羟甲基氨基甲烷)溶解与蛋白质结合的
SRB,用振荡器振荡使结合的 SRB完全溶解后,用
酶联免疫检测仪测相应 OD值。利用回归方程求出
半抑制浓度值,结果见表 1。
6 结构鉴定
化合物 I:无色针状结晶(乙酸乙酯);mp:230
~ 232℃.[d] 一47.O。(c一0.4,CHC1 );EIMS m/z:
491(M+一43),448,432,390,372,330,312,194,152,
l34,119,1O5,91,69,43;IR(KBr)cm~:2964,1743,
1372,1223,ll35,1113,1036,978,900; H—NM R
(DMSO—d ) :5.61(1H,S,H一15d),5.23 and 5.02
(2H,S,H2—17),4.86(1 H,m,H一11d),4.8O and
4.3O(2H,AB d, =12.4HZ,H2—2O),4.65(1H,dd,
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2期 丁兰等:甘肃产兰萼香茶菜二萜化学成分研究 267
J一12.4Hz,J一3.6HZ,H一1p),4.43 and 4.22(2H,
dd,J一12.4Hz,J一5.6Hz,H2—6),3.26(1H,d,J一
12.0Hz,H一9p),2.84(1H,In,H一12a),2.79(1H,t,
J一8.4Hz,H一13p),2.53(1H,d,J一6.0Hz,H一5口),
2.26(1H,In,H-14a),2.26,2.07,2.04 and 2.03
(each3H,S,4×OAc),1.92(1H,dd,J一 13.2Hz,J
一 4.4Hz,H-2a),1.72(1H,In,H一2b),1.70(1H,d,
J一 12.8Hz,H-14b),1.42(1H,In,H一3a),1.22
(1H,In,H一3b),1.05(3H,S,Me一18),0.97(3H,S,
Me-19);”C-NMR(DMSO-d )6:76.4(C-1),23.3
(C-2),39.8(C-3),34.1(C一4),48.8(C-5),62.1(C-
6),172.2(C一7),50.5(C-8),39.0(C-9),43.0(C-
10),68.3(C_11),40.1(C-12),34.9(C一13),31.0(C-
14),82.8(C-15),153.3(C_16),111.4(C_17),34.0
(C-18),23.7(C_19),66.4(C-20),OAc:170.5,
169.6,169.5,168.9,21.3,21.2,21.1,20.9。 以上
波谱数据与文献(Kim等,1992)一致,确定为 1a,6,
11p,15p一四乙酰基一6,7一断裂一7,20一内酯一对映一贝壳
[II R:OAc
V R=OH
杉一16一烯。
化合物Ⅱ:无色针状结晶(乙酸乙酯);mp:252
~ 254℃;EIMS m/z:362(M ),344,217,149;
[a] 一200。(c一0.02,C5H5D5);IR(KBr)cm- :3274,
2947,1753,1717,1645,1459,1294,1267,1043; H—
NMR(DMSO-d )6:7.04(1H,d,J一 6.4Hz,OH一
6),5.90(1H,d,J一4.4Hz,OH一11),5.9O and 5.62
(each 1H,s,H2—17),5.18(1H,d,J一 6.0Hz,H一
6a),4.81(1H,dd,J一 11.2Hz,J一 6.0Hz,H一1口),
4.23(1H,ddd,J一12.8Hz,J一9.8Hz,J一4.0Hz,
H-11口),3.89 and 3.55(each 1H,AB d,J一9.2Hz,
H2—20),3.16(1H,dd,J一 8.8Hz,J一 5.2Hz,H一
13口),2.65(1H,S,H一5p),2.05(1H,d,J一10.0Hz,
H一14B),0.95(3H,S,Me一18),0.91(3H,S,Me一
19);¨ C-NMR(DMSO—d6)6:75.8(C一1),23.1(C-
2),36.1(C_3),31.2(C一4),51.0(C一5),101.0(C_6),
170.2(C一7),55.4(C_8),52.9(C一9),49.8(C一10),
61.9(C一11),40.5(C-12),34.1(C_13),32.5(C_14),
200.4(C一15),150.4(C一16),118.1(C_17),32.7(C_
18),22.8(C-19),72.2(C-20)。以上波谱数据与文
献(Chen等,1989)一致,因而推定为 6p,11a一二羟基
一 6,7一断裂一6,20一环氧-1a,7一内酯一对映一贝壳杉一16一烯
一 15一酮。
化合物Ⅲ:无色针状结晶(乙酸乙酯);mp:250
~ 252℃;EIMS m/z:406(M ),388,346.[a] 一95。
(c一1.0,C5H5D5);IR(KBr)cm- :3450,3197,2953,
=O
H/G—OH
2919,1734,1707,1645,1494,1371,1247,1171,
1065,1037,951; H—NMR(DMS()-d6)6:6.93(1H,
S,OH),6.11(1H,S,OH ),6.07(1H,d,J一
10.4Hz,OH),5.98 and 5.58(2H,S,H2-17),4.79
(1H,S,H一14a),4.57(1H,dd,J一 10.8Hz,J一
5.6Hz,H一1口),4.09(2H,AB d,J= 10.4Hz,H2—
20),3.54(1H,dd,J一 10.4Hz,J一 6.8Hz,H一6),
2.95(1H,d,J一 9.6Hz,H一9口),2.39(1H,In,H一
5口),1_94(3H,S,OAc),1.01(3H,S,Me-18),0.98
(3H,S,Me一19); C-NMR(DMS()-d6)6:74.7(C一
1),24.8(C一2),37.4(C一3),33.2(C-4),59.2(C_5),
72.9(C_6),96.8(C一7),61.1(C-8),51_3(C_9),39.0
(c-10),17.3(C一11),29.6(C一12),42.6(C-13),72.4
(C一14),208.4(C_15),151.6(C-16),119.4(C-17),
32.3(C一18),21.5(C_19),62.4(C_20),OAc:169.5,
21.2。以上波谱数据与文献(孙汉董等,2001)相一
致,确定为 6p,7p,14p一三羟基一1a一乙酰氧基一7a,20一
环氧一对映一贝壳杉一16烯一15一酮。
化合物 Ⅳ:无色针状结晶(乙酸乙酯);mp:240
~ 242 ℃;EIMS m/z:364(M ),346,328,149;
[a] 一62。(C5H5D5);IR(KBr)crn :3428,3235,
2990,2920,2857,1715,1492,1468,1297,1247,
1108,1057,918; H—NMR(DMSO-d )6:5.25(1H,
d,J一 6.0Hz,H一6a),5.18 and 5.15(each 1H,S,
H2-17),4.94(1H,t,J一5.6Hz,H一15p),4.69(1H,
dd,J一11.2Hz,J一6.0Hz,H一1口),4.23(1H,In,H一
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11J3),3.89 and 3.8O(each 1H,AB d,J一 8.8Hz,
H,一2o),1.04(3H,s,Me一18),0.99(3H,s,Me一
19);¨ C_NMR(DMSO—d )占:78.5(C-1),24.8(C_
2),37.8(C一3),32.5(C-4),54.9(C-5),102.9(C_6),
177.0(C一7),53.9(C-8),46.4(C_9),51.5(C_10),
63.7(C—l1),45.4(C_12),37.9(C_13),34.9(C_14),
77.5(C_15),158.0(C_16),1O9.2(C-17),33.3(C-
18),23.4(C-19),73.8(C一2O)。以上波谱数据与文
献(孙汉董等,2001)相一致,因此推定为 6p,lla,
15a一三羟基一6,7一断裂一6,2O一环氧一1a,7一内酯一对映一贝
壳杉一16一烯。
表 1 化合物 I~V的 ICso值(50 抑制浓度)
Table 1 IC5o value of compound I~ V
化合物V:无色针状结晶(乙酸乙酯);mp:250-252
℃;[a]蛩一46。(c一1.0,C5 H5 D5);EIMS m/z:364
(M );IR(KBr)cm~:3381,3313,2941,2904,17ll,
1647,1459,1434,1270,ll69,1O95,988,900; H—
NMR(DMSO-d6)占:6.94(1H,s,OH),6.00(1H,s,
OH),5.98(1H,s,OH),5.97 and 5.58(each 1H,s,
H2—17),4.75(1H,s,H一14a),4.38(1H,d,J=
5.2Hz,OH),4.09 and 3.84(each 1H,AB d,J一
10.4Hz,H2-20),3.51(1H,dd,J一 10.4Hz,J一
6.8Hz,H一6a),3.31(1H,m,H-1B),2.93(1H,d,J
一 10.0Hz,H一13B),1.76(1H,dd,J一12.8Hz,J一
5.6Hz,H一913),1.12(1H,d,J一5.2Hz,H一5J3),1.OO
(3H,s,Me一18),0.98(3H,s,Me一19);¨ C^ NMR
(DMSO—d )占:73.2(C_1),30.0(C-2),38.4(C-3),
33.4(C-4),59.4(C_5),72.5(C-6),97.0(C-7),61.6
(C-8),53.0(C_9),40.5(C一10),19.3(C-l1),30.0
(C_12),42.7(C-13),71.7(C_14),208.6(C_15),
152.0(C_16),ll9.4(C_17),32.8(C_18)。21.7(C-
19),62.7(C-20)。以上波谱数据与文献 Fujita等,
1970)相一致,因此确定为 1a,6p,717,14B一四羟基一
7B,2O一环氧一对映一贝壳杉一16一烯一15一酮。
7 SRB实验结果与分析
SRB分析结果显示,化合物 I~V对细胞株
Bel一7402、HO一8910均具 有 良好 的细胞毒 活性 (表
1)。从表 1可以看 出,甘肃产蓝萼香茶菜二萜化合
物具有高活性的特点,尤其是化合物Ⅲ和V。这类
化合物进一步的抗肿瘤作用机制将另文报道。
参考文献 :
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