全 文 ：广西植物Guihaia27(4)：665—668 2007年7月
耶IC法测定不同生长期罗汉果
甙ⅡE，Ⅲ，V的含量
刘金磊，李典鹏+，黄永林，卢海啸
(；飞乒翁紫要广西植物研究所，广西桂林541006)
摘要：采用HPLC法测定同一产地不同生长期罗汉果中罗汉果甙ⅡE、Ⅲ、V的含量。结果表明，在生长初
期罗汉果中主要含具有苦味的甙Ⅱ及无味的甙Ⅲ，随着生长期的增加，苦味甙ⅡE、无味甙III含量逐渐减少，
甜甙V在50d时开始出现，并随生长期增加，到80d后含量达到最高。
关键词：罗汉果；HPLC；罗汉果甜甙IIE、III、V；生长期
中图分类号：Q946．83文献标识码：A 文章编号：lOOO一3142(2007)04—0665—04
Determinatiqof。‘1‘‘‘1‘fi fruit!Deerination mo盯ol2lycos desIromruits
ofSiraitiag
li
b‘different5trattta osvenoruindfft-erent
growingagesbyHPLC
LIUJin-Lei，LIDian-Peng’，HUANGYong-Lin，LUHai-Xiao
(GuangxiInstituteofBotany，GuangxiZhuangzuAutonomousRegionandtheChineseAcademyofSciences，Guilin541006，China)
Abstract：MogrolglycosidesIIE，llI，VinthefruitofSiraitiagrosvenoriiindifferentgrowingageswered —
terminedbyHPLC．TheresultshowsthatbitterglycocideIIandtastelessglycocidemarethemainproducts
inthefruita thearlygrowingstage，butthecontentsdecreaseasthegrowthofthefruit；thecontentofmag—
rolglycosidesVincreasesrapidlyafter50daysandgetsstabilityafter80days．Thisconclusioncanprovide
scientificev denceforthefruitpickingofS．grosvenorii．
Keywords：Siraitiagrosvenorii；HPLC；glycocidesIIE，III，V；growingage
罗汉果[Siraitiagrosvenorii(Swingle)C．Jeff—
rey]为葫芦科罗汉果属多年生宿根茎性的藤本植
物，是我国特有的经济、药用植物，为广西桂北地区
传统特产。罗汉果有清热润肺，滑肠通便。用于肺
火燥咳，咽痛失音，肠燥便秘(中华人民共和国药典
委员会，2005)。不同生长时期罗汉果果实甙类成分
不一致，成熟罗汉果味极甜，未成熟的罗汉果味苦
(李典鹏等，2006)，这是因为成熟罗汉果富含罗汉果
甜甙，主要为罗汉果甙IV、V(mogrosideIV、V)(竹
本常松等，1983)，罗汉果嫩果中主要含有罗汉果苦
甙A(mogrosideⅡE)(徐位坤等，1992)，有关罗汉
果鲜果及市售干果的甙类成分前人已有详细报道
(斯建勇等，1996)，对于HPLC法测定罗汉果甙类
生长期变化尚未见有报道，本文通过采集不同生长
期的罗汉果样品，对其中的甙类成分进行提取分离，
采用HPLC法比较研究了不同生长期罗汉果中的
甙类成分变化，为阐明罗汉果甜甙的形成机理和积
累规律打下初步理论基础。
收稿日期：2005-12—01修回日期：2006—10-20
基金项目：中国科学院“西部之光”人才培养计划项耳([2002]101)；广西自然科学基金(0236052)[SupportedbythePersonnel
TrainingPlanofWestLightFoundationoftheChineseAcademyofSciences([20021101)；NaturalScienceFoundationofGuangxi(0236052)]
作者简介：刘金磊(1980一)，男，内蒙古赤峰市人，研究实习员．从事植物资源的开发利用研究。
。通讯作者(Authorf rcorrespondence，E-mail：Idp@gxib．on)
万方数据
666 广西植物 27卷
1 材料与仪器
罗汉果样品采集于广西临桂两江乡，同一果园
同一罗汉果品种，在7月中旬一周内，选择同一天开
花的罗汉果子房，及同一周内开花并授粉后分别生
长5、10、20、40、55、70、85d的罗汉果果实适量(经
冷冻干燥后，磨成粉备用)。罗汉果甙ⅡE、Ⅲ，和甙
V对照品(本实验室自制，TLC的Rf值、IR、UV、
NMR值均与文献报道一致，液相色谱峰为单峰，纯
度分别达到98．1％、98．5％、98．2％)。HPD-200大
孑L吸附树脂(沧洲宝恩厂)。330、732型离子交换树
脂(山东鲁抗树脂分厂)。色谱纯乙腈(美国TEDIA
公司)。重蒸蒸馏水为自制，其他试剂均为AR级。
Agilent一1100分析型高效液相色谱仪，包括二
极管阵列多波长检测器DAD、四元梯度泵、在线真
空脱气机、7725i手动进样器、HP化学工作站(美国
Agilent公司)；R—114型旋转蒸发仪(瑞士Btichi公
司)；超声波清洗机。
2 色谱条件
色谱柱：ZORBAXSB-C18柱(4．6mm×150
ITlm，5／lm)；柱温：25℃；流动相：乙腈一水(体积比
25：75)；流速：1mL／min；检测波长：203nm；进样
量：20pL。定量方法：外标法。在上述条件下罗汉
果甙ⅡE、罗汉果甙Ⅲ和罗汉果甙V色谱峰与其它
组分达到了良好分离；在确定上述条件后，经空白试
剂对照实验，证明试剂无干扰，证明此分离条件可行。
3 试验部分
3．1对照品溶液的制备
分别精密称取罗汉果甙ⅡE、Ⅲ，甙V对照品各
50mg，置于50mL容量瓶中，用流动相乙腈一水
(体积比25：75)溶液超声溶解，再分别取1、2、4、6、
8mL溶液置于10mL容量瓶中，用流动相乙腈一
水(体积比25：75)溶液超声溶解稀释至刻度摇匀，
作对照品溶液备用。
3．2供试品溶液的制备
选取不同时期的新鲜罗汉果适量，破碎、冷冻干
燥36h，碾碎过40目筛，精密称取1g样品，用20
mL甲醇溶解回流提取3次(2、1、lh)，过滤，合并滤
mAU
50
40
30
20
10
O
0 2 4 6 8 10 12 14 16min
图1空白试剂
Fig．1Controleagentm藿◆
图2罗汉果甙IIE、Ⅲ、V对照品
Fig．2StandardsubstanceefmogrosidelIE，llI，V
图3 罗汉果样品(1．甙V；2．甙Ⅲ；3．甙ⅡE)
Fig．3Sampleofmogroside(V，Ⅲ，ⅡE)
液回收溶剂至干，多次总量加入约20mL水超声溶
解，溶液过HPD-200大孔吸附树脂，然后用蒸馏水
洗至流出液元色，并以80％乙醇溶液60mL洗脱，
收集洗脱液，旋转蒸发至干，以流动相乙腈一水(体
积比25：75)溶液少量多次的超声溶解，并定溶至
25mL容量瓶中，用0．45弘m微孔滤膜过滤，滤液
作为供试品备用。
3．3线性关系的考察
分别精密吸取罗汉果甙ⅡE、Ⅲ、V对照品溶液
20．0pL，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定，
记录峰面积和进样量，以进样量为横坐标，峰面积为
纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：甙ⅡE：Y一
313X+34．03，(r一0．9986)；甙llI：y一250．48X+
4．39，(r=0．9992)；甙V：Y=206．02X+26．626(r
舢们诣∞筋加佰∞o
o
万方数据
4期 刘金磊等：HPLC法测定不同生长期罗汉果甙ⅡE，Ⅲ，V的含量 667
=0．9992)。结果表明，罗汉果甙ⅡE在进样量
1．934～25．142pg，甙Ⅲ在进样量2．070～26．910
肛g，甙V含量的测定在2．5～1．2×102pg范围内呈
线性关系。
3．4稳定性试验
将同一供试品溶液室温保存，依次在2、8、12、
24、48h进样测定，RSD为1．73％，表明供试品溶液
在48h内稳定。
3．5精密度试验
精密吸取某一对照品溶液各20弘L，重复进样5
次，测定峰面积，结果罗汉果甙ⅡE峰面积值的
RSD为0．33％，罗汉果甙Ⅲ峰面积的RSD为
0．23％，罗汉果甙V峰面积的RSD为0．23％，说明
仪器精密度良好。
3．6重复性试验
精密称取罗汉果干品5份，按3．2项下方法提
取制备，进行5次平行测定，计算罗汉果甙ⅡE、Ⅲ、
V含量，RSD分别为1．68％、1．12％、0．94％。说明
本法重复性较好。
3．7加样回收率试验
精密称取已知含量的同一批号样品(批号为
20041010)5份，准确加入罗汉果甙ⅡE、Ⅲ、V对照
品溶液1mL(C=1rng／mL)，按3．2项下方法提取
测定，测定结果见表1。
表1罗汉果中甙ⅡE、Ⅲ、V的加样回收试验结果
Table1 ContentsofrecoveryaboutmogrosideIIE，II，V
注；括号内为甙ⅡE、Ⅲ和甙V的测试数据。 Note：DataofmogrosideIIE，Ⅲ，Vwerelistedinparentheses．
表2 罗汉果中甙IIE、Ⅲ、V含量的测定结果 甙类动态变化曲线(图4)。
Table2 Contentsofmogroside1IE，Ⅲ，Vinsample
天数
Days
(d)
含量Contentofmogroside(％)
甙ⅡE 甙Ⅲ 甙V
4 结果与分析
4．1不同采收期罗汉果甙类变化比较
精确称取不同采收期、同一产地的罗汉果冻于粉
末1．000g，按3．2项制备供试品溶液，分别精密吸取
20弘L，按上述色谱条件注入液相色谱仪测定，记录色
谱图，外标法定量，计算含量，样品测定结果见表2。
通过以上数据进行数理分析整理，可得罗汉果中
；◆．。··r—!卜—蜊-一一．．⋯一-⋯_
I 20 40 60 80 1(
天数t／d
图4甙类动态积累曲线
Fig．4Dynamiccurveofaccumulationof
mogrosideIIE，II，Vinsample
0
从测定结果看，在罗汉果生长初期主要含苦味
的甙Ⅱ及无味的甙Ⅲ，随着生长期的增加而减少，相
反，罗汉果甙V从生长50d后开始出现，并逐渐增
加，到生长期为80d后含量达到最高。
5 讨论
(1)罗汉果在授粉5d后即有罗汉果二糖甙出
3
5
2
5
1
5
0
5
2
，
0
0
葶
万方数据
668 广 西植物 27卷
现，随着座果日龄的增加，二糖甙逐渐减少，而相应
三糖甙，四糖甙，五糖甙逐渐增加，成熟罗汉果以五
糖甙为主，这种现象提示，罗汉果五糖甙(甜甙)可能
是以幼果中的二糖甙作为前体，经历一个复杂的生
源以葡萄糖残基逐步地转移，依次形成呈强甜味的
四糖甙，五糖甙过程。这与文献报道结果一致(李典
鹏等，2004)。为未成熟罗汉果为无味的或苦昧的，
而成熟罗汉果为甜昧的这一事实提供科学证据。
(2)通过实验发现，第50天后，罗汉果甙V的含量
增加较快，作为罗汉果的主要甜味物质，甙V的含
量影响到罗汉果的品质，因此用于提取甜味剂的罗
汉果，其果龄应该在85d以上，而不应该是目前沿
用的65～70d。在开展罗汉果规范种植同时，制定
严格科学的采收标准，以保证罗汉果的质量。(3)
HPLC法测定罗汉果甜甙简便易行，稳定性好，准确
度高，适用于罗汉果品质的检验、确定罗汉果的最佳
采收日期以及控制罗汉果深加工产品的质量。
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(上接第661页Continuefrompag661)
了出芽速度，同时考察了不同外植体、激素种类及浓
度、外植体在培养基中放置方式等多种因素对出芽的
影响，获得了很高的不定芽分化频率，为遗传转化工
作的开展及转化效率的提高创造了条件。
人工诱变与植物组织培养技术相结合，较易获得
数量较大而且较为一致的诱变群体，且能在有限的空
间内对大量诱变群体进行选择，同时可对突变材料在
短期内进行扩大繁殖，产生数量较多的突变群体。许
多研究表明，诱发突变与植物组织培养技术相结合能
够大大提高突变频率(刘进平等，2004)。本试验以广
藿香多种外植体为材料，获得了快速高效的植株再生
系统，有利于将广藿香组织培养与人工诱变技术相结
合，以促进诱变育种的进步，提高选择效率，从而加速
育种的进程。
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万方数据
HPLC法测定不同生长期罗汉果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ的含量
作者： 刘金磊， 李典鹏， 黄永林， 卢海啸， LIU Jin-Lei， LI Dian-Peng， HUANG Yong-Lin
， LU Hai-Xiao
作者单位： 广西壮族自治区中国科学院,广西植物研究所,广西,桂林,541006
刊名： 广西植物
英文刊名： GUIHAIA
年，卷(期)： 2007,27(4)
被引用次数： 20次

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引用本文格式：刘金磊.李典鹏.黄永林.卢海啸.LIU Jin-Lei.LI Dian-Peng.HUANG Yong-Lin.LU Hai-Xiao HPLC法
测定不同生长期罗汉果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ的含量[期刊论文]-广西植物 2007(4)