全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 27(6)：948— 951 2007年 11月
桂南地区苦玄参药材 RP-HPLC指纹图谱研究
梁小燕，方 宏，宁德生，陈海珊，黄永林
(； 薯 广西植物研究所，广西桂林541006)
摘 要：采用反相 HPLC法测定了广西梧州、龙州 、苍梧、越南等多产地 12批苦玄参药材指纹图谱 ，并对不同
产地的苦玄参指纹图谱进行 比较 。色谱条件为：Luna C18(4．6×250 mm，5 m)色谱柱，乙腈一水梯度洗脱，流
速 1．0 mL／min，检测波长 254 nm，柱温 25~C。结果 12批苦玄参样品指纹图谱共标定了 16个分离度良好的
共有峰，方法的精密度、稳定性、重复性均符合国家相关规定，可作为控制苦玄参药材质量的定性标准。
关键词：苦玄参；HPLC；指纹图谱；质量控制
中图分类号：Q946 文献标识码：A 文章编号：1000—3142(2007)06—0948—04
RP-HPLC fingerprint Picria e1-terrae
from South Guangxi
LIANG Xiao-Yan，FANG Hong，NING De-Sheng，
CHEN Hai-Shan，HUANG Yong-Lin
(CruangxiInstitute ofBotany，Cruangxl~auangzuAutonomousRegion andtheChineseAcademy ofSciences，Guilin 541006，China)
Abstract：The RP—HPLC assay was used tO establish the fingerprint of Picria fel-terrae from South Guangxi，
and the HPLC chromatogram of different origins of Picria fel—terrae were compared．The chromatography
conditions were as follows：Luna C18 column(4．6×250 mm，5 m)，a mixture of acetonitrile and water as mo-
bile phase in gradient mode，flow rate was 1．0 mL／min，detective wavelength at 254 nm，column temperature
25C．The fingerprints of P．febterrae with 16 common peaks were determined．The RSD of precision and re-
producibility lay within 5 ．According tO this method，the established fingerprint can be used for the identifi—
cation and quality control of P．fe&terrae．
Key words：Picria fel—terrae；HPLC；fingerprint；quality control
苦玄参(Picria fel-terrae)为玄参科苦玄参属
唯一的一种植物(中国科学院中国植物志编辑委
员会，1979)，主要分布于我国广西、广东和云南等
地，其作为民间用药已有悠久的历史，尤其是在广
西东南部，是治疗蛇伤、高热、喉痛、疮疖肿毒的民
间秘传良药。苦玄参被《广西中药材标准》1990年
版收载，以苦玄参为主要原料的数个中成药已面
市(陈勇，2000)。对苦玄参的研究表明，苦玄参化
学成分主要有 四环三萜 苷类 (成桂仁等，1982，
l985)及苯乙醇苷类(王力生等，2004)化合物，并
且发现含三萜类成分的苦玄参提取物具有抗肿
瘤、抗菌消炎的作用(广西植物研究所资源化学室
等，1978；陈仲良等，1986)。有文献报道以苦玄参
苷 工A、工B的含量检测来进行苦玄参药材的质量
控制(郑成远等，2006；邹节明等，2005b)。本实验
采用 RP—HPLC法，主要对广西东南部地区产苦玄
参药材进行 了指纹图谱的研究，为苦玄参药材更
全面的质量控制提供参考。
收稿日期：2006-12-11 修回日期 ：2007—06—19
基金项且：广西自然科学基金(0339O79)[supp0rted by Natural Science Foundation of Guangxi(0339079)]
作者简介：梁小燕(1962一)，女，广西桂林人 ，副研究员，从事天然产物化学成分利用的应用基础研究。
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6期 梁小燕等 ：桂南地区苦玄参药材 RP—HPLC指纹图谱研究 949
1 仪器与试药
仪器：Agilent一1100分析型高效液相色谱仪(含
四元低压梯度泵，二极管阵列检测器，在线真空脱气
机，柱温箱，7725i手动进样器，HP化学工作站)；超
纯水仪(Millipore公司)。试剂：乙腈 (色谱纯)，甲
醇(分析纯)，水(超纯水，自制)。对照品：苦玄参苷
I A、苦玄参苷 I B(自制，纯度 分别为 98．2 ，
97．1 )。药材：各药材样品来源见表 1，经鉴定为
玄参科植物苦玄参(P．fel-terrae)的干燥全草。
表 1 苦玄参样品来源
Table 1 The colected Picria fel-terrae samples
编号 No．采集地点 Collecting site 采集时问 Collecting date
2 实验方法和结果
2．1色谱条件
色谱 柱 ：phenomenex Luna C18(4．6×250
mm，5 m)；柱温：25℃；检测波长：254 nm；流动
相：A：乙腈，B：水，梯度洗脱，洗脱梯度如表 2；分析
时间：76 min；流速 ：1．0 mL／min~进样量 ：1O L。
2．2对照品溶液的制备
精密称取苦玄参苷 I A和 I B适量，加甲醇制
成每 1 mL含苦玄参苷 I A 1．0 mg和苦玄参苷 I B
0．56 mg的混合对照品溶液。
2．3供试品溶液的制备
称取苦玄参全草粉末(过 40目筛)1 g，加甲醇
2O mL，超声提取 30 rain，滤过，用少许甲醇洗涤残
渣并定容至 25 mL。取滤液 2 mL过 0．45 m滤
膜，作为供试品溶液。
2．4检测方法
分别精密吸取对照品溶液和样品溶液各 1O
L，注入液相色谱仪，记录 76 min的色谱图即得。
根据参照峰的保留时间和峰面积计算其他共有峰的
相对保留时间和相对峰面积值。
2．5方法学考察
2．5．1精密度试验 取同一份供试品溶液，连续进
样 5次，按 2．1项下色谱条件检测，考察共有峰的相
对保留时间和相对峰面积比值的一致性。各共有峰
相对保留时间的 RSD值为 0．01 ～O．O5 ，相对峰
面积的RSD值为 0．36 ～3．40 。结果说明仪器性
能良好，符合指纹图谱的技术要求(RSD<~5 )。
表 2 梯度洗脱条件
Table 2 Conditions of gradient elution
t／min A ( ) B(％)
2．5。2稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别于
0、2、4、8、12、24、36 h进样，按“2．1色谱条件”检测，
各色谱峰相对保 留时间 的 RSD值为 0．02 ～
0．22 ，相对峰面积的 RSD值为 1．17 ～4．53 。
表明样品溶液在 36小时内稳定，符合指纹图谱的技
术要求(RSD<5 9／6)。
2．5．3重复性试验 取同一批供试样品 6份，分别进
样，按 2．1项下色谱条件检测，各色谱峰相对保留时
间的 RSD值为 0．01 ～O．11 ，相对峰面积的RSD
值为 0．81％～4．09 。结果表明，样品制备方法重现
性良好，符合指纹图谱的技术要求(RSD<5％)。
2．6样品测定与结果
2．6．1指纹图谱的建立 分别精密吸取对照品溶液
和 12批供试品溶液各 1O L注入液相色谱仪，分别
按“2．1色谱条件”测定，记录 76 rain的色谱图，结
果如图 1。
2．6．2共有峰 的确定 根据 12批供试 品溶液
HPLC谱给出的相关参数，比较各供试品色谱图，其
中16个峰是各批供试品所共有的，因此确定这 16
个峰为共有指纹峰。根据对照品的相对保留时间和
紫外光谱，确定指纹图谱中的 3号峰为苦玄参苷IB，
1O号峰为苦玄参苷IA。在共有峰中，以 1O号峰的色
谱峰为参照物峰(相对保留时间为 1)，各共有峰的相
对保留时间和相对峰面积的比值见表 3和表 4。
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950 广 西 植 物 27卷
图 1 苦玄参 RP-HPLC指纹图谱
Fig．1 RP-HPLC fingerprint of Picria feZ—terrae
2．6．3指纹图谱的相似度计算 应用指纹图谱相似
度评价软件对各产地苦玄参药材指纹图谱进行相似
度计算。以 12批样品共有的指纹图谱为对照谱图，
计算 12批样品与对照谱图的相似度。12批样品的
与对照谱图的相似度均在 9O％以上，结果见表 5。
3 讨论
(1)至今的药理研究表明(广西植物研究所资源
化学室等，1978；陈仲良等，1986)，苦玄参有效成分
集中于苦玄参四环三萜苷部分。本实验主要考察有
表 3 l2批次苦玄参共有峰的相对保 留时间
Table 3 Relative retention time of common peaks for twelve batches of Picria feZ—terrae
效部分苦玄参苷的指纹图谱，这对于目前以苦玄参
苷 I A为质量控制标准的苦玄参产品生产企业，具
有更切合实际的指导意义。采用甲醇超声提取制备
供试品，能较好地反映该部分的各化学成分。(2)针
加 佰 5 0
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6期 梁小燕等：桂南地区苦玄参药材 RP-HPLC指纹图谱研究 951
对广西东南部地区产苦玄参进行指纹图谱研究，共
标定 l6个共有指纹峰，较前人(邹节明等，2005a)确
立了更多的指纹峰，能更全面显示苦玄参药材的特
性。其中，确定了 3号峰、lO号峰分别为苦玄参苷
I B、I A。通过对不同批次、产地苦玄参指纹图谱
的比较(图2)，可以看出广西产苦玄参药材基本上
都有相应的色谱峰。从相似度的计算结果也可看
出，其苦玄参药材之间整体差异及与对照指纹图谱
的差异均很小，因此，均可在考察其有效成分含量高
低后作为苦玄参药材取用。(3)苦玄参中主要成分
表 5 12批次苦玄参的指纹图谱相似度计算结果
Table 5 Fingerprint similarity for twelve batches of Picria fel-terrae
图 2 12批次苦玄参 RP—HPLC指纹图谱
Fig．2 RP—HPLC fingerprint for twelve batches of Picria fez—terrae
均有紫外吸收，本实验供试品于 l9O～400 nm处扫
描，结果表明在 254 nm 波长及 286 nm 波长处均有
较好的分离度。比较之下，在 254 nm处色谱峰较
多且分离度更好，因此我们选择检测波长为 254
rlm 。
(4)使用等度洗脱，达不到理想的分离效果，出
峰少。采用梯度洗脱可得到较多的峰信息，分离出
大部分的色谱峰。因此本实验采用梯度洗脱。
致谢 感谢本所刘演副研究员鉴定部分药材。
参考文献：
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