全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 30(4)：538—543 2010年 7月
水稻籼爪重组自交系 PEG胁迫
早期基因差异表达分析
樊庆鲁 一，肖国樱
(1．中国科学院 亚热带农业生态研究所，长沙 410125；2．中国科学院 研究生院，北京 100049)
摘 要 ：把从籼爪重组自交系中筛选出的最耐旱材料(47—274)和最敏感材料 (47—299)在五叶一心时用 2O
PEG处理 6 h，取叶片进行 mRNA差异显示分析，获得 1O个差异表达的 cDNA片段。利用反式 Northern斑
点杂交法去除 6个假阳性片段 ，对 4个阳性片段(DT-DF1、DT-DF2、DT-DF3、DT-DF4)测序后进行同源性分
析，发现DT—DF3的蛋白产物与核酸结合位点和富亮氨酸重复结构域类蛋白B高度同源，DT—DF2与L哥L酸
氧化酶部分序列有同源性，DT-DF1没有找到同源蛋白质序列，DT—DF4与一个假设蛋白高度同源。
关键词：水稻；籼爪重组 自交系；PEG；干旱胁迫；差异表达基因
中图分类号 ：Q786 文献标识码：A 文章编号：1000～3142(201o)o4—0538—06
Differentially expressed gene of indica／
iavanica recombinant inbred lin,in1 m n 13 e
rice at early stage of PEG stress
FAN Qing-LuI，2．XIAO Guo—YingI
(1．Institute of Subtropical Agriculture，Chinese Academy of Sciences，Changsha 410125，China；
2．Graduate University of Chinese Academy of Sciences，Beijing 100049，China)
Abstract：The drought tolerant line and drought sensitive line screened from the population of indica／Yavanica re—
combinant inbred line were stressed with 20 PEG(Polyethyleneglyco1)for 6 h at five-leaf stage of rice．Ten of cD-
NA fragments were isolated by mRNA diferentialy display reverse transcription PCR(DDRT-PCR)，but only four
fragments were approved truth by reverse Northern dot bloting．These fragments named as DT-DFI，DT-DF2，DT-
DF3 and DT-DF4 were sequenced and then analyzed by Blast program．The putative protein of DT-DF3 was highly
homologous with NBS-LRR-Iike protein B and that of DT-DF2 was homologous with L-lactate oxidase．The putative
protein of DT-DF1 was not found homologous protein，and that of DT-DF4 was highly homologous with a hypothet—
ical protein．
Key words：rice；indica／javanica recombinant inbred line；PEG；drought stress；diferentialy expressed gene
中国是一个水资源短缺的国家，全球每年平均
降水量 800 rnm，中国仅为 630 1Tim，比全球的平均
数约少 2O 。中国人均水资源占有量仅为 2 400
IT1。
，是世界人均占有量的 1／4，被联合国列为 13个
贫水国之一(邱福林等，2000；廖显辉，2002)。干旱
在我国普遍发生，每年由于缺水造成国民经济损失
达 2 000多亿元(xg楠，1999)。据气象专家预测，到
2050年前，我国将处于一个大范围干旱频数显著增
多的时期。干旱缺水是 21世纪我国面临的最严重
的问题之一(章基嘉等，1990)。
收稿日期；2008—09—14 修回日期：2009-06—09
基金项目；国家科技支撑计划项目(2007BAD77B03)；中国科学院知识创新工程重大项目(KSCX1一YW-03)[Supported by National Key Technology
Research and Development Program(2007BAD77B03)；Key Project of Knowledge Innovation Program of Chinese Academy of Sciences(KSCX1一YW-03)]
作者简介：樊庆鲁(1980一)，男，山东郓城人，在读硕士研究生，主要从事水稻耐早性研究，(E-mail)fanqinglu2007@126．corn。
通讯作者(Author for correspondence，E-mail：xiaoguoyin~r@isa．ae．cn)
4期 樊庆鲁等：水稻籼爪重组自交系 PEG胁迫早期基因差异表达分析 539
干旱是影响植物生长发育最主要的逆境 因子，
在过去十几年里植物逆境应答基因的功能及表达调
控受到广泛重视并得 到深入的研究 。利用 mRNA
差别显示技术已成功分离出水稻抗铝、抗盐、抗病、
耐淹涝、抗低温 、抗紫外线等多种逆境响应基因(张
立平等，1997；董海涛等，1998；周建明等，1999；Li
等 ，1999；黄旭等，2000；丁秀英等，2001；曾建敏等 ，
2003；Watanabe等，2004；陈永华等，2006；赵莉等，
2006；Liu等，2006；Tyagi& Chandra，2006)。但利
用 mRNA差别显示技术分离水稻耐旱基因的报道
很少，Tyagi Chandra(2006)对基 因型为 N22的
耐干旱水稻及其对照进行差异显示研究，得到一个
差异显示 cDNA片段，Northern blotting验证表 明
这一片段与干旱胁迫有关，数据库对比发现该片段
与编码 DI蛋白的 psbA基因同源。本研究对从籼
爪重组自交系群体中筛选出的最耐旱材料(47—274)
和最敏感材料(47—299)进行干旱早期差异表达基因
分析，以期为揭示耐旱机理提供信息、为耐旱基因的
进一步利用提供基础。
1 材料与方法
1．1材料处理与取材
以 2O 的 PEG-6000作渗透介质在芽期从水稻
籼型光温敏核不育 系准 S(43S)／爪 哇稻改 良品 系
770的重组自交系群体“准 7RIL”(270个株系)中筛
选出8个耐旱株系和 42个敏感株系(樊庆鲁等，
2008)，把筛选出的材料经过苗期反复干旱后筛选出
最耐旱的株系 47—274和干旱最敏感的株系 47-299
供本实验使用。
取耐旱株系 47—274和敏感株系 47—299的种子
进行水培 ，待材料 长到五 叶一 心时 ，用 2O PEG-
6000(渗透势为一5．9 bar)水溶液处理 6 h，取叶片放
于一7O℃冰箱里保存备用。
1．2总 RNA提取与反转录
总 RNA使用 TRIZOL试剂盒(Invitrogen公司)
提取，反转录锚定引物由上海 Sangon公司合成。
物编号及序列为 M1：5 一
M2：5
TTTTTGA-3 ；M4：5 一
引
3 ；
A_C一3 ；M3：5-TTTTTTT
锚定引物和 1O个随机引物组成的引物对进行。随
机引物由上海 Sangon公 司合成 ，引物编号及序列
为 S1：5 一TCGGGGCATC-3 ；S2：5 一CTGAGGTC—
CT一3 ；S3：5-CTACGGCTGC_3 ；S4：5-AGCAG
GTGGA一3 ； S5： 5-ACTGCCCGAC一3 ； S6： 5 一
CCCCTCAGAA一3 ；S7：5-CTGGTGCTGA一3 ；S8：
5-TGGAGAGCAG- 3 ；S9：5-ACAACGCCTC-3 ；
$10：5-GAACACTGGG- 3
。 PCR反 应体 积为 2O
L，包括反转录产物 2 L，1O×PCR bufer 2 L，
锚定引物 1 L(100 ng／,uL)，随机引物 1,uL(100
ng／taL)，dNTP 1 L(各 2．5 mmol／L)，Taq DNA
聚合酶 0．5 uL(2．5 U／uL)，ddH2O 12．5 L。PCR
反应程序为 94℃ 5 min，(94℃ 1 min-40℃ 1 min一
72℃ 1 rain)×40，72℃延长 8 min。
1．4聚丙烯酰胺凝胶 电泳与银染
PCR扩增产物在 10 的变性聚丙烯酰胺凝胶
上电泳 3 h(电压为 800 V)，凝胶的制备与银染参照
陈永华等(2006)所用的方法进行。
1．5差异片段的回收、重扩增
利用煮沸法(李拥军等，2005)从凝胶上回收差
异表达片段，用相同引物对回收产物进行 PCR重扩
增。重扩增产物经 1 琼脂糖凝胶电泳后，用琼脂
糖凝胶回收试剂盒(TaKaRa公司)回收纯化，用于
反式 Northern斑点杂交及克隆测序。
1．6差异片段的反式 Northern斑点杂交
在两张尼龙膜的相同位置上样 2 L同一差异片
段回收产物，8O℃真空烘烤 2 h固定后作为杂交受
体。将PEG处理 6 h的耐旱材料和敏感材料的RNA
分别反转录后用地高辛 DNA随机标记试剂盒(深圳
依诺金公司)对其进行标记。杂交信号检测使用地高
辛化学显色杂交检测试剂盒(深圳依诺金公司)。
1．7阳性片段的克隆测序
将反式 Northern斑点杂交检测为阳性的片段
与 pMD18一T载体(大连宝生物)1 L连接，转化大
肠杆菌DH5a菌株。把通过氨苄青霉素筛选和质粒
PCR鉴定为阳性的克隆接种至含氨苄青霉素的 LB
液体培养基上培养，取 1．5 mL菌液送上海 Sangon
公司测序。
GC-3 。使 2 结果与分析
用反转录试剂盒(Fermentas公司)进行反转录。
1．3反转录产物的 PCR扩增 2．1 PEG处理后差异表达基因分析
反转录产物的 PCR扩增使用与反转录相同的 40对引物扩增产物经 1O 聚丙烯酰胺凝胶电泳，
540 广 西 植 物 3O卷
回收后共得到 4个差异表达片段。其中 4个见图 1。
2．2反式 Northern斑点杂交结果
对获得的 lO个差异显示片段纯化后进行反式
Northern斑点杂交鉴定，得到 4个 阳性片段。图 2
表示在两张尼龙膜的相同位置上样 2 L相同的电
泳回收后 的纯化 产物 ，A膜 与干旱敏感 材料 (47一
B膜
2—■
7
S T
S T
299)PEG处理 6 h标记探针进行杂交，B膜与耐旱
材料(47—274)PEG处理6 h的eDNA标记探针进行
杂交。A膜无信号，B膜出现 4个信号，表明这 4个
片段受干旱胁迫诱导表达且只存在于耐旱株系中，4
个阳性片段分别命名为 DT—DF1、DT-DF2、DT—DF3
和 DT—DF4。
5
8
S T
S T
图 1 差异显示结果
Fig．1 The result of DDRT-PCR
S；敏感材料；T：耐旱材料，箭头所示为差异表达片段
S：Drought sensitive plant~T：Drought tolerant plant．The arrow marks the differential expressive band
图 2 反式 Northern斑点杂交结果
Fig．2 The result of reverse Northern dot blotting
A膜与干旱敏感材料用 PEG处理6 h叶片的eDNA标记探针杂交；B膜与耐旱材料用PEG处理6 h的叶片cDNA
标记探针杂交。DT-DF1、DT-DF2、DT-DF3、DT-DF4为 4个阳性片段。
2．3阳性片段的测序结果
对4个阳性片段进行克隆测序，测序结果如图3。
2．4序列分析及相似性比较
克隆的 4个 cDNA 片段序列用 Blast程序进行
同源性分析，发现它们位于水稻不同染色体上，核苷
酸相似性至少达到 98 ，说明它们确实是水稻基因
组的序列(表 1)。
DT—DF1的高度同源序列位于水稻第 3号染色
体上，．Blast X查询无相应蛋白序列与其推导蛋白产
物同源，推测其为新的基因片段。
DT—DF2位于水稻第 6号染色体上且与水稻
Os06g0133800 tuRNA 序 列 (登 录 号：NM 一
001063246．1)高度同源，其推导的蛋白质产物与 L_
乳酸氧化酶(登录号：MGAS618O)部分同源，但相似
性不高(27 )。
DT—DF3的高度同源序列位于水稻第 11号染
色体上且与水稻 NL—A，NL—B，NL—C和 NL-D基因
序列(登录号：AY518220．1)高度同源，其推导的蛋
白质 产物与 NBS—LRR—like protein B(登录号：
AAR99708．1)有 99 的同源性。
DT-DF4的高度同源序列位于水稻第 2号染色
体上，且与水稻 Os02g0557700 mRNA序列(登录号：
NM o01053676．1)高度同源，其推导的蛋白质产物与
假设蛋白OSL007525(登录号：EAY86292．1)有 99
4期 樊庆鲁等 ：水稻籼爪重组 自交系 PEG胁迫早期基因差异表达分析 541
DT_DF1 1 CACGCTAGCTAGCTACTCGATCCACTTCATTATTACTTATCTTGTTTCTTCTCATATAATCTTGCTGCTAATTA
TTTCTTCCATATATTAATTCCCTATATATATGTATATATACTCGATCGTACTATATTTGTATACATCATCAATTACTTG
TAACTTCAATTAATCCTAGCTACATCGAAGAGGCAGGCGGCCCTAGTTAGTTTTCCTGTACTAGAAGCTAGTTAATTTT
CCTCTATGGAGTGTTATTATGAGTTGATTGAGTCGGGCAGTA (274 bp)。
D1 DF2：CGGGGCATCACCGCGGAGAACGTCATCGCAACAGCAAAGAGCCTGTAAGATTCAAACCGCGCGTTTTGAGTTT
TTGTCATCGTTGATGCCAAGGAACAGTATACATGAAGCCATGAAGGTCTTGTGCCCAAAGCTTGGAATAATGAAGGGA
GAGGGATGCCTGCATTGGAGCGTGAGTGGTATTTTAGGCCTGTAATAAGCACTGCTTTTCCATTTACGTTTGTTTTGT
TGGATCACTCCTTAGATGATTCATCAAGTTGAGCCTGATTCAATTGGG (277 bp)。
DT-DF3：AGCTTGCATGCCTGCAGGTCGACGATTACAACGCCTCAACATGCCTCAAATTGGGGCAGACATTTACACGCAGC
TCTCTCACTTGGGGAAGGTTGGAGATCCTCTCCAGGCCTTCGCATCCTTCAACTAAAAGGCAACCAGAGAGGAATGGGA
GGTCCTCCACCGTCTTCAAGCAACTTGTGTATCTTATCGAGAACTCCTTCAAGTTGGTGGCCTGCTGTCCAAGCTGTGG
TGGGAGAGCCCTCAGCTTGGGGCAGTTCAAAAGTTCCAACCTTGTCAAACAAGGCAGCAGCCACGACGACCTTGGAGTT
GGAGACAGGGCTTCTT AAGCAGCAGTTCCATCCT GGCTGCTGCAGCTGCTTCC
TCCTCCTGCACCTCTTCTTCTTCTTCAACAAAGGACCACTCTTCCCAGTTGGGCATATCCTCGATGATCAACAATTCAAG
CTTGGGGAAAGCAATTGTCTCTGTGGATCTGAGATTACCCTCCCAGGAGCCAACGAATTCGGGTCCAATCTTGGTGATT
GAACTTGCTCCCTTAATTTTCAAGTATTTCAAGTTTGGTATCTGTCCGATTGGTGGAAGCTGCAAGCAGGATTTGCAA
TCTGTGAGTTTCAAATATGTCAGTGAAGATAATTGGGAAGTACTAAGCCAGGTGGGGAATCTACAACAAAGGAAATT
CCCAACAAAAAGATCTTCTAAGTTGTGTGGAGGCGTTGAACCTGCTTGGACGAGGCGTTGTAATCTCTAGAGGATCCCC
GGGTACCGAGCTCGAATTCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAA
CATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCG (934 bp)。
D_r_DF4：ATCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGATTGAACACTGGGCACCCAAGGCAGCTACGATGATACTAAGCCTTGGC
CTAGACGACAATGGCTCATCGCTCACCGTATGATGCTGTAGCAAATCTATATGCCGAACTAATCTCTGATGTATTGAG
TTGTAGTCCTTAACTTTGAACTGTTGTGCAACATTATGTTGTAGTTAGATCGAATCGACAGTGCGCTAATGGCTGTA
GCTGTGCGTACTGCTGGTTCGCTATCTCACAGTGATTCTGTACCGTATATTGATGATGATGATGAAACTGTGAATGG
GCAAAAAAAAAAAAAATCGTCGACCTGCAGGCATGCAAGC (345 bp)。
图 3 DT_DFI、DT—DF2、D DF3和 DT_DF4阳性片段克隆测序结果
表 1 DDRT-PCR法分离的 cDNA特征
Table 1 Characteristics of the eDNAs isolated bv DDRT—PCR
的同源性，其功能有待进一步的研究证明。
3 讨论
由于 mRNA差异显示技术具有快速、灵敏、简
单、可同时分析多个材料和所需起始材料量低等优
点(陈永华等，2005)，自1992年创立以来，很快成为
研究基因表达以及克隆新基因的重要技术(谢晓东
等，2003；孟凡荣 等，2005；张海英等 ，2005)。目前 ，
国内大多实验室都采用常规的银染法，该方法的缺
点是银染时间太长。我们实验室采用的快速银染法
只需 30 rain，本实验和陈永华等(2006)的研究均证
明可以取得较好的实验效果。
对 DT—DF2进行 Blast X 比较 ，发现与 L--~L酸
氧化酶的部分序列同源。乳酸氧化酶能催化乳酸氧
化成丙酮酸，主要是在微生物和动物体内发现，植物
中的菠菜乙醇酸氧化酶属于乳酸氧化酶蛋白家族中
的一个成员(谷劲松等，2003)。乙醇酸氧化酶是植
物光呼吸过程中的关键酶之一 ，可以催化 乙醇酸氧
化成乙醛酸(晋剑锋等，2002)。推测 DT-DF2可能
与水分胁迫时光呼吸过程的某些 生理生化过程有
关，但由于只有 27 的蛋白质相似性，这种推测还
有待进一步证实。
DT—DF3位于水稻基因组的第 11号染色体上，
542 广 西 植 物 3O卷
对DT—DF3进行Blast X比较发现与核酸结合位点
(Nueleotide binding site，NBS)和富亮氨酸重复结
构域(Leucine—rich repeat，LRR)类蛋白B高度同
源。NBS-LRR类蛋白是植物中最多的一类抗病基
因编码的蛋白，NBS—LRR类基因编码的 NBS结构
域具有保守的基序 ，NBS结构域可能参与了抗病信
号的传递(Elis等，2000)。郭继虎等(2003)以小麦
旱选 10号为材料，利用 DDRT—PCR技术研究了种
子芽期水分胁迫处理和对照材料在 mRNA表达上
的差异，找到与编码 LEA蛋 白的 Em基因同源的基
因，说明小麦芽期对水分胁迫的应答方式之一也是
积累LEA蛋白，还有一个与热胁迫有关的 EST序
列。从转录水平上证明了植物对水分胁迫与热胁迫
应答的相似性。郭宾会等(2003)以小麦幼苗为材
料，对经过用 16 PEG溶液处理不同时间而诱导表
达的小麦基因进行 分离 ，在 GenBank查询发现 l1
个 eDNA片段分别与小麦、大麦、高粱等在旱、盐、
冷、病胁迫及 ABA处理诱导表达的已知序列有较
高的同源性，说明植物在受到水分胁迫时产生的应
答与在受到其它逆境胁迫的应答有内在的相关性，
即植物的交叉适应现象。
本研究通过 DDRT—PCR的方法分离得到了 4
个差异条带 ，是水稻受到干旱胁迫产生应激反应 的
基因表达情况或者是在植株受到干旱后启动特异或
相应的基因进行表达来抵御外界胁迫。这些片段中
有通过同源比较后可以推测其功能的基因序列，也
有功能未知的基因，这些基 因有的可能直接参与了
水稻耐旱的信号传递过程，有的则可能与信号传递
后水稻相应的生理生化变化过程有关，对这些基因
的克隆和功能分析将有助于从分子水平了解水稻对
干旱抗性的信号传导过程及其生理生化变化，为探
讨水稻耐旱机理并通过分子育种培育耐旱的水稻新
品种做出贡献 。
参考文献：
邓楠．1999．制定《农业科技发展纲要》推动农业科技革命EJ]．
中国农业科技导报，2：3—8
廖显辉．2002．话说“节水农业”fJ]．农业考古，1：44-47
邱福林，张伟平．2000．水分胁迫对水稻生长影响的研究进展
EJ]．垦殖与稻作，2：7—13
ChenYH(陈永华)，Yan QQ(严钦泉)，Yu JP(余建蒲)，et a1．
2005．Research progress on mRNA diferentially display tech—
nology(mRNA差异 显示技术 的研究 进展)[J]．Acta Agric
Boreal-Occident Sin(西北农业学报)，2：9—12
Chen YH(陈永华)，Zhao S(赵森)，Yan QQ(严钦泉)，et a1．
2006．Studies on genes related to submergence tolerant using
diferential display technique in Hce(利用差异显示法研究水稻
耐淹涝相关基因)[J]．J Agric Biotech(农业生物技术学报)，
14(6)：894—898
． DingXY(丁秀英)，Zhang J(张军)，Cui X(崔霞 )，et a1．2001．
Studies on resistance gene expression by IPT inducing under low
temperature stress in root of rice seedling(低温胁迫下 IPT诱导
水稻幼苗根 中的 RNA差别显示分 析)[J-I．ActaAgron Sin
(作物学报)，27(6)：935—940 ‘
Dong HT(董海涛)，Wu YL(吴玉良)，Cheng ZQ(程志强)，et a1．
1998．Molecular cloning of diferentialy expressed genes with
kinase motif induced by Xanthomonas ory~ae ev．Oryzae(差异显
示法克隆水稻抗 自叶枯病相关蛋 白激酶基 因)[J]．J Zhe—
jiang Agric Univ(浙江农业大学学报)，24(5)：548—552
Elis J，Dodds P，Pryor t 2000．Structure，function and evolution
of plant disease resistance genes rJ]．Curt Opin Plant Biol，3
(4)：278—284
Fan QL(樊庆鲁)，Guo JY(郭加沅)，Xiao GY(肖国樱)．2009．
Studies on drought tolerance of indica／javanica recombinant in—
bred fine at germinating stage in rice(水稻籼爪重组自交系群体
芽期耐早性鉴定)[J]．Guihaia(广西植物)，29(1)：74—77
Gu JS(谷劲松)，Xu X(徐霞 )，Song X(宋欣)．2003．Research
progress on lactate oxidase(乳酸氧化酶研究进展)[J]．Chin
Biotech(中国生物工程杂志)，23(5)：36—4l
Guo BH(郭宾会)，Gao SC(高双成)，Jing RL(景蕊莲)，et a1．
2003．Studies on the diferential expression cDNA induced by
water-stressed in wheat seedling stage(d~麦苗期水分胁迫诱导
差异表达 cDNA的研究)[J]．Biotech Bull(生物技术通报)，
2-40— 44
Guo JH(郭继虎)，Jing RL(景蕊莲)，Wang JS(王金胜)．2003．
Diferential display of mRNA induced by water stress in germi—
nating wheat(Tritieum aestivum)(小麦种子水分胁迫萌发的基
因差异表达)[J]．J Shaanxi Agric Univ(山西农 业大学学
报)，23(1)：23—27
Huangx(黄旭)，Gong ZZ(龚 蓁 蓁)，Xu ZY(徐竹筠)，et a1．
2000．Isolation of related cDNA clone resistant to blast of rice
by mRNA differential display(mRNA差异显示法分离水稻抗
稻瘟病相关 cDNA克隆)口]．Jiangsu J AgHc Sci(江苏农业
学报)，16(2)：124—126
Jin JF(晋剑锋)，Tang Tw(谭天伟)，Su GF(苏国富)．2002．
C1oning and expression of spinach glycolate oxidase in Escherich一
coli(菠菜乙醇酸氧化酶基 因的克隆及表达)口]．Chin．，
Biotech(生物工程学报)，18(2)：212—215
YJ(李拥军)，Ao H(敖红)，Sun GJ(孙桂金)．2005．Compari—
son of different methods in recovering special bands in mRNA
differential display(mRNA差异显示技术中特异条带回收方法
的比较)[J]．Biotechnology(生物技术)，lS(3)：43-44
Li ZY，Chen SY．1999．Inducible expression of translation elonga-
tion factor 1A gene in rice seedlings in response to environmental
stresses[J]．Acta Bot Sin，41(8)：8Oo一806
Liu D，Zhang X，Cheng Y，et a1．2006．rHsp90 gene expression in
response to several environmental stresses in rice(Oryza sativa)
[J]．Plant Physiol Biochem，44(5—6)，38O一386
Meng FR(孟 凡荣)，Ni ZF(倪 中福)，wu LM(吴 利民)，et a1．
2005．Diferential gene expression between reciprocal cross-fer_
4期 樊庆鲁等 ：水稻籼爪重组 自交系 PEG胁迫早期基因差异表达分析 543
tilized kernels and their parents during the early stages of seed
development in wheat(不同优 势小 麦正 反杂交种子与亲本 自
交种子发育前期基因表达差异)[J]．Acta Agron Sin(作物学
报)，31(1)：119—123
Tyagi A，Chandra A． 2006． Isolation of stress responsive Psb A
gene from rice(Oryza sativa L．)using differential display[J]．
Indian J Biochem Biophys，43(4)：244—246
Watanabe H，Saigusa M ，Hase S，et a1． 2004． C1oning of cDNA
encoding an ETR2-like protein(Os-ERL1)from deep water rice
(Oryza sativa L．)and increase in its mRNA level by submer—
gence，ethylene，and gibberelin treatments[J3．J Exp Bot，55
(399)：1 145—1 148
XieXD(谢 晓东)，Ni ZF(倪 中福)，Meng FR(孟 凡荣 )，et a1．
2003． Relationship between differences of gene expression in
early developing seeds of hybrid versus parents and heterosis in
wheat(d~麦杂交种与亲本发育早期种子的基 因表达差异及其
与杂种优势关 系的初步研 究)[J]．J Genet Genom(遗 传学
报)，30(3)：260—266
Zeng JM(曾建敏)，Lin WX(林文雄 )，Liang KJ(梁康迳)，et a1．
2003．Molecular responses of rice(Oryra sativa)to the stress of
lowly enhanced UV．B radiation(水稻对低剂量 Uv_B辐射胁迫
的分子应答研究)[J]．Chin J Appl Ecol(应用生态学报)，14
(6)：941— 944
Zhang JJ(章基嘉)，Zhou SG(周曙光)．1990．Major climatic dis—
asters in China and their impact on agricultural production(我国
的主要气候灾害及其对农业生产 的影响)[J]．J Nanjing Inst
ofMeteor(南京气象学院学报)，13(3)：259—264
Zhang HY(张海英)，Liu Y(刘勇)，LiuDC(刘冬成)，eta1．2005．
Identification of the genes related to resistant to Magnaporthe
grisea using differential display technique in rice(差异显示法分
离水稻抗稻瘟病相关基 因)I-J]．J Genet Genom(遗传学报)，
32(7)：719—725
Zhang LP(张立平)，Wu P(吴平)，Zhu JM(祝金明)，et a1．1997．
The expressive diference of inductive gene by aluminium in rice by
differential display(~1]用 DD-PCR技术分析水稻铝诱导基因的表
达差异)l-J]．Sci Agric Sin(中国农业科学)，30(5)：71—74
Zhao L(赵莉)，Deng XL(XI~晓玲)，Jia XL(贾显禄)．2006．mRNA
differential expression of rice indueed by elicitor from Magna—
porthe gHsea(稻瘟病激发子诱导的水稻叶片 mRNA差别表达
研究)[J]．Mol Plant Breeding(分子植物育种)，4(4)：535-539
Zhou JM(周建明)，Zhu Q(朱群)，Bai YY(白永延)．1999．Cloning
and sequencing of eDNA fragment of early responsive gene of rice
induced by blast fungus Magnaporthe grisea(稻瘟病菌侵染诱导
的水稻早期反应基因的eDNA片段克隆与序列分析)[J]．Acta
Phytophysiol Sin(植物生理学报)，25(2)：l15—120
(上接第 520页 Continue from page 520)
1 999． Effeet of different fertilizing methods on the absorption
and translocation of iron in apple trees(施肥方式对苹果吸收、
运输铁的影响)口]．J Fruit Sci(果树科学)，16(1)：1—3
Yang QQ(杨青芹)，Xue JJ(薛进军)，Wang XR(王秀茹)，et a1．
2001．Mechanism of iron fertilizer by root-inserted to correcting
chlorosis of fruit(铁肥根系输液矫正苹果缺铁失绿症机理)I-J]．
Plant Nutr Fert Sci(植物营养与肥料学报)，7(4)：435-440
Zhou w(周卫)，Lin B(林 葆)．2002．Study on pathways of Ca2+
movement in young fruit tissue of apple and its regulation by hor—
mones(苹果幼果组织钙运输途径与激素调控)[J]．Plant Nut
Fert Sci(植物营养与肥料学报)，6(2)：214—219
Bramlage WJ，Weis SA，Drake M．1990．Observation on the rela—
tionships among seed number，fruit calcium，and senescent break—
down in apples[J]．Hort Sci，25：351—353
Cline JA，Haiuon EJ． 1992．Rdative humielity around apple fruit
influences its accumulation of calcium[J]．，Agner Soc Hort
Sci，117(4)：542—546
Falahi E，Righeti TL，Richardson DG．1985．Predictions of quality
by preharvest fruit and leaf mineral analyses in‘Starkspur Golden
Delicious’apple[-J~．J ewler Soc Hort Sci，110：524—527
Huang XM ，Wang HC，Zhong WL，et a1．2008．Spraying calcium
is not an effective wav to increase structural calcium in litchi per—
icarp[-J]．Sci Hort，117(1)：39—44
Johnson DS，Ridout MS． 1998． Prediction of storage quality of
‘Cox’s Orange Pippin’apples from nutritional and meteorologi—
cal data using multiple regression models selected by cross valida—
tion[,J]．J Hort Sci Biotech，73：622—630
Moon BW ，Lu W1，Zheng HL，eta1．2002a．Efects of tree-spry of
liquid calcium compounds on calcium contents，quality，and eel
wal structure change of“Jingfen”pear fruits[,J]．J Kores Soc
Hort Sci，43(4)：51— 53
Mo n BW ，Kang IK，Lee YC，et a1．2002b．Effects of tree-spry of
liquid calcium compounds on the changes in cel wal compo-
nents，cell wal hydrolases，and cel wal structure during cold
storage of non-astringent persimmon fruits[J]．J Kores Soc
HfJrt Sci，43(4)：443—446
Perring M A． 1984．Redistribution of minerals in apple fruit during
storage：preliminary investigations with the variety Spartan~J]．
J Sci Food Agric，35：182——190
Perring MA，Person K． 1987． Redistribution of minerals in apple
fruit during storage，the effect of storage atmosphere on calcium
concentration[J]．J Sci Food Agric，40：37-42
Wojcik P．2001．Dabrowieka prune fruit quality as influenced by
calcium spraying[,J]．J Plant Nutri，24(8)：1 229—1 241